单克隆抗体亲和层析法纯化Namalva细胞干扰素

采用自行研制的α干扰素单克隆抗体亲和层析胶3D9进行了Namalva细胞干扰素纯化的初步研究.结果表明α干扰素纯化活性回收率达96%,比活性达1×108IU/mg,一次亲和层析纯化倍数4.4×104.电泳及Westem blot结果显示相对分子质量在2.1×103.     

亲和层析法分离纯化链激酶

采用自制的酰基化－Ｐｌｇ－Ｓｐｅｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析分离纯化链激酶,ＮＰＧＢ作为酰化剂,８ｍｏｌ／Ｌ尿素进行洗脱,纯化约９倍,收率９０％以上,经活为７４００Ｕ／ｍｇ蛋白质,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示链激酶分子量为４７０００,未发生降解。ＮＰＧＢ酰化稳定,一次酰化后可反复使用２０余次。     

蛋白A亲和层析法纯化抗乙肝核心抗原单克隆抗体

建立从小鼠腹水中纯化抗乙肝核心抗原(HBcAg)单克隆抗体的一步层析法。将含抗HBcAg单克隆抗体的腹水经离心、过滤和缓冲溶液变换预处理后,采用HiTrap rProtein A FF亲和层析柱纯化,并探讨了上样缓冲液的pH值和NaCl浓度,洗脱液的种类、pH值以及体积流量对抗体纯度及回收率的影响,纯化后的单克隆抗体的生物学活性用间接ELISA法测定。结果显示,以pH7.0,20mmol/LPB+3.0mol/LNaCl为上样缓冲液,0.1mol/LGly-HCl为洗脱液,体积流量为5.0ml/min时,抗HBcAg单抗的纯度大于95%,回收率达75%,纯化后的单克隆抗体的生物学活性没有下降。本研究建立了蛋白A亲和层析法纯化抗HBcAg单克隆抗体的方法,其操作简便、快速而且效果良好。     

用亲和层析法分离纯化降纤酶

目的用亲和层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化降纤酶。方法用离子交换色谱、单克隆抗体亲和色谱技术进行分离纯化。结果得到电泳纯的降纤酶，其分子量为36000。结论用单克隆抗体亲和色谱法纯化降纤酶是切实可行的。     

应用免疫亲和层析法纯化乙型肝炎疫苗

用人肝癌细胞系分泌的HBsAg和重组酵母表达的HBsAg为原料的第二代乙型肝炎疫苗,为疫苗的制备提供了充足的抗原来源。但其浓度低、纯度差,故需采甩新的纯化工艺。作者介绍美国Merck药厂应用免疫亲和层析法纯化上述两种抗原,制备第二代乙型肝炎疫苗。该法用纯化的人血浆HBsAg免疫山羊,从其抗血清中分离特异性抗-HBs,再将此特     

用亲和层析法纯化抑肽酶的研究

<正> 抑肽酶为肽酶抑制剂,临床上用于治疗和预防急性胰腺炎、纤维蛋白原溶解引起的出血、弥漫性血管内凝血。还可用于抗休克治疗和预防术后肠粘连。原纯化方法系采用三氯醋酸沉淀杂蛋白,硫酸铵分级盐析和有机溶剂分级沉淀等多级纯化。路线长,收率低,成品纯度较差。国外报导已用亲和层析法纯化抑肽酶(商品Trasylol,Aprotinin)。作者等研究了     

应用疏水层析法纯化hCG单克隆抗体

建立一种良好的纯化hCG单克隆抗体方法。将hCG单克隆抗体的实验小鼠腹水经离心、过滤预处理后,用疏水层析法进行纯化,并探讨了洗脱方式、不同上样缓冲液离子强度、洗脱体积对抗体纯度的影响。以20 mmol/mL磷酸缓冲液+1.5 mmol/L硫酸铵为上样缓冲液,15 CV的洗脱体积进行洗脱,单抗纯度为70%,回收率20%。纯化后的单克隆抗体的生物学活性没有下降。本研究建立的疏水层析法纯化hCG单克隆抗体的方法,操作简便、快速而且效果良好。     

单克隆抗体亲和层析法精制蜱传脑炎病毒

作者选用从野鼠的血液和器官分离的蜱传脑炎(TBE)病毒Skalica株进行精制病毒的研究。此毒株的某些生物学特性不同于一般TBE病毒,其特点是皮下接种成年小鼠,毒力较低,可引起短暂的病毒血症,此毒株不耐热,可被认为是自然变异株。目前精制TBE病毒的方法较多,本文介绍的单克隆抗体亲和层析法比较简易。用鸡胚细胞培养感染病毒24小时后收获的培养液经3,000转/分钟离心10分钟,然后再经差异离心进行浓缩,最后将沉淀物再悬于pH9.0硼酸盐缓冲液中。单克隆抗体的处理是取含有单克隆抗体的腹水,调pH至7.0,再用50%饱和硫酸铵沉淀免疫球蛋白,经离     

免疫吸附亲和层析法分离纯化甲胎蛋白生产工艺研究

采用3～5个月胎龄的胚胎组织,通过盐析、凝胶层析和亲和层析法分离纯化甲胎蛋白(AFP).结果表明,通过盐析沉淀血红蛋白和Sephadex G-25柱层析脱盐,延长了亲和层析柱的使用寿命,亲和柱使用6次以上层析效果仍保持稳定.每个胚胎平均可分离得到AFP 0.7mg,回收率为45.71%.紫外吸收法测定抗体偶联率为95.38%.SDS-PAGE显示AFP在Mr 66000处一条带十分明显,纯度较高.该方法起始材料易得,适合规模化生产AFP.     

亲和层析法提纯人尿中集落刺激因子(HU-CSF)

评价用鼠巨噬细胞集落刺激因子(CSF-1)免疫的兔抗血清与人尿CSF-1的交叉反应性。一种交叉反应的抗血清用来提纯人尿中的CSF。将来自正常兔血清的IgG组分和抗CSF血清分别结合到溴化氰活化的琼脂糖凝胶上。取10升人尿用超滤法浓缩后,按顺序通过正常IgG柱和抗血清IgG柱。交叉反应蛋白质通过IgG柱去除,而CSF被抗CSF柱吸附。彻底冲洗抗体柱后,以4 mol硫氰酸钠洗脱CSF。根据在十二烷基硫酸钠(SDS)-丙烯酰胺凝胶上的迁移来判断,这一组分地含有4～5种污染的蛋白质。在进一步的提纯步骤中,CSF被刀豆素A(ConA)琼脂糖选择性地保留,然后用α-甲基葡萄糖苷洗脱。经这种方法提纯的CSF比活性为0.8～2.4×10~7U/mg蛋白质。一种单一的主要污染物质通过反相高效液相色谱(HPLC)法去除。最终提纯的CSF比活性为2.5～4.4×10~7U/mg蛋白质。每10升尿液可产生18～20μg的纯物质,收率为15%～25%。这一技术与以往报道的长时间、多步骤的方法相比,具有提纯速度快,CSF-1纯品产量高的优点。     

免疫吸附亲和层析法分离纯化甲胎蛋白生活工艺研究

采用３～５个月胎龄的胚胎组织,通过盐析凝胶层析和亲和层析法分离纯化甲胎蛋白（ＡＦＰ）。结果表明,通过盐析沉淀血红蛋白和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析脱盐,延长了亲和层析柱的使用寿命,亲和柱使用６次以上层析效果仍保持稳定。每个胚胎平无可分离得到ＡＦＰ０．７ｍｇ,回收率为４５．７１％。紫外吸收法测定抗体偶联率为９５．３８％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ＡＦＰ在Ｍｒ６６０００处一条带十分明显,纯度较高。该方法     

亲和层析法生产降纤酶

用自制的亲和层析柱纯人来自尖吻蝮蛇毒的降纤酶，可得到符合部颁质量标准的产品，降纤酶的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ纯度为单一酶带，ＨＰＬＣ纯度为单峰，酶比活为２８８６Ｕ／ｍｇ，与离子交换层析和凝胶过滤法比较，亲和层析法更适合规模化生产降纤酶。     

亲和层析法去除静注人免疫球蛋白中的血型抗体

静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)是从健康人血浆中分离提取的多种IgG抗体混合物,其中含有一定量的IgG型抗A/B血型抗体(血凝素),在临床上用于非O血型患者时,抗A/B血型抗体可与患者红细胞表面的A/B血型抗原结合,有诱发溶血反应的风险[1-2].特异性IgG型抗A/B血型抗体是制备IVIG所用原料血浆中的正常成分,但大剂量输注含有血型抗体的IVIG则可能导致溶血,因此确保抗A/B血型抗体在IVIG制品中的低水平非常重要[3].     

用葡萄球菌A蛋白亲和层析法分离人IgA

通常分离 IgA 是通过将骨髓瘤病人血清经硫酸铵沉淀、柱层析、阴离子交换层析和区带电泳等步骤完成的。而本文作者报告了用 Sephadex G-200、阴离子交换、SPA 和抗IgG-Sepharose 法从正常人血清中分离高纯度 IgA。     

醋酸棉酚对雄性木鼠睾酮、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的影响

给大鼠口服醋酸棉酚30mg/kg/d每周6次,给药2,4或8周,用放射免疫法测血清睾酮、LH和FSH水平。结果表明,给药2周(生精上皮破坏不明显)和6,8周(曲精细管严重破坏)血清睾酮水平显著下降,而血清LH无变化。给药8周时血清FSH显著升高,为对照组的4倍。实验结果提示棉酚可能影响间质细胞的功能。     

层析法提纯人绒毛膜促性腺激素(HCG)的研究

本文比较了离子交换、羟基磷灰石吸附、凝胶过滤及亲和层析等四种层析方法各自对HCG粗品的一次纯化效果。其中亲和层析所获得的纯化倍数相当于其它方法的几十倍,而且具有操作简单、时间短的优点。通过选择合适的洗脱条件,可以将吸附的HCG全部洗脱下来。     

hCG单克隆抗体的蛋白A亲和色谱纯化

建立了亲和色谱法从小鼠腹水中纯化人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体.将含hCG单克隆抗体的小鼠腹水经离心、过滤预处理后,采用蛋白A亲和色谱柱纯化,考察了上样缓冲液的pH和离子强度、洗脱液的pH和流速对抗体纯度及回收率的影响.用间接ELISA法测定纯化后单克隆抗体生物学活性.结果显示,以20 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0,含3 mol/L氯化钠)为上样缓冲液,0.1 mol/L枸橼酸钠缓冲液(pH 3.0)为洗脱液,流速为5 ml/min时,hCG单抗的纯度大于98%,回收率为75%.纯化后的单抗效价没有下降.     

层析法分离纯化溶菌酶概况

<正> 目前层析法分离纯化溶菌酶已成为最有效和较实用的工业化方法,本文拟就离子交换、凝胶过滤和亲和层析三个方面的概况作一介绍。一、离子交换法: 离子交换法是分离纯化溶菌酶最常用的方法。 1.国产724树脂提取溶菌酶: 溶菌酶为一碱性蛋白(等电点pH10.7-11.3),在等电点以下的广泛pH范围内,分子带正电荷,据此借静电引力吸附于弱酸性阳离子     

柱层析法提取门冬酰胺酶

目的　改良门冬酰胺酶提取工艺。方法　菌体经破壁处理后 ,经离子交换层析和亲和层析 ,将目的蛋白层析出来。结果　其效率远远高于传统的有机溶剂沉淀法。结论　操作方法简便 ,易于放大 ,是生产厂家提高效率、降低生产成本、提高竞争力的有效途径     

用A蛋白亲和层析法分离人和狗的IgM

本文叙述一种提纯正常人和狗IgM的方法,其步骤如下: 一、G-200柱层析:用含有0.1M醋酸(pH3.0)的Sephadex G200柱(2.0×90cm),将3ml正常人或狗血清中所