盐霉素抑制耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv增殖并诱导其凋亡

目的: 探讨盐霉素对耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv抑制增殖和诱导凋亡的作用及其机制。方法: 采用CCK-8的方法检测盐霉素对K562/Glv细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧、细胞内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)和线粒体膜电位(ΔΨ_m);比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western blotting 分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对K562/Glv细胞生长具有剂量依赖性抑制作用,0.2 μmol/L时细胞增殖抑制率为(36.70±2.31)%,细胞凋亡率为(19.66±2.43)%;0.2 μmol/L盐霉素作用于K562/Glv细胞,ΔΨ_m显著下降,24 h时下降至对照组的(19.8±2.4)%,细胞内活性氧和[Ca²⁺]_i在短期显著升高。Caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Bcl-2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。同时,盐霉素也减少K562/Glv细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素不仅通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导耐格列卫人慢性粒细胞白血病细胞K562/Glv的凋亡,而且通过抑制Wnt信号途径抑制K562/Glv细胞增殖。     

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的: 探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法: 采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨ_m)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2 μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨ_m显著下降,而细胞内活性氧和Ca²⁺浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl- 2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。     

地西他滨联合丙戊酸钠促进胃癌MGC-803细胞凋亡和G0/G1期阻滞的机制研究

目的: 探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对胃癌细胞株MGC-803凋亡和细胞周期的影响及机制。方法: DCA 1.5 μmol·L^-1、DCA 3.0 μmol·L^-1、VPA 1.5 mmol·L^-1、DCA 1.5 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1和DCA 3.0 μmol·L^-1+VPA 1.5 mmol·L^-1作用MGC-803细胞72 h。Annexin V/PI法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR检测nm23-H1 mRNA表达。结果: VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组 和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组 凋亡率均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。MGC-803细胞G₀/G₁期比例在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(61.55%±2.38%)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(66.75%±2.48%)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。nm23-H1 mRNA在VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 1.5 μmol·L^-1联合用药组(1.84±0.46)和VPA 1.5 mmol·L^-1+DCA 3.0 μmol·L^-1联合用药组(2.88±0.42)的表达水平均高于其相应单药组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论: DCA联合VPA能显著促进MGC-803细胞凋亡及G₀/G₁期阻滞,其机制可能与促nm23-H1基因的表达有关。     

小环肽C*HSDGIC*对中波紫外线诱导的视网膜色素人上皮细胞凋亡的影响

目的: 探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽 (PACAP) 的衍生物小环肽C^*HSDGIC^*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm² UVB照射,随后实验组给予含不同浓度CHC的无血清培养基培养,对照组给予无血清培养基培养;CCK-8法检测CHC对RPE细胞活性的影响;流式细胞术Annexin-V/PI双染检测RPE细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果:Western blotting显示RPE细胞表达PAC1受体,CCK-8法显示CHC促细胞活性的最佳浓度为100 μmol/L,细胞活性比对照组增加(34.23±3.39)%(P<0.05),抗凋亡最佳浓度也为100 μmol/L,细胞活性比对照组增加(20.10±1.48)%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,100 μmol/L CHC能使UVB照射后凋亡细胞比例下降 (5.63±1.49)%,线粒体去极化细胞比例下降(5.2±0.5)% (P<0.05)。结论:人RPE细胞存在PAC1受体,小环肽C^*HSDGIC^*对人RPE细胞有促进活性和拮抗凋亡的作用。     

红景天甙对缺氧/缺糖损伤的SH-SY5Y细胞线粒体膜电位的影响

目的:观察红景天甙对SH-SY5Y 细胞缺氧/缺糖损伤时细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位和活性的变化,探讨其对神经细胞线粒体膜电位的影响。方法:应用细胞培养,四唑盐比色实验( MTT )检测细胞线粒体活性,流式细胞术检测细胞内[Ca²⁺]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位。结果: SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2、4、6、12 h后,细胞内[Ca²⁺]i和细胞凋亡百分率明显高于对照组, 均有显著差异(P<0.01);细胞经缺氧/缺糖处理后,线粒体膜电位和活性明显低于对照组,2 h时分别为29.17%(P<0.01),38.80% (P<0.01), 12 h时分别为56.72%(P<0.01), 63.58% (P<0.01);红景天甙能显著降低细胞内[Ca²⁺]i,抑制细胞凋亡的发生,提高线粒体膜电位和活性,与缺氧/缺糖损伤组相比均有显著差异(P<0.05,P<0.01)。结论:红景天甙可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关。     

姜黄素对放线菌素D/TNF-α诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元损伤的影响

目的: 探讨姜黄素对放线菌素D(ActD)/TNF-α诱导的PC12细胞和大鼠海马神经元凋亡的影响及其作用机制。方法: 将PC12细胞分为以下6组:对照组、TNF-α组、ActD组、姜黄素组、ActD/TNF-α组和姜黄素+ActD/TNF-α组。各组细胞培养24 h后进行下列处理:倒置荧光显微镜普通光观察各组细胞的形态变化;Annexin V/PI染色流式细胞术检测各组PC12细胞凋亡率; Fluo-3 AM染色流式细胞术测定细胞内Ca²⁺浓度。制备离体大鼠海马脑片,分组处理同PC12细胞,细胞外微电极记录技术观察各组海马脑片CA1区长时程增强(long-term potentiation,LTP)的变化情况。结果: 10 μg/L ActD和50 μg/L TNF-α协同处理可导致PC12细胞明显损伤,而5 μmol/L姜黄素则可以减轻这种损伤作用(P<0.05);ActD/TNF-α可诱导PC12细胞内Ca²⁺浓度升高,姜黄素可以通过降低胞内Ca²⁺浓度而减少ActD/TNF-α引起的细胞凋亡(P<0.05)。此外,LTP实验也证实ActD/TNF-α可以显著抑制大鼠海马脑片LTP的诱发,而姜黄素可以拮抗这种抑制作用,改善神经元突触可塑性(P<0.05)。结论: 姜黄素可以改善ActD/TNF-α引起的神经元损伤,其机制可能是通过降低细胞内Ca²⁺浓度,维持胞内钙稳态而发挥作用。     

洛伐他汀诱导人子宫内膜癌JEC细胞G1 期同步化的研究

目的: 探讨洛伐他汀(Lov)诱导人子宫内膜癌JEC细胞G₁期同步化的方法及JEC细胞解除G₁期同步化后的细胞周期进程。方法: CCK-8法测定JEC细胞的倍增时间,采用10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L和40 μmol/L的Lov,作用1×细胞倍增时间进行流式细胞术检测G₁期细胞的比例,获得G₁期同步化的最佳Lov浓度;采用最佳浓度作用JEC细胞,于作用后的0.5×倍增时间~2×倍增时间内,每隔4 h检测同步化程度,获得最佳浓度Lov作用下的最佳同步化时间;解除G₁期同步化,每隔4 h检测一次,研究JEC细胞解除G₁期同步化后的细胞周期进程。结果: CCK-8法检测显示JEC细胞的倍增时间约为24 h;JEC细胞的最佳G₁期同步化条件为:20 μmol/L Lov作用24 h,可获取G₁期细胞(85.00±0.79)%;JEC细胞于解除G₁期同步化后16 h,获得最大量的S期细胞,为(45.28±0.53)%;同时G₁期细胞比例达到最低,为(35.93±0.44)%。结论: 20 μmol/L Lov作用24 h,可获得大量G₁期细胞;解除G₁期同步化后16 h,S期细胞比例最高,G₁期细胞比例达到最低,达到满意的G₁期同步化释放后效果。     

阿霉素联合塞来昔布诱导胃癌细胞凋亡的作用研究

目的:研究环氧化酶-2 (COX-2) 抑制剂塞来昔布联合阿霉素对胃癌MGC-803细胞株的凋亡诱导作用，并探讨其相互作用的可能的分子机制。方法:用MTT法检测MGC-803的增殖情况。用荧光显微镜、流式细胞术和DNA梯度电泳检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果:随着阿霉素剂量的增加，MGC-803细胞的数量明显减少。细胞大部分静止于G₀/G₁期，S期细胞明显减少。 阿霉素（5 mg/L）联合塞来昔布（25 μmol/L）明显抑制MGC-803细胞的生长。肿瘤细胞经阿霉素或塞来昔布处理后荧光显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态变化。与两者单独用药相比，联合用药后的DNA梯度变化更为明显。联合用药 48 h 后MGC-803细胞堆积在G₀/G₁，而S期减少的细胞数量比两者分别用药时更为显著。结论：塞来昔布和阿霉素具有协调的诱导凋亡的作用，这对于将COX-2抑制剂用于肿瘤的临床辅助化疗具有重要意义。     

NO在外源性高浓度Ca2+损伤心肌线粒体中的作用

目的：探讨一氧化氮在外源性高浓度Ca²⁺损伤心肌线粒体中的作用。方法：正常心肌线粒体分为单纯L-精氨酸（L-Arg）组、Ca²⁺损伤组和左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）保护组,分别于含有20 μmol/L EDTA、100 μmol/L CaCl₂以及1 μmol/L L-NAME+100 μmol/L CaCl₂的反应介质中孵育,然后测定线粒体活力、膜电位以及NO含量。结果：Ca²⁺损伤组线粒体活力、膜电位明显下降,而NO^-₂/NO^-₃含量升高,且线粒体活力、膜电位与NO₂^-/NO₃^-含量呈显著负相关（r=-0.5297,P<0.01;r=-0.6041,P<0.01）;L-NAME保护组线粒体活力与膜电位均明显高于Ca²⁺损伤组,但仍低于L-Arg组,而NO₂^-/NO₃^-含量低于Ca²⁺损伤组,且与L-Arg组无明显差异。结论：外源性Ca²⁺可激活线粒体一氧化氮合酶,使NO生成增多,后者在线粒体活力与膜电位降低中起重要作用。     

鲨鱼软骨制剂对胃癌细胞生长及Bcl-2表达的调控

目的通过研究鲨鱼软骨制剂(SCP)对人胃癌MGC-803细胞Bcl-2的影响,探讨其对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法以不同浓度SCP加入体外培养的MGC-803细胞中,MTT法检测SCP对细胞生长抑制作用;Hoechst33342/PI荧光染色分析细胞死亡特征;流式细胞仪测定细胞凋亡水平;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达。结果 SCP明显抑制MGC-803细胞生长,且抑制作用呈浓度和时间依赖性(P0.05),其24、48和72h的IC 50值分别为1.61,1.04和0.54mg/ml。1mg/ml SCP处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,细胞凋亡比例增大呈时间依赖性(P0.05)。SCP诱导细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低。结论 SCP抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖及诱导细胞凋亡,下调Bcl-2蛋白表达。     

Recombinant human leptin induces growth inhibition and apoptosis in human gastric cancer MGC-803 cells

The aim of this study is to investigate the effect of recombinant human leptin (rhLep) on the proliferation of human gastric cancer MGC-803 cells and its underlying mechanisms. RT-PCR was performed to identify the expression of leptin receptor (Ob-R). Cell proliferation was measured with MTT assay. DNA content and cell cycle were analyzed by flow cytometry. Apoptosis was assessed by DNA ladder assay and flow cytometry analysis using Annexin V-FITC/PI double staining. Underlying mechanisms of rhLep-induced apoptosis were evaluated by the activities of caspase-3, -8, -9, and cytochrome c release from mitochondria. Moreover, the phosphorylation of STAT3 in MGC-803 cells upon rhLep administration was detected by Western blot analysis. Our results demonstrated that two leptin receptors (Ob-Ra and Ob-Rb) were expressed in MGC-803 cells. rhLep diminished the proliferation rate of MGC-803 cells in a time- and concentration-dependent manner and induced MGC-803 cell apoptosis involving in the activation of caspase-8 and caspase-3 but not caspase-9. In addition, rhLep failed to induce cytochrome c release from mitochondria and had no effect on the activation of STAT3 in MGC-803 cells. Therefore, from these results, we concluded that rhLep significantly inhibited cell proliferation via G0/G1 phase cell cycle arrest and induced apoptosis through the extrinsic apoptotic pathway in human gastric cancer MGC-803 cells.     

槲皮素抑制人胃癌MGC-803细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:研究槲皮素抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法:采用MTT比色法检测不同终浓度的槲皮素对MGC803细胞增殖的影响及其细胞毒活性。应用TUNEL(TdTmediateddUTPnickendlabeling)染色法检测槲皮素诱导MGC803细胞凋亡的作用。用免疫组化法测定P16、P53和Cmyc的表达率。结果:在40～100μmol/L范围内,槲皮素可显著抑制MGC803细胞增殖(P<0.01),且呈剂量、时间依赖性。TUNEL染色显示,槲皮素诱导48h后,MGC803细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.01)。免疫组化检测表明,用药组P53及Cmyc蛋白的表达下降,P16蛋白的表达率增强,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:槲皮素可抑制人胃癌MGC803细胞增殖,并能诱导其凋亡,其作用机制可能与下调P53及Cmyc蛋白的表达、上调P16蛋白的表达有关。     

蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的影响

目的：研究蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响，为天然药物蛴螬的开发提供实验和理论依据。方法:应用MTT法检测蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株的抗增殖作用及细胞毒活性；通过倒置显微镜、HE染色、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）荧光染色方法观察肿瘤细胞的形态学改变；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化；应用免疫细胞化学技术（S-P法）检测用药前后凋亡通路中Bcl-2、Fas、caspase-9、caspase-3的表达改变，探讨蛴螬提取物对凋亡通路的影响。结果:(1)用MTT法检测结果表明，蛴螬提取物在体外对MCF-7人乳腺癌细胞株有明显的抑制增殖作用，实验组与对照组相比其生长抑制率有显著差异（P<0.01），而且这种抑制作用呈现浓度和时间的依赖性；(2)倒置显微镜观察表明，实验组可见胞核固缩、碎裂、凋亡小体形成等凋亡形态学变化；(3)HE染色表明实验组胞核浓缩呈蓝黑色、胞浆呈淡红色、核染色质浓缩、呈碎块状，有凋亡小体形成；(4)经AO／EB荧光染色观察结果表明，实验组出现凋亡细胞；(5)流式细胞仪结果表明实验组凋亡率明显增加，呈时间依赖性；(6)免疫细胞化学染色结果表明，实验组 Bcl-2表达下调，Fas、caspase-3、caspase-9表达均上调，与对照组比差异显著（P<0.01）。结论:①蛴螬提取物在体外显著抑制MCF-7人乳腺癌细胞株增殖；②蛴螬提取物对MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡通路的影响机制可能是通过下调Bcl-2，上调Fas、caspase-3 、caspase-9的蛋白表达而起作用，是经由细胞凋亡的线粒体途径和死亡受体途径来完成凋亡的启动和执行。     

MicroRNA-125b在胃癌组织中的高表达并促进胃癌细胞系HGC-27和MGC-803的增殖

 目的 探讨microRNA-125b (miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法 使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mimic转染胃癌细胞系HGC-27和MGC-803,确认过表达成功后,分别使用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测过表达miR-125b对细胞增殖和凋亡的影响。结果 证实在胃癌患者组织中miR-125b的表达水平显著高于癌旁对照组（P<0.01）。在胃癌细胞系HGC-27和MGC-803中过表达miR-125b后,细胞增殖明显增加：转染72h,HGC-27（scramble组：1.632±0.09,mimic组：2.473±0.08）,MGC-803（scramble组：1.603±0.05,mimic组：2.554±0.07））,同时细胞凋亡也受到抑制。结论 miR-125b可能作为癌基因在胃癌中发挥作用,并对细胞增殖和凋亡具有显著影响。     

特异性微小RNA抑制剂对胃癌细胞增殖的影响

目的： 探讨特异性微小RNA抑制剂对胃癌细胞增殖的影响。方法: 设计并合成4种微小RNA（miR-17、miR-21、miR-106a和miR-421）的2’-甲氧修饰的RNA寡核苷酸（微小RNA抑制剂）,用脂质体分别转染到SGC-7901和MGC-803胃癌细胞,然后用实时定量逆转录-聚合酶链反应技术检测微小RNA的表达情况,最后用MTT方法检测胃癌细胞的增殖情况。结果: 4种微小RNA抑制剂均有效抑制了SGC-7901和MGC-803细胞中相应微小RNA的表达;除miR-21抑制剂未见抑制胃癌细胞的增殖外,其它3种微小RNA抑制剂均以剂量依赖方式抑制胃癌细胞的增殖且对SGC-7901的效果优于MGC-803。结论: 微小RNA的特异性抑制剂能有效抑制胃癌细胞的增殖,采用这种技术为研究胃癌的发病机制提供了新方法。     

Activation of p38/HSP27 pathway counters melatonin-induced inhibitory effect on proliferation of human gastric cancer cells

Overexpression of heat shock protein 27(HSP27) in gastric cancer is correlated with poor clinical prognosis. Melatonin, an endogenous hormone, shows promise in gastric cancer therapy. However, there is limited study on the biological activity of HSP27 in response to melatonin treatment. In this study, we show an anti-proliferative action of melatonin on human gastric cancer cell lines BGC-823 and MGC-803. Biochemically, the inhibitory effect of melatonin is accompanied by the upregulation of HSP27 phosphorylation level. Transfection of gastric cancer cells with HSP27-specific siRNA effectively reduces HSP27 phosphorylation and potentiated melatonin-induced inhibitory effect on cell proliferation. The reduction of cyclin D1 in melatonin-treated cells is also aggravated by HSP27 depletion. Moreover, melatonin stimulation increases p38 phosphorylation. Pretreatment with p38 inhibitor SB203580 not only remarkably suppresses melatonin-induced HSP27 phosphorylation, but also augment the inhibitory effect of melatonin on cyclin D1 expression as well as cell proliferation. Taken together, our study indicates the protective pathway of p38/HSP27 against melatonin-induced inhibitory effect on gastric cancer cell proliferation, suggesting that combined with p38/HSP27 pathway inhibitor, the therapeutic efficacy of melatonin on gastric cancer may be improved.     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

沉默Apaf-1 基因对氧糖剥夺/ 复氧复糖PC12 细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默Apaf-1基因对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路的影响。方法:PC12细胞随机分为3组:正常组(Control)、模型组(Model)、Apaf-1基因沉默组(Apaf-1-siRNA)。正常组于CO2培养箱内正常培养,其余2组给予氧糖剥夺2 h、复氧复糖24 h处理,Apaf-1-siRNA组于造模前将化学合成的siRNA通过脂质体转染于PC12细胞靶向沉默Apaf-1基因。用荧光标记的siRNA检测Apaf-1转染效率,Western blot检测转染后PC12细胞Apaf-1蛋白表达,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡指数,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫荧光染色检测Bax/Bcl-2比值,Western blot检测线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达。结果:Apaf-1-siRNA可有效沉默PC12细胞Apaf-1蛋白表达(P<0.05)。与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05),线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达显著升高(P<0.05);与Model组相比,Apaf-1-siRNA组细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡指数和凋亡率显著降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05),Apaf-1、caspase-9、caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:靶向沉默Apaf-1基因可有效降低氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞线粒体凋亡通路关键蛋白Apaf-1、caspase-9、caspase-3表达,抑制细胞凋亡,提高细胞存活率。     

FTO在胃癌组织中的表达降低及其对细胞系MGC-803功能的影响

目的探讨RNA甲基化相关蛋白FTO在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用realtime PCR检测54例胃癌组织及对应癌旁组织中FTO的表达;用质粒(p CMV6-FTO)实现FTO在胃癌细胞系MGC-803中的过表达;通过增殖实验、划痕试验和Transwell实验,检测FTO对MGC-803细胞功能的影响。结果 FTO mRNA在胃癌组织的表达水平显著低于癌旁组织(P0.05),且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关(P0.05);在MGC-803细胞系中过表达FTO,可抑制胃癌细胞增殖(P0.05)、抑制细胞迁移(P0.05)和侵袭(P0.05)。结论 FTO在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。