慢性乙肝患者外周血CD4CD25FOXP3 Tregs及HBV抗原特异性CTLs的检测和分析

目的: 检测慢性乙肝(CHB)患者外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺调节性T淋巴细胞(Treg细胞)和乙肝病毒(HBV)特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的表达及意义。方法: 收集28例CHB患者和15例健康人外周血单个核细胞标本,运用流式细胞仪对Treg细胞亚群进行定量分析,同时采用酶联免疫斑点法检测HBV抗原特异性CTLs,并结合丙氨酸氨基转移酶(ALT)和 HBV DNA的临床情况进行分析。结果: CHB组CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺ Treg细胞的频率显著高于健康对照组 (3.14%±0.97% vs 1.95%±0.68%,P＜0.05);HBV抗原特异性CTL斑点计数为阳性(19.28±3.85)。CHB组Treg的频率与乙肝病毒载量呈正相关(r=0.831, P＜0.01),与HBV特异性CTL斑点计数值呈负相关(r＝-0.540,P＜0.01)。结论: CHB患者外周血CD4⁺CD25⁺FOXP3^＋Treg细胞表达升高并与病毒载量相关,而与HBV反应的CTLs数量呈负相关,提示Treg细胞可通过抑制细胞免疫反应影响病毒清除。     

Foxp3转染对哮喘小鼠脾淋巴细胞功能的影响

目的: 转染Foxp3至哮喘小鼠脾淋巴细胞,探讨Foxp3表达对脾淋巴细胞功能的影响。方法: 卵白蛋白(OVA)致敏激发制作哮喘小鼠模型,收集培养脾脏淋巴细胞;使用电穿孔法转染真核表达载体pcDNA3.1(-)-Foxp3至脾脏淋巴细胞,并设转染空质粒组和对照组;RT-PCR和Western blotting检测Foxp3的表达;流式细胞术检测转染后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞/CD4⁺细胞比例;MTT法检测转染后的脾脏淋巴细胞增殖反应,ELISA检测脾淋巴细胞上清中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的含量。结果: 转染组Foxp3 mRNA 和蛋白的表达水平显著高于空质粒组和对照组;转染Foxp3后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞/CD4⁺细胞比例显著高于空质粒组和对照组;与空质粒组和对照组相比,转染pcDNA3.1(-)-Foxp3质粒明显抑制了脾淋巴细胞增殖;转染组细胞上清中IL-4和IFN-γ含量低于空质粒组和对照组。结论: 转染pcDNA3.1(-)-Foxp3至哮喘小鼠脾淋巴细胞,Foxp3得到有效表达。Foxp3的高表达能增加CD4⁺CD25⁺ T细胞的数量,抑制哮喘小鼠脾淋巴细胞的增殖以及Th1和Th2细胞因子的产生。     

Treg/Th17失衡在脓毒症发病机制中的作用

目的: 观察脓毒症患者外周血中CD4⁺CD2⁺CD127^-调节性T细胞(Treg)及辅助性T细胞17(Th17)的比例,并探讨Treg/Th17失衡在脓毒症发病中的作用。方法: 选择2010年1~8月入住我院ICU的脓毒症患者70例,按疾病严重程度分为脓毒症组(34例)、重症脓毒症组(21例)和脓毒症休克组(15例)。第1 d抽取外周血,应用流式细胞术检测不同组别患者外周血中Treg/Th17比例及CD14单核细胞 HLA-DR表达率,并探讨Treg/Th17比例与免疫状态及病情严重程度(APACHEⅡ评分)的关系。选取同期健康查体者为对照组(30例)。结果: (1) 和对照组相比,各病例组外周血Treg及Th17比例均明显升高(均P<0.01),但升高的程度不同。Th17表达以重症脓毒症组升高最明显,Treg表达以脓毒症休克组升高最明显。(2)Treg/Th17:脓毒症休克组>重症脓毒症组>脓毒症组,各组两两相比均有显著差异(均P<0.01)。脓毒症组Treg/Th17显著低于对照组(P<0.01),脓毒症休克组Treg/Th17显著高于对照组(P<0.01),但重症脓毒症组Treg/Th17与对照组比较无明显差异。(3)CD14单核细胞HLA-DR表达率:脓毒症休克组<重症脓毒症组<脓毒症组<对照组,两两比较均有显著差异(均P<0.01)。(4)Th17比例和APACHEⅡ评分及 HLA-DR表达率无相关性;Treg表达率和APACHEⅡ评分正相关(r=0.93, P<0.01),和HLA-DR表达率负相关(r=-0.89, P<0.01);HLA-DR表达率和APACHEⅡ评分负相关(r=-0.91, P<0.01)。结论: (1)脓毒症患者中Treg和Th17比例失调,Treg/Th17的失衡参与脓毒症的发病及进展。(1)Treg表达率可以在一定程度上反映机体病情及免疫状态。     

Th17细胞联合CD3+CD8-IL-21+T细胞升高与宫颈癌发生发展的关系

目的: Th17细胞在免疫调节中起重要作用,而IL-21与Th17在分化调节和功能行使上密切相关。本研究旨在探讨Th17在宫颈癌发生发展中的作用。方法: 选取37例宫颈癌患者、25例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者和18例健康志愿者作为研究对象,用流式细胞分析术检测外周血中Th17细胞及CD3⁺CD8^-IL-21⁺T细胞的比例。分析两者与临床病理指标之间的关系。结果: 与健康对照组相比,Th17细胞及CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞比例(占淋巴细胞百分比)在CIN组(P<0.01,P<0.05)及宫颈癌组(P<0.01,P<0.05)均明显升高。此外,2种细胞的比例都与临床分期有关,在晚期宫颈癌组明显升高(均P<0.05),并且有淋巴结转移组或脉管浸润组都明显高于相对应的无转移组(P<0.01, P<0.05)或无浸润组(均P<0.01)。此外,在健康对照组和宫颈癌组,Th17与CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞呈正相关,CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞的比例还与肿瘤大小有关(P<0.01)。结论: Th17和CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞在宫颈癌患者外周血中的比例上调,在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。     

IL-38对胶原诱导性关节炎大鼠Th17/Treg失衡的调节作用

目的探讨IL-38对胶原诱导性关节炎Th17/Treg失衡的调节作用。方法 SPF级SD大鼠30只,随机分为3组,即正常对照组(CON)、胶原诱导性关节炎大鼠(collagen-induced arthritis rats,CIA)、CIA+IL-38(5ng/g)组;CIA组、IL-38组采用大鼠尾根部皮下注射牛II型胶原乳剂建立CIA大鼠模型;IL-38组于初次免疫后第24天起每天注射IL-38(20-152)5 ng/g,连续给药10d;观察大鼠后足及关节情况,HE染色观察大鼠滑膜组织病理变化,流式检测Th17/Treg细胞变化,ELISA、qRT-PCR检测Th17/Treg相关基因的表达情况。结果 IL-38明显改善胶原诱导性关节炎大鼠的症状、滑膜组织病理情况、调节Th17/Treg细胞的表达水平以及Th17/Treg相关基因的表达水平。结论 IL-38通过调节Th17/Treg失衡对胶原诱导性关节炎大鼠具有保护作用。     

PI3K信号通路对哮喘小鼠调节性T细胞与Th17失衡的调控作用

目的: 探讨PI3K信号通路对哮喘小鼠T细胞中辅助性T细胞17(Th17)与CD4⁺CD 25⁺调节性T细胞(Treg)失衡的调控作用。方法: 尼龙毛柱法分选对照组和哮喘组BALB/c小鼠脾脏T细胞,进而在细胞水平分组:对照组(A组)分为2个亚组:空白对照组(A1),PI3K抑制剂LY294002对照组(A2);哮喘组(B组)继续分为4个亚组:哮喘组(B1),5 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B2),10 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B3),20 μmol/L PI3K抑制剂LY294002组(B4),共培养72 h,采用流式细胞仪检测CD4⁺CD 25⁺Treg的数量,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测上清中白细胞介素(IL)-10和IL-17水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转录因子Foxp3和RORγt的mRNA水平。结果: (1)分选后获得的T细胞纯度为(74.12±3.08)%,细胞存活率为(92.82±3.21)%;(2)Treg的数量B1组较A1组显著降低(P<0.01);A2组显著高于A1组(P<0.05);B3和B4组较B1组显著增高(均P<0.01);(3)IL-17水平和RORγt mRNA表达B1组较A1组显著增高(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01,P<0.05);B2、B3、B4组均显著低于B1组(均P<0.01),呈剂量依赖性降低;而IL-10水平和Foxp3 mRNA表达B1组显著低于A1组(P<0.01); A2组显著高于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组均显著高于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性增高;(4)RORγt/Foxp3 mRNA的比值B1组显著高于A1组(P<0.01);A2组显著低于A1组(P<0.01);B2、B3和B4组显著低于B1组(P<0.01),且呈浓度依赖性降低;RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-17水平呈正相关(r=0.89,P<0.01);RORγt/Foxp3 mRNA比值与IL-10呈负相关(r=-0.86,P<0.01)。结论: 哮喘小鼠存在Th17/Treg失衡,PI3K信号通过调控Treg/Th17失衡而参与哮喘发病过程。     

镁对哮喘患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞凋亡及Foxp3表达的影响

目的:观察镁对分离培养的健康人和哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞凋亡及叉头框蛋白3(Foxp3)表达的影响。方法:经磁珠分离法分离出健康人和哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺T细胞,分镁剂干预组(10 mmol/L)及空白组培养72 h后,用流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺T细胞的凋亡率及Foxp3表达情况。结果:(1)健康人外周血CD4⁺CD25⁺T细胞的纯度为77.4％~92.3%,哮喘患者CD4⁺CD25⁺T细胞的纯度为75.2％~93.8％。(2)CD4⁺CD25⁺T细胞占外周血CD4⁺T细胞的比例在健康组为4.12%~7.98%,在哮喘组为4.51%~8.68%,两者没有显著差异(P＞0.05)。(3)镁(10mmol/L)可以诱导健康组及哮喘组外周血CD4⁺CD25⁺T细胞凋亡率增加(P＜0.05),但对Foxp3的表达无影响(P＞0.05)。结论:镁促进CD4⁺CD25⁺T调节细胞凋亡增加可能为其治疗支气管哮喘的作用机制之一。     

正常成人外周血Th1/Th2细胞亚群体外活化的研究

目的:探讨CD4⁺T细胞在体外活化的条件下向Th1或Th2极化的规律。方法:用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人抗凝外周血单个核细胞(PBMC)和血浆,将PBMC置于含或不含有自身血浆环境中,并在植物血凝素(PHA,20mg/L)的刺激下进行培养,培养24、48、72h后收获细胞,分别用双色免疫荧光标记,以流式细胞术对CD4⁺T细胞表达表面分子CCR3、CCR5进行分析。结果:CD4⁺T细胞受自身血浆和PHA刺激后向Th1/Th2两个方向极化,24、48、72h后极化率分别达到(13.28±1.59)%/(12.70±1.65)%、(17.19±1.03)%/(17.50±1.30)%、(19.49±2.87)%/(18.58±1.49)%;而只有PHA刺激的极化率很低,两组有显著性差异(P＜0.01);Th1∶Th2之比约等于1。结论:正常成人外周血CD4⁺T细胞可以在体外自身血浆和PHA的条件下明显极化,而且Th1/Th2细胞处于等值的平衡状态。     

肝癌细胞冻融抗原负载树突状细胞瘤苗的制备与活化

目的: 探讨制备肝癌树突状细胞(DCs)瘤苗和体外诱导DCs活化的优化方法。方法: 取健康人新鲜血50mL, Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC), 制备肝癌细胞冻融抗原, 采用不同因子组合培养PBMC, 诱导和激活DCs, A组: rhGM-CSF+IL-4; B组: rhGM-CSF+IL-4+冻融抗原负载;C组:rhGM-CSF+IL-4+TNF-α; D组: rhGM-CSF+IL-4+TNF-α+冻融抗原负载。结果: 各组均诱导出DCs, 并高表达CD11c和CD54, 冻融抗原可明显上调CD86、CD80、HLA-DR表达和IL-12 p40分泌(P<0.01), TNF-α促进CD86表达的作用更显著, 但对IL-12分泌无影响, 依次用TNF-α诱导和冻融抗原负载可进一步促进CD86表达和IL12 p40分泌(P<0.05)。CD54和HLA-DR双标记免疫细胞化学染色显示, 各组DCs大多为CD54⁺。表达HLA-DR的DCs均为CD54⁺HLA-DR⁺, 其中, A组CD54⁺HLA-DR⁺细胞数量最少, D组最多, 平均每个细胞HLA-DR的表达水平也与此对应。结论: 采用rhGM-CSF、IL-4诱导的未成熟DCs, 依次使用TNF-α刺激与肝癌细胞冻融抗原修饰可有效促进DCs的活化与成熟。     

血管内皮祖细胞的体外扩增特性研究

目的:探讨血管内皮祖细胞(EPCs)在体外扩增特性。方法:利用磁性活化细胞分选系统(MACS)系统富集CD34⁺细胞,在相同条件下与同批的单个核细胞(MNC)、CD34⁺和CD34^-混和细胞进行对照培养,比较EPCs体外扩增效果。另外研究血管内皮生长因子(VEGF)和传代培养对细胞分化、扩增动力学和细胞凋亡的影响。应用细胞免疫化学和流式细胞术对细胞定性定量分析。结果:MNC培养、CD34⁺和CD34^-细胞混和培养明显高于CD34⁺细胞单独培养EPCs扩增率(P＜0.05),一旦细胞形成线索样结构行传代培养明显低于未传代的细胞凋亡(P＜0.05)。VEGF对细胞凋亡(P＞0.05)无明显影响,这些分化的EPCs免疫细胞化学染色CD34、vWF、KDR、CD31阳性,并且吞噬乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)。培养7d流式细胞检查CD34⁺、AC133^＋分别占贴壁(AT)细胞的68.2%±6.3%(n=6)、57.2%±9.8%(n=6)。结论:MNC培养、CD34⁺和CD34^-细胞混和培养提高了EPCs扩增率,早传代使凋亡率明显降低。VEGF对EPCs体外扩增无明显影响。     

NF-κB寡核苷酸对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达影响的研究

为探讨NF-κB寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达的影响,建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,将NF-κB ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、模型组和实验组。42d后用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏Th17、Treg百分率、凋亡率;qRT-PCR检测IL-17、TGF-β和IL-6mRNA表达;用ELISA检测血清和关节液IL-17、TGF-β、IL-6含量。结果显示实验组大鼠脾脏Th17占CD4~+T细胞比例及IL-17和IL-6mRNA表达、血清和关节液中IL-17和IL-6的水平均低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Th17凋亡百分率低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg占CD4~+T细胞比例及TGF-βmRNA表达、血清和关节液中TGF-β的水平均高于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg凋亡百分率与模型组相比明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。由此可知,NF-κB ODN调节CD4~+T细胞Th17、Treg之间细胞平衡及相关细胞因子的分泌,对CIA有较好的治疗作用。     

PGE2受体EP2和EP4调节CIA小鼠脾B细胞表面分子和细胞因子表达

目的: 探讨前列腺素E₂(PGE₂)受体EP2和EP4在胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠脾B细胞免疫调节中的作用。方法: 建立CIA小鼠模型,用CD19⁺ 免疫磁珠分选脾B细胞,流式细胞术检测MHCⅡ、CD80和CD86的表达,实时荧光定量PCR技术检测EPs 和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-4、IL-10和TGF-β的表达。结果: 小鼠脾B细胞表达EP的4个亚型,CIA模型小鼠EP2和EP4表达增加;EP2阻断剂可以降低MHCⅡ、CD80和CD86的表达,而EP4阻断剂对CD80没有明显影响;EP2和EP4阻断剂均可以降低IFN-γ、TNF-α 和IL-6 的表达(P<0.05或P<0.01),促进IL-10的表达(P<0.01或P<0.05),并可以分别促进IL-4和TGF-β的表达(P<0.01)。结论: PGE₂可通过EP2/EP4调节B细胞表面分子和细胞因子参与CIA发病,EP2/EP4有可能成为类风湿关节炎治疗的新靶点。     

母胎界面树突状细胞CCL17和CCL22表达在母胎免疫耐受中的作用

目的: 检测非孕期子宫内膜和正常妊娠早期及复发性自然流产患者蜕膜中树突状细胞(DC)CCL17和CCL22的表达差异,探讨母胎界面DC在CD4⁺CD25⁺调节性T细胞(Treg)的募集及母胎免疫耐受微环境形成中的作用。方法: 正常早孕组人工流产时、复发性流产组清宫时取其蜕膜,正常未孕组行子宫切除时取其内膜组织。分离蜕膜或子宫内膜单个核细胞,体外诱导培养DC,用real-time PCR法分析3组DC CCL17和CCL22 mRNA的表达水平,ELISA法检测3组DC培养上清液中CCL17和CCL22蛋白的表达。结果: 正常早孕组蜕膜DC CCL17和CCL22 mRNA的表达分别为3.04±0.40和1.83±0.24,均高于正常未孕组(0.85±0.24和0.31±0.08,P<0.01)和复发性流产组(1.65±0.14和0.96±0.09,P<0.01)。正常早孕组蜕膜DC能够持续旺盛分泌趋化因子CCL17和CCL22,在培养的12~96 h内CCL17和CCL22的分泌量逐渐增多。同一时点早孕组DC分泌的CCL17和CCL22均明显高于未孕组和复发性流产组DC分泌的CCL17和CCL22(P<0.01)。结论: 正常妊娠后蜕膜DC表达CCL17和CCL22增强,DC可能通过高表达CCL17和CCL22而增强对CD4⁺CD25⁺Treg的趋化作用,从而在母胎界面的免疫耐受中发挥重要作用,蜕膜DC表达CCL17和CCL22下降可能与复发性自然流产的发病有关。     

耐受性树突状细胞通过降低Th1细胞和Th17细胞比例减轻CIA大鼠的关节炎症和病变

目的初步探讨核因子κB寡脱氧核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导建立的耐受性树突状细胞(tolDC)对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)大鼠1型辅助T(Th1)细胞、 Th2细胞、 Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的影响及干预效果。方法取SD雌性大鼠建立CIA大鼠模型,设CIA模型组、牛Ⅱ型胶原蛋白-诱骗剂-树突状细胞(Col2-decoy DC)处理组、空白对照组、 Col2-decoy DC对照组。于初次免疫的第20天尾静脉注射tolDC进行处理,造模第7周处死大鼠。流式细胞术检测大鼠脾脏Th1细胞、 Th2细胞、 Th17细胞、 Treg比例,HE染色检测踝关节病变情况,并对关节炎指数(AI)进行评分。结果与CIA模型组相比,Col2-decoy DC组AI降低且踝关节病变减轻,脾脏CD4~+ T细胞中Th1细胞、 Th17细胞百分率降低而Th2细胞、 Treg百分率升高。结论 tolDC通过降低CD4~+ T细胞中Th1细胞和Th17细胞比率减轻CIA大鼠炎症和关节病变。     

异种角膜基质异位移植对大鼠外周血T细胞亚群的影响

目的: 比较3种异种角膜基质的免疫原性。方法: 将SD大鼠36只随机分为4组,每组9只。1组为对照组,2-4组为实验组。分别获取新鲜猪、兔、鸡角膜基质,等量湿重25 mg异位植入大鼠背部皮下,术后观察伤口愈合情况,并于术后7 d、14 d、28 d获取大鼠外周血,免疫荧光标记及流式细胞仪分析比较3种异种角膜基质对大鼠CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、CD71⁺表型的动态影响。结果: 各组植入处皮肤无红肿、无渗出及其它改变,伤口愈合良好;各组与对照组比较:猪角膜基质组各时相表达的CD4⁺、CD8⁺、CD25⁺、CD71⁺T细胞比例无显著差异(P＞0.05);兔角膜基质组术后7 d,CD4⁺T细胞升高(P＜0.05),鸡角膜基质组术后7 d,CD4⁺、CD4⁺CD71⁺升高(P＜0.01)。结论: 3种异种角膜基质对大鼠细胞免疫原性比较:鸡>兔>猪,猪角膜基质的免疫原性最低。     

CIK细胞回输联合吉西他滨和顺铂治疗鼻咽癌放疗后肝肺转移瘤的效果及机制研究

目的: 观察评价细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞回输联合吉西他滨和顺铂(GP)方案化疗治疗鼻咽癌放疗后肝肺转移瘤的近远期疗效,并探讨其机制。方法: 2007年8月至2008年7月放疗后随访发现肝或肺转移患者30例,随机分为3组。研究1组10例行过继性CIK细胞回输联合GP化疗;研究2组10例行单纯GP化疗。对照组患者及健康志愿者各10例,不给予抗肿瘤治疗而仅进行随访。观察其近远期疗效、血清EB病毒DNA PCR定量和外周血淋巴细胞亚群分布变化。结果: CIK+GP组有效率(90%)比单纯GP组(70%)好,但2组间无明显差异;而CIK+GP组和GP组均比对照组(10%)好,差异明显。CIK+GP组最和GP组治疗后血清EBV-DNA PCR定量均有不同程度的下降,尤以CIK+GP组为明显,而对照组则无明显改变。鼻咽癌放疗后肝肺转移瘤患者外周血CD3⁺比例较健康志愿者显著低下,经CIK+GP治疗后CD3⁺比例较单纯GP化疗组有所提高;肝肺转移瘤患者和健康志愿者CD4⁺/CD8⁺比例无明显差异,经CIK+GP生物化疗后其比例明显升高,而经GP化疗后明显降低,2组之间存在明显差异。CIK+GP组、GP组和对照组2年生存率(OS)分别为60.0%、40.0%和20.0%,生存曲线分析显示3组病例之间均有明显差异(P＜0.05)。结论: CIK 细胞回输联合GP 化疗治疗鼻咽癌放疗后肝肺转移瘤具有肯定的近远期疗效并可改善其预后;两者具有协同作用,其作用可能与改变CD3⁺及CD4⁺/CD8⁺比例有关。     

过敏性紫癜患儿Th17、Treg 细胞及IL-17、IL-23 水平的测定

目的:观察过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)患儿急性期及恢复期Th17、Treg 细胞及IL-17、IL-23水平变化,以便更好地认识HSP 的免疫学发病机制,为HSP 的治疗提供帮助。方法:采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测HSP 患儿65 例和健康对照组儿童30 例外周血中Th17 细胞和Treg 细胞比例;采用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定其血浆中IL-17、IL-23 水平。结果:HSP 急性期组Th17、Th17/ Treg 细胞及IL-17、IL-23 水平高于正常对照组(P<0.05),恢复期组较急性期组降低(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。HSP 急性期组Treg 水平低于正常对照组(P<0.01),恢复期组较急性期组升高(P<0.01),但是仍低于正常对照组(P<0.01)。单纯型、腹型和其他类型HSP 患儿Th17、Treg、Th17/ Treg 及IL-17、IL-23 水平相同(P>0.05)。HSP 急性期患儿Th17 细胞比例与IL-17 水平呈正相关(r =0.880,P<0.01);HSP 急性期患儿IL-23 水平与Th17 细胞比例、IL-17 水平呈正相关(r =0.838 或r =0.877,P<0.01)。结论:Th17、Treg、Th17/ Treg、IL-17 和IL-23 共同参与HSP 的发病,但在单纯型、腹型和其他类型中的水平无明显差异,值得深入研究。     

Th17和Treg细胞以及其相关细胞因子在慢性丙型肝炎以及丙型肝炎肝硬化病人外周血中的变化及意义

目的：〖HTSS〗研究Th17和Treg细胞以及其相关细胞因子在慢性丙型肝炎以及丙型肝炎肝硬化病人外周血中的变化及意义,以探讨其在慢性丙型肝炎及丙型肝炎肝硬化发病中的作用。 〖HTH〗方法：〖HTSS〗用流式细胞和ELSIA技术检测慢性丙型肝炎及丙型肝炎肝硬化病人外周血Th17和Treg细胞表达率以及IL 6、IL 10、TGF β、IL 17血清学水平,分析上述指标在健康对照组和慢性丙型肝炎组以及肝硬化组之间的差异。 〖HTH〗结果：〖HTSS〗慢性丙型肝炎病人的Th17细胞表达率(133%±030%)以及IL 6［(810±242）ng/L］、IL 17［(1670±473）ng/L］血清水平明显高于健康对照组Th17 细胞表达率(114%±019%)以及IL 6［(670±172）ng/L］、IL 17［(1229±188）ng/L］血清水平,P＜005;丙型肝炎肝硬化组和慢性丙型肝炎组病人外周血的Treg细胞表达率(621%±076%,589%±085%)明显高于健康对照组的Treg细胞表达率（551%±059%）,P<005;丙型肝炎肝硬化组病人Th17/Treg的比值（019±002）明显低于慢性丙型肝炎组（022±003）和健康对照组（021±003）,P<005;丙型肝炎肝硬化组外周血IL 10水平［（1621±376）ng/L］和TGF β水平［（515±083）ng/L］显著高于慢性丙型肝炎组［（1436±278）ng/L;（447±087）ng/L］和健康对照组［（1401±301）ng/L;（443±098）ng/L］,P<005。 〖HTH〗结论：〖HTSS〗Th17和Treg细胞以及其相关细胞因子参与了丙型肝炎慢性化和肝硬化的进程,Th17和Treg细胞以及其相关细胞因子在丙型肝炎慢性化和肝硬化的治疗和预防方面可能具有重要的意义。     

AFP-L3阳性肝细胞癌患者肿瘤分期和外周血淋巴细胞亚群的研究

目的: 分析小扁豆凝素结合型甲胎蛋白(AFP-L3)阳性的肝细胞癌患者肿瘤分期及外周血淋巴细胞的改变,探讨AFP-L3水平与肿瘤分期及免疫状态的关系。方法:采集60例肝细胞癌患者外周血,检测AFP及AFP-L3含量。根据外周血AFP-L3比例将60例原发性肝细胞癌患者分为2组:AFP-L3(+)组和AFP-L3(-)组。流式细胞术检测外周血中各淋巴细胞亚群(NK、CD4⁺、CD8⁺、CD4/CD8、Treg)的比例。结果:AFP-L3(+)组患者UICC分期Ⅲ+Ⅳ期为29例,AFP-L3(-)组为7例;AFP-L3(+)组患者BCLC分期C+D期为20例,AFP-L3(-)组为3例。AFP-L3(+)组患者发生血管侵犯为17例,远高于AFP-L3(-)组(1例)。AFP-L3(+)组患者外周血中NK细胞比例及CD4/CD8比值下降,CD8⁺T和Treg细胞显著比例上升。结论:外周血AFP-L3阳性的肝癌患者容易发生血管侵犯,且分期较差,可能与淋巴细胞亚群发生变化、免疫系统受到抑制有关。     

慢性乙型肝炎患者外周血Treg/Th17比率的检测及其与肝功能的相关性研究

目的:探讨Treg、Th17细胞及Treg/Th17比率与肝功能的相关性,以便更好地反映慢性乙型肝炎(CHB)患者肝脏免疫炎症。方法:收集41例HBeAg阳性CHB患者、29例HBeAg阴性CHB患者和20例健康志愿者的外周血,采用流式细胞术检测Treg细胞(CD4+CD25highCD127low)和Th17细胞(CD3+CD8-IL-17+)的频数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TGF-β1水平;采用全自动生化仪检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)等指标。结果:CHB患者Treg和Th17细胞的频数明显高于健康对照组(P<0.05),Treg/Th17比率低于健康对照组(P<0.05)。CHB患者Treg细胞频数与TBil、DBil和AST呈正相关(P<0.05),Th17细胞与以上指标均无相关性(P>0.05)。HBeAg阳性CHB患者Treg/Th17比率与TBil、DBil和ALT呈正相关(P<0.05),且随病情进展Treg/Th17比率呈上升趋势(P>0.05),TGF-β1则明显升高(P<0.05);HBeAg阴性患者Treg/Th17比率与ALT呈负相关(P<0.05)。综合治疗平均2个月后,HBeAg阳性患者Treg/Th17比率仍与TBil保持正相关(P<0.05)。结论:Treg细胞和Treg/Th17比率与CHB患者的肝功能具有良好相关性。监测Treg、Th17细胞及其比率,有助于反映CHB患者肝组织的免疫炎症。