延胡索总生物碱对慢性低灌注脑损伤大鼠神经保护的作用研究

目的:本研究通过建立永久性双侧颈总动脉结扎复制慢性低灌注大鼠动物模型,探讨延胡索总生物碱(TAC)对脑慢性低灌注损伤的改善作用。方法:选取雄性Wistar大鼠随机分成假手术组、TAC组、阳性对照组和模型组,采用双侧颈总动脉永久性结扎建立动物模型。通过走平横木实验和Morris水迷宫实验,检测精细运动和认知能力;苏木素-伊红染色法观察TAC对脑海马CA1区组织形态学变化;免疫组织化学法检测TAC对脑海马CA1区血管内皮生长因子的表达。结果:与模型组相比,TAC组大鼠精细运动能力和认知功能显著升高(P<0.01),海马CA1区神经元损伤程度减轻,血管内皮生长因子阳性细胞数显著增加(P<0.01)。结论:TAC可明显改善慢性脑低灌注大鼠的学习记忆能力,减轻神经元损伤,提高血管内皮生长因子的表达,对脑神经元有保护作用。     

定志小丸对雌性抑郁模型大鼠海马结构的影响

目的围绕海马结构的形态学研究定志小丸的抗抑郁机制。方法40只雌性大鼠分为对照组、抑郁症模型组（模型组）、蒸馏水组（DW组）和定志小丸组（中药组），Open field法检测行为学得分，ELISA法检测血清皮质醇和雌二醇（E2）含量，HE染色和电镜技术观察海马CA3区神经元形态，免疫组化技术检测齿状回神经干细胞（NSC）增殖。结果与对照组比较，模型组和DW组行为学得分及血清E2含量显著下降，皮质醇水平升高和NSC增殖明显降低，海马CA3区神经元损伤明显；中药组行为学得分和血清E2含量无明显变化，皮质醇明显减少，NSC增殖显著增加，海马CA3区神经元基本正常。结论定志小丸能够保护海马结构，这可能是其抗抑郁机制之一。     

定志小丸对抑郁大鼠海马血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究血管内皮生长因子(VEGF)在定志小丸抗抑郁中的作用。方法:采用慢性不可预见性应激刺激制造大鼠的抑郁症模型,扫描电镜观察海马CA3区血管形态,免疫组化技术检测VEGF表达。结果:与对照组比较,模型组和盐水组CA3区血管口径变大,管壁较薄,内皮细胞形态不规则,VEGF表达减少,中药组血管口径变大,血管壁较厚,内皮细胞形态规则,VEGF表达增加。结论:定志小丸能够促进抑郁大鼠海马VEGF表达。     

定志小丸对抑郁大鼠海马血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）在定志小丸抗抑郁中的作用.方法：采用慢性不可预见性应激刺激制造大鼠的抑郁症模型,扫描电镜观察海马CA3区血管形态,免疫组化技术检测VEGF表达.结果：与对照组比较,模型组和盐水组CA3区血管口径变大,管壁较薄,内皮细胞形态不规则,VEGF表达减少,中药组血管口径变大,血管壁较厚,内皮细胞形态规则,VEGF表达增加.结论：定志小丸能够促进抑郁大鼠海马VEGF表达.     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达的影响

目的：观察养血清脑颗粒对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子（BDNF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的影响。方法：72只SD大鼠随机分为假手术组、VD模型组（模型组） 和养血清脑颗粒治疗组（治疗组）,采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作VD大鼠模型,应用Morris水迷宫实验检测VD大鼠的学习记忆能力,采用免疫组化法检测海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达水平。结果：与假手术组比较,模型组大鼠出现明显的学习记忆障碍,各时间点海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达增多（P<0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠学习记忆障碍明显改善,各时间点海马CA1区BDNF和bFGF蛋白表达明显增多（P<0.01）,以4周时表达最明显。结论：养血清脑颗粒能改善VD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与养血清脑颗粒上调BDNF和bFGF蛋白表达有关。     

电针联合复方丹参片对慢性脑缺血大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的观察电针联合复方丹参片对慢性脑缺血大鼠海马CA1区脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、复方丹参组、电针组和针药结合组,每组10只。以永久性双侧颈总动脉结扎术制备慢性脑缺血模型。造模后1周,复方丹参组和针药结合组大鼠给予复方丹参片0.75g/kg灌胃,每天1次,连续5周;电针组和针药结合组大鼠给予百会穴、大椎穴电针刺激,持续30min,每天1次,连续5周。采用免疫组织化学染色法结合图像分析检测大鼠海马CA1区BDNF及VEGF的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠海马CA1区BDNF、VEGF阳性神经元数目及表达强度均明显减少(P<0.01);与模型组比较,复方丹参组、电针组和针药结合组海马CA1区BDNF、VEGF阳性神经元数目及表达强度均增加(P<0.01,P<0.05);针药结合组阳性神经元的数目和表达强度明显高于复方丹参组和电针组(P<0.01)。结论电针与复方丹参片结合可显著增加慢性脑缺血大鼠海马CA1区BDNF、VEGF的表达,且作用优于单用复方丹参片或电针。     

柴胡细辛汤加减对颅脑损伤模型大鼠海马CA1区BDNF、SYN1表达与超微结构的影响

目的观察柴胡细辛汤加减对颅脑损伤模型大鼠认知功能和神经功能缺损的作用及其可能机制。方法将89只SD大鼠随机分为假手术组16只,模型组、阳性对照组和中药低剂量组各18只,中药高剂量组19只,除假手术组外其余各组建立控制性皮层冲击损伤模型。造模次日阳性对照组予安理申片0.45 g/(kg·d),中药低、高剂量组分别给予柴胡细辛汤加减方6.5、13 g生药/(kg·d),假手术组、模型组予等体积双蒸水,各组灌胃4周。比较各组大鼠认知功能(水迷宫测试)、神经功能缺损评分(m NSS)、脑组织病理与海马CA1区超微结构,并检测CA1区脑源性神经生长因子(BDNF)、突触素1(SYN1)蛋白表达。结果各组在造模后0、3、7天时m NSS评分较假手术组均明显升高(P0.01),中药高剂量组在第7、28天时m NSS评分较模型组降低,中药低剂量组在28天时亦低于模型组(P0.05或P0.01)。水迷宫测试中,各给药组逃避潜伏期时间较模型组减少(P0.05或P0.01)。各给药组损伤海马区病理形态学显示优于模型组,中药高、低剂量组能够改善海马CA1区受损的神经元、线粒体和突触的超微结构。中药高剂量组BDNF表达明显高于模型组和阳性对照组,中药高剂量组SYN1表达高于模型组(P0.01)。结论柴胡细辛汤加减能够改善颅脑损伤模型大鼠认知功能及其神经功能缺损,其机制可能是提高海马CA1区BDNF、SYN1的表达以促进损伤的神经元修复与突触重塑,改善海马CA1区超微结构。     

黄芪甲苷对短暂性前脑缺血模型大鼠海马神经再生的影响

目的 观察黄芪甲苷对短暂性前脑缺血大鼠海马神经干细胞增殖、分化的影响,探讨其促进神经发生和分化的作用.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,黄芪甲苷高、低剂量组(4、2 mg/kg),每组10只.短暂性前脑缺血后黄芪甲苷ip给药,模型组和假手术组ip给予生理盐水,1次/d,ip BrdU 10 mg/kg,2次/d,标记增殖细胞.各组分别于第7、14天后取脑组织,冰冻切片,行BrdU免疫荧光染色显示海马区域增殖的细胞,BrdU与MAP-2,GFAP等免疫荧光双标染色显示海马区域干细胞来源的成熟神经细胞和星形胶质细胞;取海马组织,RealTime RT-PCR法检测基本成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、脑源神经营养因子(BDNF)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达.结果 黄芪甲苷高、低剂量,作用7 d后,可增加海马DG和CA1区BrdU阳性细胞数量和海马CA1区BrdU/GFAP阳性细胞数量;作用14 d后,可显著增加海马DG区BrdU/MAP-2双阳性细胞数量.其中,黄芪甲苷低剂量(2 mg/kg)作用7 d后可显著上调NGF mRNA表达.结论 黄芪甲苷能够促进海马区神经干细胞增殖、分化,很可能与其上调NGF mRNA表达有关.     

黄连解毒汤有效部位调控VEGF表达对中动脉栓塞大鼠海马神经元的保护

目的:观察黄连解毒汤有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)对中动脉栓塞大鼠海马神经元的保护作用。并通过检测缺血中心区(尾壳核)和远隔脑区(海马)血管内皮生长因子VEGF的表达,探讨其作用机制。方法:建立中动脉栓塞大鼠模型,免疫荧光染色技术观察神经元核蛋白NeuN及血管内皮生长因子VEGF的表达。结果:脑缺血7 d大鼠海马神经元核蛋白NeuN表达下调,尾壳核、海马VEGF免疫染色强度降低,差异较假手术组有统计学意义(P0.05)。黄连解毒汤水提取物和总黄酮可提高海马神经元NeuN表达(P0.05);总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜组大鼠海马CA1区VEGF表达较模型组增强(P0.05);总黄酮还可明显上调尾壳核VEGF表达(P0.01)。结论:黄连解毒汤总黄酮对缺血中心区、远隔脑区VEGF均有调节作用,可减轻脑梗死远隔部位海马CA1区神经元继发性损害。     

脾虚大鼠脑内TGF-β_1、TNF-α的变化以及益气扶正中药干预研究

目的:研究脾虚模型大鼠脑内转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的活性表达,以及扶正益气中药的干预作用。方法:40只大鼠随机分成4组,正常组、模型组、治疗1组(四君子汤组)、治疗:2组(玉屏风散组),每组各10只。采用苦降泻下、饮食失节加劳倦过度法建立大鼠脾虚模型,采用免疫组化法检测下丘脑腹侧核、海马CA1区的TGF-β1和TNF-α表达变化与四君子汤玉屏风散的治疗作用。结果:TGF-β1在海马CA1区和下丘脑腹侧核表达明显降低,TNF-αmRNA在海马CA1区和下丘脑腹侧核表达明显降低;与模型组比较,治疗1组和治疗2组TGF-β1水平及TNF-αmRNA表达水平显著上升。结论:益气扶正中药四君子汤、玉屏风散可能通过影响免疫器官、调控细胞因子TGF-β1和TNF-α活性表达而调节机体免疫功能。     

益智健脑颗粒对SAMP8快速老化小鼠海马BDNF、MMP-9的影响及作用机制研究

目的：研究益智健脑颗粒对SAMP8快速老化小鼠海马BDNF、MMP-9的影响及作用机制。方法：6月龄SAMP8快速老化小鼠随机分为中药治疗组和模型组,6月龄SAMR1正常老化小鼠为正常对照组。对各组进行给药治疗,中药治疗组以益智健脑颗粒浓缩液灌胃;正常对照组和模型组以等剂量双蒸水灌胃,共4周。采用双抗体夹心酶联免疫方法检测各纽小鼠海马组织中BDNF、MMP-9的表达。结果：与正常对照组比较,模型组海马BDNF含量明显减少,MMP-9含量明显增多,差异有统计学意义（P〈0．01）;与模型组比较,中药治疗组中海马中BDNF含量明显增加,MMP-9含量明显减少,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：益智健脑颗粒可促进小鼠海马神经元合成BDNF,抑制MMP-9产生,这可能是其防治阿尔茨海默病的作用机制之一。     

舒郁宁心方对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及海马BDNF,TrkB表达的影响

目的:分析中药舒郁宁心方对慢性应激抑郁模型大鼠行为学及海马脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF),酪氨酸激酶B(tyrosine kinase B,TrkB)表达的影响。方法:选取60只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、西药组(氟西汀)、舒郁宁心方低、中、高剂量组,每组各10只,除正常组外,均建立为期21 d的慢性应激抑郁模型。建模2周后起,进行为期21 d的给药。其中正常组不给药,模型组ig生理盐水,西药组ig氟西汀药液12 mg·kg^-1,中药低、中、高剂量组分别ig舒郁宁心方药液2.5,7.5, 25.0 g·kg^-1。对比各组大鼠在第1天(造模前)和第56天(给药结束后)的体重、糖水摄入量、水平运动格数、垂直运动次数。对比实验结束后各组大鼠海马组织中BDNF和TrkB的表达水平。结果:第56天与正常组比较,模型组的体重、糖水摄入量、水平运动格数、垂直运动次数及CA1区和CA3区的BDNF和TrkB阳性表达的积分吸光度(IA)显著降低(P<0.05);与模型组比较,氟西汀组和舒郁宁心方各剂量组上述指标显著升高(P<0.05)。结论:舒郁宁心方可以改变海马组织中的BDNF和TrkB表达水平,进而起到一定的抗抑郁疗效。     

子宫内膜异位症患者中西医结合治疗前后血清血管内皮生长因子及糖类抗原-125的含量变化

目的观察子宫内膜异位症(EMT)患者中西医结合治疗前后血清血管内皮生长因子(VEGF)及糖类抗原-125(CA125)水平的变化及临床意义。方法将30例EMT患者设为治疗组,予中西医结合治疗,检测其血清VEGF及CA125水平。同时选择30例健康体检者作为对照组。结果治疗组Ⅰ～Ⅱ期血清VEGF、CA125含量低于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.01)。治疗组子宫内膜分泌期血清VEGF、CA125含量低于增生期(P<0.05)。对照组子宫内膜分泌期血清VEGF、CA125含量与增生期比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组治疗后血清VEGF、CA125含量低于治疗前(P<0.01),说明中西医结合治疗有效。治疗组治疗后血清VEGF、CA125含量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EMT的发生、发展与血清VEGF及CA125水平密切相关,检测EMT患者血清VEGF、CA125水平对EMT的治疗及预后具有重要的临床价值。     

脑缺血预处理对脑缺血再灌注大鼠的保护作用及对神经营养因子表达的影响

目的:观察脑缺血预处理(CIP)对再次缺血损伤大鼠的保护作用及脑组织中神经营养因子脑源性神经营养因子(BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的变化,探讨脑缺血耐受的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为3组,分别为假手术组(Sham),脑缺血再灌注损伤组(I/R),脑缺血预处理再次损伤组(CIP+MCAO)。采用神经缺损评分(NDS)法评价行为学的改变,苏木素-伊红(HE)染色法评价脑组织病理形态的改变、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的水平,免疫组化法观察BDNF,GDNF,VEGF在皮质、海马CA1区的表达变化。结果:与Sham组比较,I/R组大鼠神经缺损评分明显升高,脑组织病理损伤程度较明显,血清中NSE水平明显升高(P0.01),大鼠患侧脑组织皮层、海马CA1区BDNF阳性表达面积和积分吸光度IA均明显降低,但仅有脑组织皮层与Sham组比较有统计学差异(P0.01);与I/R组比较,CIP+MCAO组可明显降低大鼠的神经缺损评分(P0.05),明显减轻脑组织病理损伤程度(P0.05),降低血清中NSE水平(P0.01),CIP+MCAO组大鼠患侧脑组织皮层、海马CA1区BDNF,VEGF阳性表达面积和IA均明显增加(P0.05,P0.01)。GDNF的阳性表达虽有增加的趋势但没有统计学差别。结论:脑缺血预处理的神经保护作用与上调BDNF,VEGF内源性保护蛋白的表达有关。     

十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血管内皮生长因子的影响

[目的]观察十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血管内皮生长因子(VEGF)的影响。[方法]使用随机平行对照方法,将6～7周龄健康昆明种小鼠90只随机分为正常对照组、荷瘤模型组、5-FU组、十枣汤大、中、小剂量组,每组15只。正常对照组不予处理,其余小鼠局部消毒后,腹腔内注射腹水型H22肝癌瘤细胞株0.2mL/只。次日起5-FU对照组腹腔内注射5-FU 25mL/kg,隔日1次,共5次。十枣汤组小鼠按27g/kg、81g/kg、160g/kg不同剂量等体积十枣汤灌胃,0.4mL/次,1次/d,连续10天。荷瘤模型空白对照组等容积生理盐水灌胃。各组末次给药24h后(腹腔传代第7日),称体重,脱颈椎处死,眼眶取血,抽吸乳白色浓稠腹水。检测血清VEGF、腹水VEGF。[结果]血清VEGF模型组、5-FU组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组较正常对照组血清VEGF均有不同程度增高(P<0.01);与模型组相比,均有显著性差异(P<0.05);与5-FU组相比,中药组均无显著性差异(P>0.05);其中中药低剂量组与中药高剂量组相比有显著性差异(P<0.05)。腹水VEGF 5-FU组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组较模型组腹水VEGF均有不同程度降低(P<0.05);与5-FU组相比,各中药低剂量组有显著性差异;中药中、高剂量无显著性差异(P>0.05);中药低剂量与中药中、高剂量均有显著性差异(P<0.05);中药中剂量与中药高剂量相比较无显著性差异(P>0.05)。[结论]十枣汤对腹水型荷瘤小鼠血清VEGF、腹水VEGF有与5-FU类似的抑制作用,并与剂量呈量效关系,这可能是十枣汤治疗恶性腹水,延长生存期、改善生存质量的作用机制。     

妇痛宁对子宫内膜异位症COX2-PGE2作用途径的影响

[目的]通过研究化瘀散结中药妇痛宁对子宫内膜异位症(EMs)病灶中环氧化酶2(COX2)-前列腺素E2(PGE2)作用途径中相关分子基因和蛋白的表达,探讨妇痛宁对EMs中血管生成、侵袭和转移方面的影响。[方法]收集EMs患者的异位病灶组织,原代消化培养子宫内膜细胞,将25×106/m L浓度混合培养的异位子宫内膜细胞注射到裸鼠腹部皮下,成功建立模型后,将成模裸鼠分为空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组,分别予无菌生理盐水、低剂量中药、中剂量中药、高剂量中药和孕三烯酮灌胃,3周后处死裸鼠,取病灶,测量病灶体积,免疫组化法检测各组病灶中血管内皮生长因子(VEGF)的表达和微血管密度(MVD),逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail和E-cadherin m RNA的表达,Western-blot法检测病灶中Snail和E-cadherin蛋白的表达。[结果]中剂量及高剂量妇痛宁治疗组裸鼠异位病灶体积减小、VEGF表达及MVD均降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。各剂量治疗组裸鼠异位病灶中COX2、PGE2、VEGF、Snail m RNA表达降低,Ecadherin m RNA表达升高,且Snail蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。[结论]妇痛宁可影响COX2-PGE2作用途径中与血管生成、侵袭和转移相关分子的表达,通过抑制异位病灶的血管生成、侵袭和转移能力而抑制病灶的生长。     

补肾方药对衰老大鼠海马学习记忆相关基因BDNF及其受体TrkB mRNA表达的影响

目的:观察补肾方药左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB mRNA表达的影响,探讨老年大鼠学习记忆功能减退的部分分子机理,以及左归丸、右归丸的改善作用。方法:以自然衰老SD大鼠为动物模型,随机分设4组:青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用原位杂交技术,观察各组大鼠大脑切片海马各分区(CA1、CA2、CA3、DG)BDNF、TrkB mRNA表达变化。结果:与青年对照组相比,老年对照组大鼠海马各分区的BDNF、TrkB mRNA表达均明显减弱(P<0.05),而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年对照组大鼠海马DG、CA1、CA2、和CA3分区低下的BDNF、TrkB mRNA的表达。结论:老年大鼠的学习记忆功能退化,与学习记忆相关的基因BDNF、Trk B表达异常有关。而滋补肾阴方药左归丸、温补肾阳方药有归丸能通过提高BDNF、TrkB基因的表达,进而改善老年大鼠的学习记忆功能,延缓机体衰老。     

左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因BDNF mRNA表达的影响

目的:观察左归丸、右归丸对衰老大鼠海马学习记忆相关基因脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic fac-tor,BDNF) mRNA表达的影响,探讨老年大鼠学习记忆功能减退的部分分子机理,以及左归丸、右归丸的改善作用。方法:以自然衰老SD大鼠为动物模型,随机分设4组:青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用原位杂交技术,观察各组大鼠大脑切片海马各分区(DG、CA1、CA2、CA3)BDNF mRNA表达变化。结果:与青年对照组相比,衰老大鼠海马各分区的BDNF mRNA表达均明显减弱,而左归丸、右归丸能不同程度地提高老年大鼠海马DG、CA1、和CA3分区低下的BDNF mRNA的表达。结论:老年大鼠的学习记忆功能退化,与学习记忆相关的基因BDNF表达异常有关。而滋补肾阴方药左归丸、温补肾阳方药右归丸能通过提高BDNF基因的表达,进而改善老年大鼠的学习记忆功能。