转染CD258-Fc基因抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的体内外实验研究

目的探讨转染CD258-Fc基因抑制人膀胱移行细胞癌T24细胞增殖的作用及对人膀胱移行细胞癌动物模型抑瘤率的影响，以探讨CD258-Fc基因转染实现抗肿瘤的作用，为人膀胱移行细胞癌的基因治疗提供新思路。方法 以LipofectaminTM脂质体介导CD258-Fc基因转染人膀胱移行细胞癌T24细胞株，通过绘制细胞生长曲线、MTT比色法以及流式细胞仪检测观察CD258-Fc转染对T24细胞增殖的影响，PCR、Northern分析检测转染CD258-Fc基因在T24细胞的表达，WestemBlot检测蛋白表达，T24细胞接种于裸鼠，分组给予CD258-Fc基因转染进行治疗，评价其抑瘤率。结果 CD258-Fc基因的表达可以抑制T24细胞的体外生长，T24／CD258-Fc细胞的生长曲线较对照组明显降低；MTT比色显示T24／CD258-Fc的细胞活力与对照组相比有显著性差异（P〈0．05）；PCR及Northern分析提示CD258-Fc基因转染后在T24细胞上调表达，WesternBlot检测到蛋白高表达：流式细胞仪检测显示基因转染使瘤细胞的生长滞留在G0＋G1期，S期细胞明显减少，并观察到细胞凋亡。动物实验T24／CD258-Fc、T24／CD258-Fc＋IFN—γ肿瘤抑制率可达48．66％和60．98％，显著高于对照组（P〈0．05），且两组间差异具有统计学意义（P=0．032）。结论 CD258-Fc基因转染对T24细胞具有体内外抗肿瘤的作用，提示CD258-Fc基因转染T24细胞技术有可能为人BTCC的基因治疗提供-种新的治疗策略与手段。     

靶向IGF-1基因的siRNA抑制胶质瘤生长的体内外实验研究

目的观察靶向IGF-1基因的小干扰RNA（siRNA）在体内和体外对胶质瘤生长的抑制作用。方法采用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹测定干扰后IGF-1的表达水平；采用Transwell体外侵袭试验进行细胞体外的侵袭力分析；用流式细胞仪检测细胞凋亡率；应用裸鼠成瘤实验测定IGF-1基因表达下调后胶质瘤C6细胞在体内致瘤能力的改变。结果靶向IGF-1基因的siRNA可以有效抑制IGF-1基因的表达，使IGF—1 mRNA表达减少50％～80％，蛋白表达减少60％，流式细胞术检测细胞凋亡率明显提高（P〈0．01），降低了在裸鼠体内成瘤的能力。结论siRNA介导的IGF-1基因下调可明显抑制胶质瘤细胞的生长。IGF-1可以作为胶质瘤基因治疗的一个新的靶点。     

Ad-IL-24抑制乳腺癌生长的体外实验研究

目的 研究腺病毒介导的IL-24基因(Ad-IL-24)表达对乳腺癌的生长抑制作用.方法 将扩增的Ad-IL-24腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Westernblot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的转录和表达;MTT法和FCM检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制和凋亡率;半定量RT-PCR检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的凋亡相关基因Bax、Bcl-2及Survivin转录的影响;ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平.结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用,并能引起细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高、Survivin降低有关;VEGF、Ang-1表达下降.结论 腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其机制可能与下调Survivin、VEGF、Ang-1,上调Bax的基因表达水平有关,该研究可为乳腺癌的基因治疗提供一定实验依据.     

人白介素24腺病毒载体的构建与鉴定

目的构建人白介素24（hIL-24）的腺病毒载体,获得hIL-24重组腺病毒子,为hIL-24进行肿瘤的基因治疗奠定基础。方法以pcDNA3．0-hIL-24重组质料为模板,PCR扩增hIL-24,酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack—CMVR质粒上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack—CMV-hIL-24,与腺病毒质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-hIL-24,经Pacl线性化后转染QBI-293A包装细胞。收获腺病毒重组病毒子,RT-PCR和Western—blotting鉴定。结果测序结果显示hIL-24序列正确,RT—PCR和Western-blotting检测到了hIL-24的表达。结论成功构建人白介素24的重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack,CMV—hIL-24。获得了人白介素24重组病毒子Ad-hIL-24。     

Ad-hIL-24体外诱导喉癌细胞Hep-2的凋亡作用

目的研究腺病毒介导的人白细胞介素-24（hIL-24）基因选择性诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用。方法将携带有hIL-24基因的重组复制缺陷型腺病毒（Ad-hIL-24）感染喉癌细胞Hep-2,并以人胚肺成纤维细胞WI-38为对照,采用RT-PCR法检测Hep-2、WI-38细胞中外源性hIL-24基因表达;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）及流式细胞术等方法检测细胞的生长和凋亡情况。结果腺病毒介导的hIL-24基因能在Hep-2细胞和WI-38细胞中表达;MTT法显示Ad-hIL-24能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长,LSCM观察结果表明Ad-hIL-24能促进喉癌细胞Hep-2凋亡,流式细胞术显示Hep-2细胞经Ad-hIL-24感染48h后凋亡率为18.47%,G2/M期细胞百分比为38.9%,显著高于PBS组、Ad-GFP组和WI-38细胞,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论Ad-hIL-24能抑制喉癌细胞Hep-2生长和诱导Hep-2细胞凋亡,但对正常细胞无毒性作用。     

Ad-VEGFP-CD/TK系统抑制乳腺癌细胞增殖的体内外实验研究

目的 探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体内外靶向杀伤作用.方法 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染率,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响及其旁观者效应;用流式细胞术观察细胞周期及细胞内DNA含量的变化.建立MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射Ad-VEGFP-CD/TK,腹腔注射前药14 d,观察肿瘤生长抑制效应.结果 腺病毒对两种细胞的感染率相似.MTT法检测显示MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而乳腺上皮细胞对前药不敏感,且观察到该体系对MCF-7细胞明显的旁观者效应.在感染复数为100时,用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少.在MCF-7裸鼠移植瘤模型中,该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长.结论 VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,并可显著抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长.     

紫杉醇诱导胶质瘤细胞凋亡的体内外实验研究

目的：通过体内、外实验探讨抗癌新药紫杉醇有否诱导胶质瘤细胞凋亡的作用。方法：应用ＭＴＴ比色法、培养细胞ＨＥ染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪观察到多行性胶质母细胞瘤ＢＴ３２５株在紫杉醇作用下发生凋亡，将其作用于小鼠胶质瘤细胞Ｇ４２２动物模型，计算抑瘤率、观察瘤细胞形态及分析ＤＮＡ片段。结果：ＢＴ３２５细胞在紫杉醇作用下，细胞生长被明显抑制，细胞分裂阻滞在Ｇ０／Ｇ１期并诱导细胞发生凋亡，具有典型的凋亡细胞形态学特征；小鼠皮下Ｇ４２２胶质瘤在紫杉醇作用下肿瘤抑制率明显增加，细胞形态学表现及琼脂糖凝胶电泳证实其与诱导细胞凋亡有关。结论：紫杉醇具有明显的抗胶质瘤作用     

重组腺病毒携带外源p16基因抑制人脑恶性胶质瘤细胞系生长的研究

目的研究5型腺病毒载体(Ad5)携带外源p16基因对人脑恶性胶质瘤细胞系TJ899和TJ905生长状态的影响.方法免疫组化(S-P法)测定P16蛋白表达,甲基噻唑基四唑(MTT)法和克隆形成实验测定恶性脑胶质瘤细胞系生长状态.结果重组体腺病毒能介导p16外源基因在恶性脑胶质瘤细胞系TJ899和TJ905细胞中呈阳性表达,6 d时肿瘤细胞生长抑制率分别可达93.60%和98.28%.并且能显著地抑制肿瘤细胞的克隆形成能力.结论腺病毒介导p16基因能在肿瘤细胞中表达,并能明显抑制不同人脑恶性胶质瘤细胞系的生长状态.     

番茄红素抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的探讨番茄红素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导凋亡的作用。方法用CCK-8法检测不同浓度番茄红素作用于U251细胞24h、48h及72h后细胞的存活率;应用流式细胞术（FCM）检测细胞周期。结果番茄红素能抑制人脑胶质瘤U251细胞的生长,呈量-效及时-效关系（P〈0．01）;FCM检测表明,细胞主要被阻滞在G0／G1期;番茄红素诱导细胞凋亡率较对照组明显增加（P〈0．01）,具有浓度依赖性。结论番茄红素能抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

腺病毒介导IL-24基因对U251胶质瘤细胞p38 MAPK及bcl-2表达的影响

目的：探讨腺病毒介导的IL-24基因（Ad5F35-hIL-24）对人胶质瘤细胞（U251细胞）的杀伤作用,以及对p38丝裂原活化蛋白激酶（p3SMAPK）和bcl-2蛋白表达的影响．方法：应用MTT方法和双荧光染色方法测定Ad5F35-hIL-24对U251细胞的抑制作用;蛋白质印迹法检测p38MAPK,p-p38MAPK和bcl-2的表达变化．结果：MTT和双荧光染色方法检测表明,与空载体Ad5F35-VEC组及空白对照组相比,Ad5F35-hIL-24对U251细胞有明显抑制作用．蛋白质印迹检测显示,Ad5F35-hIL-24组的p-p38 MAPK蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达减少．结论：腺病毒介导的IL-24基因对胶质瘤U251细胞杀伤作用明显,提示p38MAPK信号转导通路及bcl-2基因表达是Ad5F35-hIL-24重要作用靶点,该结果对于临床治疗胶质瘤有一定参考意义．     

人IL-24基因重组腺病毒的构建及其在A549细胞中的表达

目的构建含有人IL-24基因的重组腺病毒载体,并转染肺腺癌细胞A549细胞观察其感染能力,为进一步的基因治疗奠定实验基础.方法采用基因工程技术将人IL-24基因cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用PAdEasy系统进行细菌内同源重组,后通过脂质体将正确重组体包裹并转染293T细胞以包装并扩增病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定, 利用穿梭质粒中所带绿色荧光蛋白GFP报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检定;最后采用免疫组化法对IL-24在A549中的表达进行检测.结果酶切和PCR结果证实IL-24基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.2×1010 pfu/ml,能够成功转染A549细胞并在其中进行表达.结论成功构建了有较强感染能力的含人IL-24基因的重组腺病毒载体.     

mda-7/IL-24和p53治疗神经胶质瘤的机制及临床应用进展

目前新兴的基因疗法对神经胶质瘤的治疗相比传统疗法而言越来越受到重视。在临床应用抑癌基因mda-7/IL-24和p53治疗神经胶质瘤已经显示出积极的疗效。两者抑癌的机制复杂且尚未完全清楚,其中既有不同又有联系。本文就mda-7和p53治疗神经胶质瘤的机制和临床应用进展作一比较综述。     

pSiRNA-Notch1逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞的作用

目的 建立逆转录病毒介导的人Notch1基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用.方法 将人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer 5.1-H1 Retro中,构建成携带人Notch1基因RNAi逆转录病毒载体pSiRNA-Notch1,经PT6细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染U251和CHG-5恶性脑胶质瘤细胞,用WST-8、RT-PCR和Western blot分别检测对转染细胞活性、人Notch1 mRNA和蛋白表达的影响.结果 重组pSiRNA-Notch1质粒经测序鉴定正确.重组逆转录病毒滴度可达224×10 4cfu/ml,感染U251和CHG-5恶细胞后3 d能明显抑制细胞生长,RT-PCR和Western blot检测人Notch1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组.结论 携带人Notch1基因RNAi双链转录DNA片段的逆转录病毒有明显的抑制恶性脑胶质瘤细胞生长作用,为下一步开展基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础.     

腺病毒载体介导IL-24基因对肺癌细胞的化疗增敏效应

目的研究携带人IL-24基因腺病毒载体（Ad-IL-24）联用顺铂（DDP）对人非小细胞肺癌NCI-H460细胞生长和凋亡的影响。方法取对数生长期的NCI．H460细胞,MTr比色法检测Ad．IL．24联合DDP对细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞周期及检测细胞凋亡率。结果Ad-IL-24联合DDP对NCI-H460细胞的生长抑制作用和诱导凋亡效应均明显优于单用Ad-IL-24和单用化疗药物DDP,且G2／M期细胞比例显著增加（P〈0．05或〈0．01）。结论Ad-IL-24能提高NCI-H460肺癌细胞对化疗药物DDP的敏感性。     

神经细胞粘附分子对人恶性脑胶质瘤细胞株体内外增殖能力的影响

目的：探讨神经细胞粘附分子（neural cell adhesion molecule,NCAM)对人脑胶细胞株U251MG增殖行为的影响。方法：将外源性NACM－140质粒转入U251MG细胞株,采用流式细胞仪及培养细胞增殖动力学方法比较转染前后细胞的细胞周期、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达及群体增殖速度;在裸鼠颅内原位接种上述细胞,观察成瘤率及肿瘤大小。结果：NCAM转染后细胞的体外增殖速度减慢（P＜0．05）,S期细胞减少,PCNA表达率下降;裸鼠颅内接种的成瘤率显降低（P＜0．01）,肿瘤体积明显较小。结论：转染外源性NCAM在体外、体内均可抑制人脑胶质瘤细胞株U251MG的增殖。     

The Effects of Wild-type p5 3Gene Transfection on the Growth and Chemotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

In gliomas,p5 3 mutations are among the mostfrequently observed genetic findings[1] .As a tu-mor- suppressor gene,p5 3 mutations can lead touncontrolled cell proliferation[2 ] . It was reportedthat loss of wild- type p5 3 function decreased sensi-tivity of tumor cells to chemotherapy[3 ] . In thisstudy,wild- type p5 3 gene was delivered into hu-man glioma cell line U2 5 1 by using liposome- medi-ated transfection technique to observe the effects ofp5 3 gene treatment and combined treatment of …     

siRNA靶向抑制PDGFRB对人恶性脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的应用微小RNA干涉从mRNA靶向抑制PDGFRB基因/产物对人恶性神经胶质瘤细胞T98G、U87MG增殖作用的影响。方法脂质体转染法转染PDGFRB特异性siRNA;以传统半定量RT-PCR法及实时定量PCR观察应用特异性siRNA阻断PDGFRB的表达变化;采用MTT法检测恶性脑胶质瘤细胞的体外增殖。结果siRNA(PDGFRB-HSS107758和PDGFRB-B12)可明显抑制PDGFRB的表达(抑制率70%);PDGFRB特异性siRNA可抑制恶性胶质瘤细胞的体外增殖,对U87MG细胞增殖抑制作用显著(P<0.05)。结论PDGFRB特异性siRNA可以抑制恶性脑胶质瘤细胞的体外增殖。     

Effect of Wild-type p53 Gene Transfection on the Growth and Radiotherapeutic Sensitivity of Human Glioma Cells

Ingliomas,p53mutationsareamongthemostfrequentlyobservedgeneticfindings[1].Asatumorsuppressorgene,p53mutationcanleadtouncon trolledcellproliferation[2].Itwasreportedthattransfectionofwild typep53genemayenhancetheradiosensitivityoftumorcellscontainingwild typep53[3].Inthisstudy,wild typep53genewasde liveredintohumangliomacelllineU251byusingliposome mediatedtransfectiontechniquetoob servetheeffectofp53genetreatmentandcom binedtreatmentofp53andirradiationtherapyongliomacell.1MATERIALSANDMET…