自然流产中外周血和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的比例变化

目的和方法:采用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群法探讨自然流产与正常早孕之间外周血和蜕膜自然杀伤细胞亚群的差异。结果:外周血中自然流产组的CD56⁺的百分率较早孕组有减少的趋势,而CD56⁺CD16⁺的百分率则较早孕组显著减少,CD16⁺的百分率两组间无差异。自然流产组的蜕膜CD56⁺、CD56⁺CD16⁺、CD16⁺的百分率均明显低于早孕组。结论:蜕膜中CD56⁺NK细胞的减少可能是自然流产的原因之一,外周血中CD56⁺和CD56⁺CD16⁺NK细胞的丢失可能对自然流产的发生具有诊断价值。     

早孕期人蜕膜趋化因子CCL2及其受体CCR2的表达及意义

目的：分析人早孕蜕膜及蜕膜基质细胞趋化因子受体CCR2及其配体CCL2在人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞的表达和分泌，以探讨CCR2／CCL2在母-胎界面的生物学作用。方法：收集早孕期蜕膜组织，分离蜕膜基质细胞，分别用半定量RT-PCR、免疫化学方法分析正常人早孕蜕膜组织和培养的人蜕膜基质细胞CCR2／CCL2表达；并且用流式细胞术和ELISA法分别检测蜕膜基质细胞表面CCR2的表达和培养的蜕膜基质细胞上清中CCL2的分泌。结果：人早孕蜕膜组织和蜕膜基质细胞均高水平转录和翻译CCR2／CCL2，培养的基质细胞能分泌大量的CCL2，其分泌量呈时间依赖性。结论：早孕蜕膜高表达和分泌CCR2／CCL2可能参与早孕期母一胎免疫调节。     

免疫治疗对母胎交界面NK细胞表面CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系

目的:研究反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)模型CBA/J×DBA/2小鼠母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平,并评价淋巴细胞免疫治疗(lymphocyteimmunotherapy,LIT)对CD69表达水平的影响及其与鼠胚和鼠仔预后的关系。方法:评价CBA/J×DBA/2、C57BL/6×DBA/2和BALB/c×DBA/2小鼠胚胎和鼠仔的预后,绘制出生后1-21 d鼠仔离乳前生长曲线和Kaplan-Meier生存分析曲线。并且采用PE-CD69和FITC-DX5双色流式细胞术检测在有或无LIT的情况下,母胎交界面NK细胞表面CD69分子的表达水平。此外,对CD16/CD32⁺NK细胞亚群等也进行检测。结果:在孕期母鼠体重平均增长幅度、平均每窝产仔数、新生鼠仔出生第1 d平均体重和胚胎吸收率等方面,CBA/J×DBA/2小鼠与生殖力正常的对照组相比均有显著差异。在CBA/J×DBA/2小鼠中,代表活化型NK细胞的CD69⁺DX5⁺细胞比率也显著高于对照组。而有效的LIT能够显著降低CD69在母胎交界面NK细胞表面的表达水平,并相应地显著降低胚胎吸收率。结论:CD69⁺DX5⁺细胞在胚胎被排斥的机制中可能具有重要作用。有效的LIT通过降低CD69分子在母胎交界面NK细胞表面的表达水平而显著降低流产率。     

妊娠期高血压疾病患者子宫蜕膜NK细胞表型分析

目的: 观察妊娠期高血压疾病患者子宫蜕膜自然杀伤细胞(dNK 细胞)的表型。方法:选取2008年8月至2009年3月在广州市暨南大学附属第一医院妇产科因妊娠期高血压疾病行剖宫产的单胎妊娠孕妇20例作为妊娠期高血压组,随机选取同期在此院因社会心理因素行选择性剖宫产的正常单胎妊娠孕妇15例作为正常对照组。收集孕晚期子宫蜕膜组织,机械研磨加梯度离心法提取蜕膜内单核细胞,流式细胞技术(FCM)筛选出dNK细胞,并检测dNK细胞表面CD56及CD16的表达情况。结果:(1)妊娠期高血压组与正常对照组CD56^brightCD16^-CD3^-dNK细胞的数量均多于CD56^dimCD16⁺CD3^- dNK细胞,且差异显著(均P＜0.01)。(2)妊娠期高血压组与正常对照组CD56^brightCD16^-CD3^- dNK细胞所占比例无显著差异(P＞0.05),CD56^dimCD16⁺CD3^- dNK细胞所占比例亦无显著差异(P＞0.05)。(3)妊娠期高血压组与正常对照组dNK细胞表面CD16分子的表达率并无显著差异(P＞0.05)。结论:妊娠期高血压疾病患者与正常孕妇孕晚期子宫蜕膜内dNK细胞表型无明显改变,均以CD56^brightCD16^-CD3^-亚型为主。     

复发性自然流产育龄期妇女母-胎界面中细胞因子表达分析

目的:分析复发性自然流产(RSA)育龄期妇女母-胎界面中相关细胞因子表达水平变化。方法:连续选择近期就诊的RSA育龄期妇女21例,收集流产蜕膜组织,采用酶联免疫吸附法进行蜕膜组织液中IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ浓度等指标检测,并与同期早孕并行人工流产终止妊娠妇女(对照组,20例)相同测试结果比较。结果:RSA组蜕膜组织液IL-2和IFN-γ浓度均明显高于对照组,而IL-4和IL-10浓度则显著低于后者(P均<0.01)。结论:RSA育龄期妇女母-胎界面上存在着明确的Th1优势状态表达。     

EPCAM、CD44和CD24在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的: 联合检测95例胃癌组织中上皮细胞黏附分子(EPCAM)、白细胞分化抗原 44(CD44)和白细胞分化抗原 24(CD24)的表达情况,分析这3种蛋白与胃癌临床病理资料及预后之间的关系。方法: 应用免疫组织化学法检测95例经手术切除并有明确病理诊断为胃癌的标本中EPCAM、CD44和CD24的表达。分析95例胃癌临床病理资料与这3种蛋白阳性表达之间的关系。结果: (1) EPCAM阳性56例(58.95%),CD44阳性41例(43.16%),CD24阳性56例(58.95%)。其中EPCAM⁺CD44⁺30例(31.58%),EPCAM⁺CD24⁺45例(47.37%),CD44⁺CD24⁺32例(33.68%),EPCAM⁺CD44⁺CD24⁺25例(26.32%)。(2)EPCAM与年龄、肿瘤浸润深度、WHO组织学分型有关;CD44与BORRMANN分型、WHO组织学分型、CEA值有关;CD24与浸润深度、肿瘤位置、WHO组织学分型、脏器侵犯有关;三者阳性与浸润深度、肿瘤位置、WHO组织学分型有关(P<0.05)。(3)EPCAM、CD44阳性组的生存率与阴性组比较差异有统计学意义(P<0.05及P<0.01);EPCAM⁺CD44⁺CD24⁺与EPCAM^-CD44^-CD24^-的生存率比较差异有统计学意义(P<0.05); EPCAM^-CD44⁺CD24⁺与EPCAM^-CD44^-CD24^-的生存率比较有统计学意义(P<0.05)。结论: EPCAM、CD44和CD24在胃癌组织中表达阳性率高,可作为胃癌诊断的初筛实验。     

BCL-6在经典型霍奇金淋巴瘤细胞株L428和过表达CD99的L428中的表达差异及其意义

目的: 探究BCL-6在经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin's lymphoma,cHL)细胞株L428和过表达CD99的L428(L428-CD99⁺)中的表达差异及其意义。方法: 应用免疫细胞化学和免疫荧光共聚焦检测BCL-6和CD99在cHL细胞株L428和L428-CD99⁺中的表达;运用实时荧光定量PCR和Western blotting检测细胞株L428和L428-CD99⁺中BCL-6和CD99的表达水平;MTT实验检测L428和L428-CD99⁺细胞增殖能力的差异;流式细胞术检测L428和L428-CD99⁺细胞的凋亡差异。结果: 免疫细胞化学和免疫荧光共聚焦显示CD99在L428细胞中为阴性表达,在L428-CD99⁺细胞中为阳性表达,并定位于细胞膜;BCL-6在L428细胞为阴性表达,在L428-CD99⁺细胞株中为阳性表达,并定位于细胞核。Western blotting显示CD99和BCL-6在L428细胞为阴性表达,在L428-CD99⁺细胞为阳性表达。实时荧光定量PCR结果显示,与L428细胞相比,CD99和BCL-6 mRNA在L428-CD99⁺细胞中的表达量增高(P<0.01)。MTT显示L428细胞增殖能力强于L428-CD99⁺细胞(P<0.01);流式细胞术显示L428-CD99⁺细胞凋亡较L428细胞增多(P<0.01)。结论: 过表达CD99诱发BCL-6表达增高,可导致L428细胞增殖能力下降及凋亡增加。     

外周血及蜕膜组织CD4+ CD25+调节性T细胞比例与原因不明复发性流产的关系研究

目的探讨外周血及蜕膜组织中调节性淋巴细胞的比例原因不明复发性流产(URSA)中的作用。方法根据2013年5月至2015年5月在我院就诊的URSA患者的妊娠状态将其分成4组,分别为未孕组67例,早期流产组23例;正常早孕且自愿要求人工终止妊娠的妇女组24例及正常未孕女性组66例为对照组。计划外妊娠要求URSA患者行清宫术后的新鲜蜕膜组织,采用流式细胞仪分析外周血及蜕膜组织中调节性T细胞数量及比例,最终分析4组妇女外周血及蜕膜组织中CD4+、CD25+等调节性T细胞对URSA患者的影响。结果正常早孕妇女外周血CD4+CD25 high T细胞高于正常未孕妇女及URSA流产组,组间比较差异明显(P﹤0.01);URSA未孕患者的外周血CD4+、CD25high T细胞也显著低于正常未孕女性及URSA流产组患者(P﹤0.01);URSA流产患者蜕膜组织中CD4+、CD25high T细胞数量低于正常早孕组(P﹤0.01)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞在维持正常妊娠中扮演重要角色,原因不明复发性流产的发生可能与CD4+、CD25+调节性T细胞的数量降低有关。     

肺癌干细胞中存在容积激活氯通道

目的: 研究肺癌干细胞中是否存在容积激活氯通道。方法: 用免疫磁珠法分选非小细胞肺癌细胞系A549中CD133⁺细胞,用流式细胞术检测其纯度。用全细胞膜片钳记录CD133⁺细胞中是否存在容积激活氯电流。结果: 本实验中免疫磁珠法分选出的CD133⁺肺癌干细胞,流式细胞术检测其纯度为92.14%;在22/40(55%) CD133⁺细胞上记录到容积激活氯电流。结论: CD133⁺肺癌干细胞中存在容积激活氯通道。     

地西他滨联合丙戊酸钠促进胃癌MGC-803细胞凋亡和G0/G1期阻滞的机制研究

目的: 探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对胃癌细胞株MGC-803凋亡和细胞周期的影响及机制。方法: DCA 1.5 μmol·L^-1、DCA 3.0 μmol·L^-1、VPA 1.5 mmol·L^-1、DCA 1.5 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1和DCA 3.0 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1作用MGC-803细胞72 h。Annexin V/PI法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测nm23-H1 mRNA表达。结果: VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组 和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组 凋亡率均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803细胞G₀/G₁期比例在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(61.55%±2.38%)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(66.75%±2.48%)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。nm23-H1 mRNA在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(1.84±0.46)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(2.88±0.42)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: DCA联合VPA能显著促进MGC-803细胞凋亡及G₀/G₁期阻滞,其机制可能与促nm23-H1基因的表达有关。     

Up-regulation of CCL17, CCL22 and CCR4 in drug-induced maculopapular exanthema

BACKGROUND: Maculopapular exanthema has been reported to be the most frequently drug-induced cutaneous reaction. Although T lymphocytes are involved in the pathomechanism of this disease, little is know about the recruitment of these cells to the skin. OBJECTIVE: The aim of this work is to study the role of the chemokines TARC/CCL17 and MDC/CCL22 in the lymphocyte trafficking to affected skin in drug-induced exanthemas. METHODS: Real-time PCR was performed to quantify gene expression levels of CCL17, CCL22 and their receptor CCR4 in lesional skin biopsies and in peripheral blood mononuclear cells from patients. CCL27 and CCL22 proteins were detected in the skin by immunochemistry. Protein expression of CCR4 was determined by flow cytometry in peripheral blood lymphocytes. Functional migration assays to CCL17 and CCL22 were assessed to compare the migratory responses of peripheral blood lymphocytes from patients and healthy subjects. RESULTS: CCL17 and CCL22 were up-regulated in maculopapular exanthema-affected skin. CCR4 mRNA levels and protein expression were increased in peripheral blood mononuclear cells during the acute phase of the disease. The increased expression of the receptor was consistent with a higher response of peripheral blood lymphocytes to CCL17 and CCL22 compared with the migratory response in healthy donors. CONCLUSION: TARC/CCL17 and MDC/CCL22 might cooperate in attracting T lymphocytes to skin in drug-induced maculopapular exanthemas.     

复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素8的表达

目的:研究复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)的表达。方法:应用免疫组化法及图像分析技术,对30例复发性自然流产患者绒毛、蜕膜组织中IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析;H- E染色后光镜下观察绒毛及蜕膜组织的形态学变化。结果:在绒毛组织中,IL-8蛋白定位于绒毛上皮细胞的细胞质内,且病例组的表达明显高于对照组;在蜕膜组织中,病例组蜕膜细胞的胞质内可见IL-8蛋白表达,且高于对照组;H- E染色可见病例组绒毛组织的滋养层变薄,细胞变性甚至坏死、嗜酸性增强,绒毛中轴纤维化程度增强;蜕膜组织中蜕膜细胞失去细胞间连接,部分蜕膜细胞解体、核消失。结论:病例组绒毛及蜕膜组织中IL-8蛋白表达的增强与复发性自然流产有关,IL-8可能参与复发性自然流产的病理过程。     

白细胞介素-8蛋白在反复自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达

目的 探讨反复自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素-8 （IL-8）蛋白水平的表达。 方法 应用免疫组织化学染色和Western blotting 技术,分别对30例反复自然流产患者（流产组）和30例正常妊娠者（对照组）绒毛、蜕膜组织中IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析。 结果 免疫组织化学染色结果显示,在绒毛组织中,流产组和对照组IL-8的蛋白表达主要定位于绒毛上皮细胞的细胞质内;在蜕膜组织中,流产组IL-8蛋白表达于蜕膜细胞的胞质内,对照组蜕膜细胞则为阴性,但两组腺上皮细胞均为阳性反应。Western blotting结果显示,在绒毛组织中,流产组IL-8的蛋白相对含量明显高于对照组（P﹤0.01）;在蜕膜组织中,流产组IL-8的蛋白相对含量高于对照组（P﹤0.05）。 结论 流产组绒毛及蜕膜组织中IL-8蛋白表达增强与反复自然流产有关,IL-8可能参与反复自然流产的病理过程。     

E003对RSA模型小鼠蜕膜组织超微结构的影响

目的　观察瑞香素（daphnetin）即E003处理后RSA模型小鼠蜕膜组织形态结构的改变。 方法　建立反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）模型小鼠后,实验分正常妊娠组、RSA模型组、E003低剂量组和E003高剂量组共4组,E003连续灌胃处理14 d后,取蜕膜组织。光镜下观察蜕膜组织血管和细胞形态,电镜下观察蜕膜组织超微结构。 结果　解剖子宫计算胚胎吸收率,E003处理组（低剂量组和高剂量组）低于RSA模型组,差异具有统计学意义,P<0.05;E003高剂量组胚胎吸收率与正常妊娠组相比无统计学差异,P>0.05。光镜下可见RSA模型组蜕膜细胞碎裂,数量较正常妊娠组减少;E003低剂量组和高剂量组蜕膜细胞数量均较模型组增多,排列较整齐。电镜下RSA模型组较正常妊娠组蜕膜细胞体积减小,细胞间隙增大,血管壁不完整,血管内皮细胞结构不完整,细胞核呈梭形;E003低剂量组与模型组比较,蜕膜细胞体积增大,细胞间隙增大,血管壁较完整,血管内皮细胞呈长梭形,细胞结构较完整,细胞间隙稍增宽;E003高剂量组蜕膜细胞组织及血管壁接近正常妊娠组。 结论　RSA模型小鼠存在母胎界面血管生成障碍,E003可修复RSA模型小鼠蜕膜组织中破坏的细胞结构,改善血管生成和细胞器形态,对RSA模型小鼠具有一定的治疗作用。     

树突状细胞C型凝集素在自然流产中的表达研究

目的通过检测早期自然流产患者子宫蜕膜组织中树突状细胞C型凝集素（DC-SIGN）的表达,探讨其在自然流产发生中的可能机制。方法采用免疫荧光染色法及实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术检测DC-SIGN在蜕膜组织中的表达,比较两组间表达情况及分布差异。结果 1.通过免疫荧光染色技术检测显示：妊娠期子宫蜕膜组织均表达DC-SIGN,主要分布于细胞膜上,自然流产组中DC-SIGN＋DC表达明显低于对照组（46.20±2.40 vs 78.21±0.28,P〈0.01）。2.RT-PCR结果显示：自然流产组明显低于对照组,患者蜕膜组织中DC-SIGN mRNA相对表达量（0.0032370±0.00124 vs0.0076412±0.0040,P〈0.05）。结论树突状细胞（DC）在母胎免疫耐受机制中起着重要的作用,蜕膜组织DC-SIGN的表达量降低可能导致早期自然流产的发生。     

Commitment of decidual haematopoietic progenitor cells in first trimester pregnancy

PROBLEM The aim of this study was to investigate the phenotype and commitment of decidual haematopoietic progenitor cells (HPCs) in healthy pregnant women and in women with early miscarriage. METHOD OF STUDY Peripheral blood and decidual tissue from healthy and pathological pregnant women were examined for HPCs and lymphoid progenitors using flow cytometric analysis. RESULTS Compared with peripheral blood, we found a significant increase in decidual HPCs in both healthy pregnant women and women with spontaneous abortion. T/NK, natural killer (NK), gamma-delta and NKT cell progenitors were identified in all peripheral blood and decidual samples. In pathologic pregnant women, the ratios of decidual T/NK and NK cell progenitors were significantly increased compared with healthy pregnant controls. CONCLUSION We demonstrated decidual cells with haematopoietic progenitor cell phenotype in human decidua. Increased levels of NK progenitors in the decidua of women with early spontaneous abortion suggest a dysregulation of this pathway that may contribute to pregnancy failure.     

反复自然流产患者母胎界面SOCS3蛋白、TNF-α及IL-10的表达

目的:研究反复自然流产患者蜕膜组织中细胞因子信号转导抑制因子SOCS3,细胞因子TNF-α及IL-10的表达,并与正常妊娠作对照。方法:Western blot检测SOCS3的表达,免疫组织化学法检测细胞因子TNF-α及IL-10的表达。结果:反复自然流产组蜕膜组织中SOCS3的表达明显降低(P<0.01),差异有统计学意义,IL-10表达降低(P<0.01),TNF-α表达增高(P<0.05),差异有统计学意义。结论:与正常妊娠相比,反复自然流产组蜕膜组织中SOCS3蛋白及IL-10表达降低,TNF-α表达增高,差异有统计学意义,说明反复自然流产患者母胎界面Th1/Th2失衡,SOCS3蛋白可能通过与细胞因子的相互调控作用影响Th1/Th2平衡导致流产发生。     

Immunoregulatory activity of decidua in spontaneous early pregnancy loss.

The present study aimed to address whether the immunoregulatory properties of the molecules secreted within decidua were altered in women suffering spontaneous miscarriage, compared with apparently normal fertile women. Unfractionated decidual cells from 22 women undergoing therapeutic pregnancy terminations and 25 women experiencing a sporadic spontaneous early pregnancy loss were isolated, cultured for 24 h and 72 h, and supernatants were collected. The effect of decidual supernatants on phytohaemagglutinin (PHA)-induced peripheral blood lymphocyte proliferation was investigated. Immunosuppressive activity was detected in 24 h cell culture supernatants from 91% of therapeutic abortion cases compared with only 64% of spontaneous abortion samples; 72 h supernatants from all of therapeutic abortion samples and 90% of spontaneous abortion cases suppressed lymphoproliferation. The remaining spontaneous abortion samples (36% of 24 h supernatants; 10% of 72 h supernatants) enhanced or had no effect on lymphocyte proliferation. Enhancement of lymphocyte proliferation was not observed in therapeutic abortion samples, and the association between stimulation of cell proliferation and spontaneous abortion was significant for 24 h decidual cell supernatants at 50% concentration (P = 0.02). These findings suggest that in a subgroup of women experiencing spontaneous early pregnancy loss, soluble factors within decidua display altered immune responses that may be implicated in the complex process of fetal rejection.     

Decidual natural killer cells in recurrent spontaneous abortion with normal chromosomal content.

PROBLEM: The maternal local immune responses in unexplained recurrent spontaneous abortion (RSA) are not yet well known. Maternal peripheral and decidual natural killer (NK) cells were evaluated in RSA with normal chromosomal content. METHOD OF STUDY: Maternal peripheral blood, villous trophoblast, and decidua were taken from 15 normal pregnancies and 9 RSA patients with normal chromosomes. The NK cells in decidual lymphocytes were evaluated by flow cytometry using monoclonal antibodies for CD56, CD16, and CD3. RESULTS: The percentages of CD56+ CD16- CD3- cells in decidual lymphocytes in RSA were lower than in normal pregnancies (P < 0.002). The CD56+CD16+/CD56+CD16- cells ratio in RSA was higher than in normal pregnancies (P < 0.02). CONCLUSION: The lower percentages of CD56+CD16-CD3- cells in RSA cases may show an inappropriate accumulation of NK cells in the decidua, and this finding may be a factor involved in RSA.     

Foxp3在子痫前期患者胎盘的表达变化

目的本文检测Foxp3在子痫前期患者胎盘中的表达,探讨其在子痫前期免疫耐受失衡中的作用。方法选择子痫前期患者30例,正常晚期妊娠患者30例。采用免疫组织化学法检测胎盘调节性T细胞的特异性转录因子Foxp3的表达。结果胎盘中Foxp3在子痫前期组的表达阳性率为(26.67%)明显低于正常对照组(63.33%)(P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘组织中的Foxp3低于正常孕妇,提示其数量的减少使其免疫抑制功能减弱,母胎免疫耐受失衡,导致子痫前期的发生。