油酰乙醇胺对脂多糖诱导的THP-1细胞炎症因子表达的影响

目的探讨油酰乙醇胺(OEA)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人急性白血病单核细胞(THP-1)中前炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响,并初步探讨OEA作为过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激动剂参与对炎症调节的作用机制。方法体外培养的THP-1细胞,分别加入不同浓度的OEA(10,20,40μmol/L)或非诺贝特(100μmol/L)共同孵育1 h后,用1μg/mL LPS分别诱导6或24 h。采用RT-PCR、实时定量PCR和酶联免疫吸附检测测定细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达的变化,并使用实时定量PCR及Western blot方法检测PPAR-α及Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白的表达。结果相对于正常THP-1细胞,LPS诱导后细胞中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达明显增加。OEA对TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达有抑制作用,并呈现出一定的剂量依赖性。且OEA在激活PPAR-α表达的同时能够抑制TLR4的表达。结论 OEA对LPS诱导的炎症反应有抑制作用,其机制可能与激活PPAR-α,下调TLR4的表达有关。     

前胡甲素通过PPARα抑制LPS诱导的内皮细胞的炎症反应

目的探讨前胡甲素(Pd-Ia)对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导的内皮细胞中细胞因子表达的影响及其作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),用1mg·L-1LPS和不同浓度的Pd-Ia(10,20,40μmol·L-1)孵育24 h,采用荧光实时定量PCR检测TNF-α、IL-1β、PPARs(过氧化物酶体增殖激活受体)的表达。进一步在HUVECs中采用siRNA干扰PPARα后观察Pd-Ia的抗炎效应的变化。结果①Pd-Ia可以抑制LPS诱导的内皮细胞中TNF-α、IL-1β的表达。②Pd-Ia选择性上调LPS诱导的内皮细胞中PPAR-α的表达,而对PPAR-β、PPAR-γ的表达没有影响。③采用了siRNA特异性沉默PPARα后,Pd-Ia对TNF-α、IL-1β的下调作用被一定程度的逆转。结论 Pd-Ia对LPS诱导的内皮炎症反应有抑制作用,其机制与激活PPARα有关。     

巨噬细胞移动抑制因子siRNA对肺泡上皮细胞Toll样受体及其下游信号转导通路的影响

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子siRNA对脂多糖刺激的肺泡上皮细胞Toll样受体(TLR)及其下游信号转导通路的影响和作用机制.方法:用LPS刺激A549细胞,脂质体法分别将巨噬细胞移动抑制因子(MIF) siRNA和非特异性siRNA加入A549细胞进行干预.RTPCR法检测MIF和TLR2、TLR4 mRNA的表达,Western Blot法分析TLR下游信号转导通路元件髓样分化因子88 (MyD88)和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白表达,细胞免疫荧光法观察NF-κB核迁移,ELISA法测定细胞培养上清炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6,免疫介质IFN-β分泌水平.结果:MIF siRNA对LPS刺激诱导的MIF和TLR2、TLR4 mRNA高表达有显著的下调作用和部分阻断NF-κB(p65)核迁移.LPS刺激诱导后,MIF siRNA显著降低MyD88蛋白表达和炎症介质TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平,但MIF siRNA对IRF3蛋白表达和免疫介质IFN-β分泌水平无影响.结论:MIF siRNA能抑制A549细胞的炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6过度分泌,其机制可能是MIF siRNA降低了LPS刺激A549细胞诱导的MIF和TLR2、TLR4高表达,及阻断TLR下游信号转导通路元件MyD88和NF-κB核迁移.     

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

丹参酮II-A通过调控TLR4/IκBα/NFκB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症

目的建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究丹参酮II-A(Tan IIA)的抗炎活性及其机制。方法CCK-8法测定Tan IIA对细胞活力的影响;迁移小室测定Tan IIA对LPS诱导细胞迁移能力作用;ELISA法测定细胞上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL^-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量;Western blot法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、MMP-9、Toll样受体-4(TLR4)、IκB-α、p-IκB-α、NFκB和p-NFκB蛋白的表达。结果Tan IIA对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL^-1β和MCP-1的分泌有明显的抑制作用;明显下调MMP-2、MMP-9、TLR4、p-IκB-α和p-NFκB的蛋白的表达,抑制IκB-α磷酸化和NFκB的入核和活化。结论Tan IIA可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达以及TLR4/κB-α/NF-κB信号通路,调控TNF-α、IL-6、IL^-1β等炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的干预作用

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子κB(NF-κB)信号通路研究黄连素对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象,以阿托伐他汀钙为阳性对照,经脂多糖(LPS)诱导以复制炎症细胞模型,采用酶联免疫吸附测定法检测低、中、高剂量黄连素(5、10、20μmol/L)作用24 h后细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、NF-κB含量,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中TLR4、MyD88 mRNA的表达水平,采用Western blotting法检测细胞中TLR4、MyD88、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD206蛋白的表达水平。结果:与空白对照组比较,LPS诱导组细胞培养液中TNF-α、IL-6、NF-κB含量,细胞中TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量以及TLR4、MyD88、iNOS蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与LPS诱导组比较,阿托伐他汀钙组和黄连素中、高剂量组TNF-α、IL-6含量,TRL4、MyD88 mRNA及其蛋白的相对表达量以及各给药组NF-κB含量和i NOS蛋白的相对表达量均显著降低,且黄连素高剂量组NF-κB含量显著低于阿托伐他汀钙组(P<0.05);阿托伐他汀钙组和黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量均显著升高,且黄连素高剂量组CD206蛋白的相对表达量显著高于阿托伐他汀钙组(P<0.05)。结论:不同剂量的黄连素均可不同程度地干预小鼠巨噬细胞极化,其机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

目的探讨豆蔻明(cardamonin,CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/My D88/NF-κB/i NOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组:正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组);CCK-8方法检测细胞活力,Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-ɑ、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的mRNA表达,Western blot检测i NOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitorκBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1~50μmol·L~(-1)豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性,但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和i NOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达,25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的i NOS、TLR4、My D88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/My D88/NF-κB/i NOS信号通路从而抑制NO的产生。     

瑞芬太尼对脂多糖诱导的急性肺损伤大鼠肺脏Toll样受体4的影响

目的研究瑞芬太尼对LPS诱导的急性肺损伤大鼠肺组织的影响。方法24只Wistar大鼠随机分为3组(n=8):对照组(C组),肺损伤组(LPS组)和瑞芬太尼组(R组)。分别于气管内给药前、给药1h、3h和5h记录平均动脉压和心率,行动脉血气分析。注药、机械通气5h后测定TLR4mRNA和蛋白表达,观察肺组织病理学及支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达。结果与C组比较,LPS组及R组TLR4mRNA表达和蛋白表达明显增加,BALF中TNF-α增加。与LPS组比较,R组TLR4mRNA表达增高,BALF中TNF-α增加。肺组织损伤程度从轻至重分别为C组、LPS组、R组。结论瑞芬太尼能加重LPS诱导的ALI大鼠肺组织的损伤,其作用机制与上调TLR4表达有关。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Western bolt法检测TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA和蛋白表达。结果 LPS刺激组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05)。与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-κB信号通路来实现的。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-кB炎症信号通路的影响

目的 观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导入脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-кB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法 体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Westem bolt法检测TLR4,NF-кB、TNF-αmRNA和蛋白表达.结果 LPS 刺激组TLR4,NF-кB和 TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05).与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4,NF-кB,TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4,NF-кB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-кB信号通路来实现的.     

吡格列酮对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性细胞因子释放的影响

目的研究吡格列酮对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症介质释放的抑制作用及其信号传导通路。方法神经胶质酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞纯度。ELISA方法检测IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量的变化。Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮(NO)含量。结果星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定,其阳性率可达95%以上。LPS组能明显增加星形胶质细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α及NO。吡格列酮能明显抑制LPS引起的这些作用,并呈一定浓度依赖性。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662能明显对抗吡格列酮对LPS引起的IL-1β、IL-6、TNF-α及NO增加的抑制作用。与LPS组相比,JNK特异性阻断剂SP600125(5μmol·L-1)亦能有效对抗LPS诱导星形胶质细胞IL-1β、IL-6、TNF-α及NO分泌的增加;特异性iNOS抑制剂SMT可明显抑制LPS引起的NO分泌增加。结论吡格列酮能明显改善LPS诱导的大鼠皮层星形胶质细胞的损伤,这种作用可能与激活PPARγ、抑制JNK信号传导通路有关。     

黄芪多糖通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的旨在从TLR4-NF-κB信号转导通路角度探讨黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)诱导新生大鼠心肌细胞肥大的作用机制。方法原代培养新生大鼠心肌细胞,以LPS 1mg.L-1诱导心肌细胞肥大,观察不同浓度APS及IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082对肥大心肌细胞的影响。以计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量;RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达;Western blot法检测心肌细胞IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液TNF-α的含量。结果 APS及BAY11-7082均能有效抑制LPS诱导的心肌肥大,表现为蛋白含量降低,体积减小;并能有效减少炎症反应,表现为TLR4 mRNA表达降低,IκBα的蛋白含量升高,细胞外液中TNF-α明显减少,且APS的作用呈一定的剂量依赖性。结论黄芪多糖对LPS诱导的乳鼠心肌细胞有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

黄芪注射液对脂多糖诱导的内皮细胞炎症因子产生的影响及其机制研究

目的:观察黄芪注射液对脂多糖(LPS)诱导的内皮细胞炎症因子产生的影响,并初步探讨黄芪注射液的抗炎作用机制。方法:体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),待细胞生长到融合状态时加入不同浓度(10、20、40 mg/L)的黄芪注射液预处理2 h,然后加入LPS(1 mg/L)作用24 h。用四唑盐比色实验(MTT)检测细胞活力;半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达和其在上清液中的含量;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达;凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-κB活性。结果:LPS能明显降低细胞活力,并能显著增加ICAM-1I、L-8和TNF-αmRNA的表达和含量,同时TLR4 mRNA的表达和NF-κB的活性也显著升高,而预先应用不同浓度的黄芪注射液处理后,上述效应明显减弱。结论:黄芪注射液抑制炎症因子的产生可能与其抑制TLR-4/NF-κB信号通路有关。     

1,25（OH）2D3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子表达的抑制作用

目的探讨1,25(OH)2D3(1,25-dihydroxyvitamin D3)对人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC)果蝇样受体(Toll like receptor 4,TLR4)基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用。方法不同浓度1,25(OH)2D3干预HA-VSMC后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mR-NA的表达水平。结果 1,25(OH)2D3在浓度为1~20nmol/L之间抑制TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mRNA水平的表达且具有明显的剂量依赖关系。在浓度为1nmol/L时1,25(OH)2D3下调TLR4和MCP-1mRNA表达的作用最明显,浓度为10nmol/L时,1,25(OH)2D3下调IL-6mRNA表达的作用最明显,浓度为20nmol/L时,1,25(OH)2D3下调IL-8mRNA表达的作用最明显。TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1mRNA表达的最大下调幅度分别为对照组的3.08、2.39、3.19、2.23倍(均P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3通过下调TLR-4信号抑制了人主动脉血管平滑肌细胞的炎症反应。     

丙泊酚对BV-2小胶质细胞活化的影响

目的探讨丙泊酚对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞活化的影响及其可能机制。方法体外培养小鼠BV-2小胶质细胞,随机分为LPS 1μg/ml组(A组)、丙泊酚30μM组(B组)、LPS 1μg/ml+丙泊酚30μM组(C组)和空白对照组(D组)。采用RT-PCR检测各组细胞中IL-1β和TNF-αmRNA表达量,Western blot检测总糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的蛋白表达水平。结果 A、C组IL-1β、TNF-α及p-GSK-3表达量均较D组明显增加(P<0.05或P<0.01)。与A组相比,C组IL-1β和TNF-αmRNA表达量降低,而p-GSK-3β蛋白表达量增加(P<0.05)。结论丙泊酚30μM能在体外减轻LPS诱导的BV-2小胶质细胞释放IL-1β和TNF-α的水平,此作用可能与抑制GSK-3β活性有关。     

槟榔碱改善脂多糖诱导的BV2细胞神经炎症及作用机制

目的 探讨槟榔碱对脂多糖（LPS）诱导小鼠小胶质细胞BV2炎症反应的改善作用及机制。方法 取对数生长期的BV2细胞分为空白组和LPS(0.01、0.1、1、10、20μg/mL)组,CCK-8法检测细胞活力,分光光度法检测一氧化氮（NO）含量。另取细胞分为空白组、模型组、槟榔碱（10、20、40μmol/L）组。CCK-8法检测细胞活力;分光光度法检测NO含量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和抗炎因子白细胞介素10(IL-10)水平;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测细胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、一氧化氮合酶（i NOS）mRNA表达表达;Western blotting法检测Toll样受体4(TLR4)、p-p65、p65、环氧化酶2(COX2)、iNOS、胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt蛋白表达水平。结果 0.01～20μg/mL LPS诱导对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著影响,1μg/mL LPS诱导显著上调了细胞中NO含量;槟榔碱在10～4...     

芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PF)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响。方法 AGEs在不同时间点刺激RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度的PF预先孵育细胞干预刺激,以优化实验条件;后将巨噬细胞随机分为对照组(DMEM培养基)、牛血清白蛋白(BSA)组(200 mg·L~(-1)BSA)、AGEs组(200 mg·L~(-1)AGEs)、PF组(200 mg·L~(-1)AGEs+10~(-5)mol·L-1PF)及TLR2/4抑制剂组(200 mg·L~(-1)AGEs+30 mg·L~(-1)人氧化磷脂)。Western blot检测各组TLR2、TLR4、髓样分化因子(My D88)、p-IRAK1、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、干扰素调节因子3(IRF3)、p-IRF3、NF-κB p-p65、NF-κB p65、iNOS、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达,RT-PCR检测各组TLR2和TLR4mRNA表达,ELISA法测定各组细胞上清液中TNF-α、IL-1β及MCP-1水平。结果与对照组相比,AGEs能明显上调TLR2、TLR4、My D88、p-IRAK1、TRIF、IRF3、p-IRF3、NF-κB pp65、NF-κB p65、i NOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1蛋白表达(P<0.01)及TLR2、TLR4 mRNA表达(P<0.01),增加细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MCP-1水平(P<0.01);PF和TLR2/4抑制剂能明显下调AGEs诱导产生的效应(P<0.01)。结论 PF可通过抑制巨噬细胞TLR2/4信号通路而发挥抗炎作用,这可能为糖尿病肾病的治疗提供新的理论基础。     

肿瘤坏死因子-α对脂肪细胞脂联素和炎症因子mRNA表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子吨(TNF-α)在肥胖-炎症-胰岛素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)的病生理过程中的作用.方法:(1)培养前脂肪细胞3T3-L1细胞,并观察其诱导分化成熟过程中过氧化物酶体增殖活化受体-γ(PPAR-γ)mRNA、脂联素(ADPN)mRNA的表达情况.(2)以高浓度(20 μg几/L的TNF-α处理分化成熟的脂肪细胞0.5、4、8、24h,提取总RNA,采用实时定量逆转录聚合酶链反应检测ADPN mRNA、PPAR- γ mRNA、TNF-α mRNA、白细胞介素(IL)-6 mRNA、IL-1β mRNA的表达情况.结果:(1)3T3-L1细胞诱导分化过程中ADPN mRNA的表达呈逐渐上升趋势,诱导后PPAR-γ mRNA增加.(2)分化成熟的脂肪细胞中ADPN mRNA表达水平在TNF-α处理0.5、4、8 h后随着时间延长逐渐下降,8 h时降至最低(P<0.01). 0.5 h后PPAR-γ/mRNA表达水平并未出现明显下降,4、8、24 h时均低于对照组(P<0.01),4 h时降至最低.TNF-α处理0.5 h后TNF-α mRNA表达水平明显上升,并于4 h时达峰值,各处理组均高于对照组(P<0.01);0.5 h后IL-6mRNA表达水平明显升高,各处理组均高于对照组(P<0.01).空白组、对照组和各TNF-α处理组IL-1β mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论:本实验从分子生物学水平证实了TNF-α参与肥胖-炎症-IR-T2DM的过程.     

化合物4h对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用及机制研究

摘要：目的:探讨化合物4h对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症的抑制作用。方法:小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7经LPS诱导建立炎症模型,实验分为空白组、对照组、阳性罗格列酮组(5,10μmol·L-1)、阳性吲哚美辛组(5,10μmol·L-1)、4h组(5,10μmol·L-1),采用酶联免疫吸附实验测定目标化合物4h对于炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌的影响;实验分为空白组、对照组、4h组(5,10μmol·L-1),采用蛋白免疫印迹实验测定目标化合物4h对于信号通路Toll样受体4/核因子κB（TLR4/NF-κB）蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,LPS作用后,对照组TNF-α含量显著升高（P<0.01）,并且随着LPS作用时间的延长,TNF-α含量随之升高。加入化合物处理后,各实验组TNF-α含量呈下降趋势,与对照组比较,化合物4h各时间点的TNF-α含量差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,随着化合物浓度的升高,炎症因子的含量逐渐下降。化合物4h对TNF-α的抑制作用明显优于两个阳性对照药罗格列酮和吲哚美辛（P<0.05或P<0.01）。与空白组比较,LPS作用后对照组RAW 264.7细胞中IκBα蛋白表达水平显著降低,TLR4、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与对照组比较,4h作用后实验组RAW 264.7细胞中IκBα蛋白表达水平显著升高,TLR4、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论:4h通过抑制信号通路TLR4/NF-κB蛋白的表达,进而抑制炎症因子TNF-α的产生,从而发挥抗炎作用。     

双氢青蒿素通过抑制炎症反应在血管重塑中的作用机制研究

目的 探究双氢青蒿素通过抑制炎症反应对血管重塑的抑制作用。方法 采用贴块法培养小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，以TNF-α诱导建立体外平滑肌细胞增殖模型，通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉损伤模型，并采用双氢青蒿素干预细胞及股动脉损伤小鼠。采用CCK-8法检测细胞增殖；H&E染色评价股动脉组织病理变化情况并测量中膜厚度；ELISA法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、CCR8及小鼠股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1的含量；免疫组织化学法检测股动脉组织NF-κB p65、CCR8表达；qRT-PCR分析细胞及股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CCR8、NF-κB p65、TGF-β1、MCP-1 mRNA表达；Western blotting分析细胞及股动脉组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、NF-κB p65、CCR8、TGF-β1、MCP-1蛋白表达。结果 在TNF-α诱导的VSMCs增殖及股动脉损伤小鼠模型中，VSMCs增殖及TNF-α、IL-6含量明显升高，IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达明显升高，IL-6、CCR8、NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)；双氢青蒿素可明显降低TNF-α诱导的VSMCs中IL-1β、IL-8 mRNA及股动脉损伤小鼠IL-1β mRNA表达和IL-1β、p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论 双氢青蒿素能降低血管炎症，延缓损伤血管的重塑，表明其为经皮冠状动脉介入治疗(如支架植入)的潜在治疗药物。