镉中毒对人脐静脉内皮细胞衰老的影响以及中药防护作用

目的:探讨镉中毒对血管内皮细胞衰老的影响,为进一步揭示中医病因环境毒邪因素所致血管内皮细胞衰老机制以及中药防护作用,从而为血管衰老的预防和控制提供理论依据。方法:通过人脐静脉内皮细胞培养,分成6组,建立不同浓度氯化镉的模型组和处理西药(硫酸锌)、中药复方(冠心康颗粒剂低、中、高浓度)的治疗组后,继续培养24h、48h,观察SOD、MDA以及端粒酶活性变化。结果:不同浓度氯化镉作用24h、48h后,与对照组比较,各组的端粒酶活性和SOD活力明显下降,MDA含量明显增高(P<0.05)。各治疗组与模型组比较,端粒酶活性和SOD活力增高,MDA含量降低(P<0.05),随着氯化镉浓度不同,各治疗组的表现有差异。结论:镉中毒可造成血管内皮细胞病理损伤,也可引起衰老。硫酸锌和中药复方冠心康颗粒剂对血管内皮细胞镉毒作用具有一定的保护作用,从而可能延缓衰老。     

冠心康颗粒剂对镉中毒大鼠氧化损伤的保护作用

[目的]通过观察冠心康颗粒剂对镉中毒大鼠氧化损伤的影响,为研究环境毒邪所致衰老的机制以及中药防护作用,从而为衰老的预防和控制提供理论依据。[方法]选择72只健康Wistar雄性大鼠,随机分为空白组、模型组、西药组、中药低、中、高剂量组,每组12只,每只体重250±50g。除了空白组以外,均给0.05mg/Kg镉溶液,连续2周后停镉,同时西药组给2mL硫酸锌溶液,中药低、中、高剂量组分别给1.5g/(Kg.d)、3g/(Kg.d)、6g/(Kg.d)的冠心康颗粒,连续至60天,实验结束后结果模型组大鼠死亡2只。测定端粒酶(Telomerase)活性、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。[结果]与空白组比较,各组的端粒酶活性和SOD活力明显下降,MDA含量明显增高。(P<0.05)西、中药处理组与模型组比较,端粒酶活性和SOD活力增高,MDA含量降低(P<0.05)。[结论]镉中毒可引起氧化性损伤导致促进衰老,硫酸锌和冠心康颗粒剂可以拮抗镉的毒性,提高抗氧化能力,从而可能延缓衰老。     

LOX-1介导ox-LDL诱导血管内皮细胞p65的表达

目的:观察血凝素氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)对氧化LDL(ox-LDL)诱导原代培养的兔内皮细胞核因子κB(nuclearfactorκB,NFκB)主要成份p65基因及蛋白的影响。方法:用RT-PCR和Westernblot的方法观察ox-LDL对培养的兔内皮细胞表达LOX-1和p65基因及蛋白的影响,然后用中药复方制剂(冠心康)含药血清与兔内皮细胞预先作用后,再观察内皮细胞表达LOX-1和p65基因和蛋白的变化。结果:用浓度为50mg/L的ox-LDL与兔内皮细胞培养24h后,LOX-1和p65的mRNA和蛋白的表达明显增加;用中药复方制剂(冠心康)含药血清与兔内皮细胞预先作用2h后,再加入50mg/L的ox-LDL培养24h,与未加中药复方制剂(冠心康)含药血清相比,兔内皮细胞LOX-1和p65的mRNA和蛋白的表达明显减少。结论:ox-LDL可以调节培养的兔内皮细胞LOX-1和p65基因和蛋白的表达,LOX-1作为ox-LDL的特异性受体,可能介导了ox-LDL诱导血管内皮细胞p65,从而在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要的作用。     

冠心康对镉染毒人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:对比观察冠心康和锌对镉染毒人脐静脉内皮细胞NO水平和细胞增殖率的变化,分析其抗镉染毒致动脉粥样硬化的可能途径。方法:人脐静脉内皮细胞体外培养,随机分为空白组、模型组、补锌组,及冠心康低、中、高剂量组,分别以空白血清、CdCl2血清、CdCl2及硫酸锌血清和CdCl2及冠心康血清培养24h、48h、72h,收集培养液,硝酸还原酶法测定NO浓度,MTT法检测细胞增值率;结果:1μM、5μM、10μM、30μM和60μM各组镉染毒HUVECS细胞NO水平明显下降(P<0.01),60μΜ镉染毒浓度可致HUVECs细胞增殖率(PR)显著降低(P<0.01);而与模型组相比,冠心康组、补锌组的NO含量和PR均有明显恢复(P<0.01)。结论:①冠心康可明显提高镉染毒HUVECs的NO和PR,从而减少血管内皮损伤,发挥抗动脉粥样硬化作用;②气虚痰瘀可能是镉染毒诱发动脉硬化的主要病机。     

冠心康对镉染毒大鼠镉蓄积和锌、钙浓度的影响

目的:观察冠心康颗粒剂对镉染毒大鼠镉蓄积及脏器钙、锌稳态变化的影响,分析中药对镉染毒大鼠的保护作用和可能机制。方法:镉染毒大鼠补锌及中药干预60天,处死后对心、肝和肾中镉、锌、钙含量进行测定;结果:与空白组比较,各染镉组大鼠心、肝、肾中镉浓度均明显升高(P<0.01),模型组伴钙含量升高和锌含量下降(P<0.01);补锌组及冠心康各组与模型组比较,心、肝、肾镉蓄积量明显减少(P<0.01),钙、锌含量变化亦有明显改善(P<0.01)。结论:镉可在体内蓄积并引起钙、锌稳态失调,锌和冠心康颗粒剂可以减少镉蓄积,并拮抗镉对机体锌、钙稳态的干扰。     

冠心康对脂质损伤的人血管内皮细胞保护机制的研究

目的:探讨中药复方制剂冠心康对损伤血管内皮细胞的保护作用,寻找其抗动脉粥样硬化、防治冠心病可能的作用机制.方法:建立细胞损伤模型,用氟伐他汀及冠心康药物血清处理损伤的内皮细胞72h后,分别用硝酸还原酶法、放射免疫法以及ELISA法测定培养上清液中NO、ET以及sICAM-1水平,RT-PCR法测各组细胞sICAM-1mRNA表达水平.结果:中药复方制剂冠心康能明显上调NO水平,降低ET、sICAM-1及其mRNA水平,与模型组比较有显著性差异(P＜0.01).与西药氟伐他汀比较,在下调ET、sICAM-1及其mRNA水平方面,冠心康明显优于氟伐他汀(P＜0.01);在上调NO水平方面,西药则明显强于冠心康(P＜0.01).结论:冠心康能改善受损的内皮细胞分泌功能,减少内皮细胞与单核细胞的黏附,从而减少血管内皮损伤,防止动脉粥样硬化的发生与发展.     

冠心康对脂质损伤的人血管内皮细胞保护机制的研究

目的：探讨中药复方制剂冠心康对损伤血管内皮细胞的保护作用．寻找其抗动脉粥样硬化、防治冠心病可能的作用机制。方法：建立细胞损伤模型．用氟伐他汀及冠心康药物血清处理损伤的内皮细胞72h后，分别用硝酸还原酶法、放射免疫法以及ELISA法测定培养上清液中NO、ET以及sICAM-1水平．RT—PCR法测各组细胞sICAM—1mRNA表达水平。结果：中药复方制剂冠心康能明显上调NO水平．降低ET、sICAM-1及其mRNA水平．与模型组比较有显著性差异（P〈0．01）。与西药氟伐他汀比较，在下调ET、sICAM-1及其mRNA水平方面．冠心康明显优于氟伐他汀（P〈0．01）；在上调NO水平方面．西药则明显强于冠心康（P〈0．01）。结论：冠心康能改善受损的内皮细胞分泌功能．减少内皮细胞与单核细胞的黏附，从而减少血管内皮损伤，防止动脉粥样硬化的发生与发展。     

参乌冠心颗粒剂对冠心病心绞痛患者血清VEGF与IL-6的影响

目的:观察参乌冠心颗粒剂对冠心病心绞痛患者白介素-6(IL-6)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响。方法:120例冠心病心绞痛患者,依据随机双盲双模拟的原则分为参乌冠心颗粒剂组和地奥心血康胶囊组各60例,治疗4周后进行心绞痛疗效评定,并观察治疗前后IL-6及VEGF的变化。结果:①参乌冠心颗粒剂组和地奥心血康胶囊组心绞痛总有效率分别为81.67%、65.00%,两组比较有统计学意义(P<0.05)。②参乌冠心颗粒剂组治疗后IL-6明显降低,与治疗前比较有显著性差异(P<0.01),与地奥心血康胶囊组治疗后比较有统计学意义(P<0.05);参乌冠心颗粒剂组治疗后血清VEGF值明显降低,与治疗前比较有显著性差异(P<0.01),与对照组治疗后比较有统计学意义(P<0.05)。结论:表明参乌冠心颗粒剂能降低患者血浆中IL-6、VEGF的水平,改善内皮功能、抑制粥样斑块形成,稳定斑块、延缓斑块进程作用。     

冠心康对实验性大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的：探讨冠心康颗粒对大鼠急性心肌缺血的保护作用及其机理。方法：雄性大鼠32只，随机分为4组，每组8只，预防给药7d。灌胃结束后，采用在体大鼠冠状动脉左前降支结扎的方法建立心肌缺血模型，观察冠心康颗粒对大鼠急性心肌缺血后心肌中NO和NOS含量的影响，用免疫组化法检测Bcl-2蛋白在心肌中的表达。结果：模型组、冠心康组、地奥组与假手术组比较，心肌组织NO及NOS含量均有明显降低（P〈0．05）；而与模型组相比，冠心康组、地奥组的NO及NOS含量均有明显的恢复（P〈0．05），提示冠心康颗粒可明显提高大鼠急性心肌缺血后心肌中NO和NOS含量（P〈0．005，0．005），同时增加Bcl-2蛋白的表达，减少细胞凋亡。结论：冠心康颗粒对大鼠急性心肌缺血具有保护作用，可能与其提高心肌中NO和NOS含量，增加Bcl-2蛋白的表达有关。     

不同浓度的二仙汤及其拆方对大鼠卵泡颗粒细胞凋亡因子影响的比较研究

目的:观察不同浓度的二仙汤及其拆方温补肾阳组、滋阴泻火组、补血组对原代培养的雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表达及Caspase-3蛋白活性的影响。方法:采用氯化镉复制的大鼠卵泡颗粒细胞凋亡模型,加入不同浓度二仙汤及其拆方,作用24 h后,酶联免疫吸附法检测卵泡颗粒细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达及Caspase-3活性。结果:1二仙汤及其拆方均可抑制卵泡颗粒细胞的凋亡;2二仙汤及其拆方抑制卵泡颗粒细胞凋亡的作用靶点与其浓度相关:高浓度(1 mg/m L)二仙汤主要降低卵泡颗粒细胞中Bax蛋白表达;高浓度(1 mg/m L)二仙汤、低浓度(0.01 mg/m L)补肾阳组主要上调卵泡颗粒细胞中Bcl-2蛋白表达,二者比较无差异;低浓度(0.01 mg/m L)补血组主要抑制卵泡颗粒细胞内Caspase-3活性。结论:二仙汤主要是通过补肾阳组上调卵泡颗粒细胞Bcl-2蛋白表达而发挥君药的"扶正"作用,通过补血组抑制Caspase-3蛋白活性发挥使药的调和作用,初步证明了二仙汤配伍的合理性。     

冠心康对镉染毒大鼠动脉内皮细胞黏附因子表达的影响

镉极易在人体内蓄积且很难靠自身作用排出体外,对人体危害较大。文章采用大鼠镉染毒试验,观察中药冠心康对镉染毒大鼠血管舒缩因子、黏附因子和主动脉病理及黏附因子免疫组化结果的影响,探索中药防治镉染毒致动脉硬化的可能和机理。结果:大鼠中毒后血清NO水平明显降低,ICAM-1水平明显升高(P<0.05),HE染色见动脉硬化改变,免疫组化结果见各层均有较多ICAM-1阳性表达,主要存在于粥样斑块区;冠心康低、中、高剂量条件下,NO水平均明显高于染毒组(P<0.05),ICAM-1水平较染毒组均明显降低(P<0.05),HE染色内膜较完整平坦,主动脉内膜及平滑肌层均可见少量ICAM-1阳性表达信号,但信号强度明显弱于染毒组,且平滑肌细胞形态及排列明显优于对照对照组,尤以冠心康中剂量组改善明显。提示冠心康对镉染毒大鼠动脉硬化具有保护作用。     

冠心康对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样斑块及CD40L表达的影响

目的：通过观察中药复方冠心康对载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠主动脉粥样硬化斑块病理形态及CD40L表达的影响,探讨冠心康抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：45只8周龄雄性ApoE-/-小鼠予高脂饲料喂养建立实验性动脉粥样硬化小鼠模型,至第12周龄时,ApoE-/-小鼠随机分为模型对照组、氯吡格雷组和冠心康组。取15只8周龄近交系C57BL/6小鼠作为正常对照组给予普通饲料喂养。各组于第24周取材检测血脂、血浆sVCAM-1和sICAM-1及CD40L含量、检测外周血血小板表面CD40L表达;观察主动脉组织病理形态学改变;检测主动脉组织CD40L表达强度。结果：冠心康组和氯吡格雷组的血浆sVCAM-1和sICAM-1的浓度,血浆CD40L、血小板表面CD40L和动脉组织CD40L的表达明显降低,与模型组比较有显著差异（P〈0.01）,冠心康组和氯吡格雷组相比无显著性差异（P〉0.05）。此外冠心康组血脂水平明显降低,与模型组比较有显著差异（P〈0.01）;氯吡格雷组与模型对照组之间的血脂水平比较无统计学意义（P〉0.05）。此外冠心康减轻AS病变程度方面均优于氯吡格雷组,两组与模型组对比明显减轻。结论：冠心康和氯吡格雷都可通过抑制血小板活化,减少CD40L和黏附分子表达,减轻炎症反应,抑制AS病变,起到抗动脉粥样硬化的作用,揭示冠心康抗动脉粥样硬化的作用机制与下调CD40-CD40L系统,抑制血小板活化,降低CD40L表达有关。     

冠心康对实验性大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的:探讨冠心康颗粒对大鼠急性心肌缺血的保护作用及其机理。方法:雄性大鼠32只,随机分为4组,每组8只,预防给药7d。灌胃结束后,采用在体大鼠冠状动脉左前降支结扎的方法建立心肌缺血模型,观察冠心康颗粒对大鼠急性心肌缺血后心肌中NO和NOS含量的影响,用免疫组化法检测Bc l-2蛋白在心肌中的表达。结果:模型组、冠心康组、地奥组与假手术组比较,心肌组织NO及NOS含量均有明显降低(P<0.05);而与模型组相比,冠心康组、地奥组的NO及NOS含量均有明显的恢复(P<0.05),提示冠心康颗粒可明显提高大鼠急性心肌缺血后心肌中NO和NOS含量(P<0.005,0.005),同时增加Bc l-2蛋白的表达,减少细胞凋亡。结论:冠心康颗粒对大鼠急性心肌缺血具有保护作用,可能与其提高心肌中NO和NOS含量,增加Bc l-2蛋白的表达有关。     

冠心康对高同型半胱氨酸血症兔主动脉MMP-2表达的影响

目的探讨冠心康对动脉粥样硬化(AS)的防治作用及其可能机制。方法30只兔随机分为:对照组、模型组和干预组,通过喂饲高蛋氨酸饲料建立兔高同型半胱氨酸血症模型。第0周和第8周时,兔耳中央动脉取血以循环酶法检测血浆同型半胱氨酸的含量、血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。第8周处死动物,免疫组化方法检测兔主动脉基质金属蛋白(MMP-2)表达的情况。结果冠心康在降低血浆同型半胱氨酸的同时,调整血脂水平,降低血清中TC、TG、LDL-C水平,并升高HDL-C,抑制主动脉MMP-2表达。结论冠心康对AS的发生、发展有预防和治疗作用。     

阿托伐他汀对LPS诱导的人血管内皮细胞表达TLR4的影响

[目的]通过研究阿托伐他汀对LPS诱导的人血管内皮细胞TLR4 mRNA和蛋白质表达的影响,探讨其抗炎机制。[方法]采用1640培养液培养人血管内皮细胞;TLR4诱导的人血管内皮细胞分为五组:空白组(A组)、LPS组(B组)、阿托伐他汀钙低浓度组(C组)、阿托伐他汀钙中浓度组(D组)和阿托伐他汀钙高浓度组(E组),每组9个副孔,采用RT-PCR方法观察各组TLR4mRNA表达情况;用Westen Blot方法检测TLR4蛋白表达情况。[结果]与空白组(A组)相比,LPS组(B组)TLR4mRNA和蛋白质表达显著增加;阿托伐他汀抑制LPS诱导的TLR4 mRNA和蛋白质表达均呈剂量依赖性;阿托伐他汀高浓度组(E组)LPS诱导TLR4 mRNA和蛋白质表达明显减少(P<0.05)。[结论]阿托伐他汀能够通过抑制TLR4信号转导通路,抑制TLR4表达起到抗炎作用,进而发挥延缓动脉粥样硬化进程作用。     

一氧化氮与内皮素在冠心康胶囊对实验性急性心肌缺血大鼠心肌损伤保护中的作用

目的探讨一氧化氮(NO)和内皮素(ET)在冠心康胶囊保护大鼠心肌损伤中的作用。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、急性心肌缺血大鼠心肌损伤模型组和冠心康胶囊治疗组,每组10只。实验中监测各组大鼠心电、心肌酶(CK,CK-MB,LDH)变化,同时观察血清和心肌组织匀浆中NO和ET水平的改变。结果冠心康胶囊治疗组可显著降低心肌缺血大鼠心电图ST-T段变化值,治疗组的心肌酶(CK,CK-MB,LDH)水平较模型组明显降低(P<0.01);血清和心肌组织匀浆中NO明显升高,而血清和心肌组织匀浆中ET含量明显降低(均P<0.05)。结论冠心康胶囊能明显减轻急性心肌缺血心肌损害,能提高血清及心肌组织的NO水平,并降低ET的水平;NO和ET的变化可能是其防治心肌损伤的重要机制之一。     

冠心康胶囊对实验性急性心肌缺血大鼠心电标测与血液流变学的影响

目的:观察中药复方制剂冠心康胶囊抗大鼠急性心肌缺血的药理效应及探讨对血瘀模型大鼠的血液流变学的影响。方法:运用盐酸异丙肾上腺素(ISO)造大鼠急性心肌缺血模型,运用皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冷浴造大鼠瘀血模型,观察冠心康胶囊对大鼠急性心肌缺血模型心电标测和瘀血模型血液流变学等指标的影响。结果:大、中、小剂量的冠心康胶囊组大鼠心电图S-T段移位明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),血液流变学指标中全血黏度比(mPa.s)、红细胞压积、血沉、红细胞聚集指数、血浆黏度比(mPa.s)与模型组比有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:冠心康胶囊可降低血液黏度,改善冠脉循环,有效抗大鼠急性心肌缺血。     

冠心康对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞形态结构和Caspase-3活性的影响

目的观察冠心康对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞形态结构和Caspase-3活性的影响。方法将40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组,每组10只。冠心康组灌胃给予冠心康,盐酸地尔硫卓组灌胃给予盐酸地尔硫卓,假手术组和MIRI模型组于相同时间分别灌胃给予等容积的0.9%NaCl溶液,各组术前灌胃均每天1次,连续7天。灌胃7天后,采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min、再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。造模后,在MIRI结扎线以下区域至心尖取材,运用常规苏木素-伊红(HE)染色,光镜下用图形分析系统定量观察单位视野全部心肌细胞核染色部分的面积、积分光密度,采用生化法检测Caspase-3活性。结果 MIRI模型组大鼠心肌细胞结构破坏,冠心康组大鼠心肌细胞保持完好。与假手术组比较,MIRI模型组大鼠单位视野全部心肌细胞核染色部分的面积和积分光密度显著降低(P0.01);冠心康组和盐酸地尔硫卓组则显著升高,与MIRI模型组比较差异有统计学意义(P0.01);MIRI模型组大鼠心肌组织Caspase-3活性较假手术组明显升高(P0.01),冠心康组和盐酸地尔硫卓组Caspase-3活性则较MIRI模型组明显降低(P0.01)。结论冠心康对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织具有保护作用,其机制与冠心康抑制心肌组织Caspase-3活性有关。