HPLC法分离与检测20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3

20(R)-人参皂苷Rg3是我国21世纪批准的第一个中药单体新药，拥有完全自主知识产权。实验与临床研究表明，人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤细胞的增殖、浸润，对抗肿瘤细胞的转移，促进肿瘤细胞凋亡，提高机体免疫能力等作用。目前对于20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3的抗肿瘤作     

20(R)-人参皂甙Rg3对K562/ADM细胞凋亡诱导的研究

目的 :探讨抗癌药物 2 0 (R) -人参皂甙Rg3(2 0 (R) -GinsenosideRg3)对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :采用人红白血病耐阿霉素 (adriamycin ,ADM)细胞株K5 6 2 /ADM细胞作为实验模型 ,用ADM作阳性对照。结果 :MTT法细胞毒实验显示 ,Rg3对K5 6 2 /ADM细胞的IC 5 0为 10 4 9± 0 30 μg/ml;流式细胞仪法测定该细胞与浓度为 1 0 μg/ml(无毒剂量 )和 5 0 μg/ml(低毒剂量 )的Rg3共同培养 4 8h的细胞凋亡率分别为 3 39± 0 2 5 %和 9 36± 0 6 1% ;电镜下 ,可见凋亡的K5 6 2 /ADM细胞及凋亡小体。结论 :Rg3具有较强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,其诱导强度与其浓度呈正相关 ,对作用时间有依赖性。     

20（S）-人参皂苷Rg3抗异丙肾上腺素诱导心肌缺血作用

[目的]研究20（S）-人参皂苷Rg3抗心肌缺血作用及其机制.[方法]随机将50只Wistar大鼠分成5组,即空白对照组（CON）,异丙肾上腺素组（ISO）,20（S）-人参皂苷Rg3（5、10、20 mg/kg）组.各组大鼠灌胃给予相应药物,除CON外其余各组大鼠皮下注射盐酸异丙肾上腺素（20 mg/kg）制备心肌缺血模型.末次注射异丙肾上腺素2h后麻醉大鼠,取血检测血清中肌酸激酶（creatine kinase,CK-MB）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力,取大鼠左心室制备匀浆后检测心肌组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidas,GSH-Px）活性、总抗氧化能力（total antioxygencapabilit,T-AOC）及丙二醛（malonaldehyd,MDA）含量.[结果]与CON组相比,ISO组血清CK-MB、LDH活力明显增高.与ISO组比较,20（S）-人参皂苷Rg3（5,10,20 mg/kg）可显著降低血清CK-MB、LDH活力;与CON组比较,ISO组SOD活性、GSH-Px活性及T-AOC降低,MDA含量增高;与ISO组相比,20（S）-人参皂苷Rg3（5、10、20 mg/kg）可显著提高SOD活性、GSH-Px活性及T-AOC,降低MDA含量.[结论]20（S）-人参皂苷Rg3具有抗心肌缺血作用,其作用机制与清除自由基和抗脂质过氧化有关.     

HPLC法测定西洋参茎叶总皂苷降解物中20(S)-人参皂苷Rg3的含量

西洋参 Panax quinquefolium L.为五加科人参属植物 ,根部入药。 1 998年尹建元等从野山参茎叶皂苷中首次分离得到人参皂苷 Rg3 [1] 。 2 0 0 2年孟勤等从西洋参叶中首次分离得到人参皂苷 Rg3 [2 ] 。人参皂苷 Rg3 具有明显抑制乙酰胆碱刺激牛肾上腺素嗜铬细胞分泌儿茶酚胺的作用 [3 ] ,并且人参皂苷Rg3 毒性小 ,生物活性强 ,是很具有开发价值的天然活性成分 ,但人参皂苷 Rg3 在自然界存在甚少。为了获得大量人参皂苷 Rg3 ,我们采用西洋参茎叶提纯总皂苷并制备二醇组皂苷[4] ,再将二醇组皂苷进行降解制备人参皂苷 Rg3 。本实验采用 HPL…     

20（R）-人参皂苷Rg 3对人乳腺癌细胞自噬作用的影响

目的：观察20(R)-人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞（MCF-7）自噬作用的影响,并探讨20(R)-人参皂苷Rg3诱导MCF-7自噬作用的最佳剂量。方法人乳腺癌细胞株分为20(R)-人参皂苷Rg3实验组及空白对照组。采用MTT法观察20(R)-人参皂苷Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并依据计算出的IC50值确定20(R)-人参皂苷Rg3的有效浓度。结果当20(R)-人参皂苷Rg3浓度在37.5～600.0mg/L时,MCF-7细胞的生长抑制率最高,并随其浓度的增加而增大,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在荧光显微镜下观察到细胞所含自噬泡明显增多,说明20(R)-人参皂苷Rg 3可诱导乳腺癌细胞自噬。蛋白质印迹法检测结果显示：LC 3蛋白,特别是LC 3-I 的表达量与细胞自噬程度呈正相关,随着20(R)-人参皂苷Rg 3干预浓度的增大,LC3-I和LC3-I蛋白表达量亦明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论20(R)-人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖,且呈现良好的剂量、时间依赖性;20(R)-人参皂苷Rg 3有诱导MCF-7细胞自噬作用。     

人参皂苷Rg3合用青蒿琥酯抗肿瘤活性研究

目的:探讨人参皂苷Rg3合用青蒿琥酯(R-A合剂,1∶1)的抗肿瘤活性。方法:MTT法观察R-A合剂对刀豆蛋白A(Co-nA)诱导的小鼠脾细胞增殖的影响。小鼠接种S180肉瘤,分为5组,模型组、R-A合剂高剂量组、中剂量组、低剂量组,分别灌胃200 mg.kg-1、100 mg.kg-1、50 mg.kg-1,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺50 mg.kg-1,给药10 d后,各组称体质量和瘤质量,计算抑瘤率。结果:R-A合剂(≥0.1μmol.L-1)对淋巴细胞增殖表现出较强的抑制活性(P<0.01),细胞增殖的抑制作用随药物浓度的增加而显著提高。R-A合剂各组荷瘤小鼠的瘤质量与模型组相比均明显减轻(P<0.05或P<0.01),抑瘤率为41%～49%,抑瘤作用呈剂量依赖性。结论:人参皂苷Rg3合用青蒿琥酯有良好的抗肿瘤活性。     

20（R）-人参皂苷Rg_3抗血小板活化因子诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨20（R）-人参皂苷Rg3抗血小板活化因子（PAF）损伤人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制.方法采用MTT法测定PAF诱导HUVEC活性;用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI-1含量.结果 1μmol/LPAF刺激HUVEC 2 h后,可明显降低HUVEC的吸光度值,细胞内钙离子浓度升高,上清液中PAI-1含量明显升高,而t-PA含量无明显变化;20～80μmo/L 20（R）-人参皂苷Rg3可升高HUVEC吸光度值,并呈浓度依赖性显著降低HUVEC内游离钙浓度;20（R）-人参皂苷Rg3降低上清液中PAI-1含量,对t-PA含量无明显影响.结论 20（R）-人参皂苷Rg3对PAF诱导损伤的HUVEC具有抗损伤保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度,抑制PAI-1产生和调节t-PA/PAI-1平衡作用有关.     

20(R)-人参皂甙Rg3抗肿瘤作用机制的研究进展

人参皂甙Rg3为近年从人参(ginseng)根的浸出液中分离出的一种有效成分,其具有抑制肿瘤细胞转移的作用[1]。20(R)人参皂甙Rg3是日本学者北川勋于1980年首先制备出,并确定其分子式的[2]。20(R)人参皂甙Rg3是从红参(栽培人参经晒干或烘干再蒸制而成)中微量提取的,其提取率仅为0.00     

超高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量

目的建立超高效液相色谱（UPLC）法测定三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的含量。方法采用ACQUITY BEH C18（2.1 mm×50 mm,1.7μm）色谱柱;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为0.4 mL·min^-1;检测波长为203 nm;柱温为35℃;进样体积为2μL。结果三七中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1分别在0.116 8～1.168μg、0.123 6～1.236μg、0.030 0～0.300μg范围内与相应峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为100.1%、99.3%、99.9%,RSD值分别为0.4%、0.6%、1.0%（n=6）。结论较之HPLC法,UPLC法在不影响分离效果的情况下可大大提高三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的分析速度,改善分析效果;同时可减少溶剂的消耗。UPLC法可作为替代传统HPLC法的一种更为方便、快捷、可靠的方法。     

人参皂苷Rg3对HSE模型鼠的治疗作用及免疫调节效应

目的：研究人参皂苷Rg3对单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型鼠的治疗作用及其免疫调节效应。方法：腹腔注射单纯疱疹病毒1(HSV-1)病毒悬液,用PBS做六个稀释度10倍递次稀释,分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5和10^-6,制备小鼠HSE模型。硝酸还原酶法检测小鼠脑组织NO含量。腹腔注射人参皂苷Rg3,剂量分别为0.3、1.0和3.0 mg•kg^-1,观察Rg3对HSE模型鼠存活时间的影响和脑组织病理形态的改变。MTT法检测Rg3对小鼠淋巴细胞转化功能和NK细胞毒活性的影响,鼠脾T淋巴母细胞增殖分析法测定上清中IL-2活性,细胞病变抑制法测定IFN-γ活性。结果：成功建立HSE小鼠模型。HSE模型鼠脑组织中NO含量高于对照组(P<0.05)。0.3 mg•kg^-1Rg3组和疱疹性脑炎小鼠的存活时间延长,脑组织病理改变减轻。0.4 mg•kg^-1Rg3组SI、IL-2和IFN-γ高于对照组(P<0.05),NK细胞毒活性高于对照,但差异无显著性(P<0.05)。结论：Rg3对HSE小鼠具有保护作用,具有免疫调节效应,是一种具有潜在开发前景的抗HSV-1药物。     

人参皂苷Rg3抗肿瘤新生血管形成的实验研究

目的：探讨人参皂苷Rg3的抗肿瘤血管形成作用。方法：用含不同浓度人参皂苷Rg3的培养液培养人肺癌SPC－A－1细胞，收集培养上清并制备条件培养液（CM），将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）团培养在纤维蛋白凝胶中，在凝胶上面加入CM，观察并记录内皮细胞形成的血管状结构数量。结果：来自肺癌细胞的CM能刺激内皮细胞呈管状结构生长，用人参皂苷Rg3处理肺癌细胞后的CM对管状细胞生长的刺激作用减弱。结论：人参皂苷Rg3在体外能抑制肺癌细胞新生血管的形成。     

大鼠肌内注射20(S)-人参皂苷Rg3的药动学研究

目的 研究20(S)-人参皂苷Rg3经肌内注射后在大鼠体内的药动学情况,包括血药动力学研究,组织分布情况,在尿和胆汁中的排泄情况等方面的内容.方法 本实验采用蒸发光散射检测法测定药物在血液和组织中的浓度,用3P97药动学程序进行数据处理,方法快捷、简便,结果的精密度、稳定性和回收率均好.结果 20(S)-人参皂苷Rg3肌内注射后(1.5 mg&#183;kg-1),其药动学模型为一室模型,t1/2(ke)为0.75 h,t(peak)为0.116 h,pmax为13.9 mg&#183;L-1,AUC为16.6 mg&#183;h&#183;L-1;肌注后在心、肝、脾、肺、肾中可以检测到有20(S)-人参皂苷Rg3存在,而在脑、胃、肠、体脂、肌肉和生殖腺中均未检测到;药物主要经尿液排泄,给药8 h内,20(S)-人参皂苷Rg3经尿液排出药物总量的72.1%,经胆汁排泄的药物占药物总量的10.1%;药物与蛋白的结合率为15%～17%,且不随浓度的变化而改变.结论 20(S)-人参皂苷Rg3肌内注射后可以很快被吸收进入血液,迅速达到血药浓度的峰值,它在体内的代谢速度较快,且大部分药物经尿液由肾脏排出体外,在体内基本无蓄积.     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中人参皂苷Rg3的浓度

目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定大鼠血浆中人参皂苷Rg3的浓度,用于大鼠体内人参皂苷Rg3的药代动力学研究.方法 血浆样品经乙酸乙酯液-液提取.色谱柱为Inertsil ODS-3(2.1 mm×50 mm,5μm),流动相:乙腈:10 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1％甲酸,90:10);流速:0.4 mL/min;ESI离子源,负离子模式监测.6只大鼠灌胃给予人参皂苷Rg3 20 mg/kg后按预定时间点眼眶采血.采用DAS 3.3.1软件统计其药代动力学参数.结果 血浆中人参皂苷Rg3的线性范围为2 ～ 400 ng/mL,日内、日间精密度及基质效应RSD均小于15％,主要的药代动力学参数:AUC0-t为(821.659±170.125)ng·h/mL,AUC0-∞为(912.468±190.653)ng·h/mL,Cmax为(138.803±28.997) ng/mL,t1/2为(2.803±0.263)h.结论 建立的方法快速、灵敏、准确.适用于大鼠血浆中人参皂苷Rg3浓度的测定.     

人参皂苷Rg3抗血管形成作用的实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg3的抗血管形成作用.方法:原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测TNP-470(阳性对照)和人参皂苷Rg3对HUVEC增生的影响;采用改良鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成模型,将不同剂量人参皂苷Rg3和TNP-470(阳性对照)置于7天的鸡胚绒毛尿囊膜上,3天后观察新生血管形成是否被抑制.结果:TNP-470抑制HUVEC增生,人参皂苷Rg3对HUVEC增生无影响,二者都抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成.结论:人参皂苷Rg3无细胞毒作用,但有抗血管形成作用.     

人参皂苷Rg3调控ERK通路抑制Lewis小鼠肺癌生长的研究

目的:通过人参皂苷Rg3对Lewis肺癌小鼠模型及其细胞模型的抑制研究,探讨ERK信号通路及相关基因在抗肿瘤中的作用。方法:建立Lewis肺癌小鼠荷瘤动物模型,通过口饲法给予定量人参皂苷,连续3周,处死动物后,比较各组荷瘤小鼠肿瘤体积。含药动物血清作用于Lewis肺癌细胞,MTT法检测各组细胞抑制效率。Realtime-PCR法检测荷瘤鼠Dusp6,Bax,Bcl-2基因表达变化,Western blot法检测荷瘤鼠ERK,p-ERK蛋白表达变化。结果:人参皂苷Rg3对Lewis肺癌细胞及荷瘤小鼠的肿瘤生长均有明显抑制作用（P <0.01）。Western blot显示ERK在Rg3处理组中的表达明显比对照组低,Realtime-PCR结果显示,在动物肿瘤标本中,Dusp6,Bax基因药物处理组比对照组高表达（P <0.01）,Bcl-2基因药物处理组比对照组低表达（P <0.01）。结论:人参皂苷Rg3在Lewis肺癌体内外模型中具有一定的肿瘤抑制效果,ERK信号通路及Dusp6基因与Rg3的抑制作用有关,Rg3诱导的细胞凋亡也参与了抗肿瘤的作用。     

人参皂苷Rg1、三七皂苷R1微透析体外回收率的研究

[目的]建立人参皂苷Rg1、三七皂苷R1经皮给药微透析采样的体外回收率研究方法.[方法]运用高效液相色谱法测定微透析样品中人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的浓度,利用增量法、减量法计算体外回收率,并考察流速、浓度、温度对回收率的影响.[结果]在同一浓度下,体外回收率随着流速的增加而减少,采用1μL/min流速灌流,30 min取样时间间隔的参数适于人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的微透析研究;在同一流速下,浓度的变化对体外回收率的影响不大;体外回收率随温度的上升明显增加.[结论]确定了影响微透析体外回收率的因素,建立了人参皂苷Rg1、三七皂苷R1经皮给药微透析体外回收率的研究方法.     

高效液相-蒸发光散射法检测20(S)-人参皂苷Rg3在大鼠体内的分布

目的:研究20(S)-人参皂苷Rg3肌肉注射后在大鼠体内的分布情况。方法:采用固相萃取法提取生物样品中的20(S)-人参皂苷Rg3,并以高效液相-蒸发光散射检测法检测其在生物样品中的含量。结果:20(S)-人参皂苷Rg3在大鼠体内分布于肺、脾、心、肾、肝中,且分布的量依次减少。结论:用蒸发光散射检测器检测生物样品中的20(S)-人参皂苷Rg3,方法简便、快捷,精密度和回收率均好,与紫外检测器相比响应值高,具有更大的优越性。     

人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯致小鼠生殖功能损伤的改善作用及其机制

探讨人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤小鼠的生精保护作用,并阐明其作用机制。     

人参皂苷Rg1抑制NLRP3/Caspase-1通路抵抗肾纤维化的作用研究

目的：通过体内外实验探讨人参皂苷Rg1对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞HK2纤维化细胞株中炎症及其抗纤维化的机制。方法：将HK2细胞诱导分组为对照组、纤维化模型组（2 ng/mL的TGF-β1诱导纤维化）、低剂量人参皂苷Rg1治疗组（2 ng/mL的TGF-β1+15μg/mL人参皂苷Rg1）、高剂量人参皂苷Rg1治疗组（2 ng/mL的TGF-β1+45μg/mL人参皂苷Rg1）;Western印迹及免疫荧光检测结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-1）表达水平;Western印迹检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)表达水平;透射电镜检测细胞焦亡水平。动物研究将大鼠诱导分为对照组、模型组（单侧输尿管梗阻）、低剂量人参皂苷Rg1治疗组（单侧输尿管梗阻大鼠+50 mg/kg人参皂苷Rg1）、高剂量人参皂苷Rg1治疗组（单侧输尿管梗阻大鼠+100 mg/kg人参皂苷Rg1）;Western印迹检测肾组织中蛋白表达水平;苏木精-伊红（HE）及Masson检测肾脏病理...     

人参皂苷Rg3固体分散体的制备与体外特性研究

目的 采用固体分散技术,比较3种不同载体对人参皂苷Rg3的溶解度和体外溶出度的作用.方法 分别以泊洛沙姆188(F68)、聚维酮k29/32(PVP)和聚乙二醇6000(PEG)为载体,采用熔融法或溶剂法,制备人参皂苷Rg3固体分散体,测定溶解度,进行溶出度试验,并采用差热量热分析(DSC)法鉴别药物在固体分散体中的存在状态.结果 各种固体分散体均能显著增加人参皂苷Rg3的溶解度,加快其体外溶出.人参皂苷Rg3可充分分散在载体中并形成低共熔物.结论 F68作为载体制成固体分散体,对增加人参皂苷Rg3的溶解度和体外溶出度的效果优于PEG和PVP.