腺病毒介导IL-24基因对U251胶质瘤细胞p38 MAPK及bcl-2表达的影响

目的：探讨腺病毒介导的IL-24基因（Ad5F35-hIL-24）对人胶质瘤细胞（U251细胞）的杀伤作用,以及对p38丝裂原活化蛋白激酶（p3SMAPK）和bcl-2蛋白表达的影响．方法：应用MTT方法和双荧光染色方法测定Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;蛋白质印迹法检测p38MAPK,p-p38MAPK和bcl-2的表达变化．结果：MTT和双荧光染色方法检测表明,与空载体Ad5F35-VEC组及空白对照组相比,Ad5F35-hIL-24对U251细胞有明显抑制作用．蛋白质印迹检测显示,Ad5F35-hIL-24组的p-p38 MAPK蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达减少．结论：腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤U251细胞杀伤作用明显,提示p38MAPK信号转导通路及bcl-2基因表达是Ad5F35-hIL-24重要作用靶点,该结果对于临床治疗胶质瘤有一定参考意义．     

白细胞介素24和替尼泊苷联合抑制裸鼠人胶质瘤模型肿瘤生长的机制研究

目的观察白细胞介素24(IL-24)与替尼泊苷(VM-26)对裸鼠人胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用是否相互协同增效。方法先建立人胶质瘤动物模型,随机分组,瘤内注射Ad5F35-IL-24,腹腔注射VM-26,观察肿瘤生长情况;再用Western blot分析IL-24蛋白表达情况。接着用免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织的血管密度(MVD)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果 Ad5F35-IL-24感染胶质瘤组织后IL-24蛋白高表达,Ad5F35-IL-24+VM-26组的胶质瘤的生长受到抑制最明显,Ad5F35-IL-24+VM-26组的微血管生成明显减少(P<0.05),且其VEGF和bFGF表达也明显减少(P<0.05)。结论 IL-24和VM-26对裸鼠人胶质瘤模型肿瘤生长的抑制作用相互协同增效,其机制可能与IL-24诱导胶质瘤组织中VEGF和bFGF表达的减少,抑制胶质瘤微血管生成有关。     

PKR、eIF-2α在 IL-24诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用研究

目的：探讨白细胞介素24（interleukin-24,IL-24）对胶质瘤细胞凋亡的影响以及双链RNA蛋白激酶R （double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR）、真核细胞翻译起始因子2α（eukaryotic initiation factor 2α, eIF-2α）在其中的作用。方法将载有 IL-24基因的 Ad5F35型重组腺病毒（Ad-IL-24）及载有增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因作为对照的 Ad5F35型重组腺病毒（Ad-EGFP）转染入胶质瘤细胞U87和 U251中,应用流式细胞仪检测胶质瘤细胞 U87和 U251中的凋亡情况,并检测 U87和 U251各组中 PKR、磷酸化 PKR（phosphorylation-PKR,pPKR）、eIF-2α及磷酸化 eIF-2α（phosporylation-eIF-2α,peIF-2α）的表达情况。结果在胶质瘤细胞 U87和 U251中转染 IL-24后的细胞凋亡率为12．3％和13．0％,明显高于空白组与对照组,并且转染 IL-24的胶质瘤细胞中 PKR、pPKR、eIF-2α及 peIF-2α的表达增加。结论 IL-24可能在胶质瘤细胞中通过上调 PKR、eIF-2α的表达及其活化,促进胶质瘤细胞凋亡。     

Induction of apoptosis in glioblastoma cell line U251 of Cinobufacini

目的 研究观察华蟾素(Cinobufacini)对体外培养人胶质瘤细胞U251增殖抑制作用,并初步探讨其诱导U251细胞凋亡的分子机制.方法 平皿克隆形成法测定不同浓度华蟾素对U251细胞锚定依赖性生长能力的影响;使用Wester Blot法观察不同浓度华蟾素处理人胶质瘤细胞48小时后,Bcl-2、Bax蛋白表达变化情况.结果 平皿克隆法显示:华蟾素抑制人胶质瘤细胞U251生长,呈剂量依赖性;Wester Blot显示随着药物浓度升高,华蟾素可以逐渐抑制Bcl-2的蛋白表达,活Bax蛋白表达.结论 华蟾素有诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡的作用,其机制可能Bcl-2/Bax比值的下调,促进细胞凋亡有关.     

华蟾素诱导人胶质瘤细胞U251凋亡的作用机制研究

目的研究观察华蟾素(Cinobufacini)对体外培养人胶质瘤细胞U251增殖抑制作用,并初步探讨其诱导U251细胞凋亡的分子机制。方法平皿克隆形成法测定不同浓度华蟾素对U251细胞锚定依赖性生长能力的影响;使用Wester Blot法观察不同浓度华蟾素处理人胶质瘤细胞48小时后,Bcl-2、Bax蛋白表达变化情况。结果平皿克隆法显示:华蟾素抑制人胶质瘤细胞U251生长,呈剂量依赖性;Wester Blot显示随着药物浓度升高,华蟾素可以逐渐抑制Bcl-2的蛋白表达,活Bax蛋白表达。结论华蟾素有诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡的作用,其机制可能Bcl-2/Bax比值的下调,促进细胞凋亡有关。     

天然红心鸭蛋紫杉紫素对人胶质瘤细胞增殖、凋亡的干预作用

目的:研究天然红心鸭蛋紫杉紫素对人星形胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的干预作用。方法:研究对象为U251人星形胶质瘤细胞系,细胞增殖采用MTT比色法检测,细胞凋亡采用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术法检测,U251细胞浆中钙离子浓度采用LSCM测定。结果:天然红心鸭蛋紫杉紫素对胶质瘤细胞的生长具有明显的抑制作用,使用小剂量(0.25μmol·L-1)的紫杉紫素能有效地诱导胶质瘤细胞凋亡,并显著提高胶质瘤细胞内Ca2+浓度。结论:天然红心鸭蛋紫杉紫素可以显著抑制U251细胞增殖,且呈时间-效应和剂量-效应依赖关系,同时使U251细胞内Ca2+浓度升高,诱导U251细胞凋亡。     

重组人ndrg2腺病毒对胶质瘤细胞U251抑制作用的研究

目的:研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响。方法:将人脑胶质瘤细胞系U251细胞分成空白对照组,重组人ndrg2腺病毒组和今又生(重组人P53腺病毒)组,重组人ndrg2腺病毒组和今又生组下设1.68×1011、8.4×1010、4.2×1010、2.1×1010、1.05×1010、5.25×109、5.25×108、5.25×107 v.p/ml组,各组分别作用96h后观察细胞形态学改变,甲基噻唑基四唑法(MTT法)绘制细胞生长抑制曲线。结果:重组人ndrg2腺病毒和今又生转染人胶质瘤细胞系U251后,细胞生长受到明显抑制,呈现明显的剂量-效应依赖曲线;重组人ndrg2腺病毒组对U251细胞的抑制率优于今又生组。结论:过表达NDRG2可明显抑制人胶质瘤细胞U251的增殖并导致细胞凋亡。     

XAF1基因对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响

目的探讨Ad5／F35腺病毒介导的X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1（XAFl）基因对胰腺癌细胞株SW1990增殖和凋亡的影响。方法构建和包装Ad5／F35-XAF1重组腺病毒并感染胰腺癌细胞SW1990（Ad5／F35-XAF1组）,设立对照病毒感染组（Ad5／F35-Null组）和空白组。运用RT—PCR技术和Western blotting分析对感染细胞进行鉴定。流式细胞仪检测细胞凋亡并分析细胞周期,TUNEL法测定细胞凋亡率;MTT法检测细胞增殖。结果Ad5／F35-XAF1组SW1990细胞XAF1mRNA和蛋白表达水平均明显上调。与空白对照组和Ad5／F35-Null组比较,Ad5／F35-XAF1组细胞凋亡率明显增加,增殖活性明显降低,G2／M期细胞比例显著增加,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad5F35-XAF1重组腺病毒感染胰腺癌细胞SW1990后,能促进细胞凋亡并抑制细胞增殖。     

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1抑制肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的 研究X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1(XAF1)基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠荷瘤模型,每组5只裸鼠分别在瘤内分3点注射相同感染滴度的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、Ad5/F35-Null对照空病毒及等体积的磷酸缓冲液(PBS),隔天注射1次,疗程2周.每3天测量各组裸鼠移植瘤的体积,观察Ad5/F35-XAF1组移植瘤的生长与其他两组的差异.原位末端标记TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中XAF1蛋白表达和微血管密度(MVD).结果 与PBS组和Ad5/F35-Null组比较,瘤内注射Ad5/F35-XAF1组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小(P<0.05或P<0.01),而移植瘤细胞的凋亡指数和XAF1蛋白的表达率均明显增高(P<0.01).结论 腺病毒介导XAF1基因可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导肝癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关.     

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1抑制肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的 研究X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1（XAF1)基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠荷瘤模型,每组5只裸鼠分别在瘤内分3点注射相同感染滴度的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、Ad5/F35-Null对照空病毒及等体积的磷酸缓冲液（PBS）,隔天注射1次,疗程2周。每3天测量各组裸鼠移植瘤的体积,观察Ad5/F35-XAF1组移植瘤的生长与其他两组的差异。原位末端标记TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中XAF1蛋白表达和微血管密度（MVD）。结果 与PBS组和Ad5/F35-Null组比较,瘤内注射Ad5/F35-XAF1组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小（P<0.05或P<0.01）,而移植瘤细胞的凋亡指数和XAF1蛋白的表达率均明显增高（P<0.01）。结论 腺病毒介导XAF1基因可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导肝癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。     

放射性粒子125I对胶质瘤细胞治疗作用的实验研究

目的探讨放射性粒子125I在动物体内抗人脑胶质瘤的效果及其作用机制。方法建立人胶质瘤的动物模型,瘤内植入放射性粒子125I,观察肿瘤生长情况,在电镜下观察其超微结构的变化,采用TUNEL技术检测肿瘤组织的凋亡情况,流式细胞仪检测Bax/Bcl-2的表达,并应用免疫组化染色检测血管密度和VEGF、bFGF的表达。结果成功建立了人胶质瘤细胞U251的动物模型,植入放射性粒子125I后,胶质瘤生长较对照组明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),电镜下可呈现核断裂、染色质边聚等细胞凋亡的形态特征。检测显示:和对照组相比,肿瘤组织的Bax/Bcl-2(1.88±0.47vs1.11±0.52,P<0.01)和组织凋亡率的IHS评分(3.64±0.89vs0.81±0.45,P<0.01)明显增高;肿瘤组织的微血管密度IHS评分(1.40±0.55vs3.23±0.87,P<0.01)、VEGF的IHS评分(1.58±0.55vs4.19±0.45,P<0.01)和bFGF的IHS评分(2.44±0.89vs3.52±0.79,P<0.05)明显降低。结论放射性粒子125I对在体人胶质瘤U251有明确的抑制作用,促进...     

In vitro effect of p21WAF-1/CIP1 gene on growth of human glioma cells mediated by EGFR targeted non-viral vector GE7 system

Objective: To construct the EGFR targeted non-viral vector GE7 system and explore the in vitro effect of p21WAF-1/CIP1 gene on growth of human glioma cells mediated by the GE7 system. Methods: The EGFR targeted non-viral vector GE7 gene delivery system was constructed. The malignant human glioma cell line U251MG was transfected in vitro with β-galactosidase gene(reporter gene) and p21WAF-1/CIP1 gene (therapeutic gene) using the GE7 system. By means of X-gal staining, MTS and FACS, the transfection efficiency of exogenous gene and apoptosis rate of tumor cells were examined. The expression of p21WAF-1/CIP1 gene in transfected U251MG cell was examined by immunohistochemistry staining. Results: The highest transfer rate of exogenous gene was 70%. After transfection with p21WAF-1/CIP1 gene, the expression of WAF-1 increased remarkably and steadily; the growth of U251MG cells were inhibited evidently. FACS examination showed G1 arrest. The average apoptosis rate was 25.2%. Conclusion: GE7 system has the ability to transfer exogenous gene to targeted cells efficiently, and expression of p21WAF-1/CIP1 gene can induce apoptosis of glioma cell and inhibit its growth.     

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因（WWOX）、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高（P < 0.01）。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响（P < 0.01）。结论miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。     

胶质瘤U251干细胞的培养、分离以及体内成瘤的实验研究

目的 以U 251为研究对象探索恶性胶质瘤的新治疗方案,培养恶性胶质瘤干细胞并同时建立肿瘤模型,为下一步体内靶向治疗奠定肿瘤模型基础.方法 培养普通的U251细胞,并在无血清的条件下加入EGF、bFGF、LIF、B27因子,培养获得U251干细胞;分别制备浓度为3.5×107/mL的U251和U251干细胞悬液,并分别种植于BALB/c Nude小鼠左右臀部皮下,观察并测量荷瘤体积.结果 通过以上方法培养,获得U251干细胞:在相同浓度的条件下,干细胞移植组荷瘤生长速度明显比普通的恶性胶质瘤快,并且荷瘤体积明显大于普通的U251细胞组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 U251恶性胶质瘤干细胞比普通U251胶质瘤细胞更具有高生长率、高侵袭性、和高表达CD133抗原;应用U251恶性胶质瘤干细胞建立肿瘤模型更优于普通U251胶质瘤细胞.     

CD/5-FC自杀基因治疗系统体外杀伤恶性人脑胶质瘤细胞作用的研究

目的：探讨胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶（CD/5-FC）自杀基因治疗系统对恶性人脑胶质瘤细胞的杀伤作用。方法：采用Lipofectamine2000脂质体介导法将CD基因转染U251恶性人脑胶质瘤细胞,G418筛选获得抗性克隆（取名为U251/CD细胞）,使用不同浓度的5-FC作用于U251/CD细胞,MTT法测定活性细胞比率。采用高效液相色谱法（HPLC）检测5-FC培养液内5-FU的浓度。结果：U251细胞获得了质粒的成功转染。基因转染使G418抗性细胞（U251/CD细胞）对5-FC高度敏感。未转染的U251细胞对5-FC不敏感,IC50 约为6 500 μmol/L,而转染基因后 IC50 约为10 μmol/L。并且加入不同浓度的5-FC后,U251/CD细胞培养液内均能检测到5-FU。结论：5-FC对CD基因修饰U251细胞具有杀伤作用;为胶质瘤基因治疗的在体研究提供依据。     

白桦脂酸对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察白桦脂酸(BA)对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 对数期稳定生长的U251细胞中分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、 20、40、80 μg/mL)的BA进行培养。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI 双染色法检测培养24、48、72 h 时细胞的增殖、凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax及信号通路蛋白Akt及磷酸化Akt(p-Akt)表达变化情况。结果 在0～80 μg/mL范围内,BA可抑制U251细胞增殖并促进细胞凋亡(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性,随着BA浓度的增加、培养时间的延长,U251细胞的Akt表达水平无明显变化(P＞0.05),P-Akt、Bcl-2表达水平逐渐降低(P均＜0.05),Bax 表达水平逐渐升高(P＜0.05)。结论 BA可抑制脑胶质瘤U251细胞增殖并诱导其凋亡,这可能与其参与调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路有关。