吸收性氧化纤维素止血胶囊的止血作用研究

目的研究吸收性氧化纤维素止血胶囊(XYZJ)的止血作用和止血机制。方法通过小鼠凝血、断尾止血模型和大鼠血小板聚集实验,评价本品的止血作用;通过血小板活化实验研究本品的止血机制。结果本品各剂量组小鼠体外凝血和外伤出血时间明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);本品高、中剂量组1~5min血小板聚集度明显高于对照组(P<0.05,P<0.01);本品高、中剂量组颗粒膜蛋白(CD62P)血小板阳性表达率明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论吸收性氧化纤维素止血胶囊有一定的止血作用,其止血作用可能是缩短凝血时间和增加血小板聚集度,其止血的机制可能是增强血小板活化功能。     

云南白药对大鼠血小板聚集及膜糖蛋白表达的影响

目的　研究大鼠服用云南白药后,血小板在ADP及花生四烯酸诱导下聚集率的变化,以及血小板糖蛋白CD61及CD62P在静息及ADP诱导条件下在膜表面表达的变化。方法　大鼠ig给药3d后,取血,用血小板聚集仪测定血小板的聚集率以及用流式细胞仪测定CD61和CD62P的表达。结果　无论在ADP或花生四烯酸诱导下,云南白药组的血小板聚集率都显著高于对照组(P<0.01) ;在静息条件下,CD61及CD62P在膜表面的表达虽有少量增加,但与对照组相比没有显著差异(P>0.05) ,但在ADP刺激条件下,给药组CD6 1及CD6 2P表达比对照组都有显著增加(P<0.01)。结论　在诱导条件下,云南白药可以促进血小板聚集及血小板膜上CD61及CD62P的表达,但不会增加静息血小板表面CD41及CD62P的表达,不会形成促血栓倾向。     

全三七片抗血小板聚集作用及优势分析研究

目的:评价三七创新新药全三七片的抗血小板聚集作用及其作用优势。方法:采用人富血小板血浆和洗涤血小板,检测全三七片对不同血小板激活剂诱导的血小板聚集率和Ca²⁺浓度;采用大鼠富血小板血浆,对比全三七片和三七提取物对二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集率;通过注射80%乙醇建立胃出血模型大鼠,考察全三七片与阿司匹林对便潜血的影响;通过小鼠凝血实验和大鼠凝血四项的检测,观察全三七片的止血作用。结果:全三七片可以剂量依赖性地抑制ADP、凝血酶、U46619、胶原、anti-CD9诱导的人血小板聚集率(均P<0.01)和Ca²⁺释放(P<0.05或P<0.01);可以抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集率(P<0.01),且作用明显优于传统三七提取物;全三七片以及与阿司匹林联合用药均可降低胃出血模型大鼠的便隐血等级(均P<0.05),而单用阿司匹林则未见显著性差异(P>0.05);全三七片还可显著缩短小鼠的凝血时间和大鼠的活化部分凝血活酶时间,具有一定的止血作用。结论:三七创新药物全三七片具有显著的抗血小板聚集作用,具有多...     

抗血小板药物对2型糖尿病下肢动脉硬化者血小板功能的影响

目的探讨抗血小板药物阿司匹林、氯吡格雷对2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞患者血小板膜糖蛋白表达的影响。方法50例2型糖尿病合并下肢动脉硬化闭塞患者随机分为阿司匹林组(n=25,100 mg.d-1)和氯吡格雷组(n=25,75mg.d-1),疗程均为1 wk,观察治疗前后血小板膜糖蛋白CD62p、CD63、CD61、CD41a、CD42b、纤维蛋白原和血小板聚集率的变化。结果2组患者在服药前血小板膜糖蛋白CD62p、CD63、CD61、CD41a、CD42b、纤维蛋白原和血小板聚集率无明显差异(P>0.05);阿司匹林组血小板膜糖蛋白CD62p、CD63及血小板聚集率较用药前无明显差异(P>0.05),氯吡格雷组CD62p、CD63及血小板聚集率较用药前显著降低(P<0.01)。结论氯吡格雷可以减轻2型糖尿病下肢动脉硬化闭塞症患者机体血小板活化,显著降低血小板聚集率。     

糖尿病患者血栓指标检测的临床价值

目的:研究糖尿病患者的血栓相关指标变化情况,讨论其在糖尿病发生发展过程中的预测作用。方法:选取2013年6月至2014年6月于我院治疗的62例糖尿病患者,测定治疗前和饮食及运动控制联合口服降糖药1个月后的血小板水平、随机血糖水平和血栓相关指标等,并取同期的健康人62例进行对比。比较两组的差异。结果:饮食及运动控制前的TXB2、t PAAg、v WF等血栓指标及血小板水平等明显高于健康人(P<0.05)。饮食及运动联合口服降糖药控制后1个月TXB2、t PAAg、v WF等血栓指标及血小板水平等明显较治疗前有改善。(P<0.05)结论:测定血清中的血小板水平、TXB2、t PAAg、v WF等血栓指标可预测糖尿病的高凝状态的出现并可预防并发症的发生。     

2型糖尿病大鼠血小板CD62表达与主动脉病变关系的探讨

目的探讨血小板CD62表达在2型糖尿病大鼠主动脉病变中的作用。方法Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、高糖高脂喂养组(B组)、糖尿病组(C组)。分别于胰岛素抵抗期、成模后8周、18周时经光镜和透射电镜观察主动脉形态学改变;应用微机图像处理系统,对主动脉内中膜厚度进行动态测量;应用流式细胞术测定循环血中血小板CD62的表达。应用酶联免疫吸附法检测氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)。结果镜下糖尿病大鼠主动脉病变出现于成模后8周,但在胰岛素抵抗期已有血小板CD62的表达明显增加,C组始终高于其他两组,而B组则高于A组(P<0.05);主动脉内-中膜厚度与血小板CD62表达和OX-LDL呈显著正相关(r=0.73,r=0.65,P<0.05),与血糖无明显相关。结论2型糖尿病大鼠血小板CD62过度表达先于大血管病变,可能是导致糖尿病大血管病变的重要因素之一,其可作为预测2型糖尿病大血管并发症的早期指标。     

不同血脂水平冠心病患者CD62p和CD63的检测(附50例分析)

目的探讨不同血脂水平冠心病患者血小板α颗粒膜糖蛋白(CD62p)和溶酶体膜蛋白(CD63)表达的意义。方法根据冠脉造影将71例可疑冠心病患者分为冠心病组(50例)和对照组(21例),应用流式细胞仪检测CD62p和CD63;并根据血清LDL-C水平分组,比较其表达水平。结果冠心病组CD62p[(5.23±4.29)%]和CD63[(5.17±3.38)%]水平高于对照组(P<0.01);高LDL-C组CD62p、CD63均高于低LDL-C组(P<0.01)。结论冠心病患者存在高度血小板活化,高LDL-C水平的冠心病患者血小板活化更为显著。     

银杏叶提取物制剂、阿司匹林及氯吡格雷抗血小板聚集作用比较及对血小板活化因子含量的影响

目的:观察银杏叶提取物(EGB)制剂、阿司匹林及氯吡格雷对家兔血小板聚集率及血小板活化因子(PAF)含量的影响。方法:采用体内实验,观察EGB制剂、阿司匹林及氯吡格雷对由花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)和PAF诱导的家兔血小板聚集作用的影响,以及对给药前后家兔PAF含量的影响。结果:与生理盐水组比较,EGB制剂抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集有统计学差异(P<0.05,P<0.01),并能够降低血清中PAF的含量(P<0.05),阿司匹林对AA诱导的血小板聚集有统计学差异(P<0.01),氯吡格雷对ADP诱导的血小板聚集有统计学差异(P<0.01),而阿司匹林和氯吡格雷对PAF的含量没有显著影响。结论:EGB制剂具有抗血小板聚集作用,抗PAF诱导的血小板聚集作用最强,并能显著降低PAF含量。     

阿司匹林铝镁合剂对冠心病患者抗血小板聚集的有效性与安全性评价

目的评价阿司匹林铝镁合剂(含阿司匹林81 mg、甘羟铝11 mg和重质碳酸镁22 mg)在冠心病患者抗血小板聚集治疗过程中的有效性及安全性。方法采用单盲、随机、平行对照临床研究方法,比较阿司匹林铝镁合剂(A组)与阿司匹林肠溶片(B组)对冠心病患者12周治疗过程中的安全性及有效性评价。结果两组患者治疗前血小板聚集率显著高于正常人(P<0.01),治疗后均明显下降(P<0.05),两组比较无显著性差异(P>0.05),但试验过程中A组消化道不良反应发生率明显低于B组(P<0.05)。结论阿司匹林铝镁合剂的安全性优于阿司匹林肠溶片,且抗血小板聚集作用相似。     

尼莫地平联合神经节苷脂治疗急性脑出血的效果及对患者神经功能、日常生活能力和hs-CRP、vWF水平的影响

目的观察尼莫地平联合神经节苷脂治疗急性脑出血的效果及对患者神经功能、日常生活能力和超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血管性假血友病因子(v WF)水平的影响。方法选取2018年6月-2019年6月株洲市省直中医院收治的急性脑出血患者130例为研究对象,按入院病历单双号随机分为观察组(65例)和对照组(65例)。对照组予以尼莫地平治疗,观察组予以尼莫地平联合神经节苷脂治疗。比较2组临床疗效,治疗前后神经功能缺损程度(NIHSS)、日常生活活动能力变化(ADL)评分和hs-CRP、v WF表达水平及不良反应。结果治疗15 d,观察组总有效率为89.23%,高于对照组的66.15%(χ²=9.986,P=0.002);2组NIHSS评分较治疗前明显降低(P<0.01),而ADL评分明显较治疗前升高(P<0.01),且观察组改善程度优于对照组(P<0.01);2组hs-CRP、v WF水平均较治疗前明显降低(P<0.01),且观察组较对照组降幅更明显(P<0.01);治疗期间,2组均未出现肝肾功能损伤等其他严重症状,2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(χ²=0.099,P=0.753)。结论尼莫地平联合神经节苷脂治疗急性脑出血疗效确切,可降低患者hs-CRP和v WF水平,减轻患者神经功能缺损程度,提高患者日常生活能力。     

诺帝对血管内皮生长因子诱导的人脐血源性内皮祖细胞功能的影响

探讨手性化合物诺帝(Nordy)对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的人脐血源性内皮祖细胞(EPCs)功能的影响及其意义。应用密度梯度离心法分离新鲜人脐血的单个核细胞，接种于EGM-2培养液中培养7～10 d获得内皮祖细胞(EPCs)。分别采用MTT法、Millicell-PCF培养小室系统和Matrigel内小管形成试验检测诺帝对VEGF刺激下EPCs增殖活性、迁移能力和体外形成小管样结构能力的影响。结果表明，100 μmol·L^-1诺帝作用24 h明显抑制EPCs增殖活性(P<0.05)，诺帝(25～50 μmol·L^-1)作用48～72 h也明显抑制EPCs增殖活性(P<0.05)。诺帝(25～100 μmol·L^-1)显著抑制VEGF诱导的EPCs迁移活性和体外形成小管样结构的能力(P<0.05)。诺帝能抑制体外VEGF诱导的人脐血源性EPCs增殖、迁移和体外小管形成能力，提示其具有抗EPCs效应。     

The effect of acute exposure to coarse particulate matter air pollution in a rural location on circulating endothelial progenitor cells: results from a randomized controlled study

Abstract

Context: Fine particulate matter (PM) air pollution has been associated with alterations in circulating endothelial progenitor cell (EPC) levels, which may be one mechanism whereby exposures promote cardiovascular diseases. However, the impact of coarse PM on EPCs is unknown.

Objective: We aimed to determine the effect of acute exposure to coarse concentrated ambient particles (CAP) on circulating EPC levels.

Methods: Thirty-two adults (25.9?±?6.6 years) were exposed to coarse CAP (76.2?±?51.5?μg?m^?3) in a rural location and filtered air (FA) for 2 h in a randomized double-blind crossover study. Peripheral venous blood was collected 2 and 20 h post-exposures for circulating EPC (n?=?21), white blood cell (n?=?24) and vascular endothelial growth factor (VEGF) (n?=?16–19) levels. The changes between exposures were compared by matched Wilcoxon signed-rank tests.

Results: Circulating EPC levels were elevated 2 [108.29 (6.24–249.71) EPC?mL^?1; median (25th–75th percentiles), p?=?0.052] and 20 h [106.86 (52.91–278.35) EPC?mL^?1, p?=?0.008] post-CAP exposure compared to the same time points following FA [38.47 (0.00–84.83) and 50.16 (0.00–104.79) EPC?mL^?1]. VEGF and white blood cell (WBC) levels did not differ between exposures.

Conclusions: Brief inhalation of coarse PM from a rural location elicited an increase in EPCs that persisted for at least 20 h. The underlying mechanism responsible may reflect a systemic reaction to an acute “endothelial injury” and/or a circulating EPC response to sympathetic nervous system activation.     

Homocysteine impaired endothelial function through compromised vascular endothelial growth factor/Akt/endothelial nitric oxide synthase signalling

1. Hyperhomocysteinaemia (HHcy) is associated with endothelial dysfunction and has been recognized as a risk factor of cardiovascular disease. The present study aimed to investigate the effect of homocysteine (Hcy) on endothelial function in vivo and in vitro, and the underlying signalling pathways. 2. The HHcy animal model was established by intragastric administration with l ‐methionine in rats. Plasma Hcy and nitric oxide (NO) concentration were measured by fluorescence immunoassay or nitrate reductase method, respectively. Vasorelaxation in response to acetylcholine and sodium nitroprusside were carried out on aortic rings. Human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were treated with indicated concentrations of Hcy in the in vitro experiments. Intracellular NO level and NO concentration in culture medium were assayed. The alterations of possible signalling proteins were detected by western blot analysis. 3. l ‐methionine administration induced a significant increase in plasma Hcy and decrease in plasma NO. Endothelium‐dependent relaxation of aortic rings in response to acetylcholine was impaired in l ‐methionine‐administrated rats. The in vitro study showed that Hcy reduced both intracellular and culture medium NO levels. Furthermore, Hcy decreased phosphorylation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) at serine‐1177 and phosphorylation of Akt at serine‐473. Hcy‐induced dephosphorylation of eNOS at Ser‐1177 was partially reversed by insulin (Akt activator) and GF109203X (PKC inhibitor). Furthermore, Hcy reduced vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in a dose‐dependent manner. 4. In conclusion, Hcy impaired endothelial function through compromised VEGF/Akt/endothelial nitric oxide synthase signalling. These findings will be beneficial for further understanding the role of Hcy in cardiovascular disease.     

Decreased mobilization of endothelial progenitor cells contributes to impaired neovascularization in diabetes

• 1 Circulating bone marrow (BM)‐derived endothelial progenitor cells (EPCs) play an important role in neovascularization. In the present study, we investigated the mechanisms underlying the reduction in circulating EPCs in a mouse model of diabetes induced by streptozotocin.
• 2 Compared with non‐diabetic controls, diabetic mice had reduced circulating EPCs (0.59 ± 0.11 vs 0.94 ± 0.21%, respectively; P < 0.01) and increased plasma endothelial microparticles (18 642 ± 6809 vs 5692 ± 1862/mL, respectively; P < 0.01). In a mouse bone marrow (BM) transplantation model, increased adhesion of transplanted BM cells to aortas of diabetic mice was observed compared with control (900 ± 194 vs 431 ± 109 cells/mm², respectively; P < 0.01).
• 3 Following hindlimb ischaemia, diabetic mice exhibited suppressed EPC mobilization, a reduction in the expected increase in capillary density and suppressed restoration of transcutaneous oxygen pressure in the ischaemic tissue. Diabetic mice also showed impaired ischaemia‐induced upregulation of vascular endothelial growth factor (VEGF), hypoxia‐inducible factor (HIF)‐1α and interleukin‐1β, an exaggerated increase in matrix metalloproteinase (MMP)‐2 and ‐9 and a suppressed increase in tissue inhibitor of matrix metalloproteinase (TIMP)‐1. On multivariate analysis, VEGF expression was the only independent factor related to circulating EPC count.
• 4 In conclusion, the data indicate that the decrease in basal circulating EPCs in diabetes may be attributable, in part, to consumptive loss of EPCs due to increased endothelial damage. Impairment of ischaemia‐induced EPC mobilization in the diabetic mouse model is associated with altered HIF‐1α/VEGF and MMP/TIMP regulation and represents a novel mechanism underlying defective postischaemic neovascularization in diabetes.

     

血管内皮生长因子对兔肾血管内皮细胞体外培养的影响

目的 探索血管内皮生长因子（VEGF）对兔肾血管内皮细胞（MVECs）体外培养的影响。方法采用三步梯度筛网法,获得纯度较高的肾血管球,0．5％胶原酶Ⅳ37℃消化15～20min,离心沉淀获取血管内皮细胞,分加与不加VEGF培养。对培养的细胞用倒置显微镜观察常规形态,用免疫组化法进行第Ⅷ因子相关抗原鉴定,用透射电镜观察细胞浆Weibel-Palade小体,用间接免疫荧光法检测CD31、CD34及CD44的表达。结果加VEGF的MVECs原代3d铺满瓶底,3～4d传一代;不加VEGF的MVECs原代7～12d铺满瓶底,7～8d传一代。鉴定时两种培养的MVECs表达是一致的。倒置显微镜观察细胞铺满瓶底时呈典型的铺路卵石样结构,免疫组化法第Ⅷ因子相关抗原阳性,透射电镜观察到细胞浆中的Weibel-Palade小体,间接免疫荧光法检测CD31、CD34表达阳性,CD44阴性。结论VEGF对MVECs体外培养的影响无显著意义。     

蜕皮甾酮对内皮细胞凋亡保护作用的研究

目的　初步探讨缺氧对培养人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)凋亡的影响及蜕皮甾酮的干预性作用。方法　①人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定 ;②建立人脐静脉内皮细胞缺氧模型 ,TUNEL法观测不同的缺氧时间 ( 0、12、2 4、4 8h)及蜕皮甾酮对内皮细胞凋亡的影响 ;③内皮细胞在常氧与缺氧状态下 ,实验组分别给于蜕皮甾酮 ( 10 0mg·L-1)刺激 ,2 4h后检测细胞中血管内皮生长因子 (VEGF)的表达。结果　随缺氧时间延长 ,HUVECs凋亡率显著升高 ;蜕皮甾酮能抑制缺氧导致的内皮细胞凋亡 ;蜕皮甾酮刺激内皮细胞VEGF表达上调。结论　缺氧作为一种致病因素 ,对内皮细胞凋亡的促发作用是随缺氧时间的延长而加重的。内皮细胞的过度凋亡是引起内皮功能障碍的一个重要因素 ,蜕皮甾酮通过抑制内皮细胞凋亡而具有内皮细胞保护作用 ,而此作用是由蜕皮甾酮刺激内皮细胞VEGF表达上调所介导的。     

普伐他汀对人内皮祖细胞一氧化氮合成的影响

目的观察普伐他汀对人内皮祖细胞（EPCs）一氧化氮（NO）合成的影响。方法密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,培养7d后,收集贴壁细胞并分别加入普伐他汀,10μmol/L及100μmol/L干预48h,免疫组化、荧光显微镜和流式细胞仪鉴定EPC,用RT-PCR方法测定对细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响,并用硝酸还原酶法测定培养液中一氧化氮（NO）的水平。结果普伐他汀组的人内皮祖细胞eNOS mRNA的表达、NO的合成明显增加。结论普伐他汀可增加人内皮祖细胞eNOS mRNA的表达和NO的合成     

内外源性EETs对血管内皮一氧化氮合酶的表达及其在Thr-495位磷酸化的作用

目的　研究细胞色素P4 5 0表氧化酶基因转染和直接加入EETs对内皮细胞eNOS表达及其在Thr 4 95位磷酸化的影响。方法　在原代培养的牛主动脉内皮细胞中 ,分别加入生理浓度的 8,9 EET(1 0 0nmol·L-1 )、1 1 ,1 2 EET(1 0 0nmol·L-1 )、1 4 ,1 5 EET(1 0 0nmol·L-1 )孵育 4h ,或直接用重组腺相关病毒介导的花生四烯酸表氧化酶转染牛主动脉内皮细胞2wk ,以产生内源性EETs ,用Westernblot法检测总eNOS蛋白的表达及eNOSThr 4 95磷酸化的水平 ;此外 ,从大鼠尾静脉注射真核表达质粒pCB6、pCB6 2C1 1OR、pCB6 2J2和pCB6 F87V ,2wk后检测大鼠主动脉总eNOS表达及eNOSThr 4 95磷酸化的水平。结果　与空白和溶媒组比较 ,外源性EETs明显促进内皮细胞总eNOS表达 ,增加eNOSThr 4 95的磷酸化 ,而CYP4 5 0抑制剂 (1 7 ODYA)则可明显降低eNOS表达和eNOSThr 4 95的磷酸化水平 ;与相应的对照组比较 ,体内和体外转染不同的表氧化酶基因均能明显上调内皮细胞eNOS的表达 ,增加eNOSThr 4 95的磷酸化水平。结论　EETs和CYP表氧化酶不仅能明显促进血管内皮细胞总eNOS蛋白的表达 ,而且还通过其翻译后修饰来增加其Thr 4 95位蛋白磷酸化水平