姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝组织Bel-2和Bax表达的影响

目的观察姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织抑凋亡细胞(Bcl-2)、促凋亡细胞(Bax)的影响效果,探讨其抗肝纤维化的机理。方法 48只大鼠随机分为正常组、模型组和治疗组(姜黄素)和对照组(复方鳖甲软肝片组),采用四氯化碳皮下注射加乙醇灌胃制备大鼠肝纤维化模型,至12 W造模结束后第13 W起,治疗组以姜黄素20 mg/100 g体重灌胃,对照组以复方鳖甲软肝片62.5 mg/100 g体重灌胃,正常组和模型组以生理盐水灌胃,治疗8 W。采用免疫组织化学方法(SABC)检测分析各组大鼠肝组织中Bcl-2、Bax的含量。结果与模型组比较,治疗组和对照组肝组织纤维间隔中Bcl-2的表达明显下降(P<0.05),Bax的表达无明显改变(P>0.05),治疗组Bax/Bcl-2的比值明显升高(P<0.05),对照组略升高,但不明显(P>0.05)。结论姜黄素可有效升高肝纤维化大鼠肝脏纤维间隔中Bax/Bcl-2的比值,并进而能抑制HSC活化增殖,诱导活化的HSC凋亡,为其可能的抗肝纤维化机理,这一作用优于复方鳖甲软肝片。     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡机制的研究

目的研究荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi Chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响及其作用机制。方法以二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、低剂量的TFL灌胃6周进行干预治疗,HE及Masson染色观察肝纤维化程度,免疫组化二步法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果模型组大鼠肝组织中Bcl-2、Bax的表达较正常组均显著升高(P<0.01);TFL高、低剂量给药组Bcl-2的表达较模型组升高(P<0.05)、Bax表达较模型组降低(P<0.05);TFL高剂量组与低剂量组比较Bcl-2升高(P<0.05)、Bax显著降低(P<0.01)。结论 TFL抗肝纤维化的作用可能是通过上调Bcl-2、下调Bax的表达,抑制肝细胞的凋亡来实现的,且具有一定的量效关系。肝纤维化的严重程度与Bcl-2的表达负相关、Bax的表达正相关。     

绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。     

软肝丸药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的研究软肝丸药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响。方法传代培养大鼠肝星状细胞(HSC)系HSC-76与不同剂量软肝丸(大、中、小剂量组)共同培养48小时,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测软肝丸对大鼠HSC凋亡的影响;免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax水平。结果软肝丸能使大鼠HSC凋亡明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,使凋亡分子Bax表达增强(P0.01)。结论软肝丸可下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

姜黄素对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ.C含量及肝组织TGFβ_1的影响

目的:观察研究姜黄素对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ.C含量及肝组织转化生长因子β1(TGFβ1)的影响效果及不同剂量与疗效的关系。方法:四氯化碳皮下注射加乙醇灌胃制备大鼠肝纤维化模型,随机分为病理模型组、姜黄素大、中、小剂量组、复方鳖甲软肝片组、γ-干扰素组,并设正常对照组。治疗结束后检测血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ.C含量;HE染色及胶原纤维、网状纤维染色观察肝组织纤维化程度;免疫组织化学方法(SABC法)检测分析肝组织TGFβ1的含量。结果:和病理模型组比较,姜黄素大、中剂量组血清HA、LN、PCⅢ、Ⅳ.C含量降低(P<0.05),SSS计分值明显降低P<0.05),肝组织中TGFβ1的含量明显下降(P<0.05)。结论:1.姜黄素具有治疗肝纤维化的作用,其机理可能与抑制肝组织中TGFβ1的表达有关。2.姜黄素抗肝纤维化存在有效的剂量范围,在一定剂量范围内,抗肝纤维化作用强度与剂量无明显依赖性。     

蕲艾提取液对免疫性肝纤维化大鼠细胞增殖和凋亡的影响

目的观察蕲艾提取液对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1、CyclinD1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响,探讨其对肝纤维化作用及相关机制。方法 Wister大鼠72只被随机分为正常对照组、肝纤维化模型组、小、中、大剂量蕲艾提取液处理组和丹参对照组,采用猪血清腹腔内注射法构建肝纤维化大鼠模型;采用荧光定量PCR和Western blot检测大鼠肝脏组织TGF-β1、CyclinD1和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果各蕲艾提取液处理组与肝纤维化模型组相比,肝组织中TGF-β1、CyclinD1和Bcl-2 mRNA和蛋白水平均明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论蕲艾提取液可显著抑制肝组织中TGF-β1、Cyclin D1mRNA及其蛋白表达,抑制细胞增殖与活化;同时下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,促进肝星状细胞的凋亡,降低细胞外基质合成,从而达到抗纤维化的作用。     

大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响

目的观察大黄(庶虫)虫丸对大鼠肝星状细胞活化及增殖的影响。方法用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌注消化正常大鼠肝脏,Nycodenz 密度梯度离心分离肝星状细胞(HSC),在制备大黄(庶虫)虫丸大鼠药物血清的基础上,温育 HSC。采用 MTT 比色法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及增殖周期情况。结果药物血清对体外培养的 HSC 有抑制作用,且存在浓度剂量依赖关系,但作用较弱,需在20%以上方见到差异有显著性(P<0.05),对 HSC 凋亡及细胞增殖周期则未见明显影响(p>0.05)。结论大黄座虫丸对 HSC 增殖有一定抑制作用,但可能不是其抗肝纤维化作用的主要途径,其抗肝纤维化作用与诱导细胞凋亡无关。     

养肝抗纤汤对肝纤维化大鼠肝脏Bcl-2、Bax、PCNA表达的影响

目的:观察养肝抗纤汤对肝纤维化大鼠Bcl-2、Bax、PCNA表达的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将健康雄性SD系大鼠30只,随机分为正常组、肝纤维化模型组、养肝抗纤汤治疗组各10只。以0.5%的二甲基亚硝胺(DMN)按0.2ml/100g的剂量腹腔内注射4周造模。42天后处死,分批从各组取血清、肝脏组织,采用S-P免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax和PCNA的表达,并检测血丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、白蛋白、透明质酸、层粘连蛋白。结果:治疗组肝组织中Bcl-2表达水平明显升高,与模型组相比差异有统计学意义(P0.05),而Bax表达水平与模型组相当,差异无统计学意义。模型组PCNA的水平较正常组高,差异有统计学意义(P0.01),但治疗组PCNA的水平较模型组又明显提高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:养肝抗纤汤可能通过影响肝细胞的凋亡和增殖对DMN诱发的大鼠肝纤维化产生一定的抑制作用。     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞(HSC)增殖、转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1及其I、II受体(TβRI、TβRII)和I、III型胶原(Col-I、Col-III)mRNA的表达。结果姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡及相关调控基因的影响

目的通过观察消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝细胞凋亡及相关调控基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法采用高脂饮食喂饲大鼠复制NAFLD模型,以东宝甘泰作为阳性对照药,运用流式细胞仪观察各组大鼠肝细胞凋亡及相关调控基因Bcl-2和Bax蛋白表达的变化,同时采用HE染色观察各组大鼠肝组织形态学变化。结果光镜下可见模型组大鼠肝脏中度以上脂肪变性,并有少量的肝细胞坏死;流式细胞术分析可见其细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达FI值降低(P<0.01),Bax蛋白表达FI值增高(P<0.01)。与模型组比较,各用药组肝脂变程度显著改善,肝细胞的凋亡率明显下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达FI值增高(P<0.01),Bax基因表达FI值降低(P<0.05或P<0.01)。结论消瘀化痰饮能使Bcl-2蛋白表达上调、Bax蛋白表达下降,抑制细胞凋亡趋势,起到抗脂肪肝的作用。     

胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察胰泰复方对慢性胰腺炎胰腺纤维化大鼠Bcl-2、Bax表达的影响。方法予13.3%L-精氨酸行左下腹腔注射制备大鼠慢性胰腺炎模型,10d后给予灌胃治疗,2个月后处死各组动物取材;免疫组织化学法检测各组大鼠胰腺Bcl-2、Bax的表达。结果模型组Bax表达较中药对照组及中药治疗组均降低;中药治疗组Bax高于中药对照组,Bcl-2低于中药对照组,Bax/Bcl-2比值较中药对照组上升。结论胰腺纤维化过程中胰腺Bax、Bcl-2表达增强;胰泰复方能上调胰腺Bax/Bcl-2比值,促进细胞凋亡,对慢性胰腺炎胰腺纤维化具有恢复作用。     

大黄素对大鼠肝纤维化形成的影响

目的；研究大黄素对肝纤维化的影响。方法：采用４０％的四氯化碳（ＣＣｌ４）给予大鼠皮下注射诱导肝纤维化，并以小，中和大剂量大黄素（２０，４０和８０ｍｇ／ｋｇ体重）干预，测定血清透明质酸，层粘连蛋白及肝组织羟脯氨酸，并通过光镜和电镜观察肝组织病理变化。结果：大黄素组较模型组；（１）血清透明质酸及层粘连蛋白显著降低；（２）肝组织胶原蛋白含量明显减少；（３）肝组织纤维化程度明显改善；（４）肝细胞损伤减轻。     

加味鳖甲煎丸对四氯化碳所致肝纤维化大鼠肝组织的保护作用

目的：观察加味鳖甲煎丸对四氯化碳（CCl4）所致肝纤维化大鼠肝组织的保护作用。方法：由皮下注射40％CCl4溶液首次5mL／kg，以后每周2次，每次3mL／kg，连续注射6周，在病理检查证明造模大鼠肝组织出现肝纤维化后，分组给药，连续给药8周后处死大鼠，病理切片，HE和Masson染色，观察加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠肝组织病变程度的影响，并对脂质空泡和胶原含量进行定量分析。结果：加味鳖甲煎丸大、中剂量组大鼠肝组织炎性细胞浸润程度、脂质空泡和胶原含量、肝假小叶形成的数量均较模型组大鼠明显减少，肝纤维化病变程度明显减轻。结论：加味鳖甲煎丸对CCl4所致肝纤维化大鼠肝组织有较好的保护作用，可明显减轻其病变程度。     

实验性肝纤维化造模方法研究

目的:研究实验性肝纤维化造模方法。方法:将大鼠分为3个造模组和1个正常组,造模组分别用3种纤维化造模方法造成不同类型的肝纤维化,对比各组大鼠死亡数、体重、肝脏重量及肝纤维化程度。结果:猪血清组无死亡,但形成肝纤维化较缓慢。四氯化碳组与酒精组随着造模时间的延长死亡率逐渐上升(P0.05),但形成肝纤维化较明显。结论:用猪血清造模比较稳定、损伤性较小,但形成肝纤维化较慢,是长期造模的较好方法、四氯化碳与酒精造模肝纤维化形成较快、但损伤较大,是短期造模的较好选择。     

瘀痛消胶囊对大鼠实验性肝纤维化影响的实验研究

目的:观察瘀痛消胶囊对大鼠实验性肝纤维化的影响。方法:采用复合因素诱导大鼠肝纤维化模型。Wistar大鼠随机分为正常组、瘀痛消胶囊组、疏肝理脾片组、模型组。瘀痛消胶囊组和疏肝理脾片组在造模的同时给药,造模结束后观察各组肝纤维化程度及血清谷丙转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)的变化。结果:瘀痛消胶囊组纤维化程度低于模型组(P<0.01);瘀痛消胶囊组的血清HA、ALT均较模型组有明显下降(P<0.01)。结论:瘀痛消胶囊具有一定的抗大鼠实验性肝纤维化的作用。     

藏药郎庆阿塔治疗肝纤维化的实验研究

目的:研究藏药郎庆阿塔对复合因素所致大鼠肝纤维化的治疗作用.方法:清洁级Wistar大鼠90只采用复合因素(高脂低蛋白饲料喂养、含乙醇饮用水加皮下注射四氯化碳)制备大鼠肝纤维化模型,造模6周末随机处死12其造模大鼠,通过肝组织病理检查及血清肝功能指标来检查肝纤维化模型成功率.将模型大鼠随机分为模型对照组、阳性药复方鳖甲软肝片组(0.55 g·kg-1)、郎庆阿塔颗粒给药高、中、低剂量组(生药11.4,5.7,2.85 g·kg-1),另设正常对照组.各组大鼠于分组后即日(第7周)开始ig给药,每日1次,连续ig给药7周.治疗结束后,检测血清中生化指标和肝纤维化指标,并取肝脏组织,测定肝脏组织中羟脯氧酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)水平,另取肝脏组织标本进行病理组织学检查.结果:郎庆阿塔能明显降低肝纤维化大鼠增高的肝脏系数和肝组织中羟脯氨酸含量(P ＜0.05～p＜0.01),显著降低肝纤维化大鼠血清中异常升高的天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(T-BIL)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨端肽( PⅢ NP)及Ⅳ型胶原(CⅣ)(P＜0.05～P＜0.01),升高白蛋白(ALB)和A/G,比值,能明显升高肝组织中SOD活力(P＜0.05～P＜0.01)、降低异常升高的MDA水平(P ＜0.05～P＜0.01),病理组织学检查结果表明郎庆阿塔高、中剂量对肝纤维化大鼠肝纤维组织增生、肝组织炎症活动度均有显著的改善作用(P ＜0.05～P＜0.01),并能显著降低肝组织中胶原纤维面积(P＜0.05～P＜0.01).结论:藏药郎庆阿塔具有明显的治疗肝纤维化作用.     

复方丹参滴丸对大鼠肝纤维化治疗作用的组织病理学影响

目的:观察复方丹参滴丸对大鼠肝纤维化作用的组织病理学影响.方法:按2 mL·kg-1(10 μg· kg-1)剂量ip0.5％二甲基亚硝胺水溶液,每天1次,每周的第1,2,3天注射,连续4周.手术取大鼠肝中叶组织,进行病理组织学活检,确定和筛选成功模型.用复方丹参滴丸以292,146,73 mg· kg-剂量,ig连续治疗30 d.观察肝脏组织病理形态变化,并用IPP 5.0图像分析软件计算肝纤维化面积.结果:复方丹参滴丸治疗4周后,292,146,73 mg· kg-1剂量组大鼠肝纤维化面积分别减少(1 602±1 966),(631±1 589),(2 759±1 965)μm2,与模型组比较有显著差异(P＜0.01).同组治疗前后比较均减少,但差异不明显.结论:复方丹参滴丸对肝纤维化具有一定的治疗作用.     

姜黄素抗肝纤维化的实验研究

目的:探讨姜黄素的抗肝纤维化作用。方法:将大鼠随机分为正常对照组、模型组、高、中、低3个剂量姜黄素组和阳性对照组,用皮下注射CC l4法诱导大鼠肝纤维化。测量并计算肝脏指数;测定各组大鼠ALT及AST活性以评价肝功能;同时观察各组大鼠肝脏形态学变化。结果:模型组大鼠肝脏指数均明显低于正常对照组(P<0.01),姜黄素治疗组大鼠肝脏指数明显高于模型组大鼠(P<0.05)。与正常组大鼠比较,模型组大鼠肝脏AST和ALT均显著升高(P<0.01),给予姜黄素治疗后,各治疗组大鼠肝脏AST和ALT活性均显著下降(P<0.05)。HE染色及M asson三色染色显示,秋水仙碱治疗组及各剂量姜黄素治疗组可见肝损伤病变明显减轻,纤维组织增生程度也明显轻于模型组。结论:姜黄素能明显减轻CC l4所致肝损伤,保护肝脏正常结构和功能,延缓肝纤维化。