抗肝衰复方对急性肝衰竭大鼠的防护作用及对肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:观察抗肝衰复方(KGSFF)对急性肝衰竭大鼠防护作用及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响,探讨KGSFF对大鼠肝衰竭的作用机制。方法:健康雄性Wistar大鼠110只,随机分为正常对照组10只,模型组20只、促肝细胞生长素(PHGF)阳性对照组20只、茵陈蒿汤(YCHT)组20只、KGSFF小剂量组20只、KGSFF大剂量组20只。除正常对照组外其余各组大鼠分别给予D-氨基半乳糖(D-GalN)800mg/kg和内毒素脂多糖(LPS)0.1mg/kg的剂量,腹腔注射1次成模,正常对照组大鼠给予等量生理盐水腹腔注射。除模型组和正常对照组外各组大鼠均于造模后2小时用药,按每次1.5ml/100g,每天灌胃两次。模型组和正常对照组大鼠均分别给予生理盐水灌服。造模后72小时取材。观察造模后72小时内大鼠病死率。检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。HE染色观察肝组织病理变化,免疫组织化学染色法检测肝组织TNF-α水平。结果:KGSFF大剂量组大鼠病死率及血清ALT、AST、TBil含量降低,肝细胞损伤程度显著改善,血清及肝组织TNF-α水平明显降低,与模型组相比P0.01或P0.05。结论:KGSFF对急性肝衰竭大鼠具有明显的防护作用,其机制可能与抑制TNF-α产生,降低内毒素血症,改善肝功能有关。     

正肝方对黄曲霉毒素B1诱发的大鼠癌前病变肝组织增殖细胞核抗原和甲胎蛋白的影响

目的:观察正肝方对黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发的大鼠癌前病变肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)和甲胎蛋白(AFP)的影响.方法:100只Wistar大鼠随机分为4组,模型组、正肝方小剂量预防组、正肝方大剂量预防组各30只,正常组10只.除正常组外,先后用AFB1和2-乙酰氨基芴(2-AAF)对3组大鼠进行造模.造模期间,将不同浓度正肝方水剂(0.6g/ml,0.3g/ml)分别灌喂正肝方预防组大鼠;用无菌蒸馏水灌喂模型组大鼠.8周后处死大鼠,肝组织取材.采用免疫组化染色法检测大鼠肝组织PCNA、AFP水平.结果:模型组大鼠肝组织PCNA、AFP染色标记指数(LI)、阳性单位(PU)值最高,正肝方大剂量组大鼠PCNA和AFP染色的PU值、LI值均较模型组显著降低(P<0.01或P<0.05).结论:大剂量正肝方能有效降低大鼠癌前病变肝组织PCNA和AFP的表达,减轻大鼠癌前病变肝组织的异常增生.     

糖皮质激素对慢加急性肝衰竭大鼠CD163及细胞因子的影响及意义

目的:研究糖皮质激素(地塞米松)对慢加急性肝衰竭大鼠模型CD163分子及促炎与抗炎因子的影响。方法:将30只无特殊病原体(SPF)级雄性Wistar大鼠分为3组,正常组与模型组各6只,治疗组18只。除正常组外,其余各组大鼠通过腹腔注射50%四氯化碳植物油溶液8周及D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS)联合冲击制备慢加急性肝功能衰竭模型。治疗组按地塞米松治疗时间不同分为不同3个时段:造模后0小时、造模后4小时、造模后8小时。各组于造模后24小时处死大鼠,用自动生化仪检测其血清ALT、AST、TBil,常规HE染色观察大鼠肝脏病理改变;实时定量PCR检测其肝组织中CD163分子水平;ELISA法检测其血清TNF-α及IL-10水平。结果:大鼠慢加急性肝衰竭模型复制成功,其肝组织纤维化基础上出现片状坏死,炎细胞浸润明显,肝脏生化指标显著升高,血清TNF-α及IL-10水平明显升高。造模后0小时地塞米松治疗后大鼠肝组织学明显好转,生化指标及血清TNF-α水平比模型组大鼠下降,而血清IL-10及肝组织中CD163分子表达水平升高,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05);造模后4小时与8小时治疗组大鼠上述指标与模型组相比,差异无统计学意义。结论:慢加急性肝衰竭大鼠早期应用地塞米松可平衡促炎因子与抗炎因子,同时也促进了肝组织CD163分子的表达,对肝脏有保护作用。     

抗肝衰复方治疗MHV-3感染肝衰竭小鼠的作用观察

目的:观察抗肝衰复方治疗Balb/cJ小鼠感染MHV-3所致肝衰竭的疗效及初步探讨其作用机制.方法:将75只Balb/cJ小鼠随机分为3组:生理盐水对照组、茵陈复方组1、茵陈复方组2(抗肝衰复方组).采用MHV-3感染Balb/cJ小鼠,建立急性肝衰竭模型.描绘各茵陈复方组的生存曲线,观察血清生化及肝脏病理组织学改变,免疫组化检测小鼠肝组织纤维介素(mfgl2)的表达状况.结果:与生理盐水对照组及茵陈复方组1比较,抗肝衰复方组的生存情况最佳,血清ALT、STB明显降低(P＜0.01或P＜0.05);肝细胞损害明显减轻(P＜0.05);与生理盐水对照组及茵陈复方组1比较,抗肝衰复方组中肝组织mfgl2表达明显减少(P＜0.01或P＜0.05).结论:抗肝衰复方可减轻MHV-3感染的Balb/cJ小鼠肝衰竭时的肝功能损伤及肝细胞mfgl2的表达水平.     

丹黄方对硫代乙酰胺所致大鼠急性肝衰竭的防治作用

目的:探讨丹黄方抗大鼠急性肝衰竭的作用和可能机制。方法:按600mg/kg的剂量经皮下注射硫代乙酰胺(TAA)1次,24小时后按相同剂量重复注射1次,造成大鼠急性肝衰竭模型,于实验前3天至实验结束分别给予各组大鼠生理盐水,不同剂量丹黄方及促肝细胞生长素,观察造模后48小时内大鼠病死率,并于造模48小时后经腹主动脉采血测定ALT、AST、TBil、TNF-α、IL-6,取肝组织作病检。结果:丹黄方能明显降低急性肝衰竭大鼠死亡率、降低ALT、AST、TBil及TNF-α、IL-6水平,改善肝组织病变,与模型组及促进肝细胞生长素阳性对照组比较,P<0.05或P<0.01,差异有显著性意义。结论:丹黄方具有抗TAA大鼠急性肝衰竭作用,可能与降低大鼠急性肝衰竭的重要介质TFN-α、IL-6有关。     

HMGB1在急性肝衰竭大鼠中的表达及作用

目的探讨HMGB1在急性肝衰竭大鼠肝组织和血中的变化规律及作用。方法将48只健康雌性SD大鼠按数字表随机分为对照组、模型组,每组24只,采用腹腔内注射D-Gal N（400 mg/kg）＋LPS（100μg/kg）的方法诱导急性肝衰竭,同时对照组予腹腔注射等量生理盐水。两组大鼠均在4、8、12小时时间点取血液及肝组织标本,检测血清ALT、AST水平,HE染色观察肝组织病理变化,ELISA法检测血清HMGB1浓度,RT-PCR法检测肝组织HMGB1 m RNA表达,免疫组化法检测肝组织HMGB1的表达。结果 D-Gal N（400 mg/kg）＋LPS（100μg/kg）的方法能成功诱导急性肝衰竭模型。对照组血清HMGB1浓度及肝组织HMGB1 m RNA表达在各时间点均较低,而模型组随时间延长而升高。对照组肝细胞核与胞浆中仅见少量HMGB1蛋白表达,模型组肝组织HMGB1蛋白表达随时间延长升高。结论急性肝衰竭时血和肝组织中HMGB1水平均随时间延长而升高,且两者变化与肝损程度正相关。     

黄芩苷对急性肝衰竭大鼠肝脏核转录因子-κB表达的影响

目的观察急性肝衰竭大鼠肝脏NF-κB的表达水平及黄芩苷对其表达的影响。方法雄性SD大鼠106只随机分为正常组、肝衰竭组和黄芩苷组。肝衰竭组和黄芩苷组采用腹腔注射D-氨基半乳糖制备大鼠急性肝衰竭模型;黄芩苷组于造模后每隔12 h以120 mg/kg剂量腹腔注射。造模后24 h、72 h、120 h和168 h处死大鼠。全自动生化仪检测血清ALT、AST和TBil水平;HE染色观察肝脏病理学变化;RT-PCR法检测肝组织NF-κB、TNFα、Caspase-3 mRNA表达;免疫组化法检测肝组织NF-κB蛋白表达。结果黄芩苷组大鼠168 h存活率明显高于肝衰竭组。黄芩苷组大鼠各时间点血清ALT、AST、TBil水平较肝衰竭组明显降低（F=173.584,158.329,74.902;P〈0.01）。黄芩苷组NF-κB、TNFα、Caspase-3 mRNA表达趋势与肝衰竭组相同,72 h达高峰,但表达量较肝衰竭组明显减少,差异有统计学意义（F=603.801,42.174,27.222,P〈0.001,P〈0.001,P=0.001）。黄芩苷组NF-κB蛋白的表达也于72 h达到最大值,但其表达量较肝衰竭组减少,其差异有统计学意义（F=8.903,P=0.017）。结论黄芩苷对D-氨基半乳糖诱发的大鼠急性肝衰竭有保护作用,其机制可能与黄芩苷下调NF-κB、TNFα和Caspase-3的表达有关。     

复方红景天对大鼠肝纤维化肝脏中TIMP-1表达的影响

目的:探讨复方红景天对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化肝组织TIMP-1基因表达的影响.方法:健康♂SD大鼠80只随机分组:(1)正常对照组;(2)肝纤维化模型组;(3)复方红景天高剂量组(H组);(4)复方红景天中剂量组(M组);(5)复方红景天低剂量组(S组),每组16只.以CCl4 ip法诱导大鼠肝纤维化,复方红景天干预组大鼠在造模的同时给予复方红景天灌胃,正常对照组给予橄榄油sc和生理盐水ip,8 wk实验结束时处死动物,留取的肝脏组织做HE按0-4期标准判定肝纤维化程度,应用半定量RT-PCR检测肝组织中TIMP-1 mRNA的表达情况,用免疫组化检测肝组织中TIMP-1的表达.结果:模型组大鼠肝纤维化程度处于2-4期,其中大部分达3期以上.复方红景天干预组大鼠肝纤维化程度明显减轻,只有少部分达3期.模型组大鼠肝组织中TIMP-1 mRNA水平高于正常对照组(0.858±0.052 VS 0.615±0.067,P＜0.05),而复方红景天干预组大鼠肝组织中TIMP-1 mRNA水平(0.740±0.081,0.704±0.032,0.695±0.030)显著低于模型组(均P＜0.05);模型组大鼠肝组织TIMP-1的阳性表达显著强于正常对照组(0.3564±0.052 VS 0.121±0.067.P＜0.05),复方红景天干预组肝组织中TIMP-1的阳性表达(0.298±0.081,0.256±0.032,0.213±0.030)明显强于正常对照组(均P＜0.05),但较模型组显著减弱(P＜0.05).结论:中药复方红景天能有效抑制CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-1的表达.     

温阳解毒化瘀方对肝衰竭大鼠内毒素血症的影响

目的:动态观察温阳解毒化瘀方对肝衰竭大鼠内毒素血症(ITEM)的影响。方法:将85只SD大鼠随机分为正常组、模型组、对照组(予乳果糖+三联活菌溶液)及温阳解毒化瘀颗粒组(实验组),采用D-半乳糖胺(D-gal)腹腔注射致肝衰竭ITEM大鼠模型。正常组在腹腔注射生理盐水12小时后处死,其余各组分别于造模后12小时、24小时各取10只大鼠处死,检测各组大鼠血清转氨酶(ALT、AST)、肝组织病理学、门静脉及结肠内毒素水平。结果:模型组12小时时ALT和AST较正常组升高(P<0.05),24小时时门静脉及结肠内毒素水平明显升高(P<0.01),肝组织大面积坏死;实验组及对照组在造模后12小时各观察指标与模型组比较,差异无显著性意义,造模后24小时两组ALT和AST、门静脉及结肠内毒素水平较模型组降低(P<0.05),肝组织病变减轻。结论:D-gal腹腔注射可建立大鼠肝衰竭ITEM模型,温阳解毒化瘀方可通过降低门静脉及结肠内毒素水平减轻ITEM而达到抗肝衰竭的效应。     

扶正化瘀方对肝纤维化模型大鼠肝组织纤维化及肝星状细胞的影响

目的 评价扶正化瘀方对肝纤维化模型大鼠肝组织纤维化及活化肝星状细胞(HSC)的影响. 方法 64只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、四氯化碳(CCl4)肝纤维化模型组、药物干预低剂量组和药物干预高剂量组.除正常组外,所有大鼠用CCl4复合法制备大鼠肝纤维化模型；在造模同时,药物干预组给予扶正化瘀方灌胃,1次/d,6次/周,共6周(低剂量组按0.75g/kg,高剂量组1.5 g/kg);分别在实验的第2、4、6周处死正常组、模型组及药物干预低、高剂量组大鼠各4只,收集大鼠血清及肝组织标本,测定大鼠血清ALT、AST、总胆红素(TBil);组织标本常规石蜡包埋、切片、HE染色及Masson三重染色,采用计算机图像分析测定大鼠肝组织纤维化面积比例；测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的积分吸光度值.组间数据比较用完全随机设计的单因素方差分析.结果 2周末正常对照组、模型对照组、药物干预低、高剂量组ALT分别为(24.68±1.50) U/L、(85.33±5.68)U/L、(56.49±4.85) U/L、(36.94±5.23)U/L,4组比较,F值为98.11,差异有统计学意义；4组的AST值分别为(37.69±3.35)U/L、(112.34±7.02) U/L、(82.89±5.32) U/L、(61.39±6.06)U/L,4组比较,F值为96.31,差异有统计学意义；4组的TBil值分别为(6.70±1.10) U/L、(14.12±0.68) U/L、(10.85±0.64) U/L、(7.78±0.69) U/L,4组比较,F值为51.67,差异有统计学意义.4周末4组ALT、AST、TBil比较,F值分别为111.24、72.11、101.20,P值均＜0.05,差异均有统计学意义；6周末4组ALT、AST、TBil比较,F值分别为154.16、190.80、158.91,P值均＜0.05,差异均有统计学意义.与正常组比较,2、4、6周末模型组、扶正化瘀高、低剂量各组ALT、AST、TBil的水平均有不同程度的升高；与模型组比较,药物干预各组ALT、AST、TBil数值均有不同程度下降,其中以扶正化瘀方高剂量组改善最为显著.与正常组比较,模型组、药物干预低、高剂量组肝组织纤维化面积比例明显升高,2周末正常组、模型组、药物干预低、高剂量组肝组织纤维化面积比例分别为5.23％±0.10％、11.93％±1.78％、9.33％±1.09％、8.26％±0.77％,4组比较,F=18.68,P＜0.01；4周末、6周末正常组、模型组、药物干预低、高剂量组肝组织纤维化面积比较,F值分别为49.95、82.44,P值均＜0.01,差异均有统计学意义.随着造模时间的延长,α-SMA表达亦较正常对照组均有升高,药物干预低、高剂量组大鼠肝组织α-SMA的表达与正常组和模型组比较,均明显下调,且药物干预高剂量组α-SMA表达下调显著.结论 扶正化瘀方具有抗肝纤维化的作用,且可减少α-SMA的表达,其抗肝纤维化机制可能是通过促进活化HSC的凋亡,减少活化HSC的数量.     

Tau protein and beta protein

The main pathological features of Alzheimer's disease are Alzheimer neurofibrillary tangles and senile plaques. Recent biochemical research revealed that tangles are composed of tau protein and ubiquitin and amyloid in senile plaques is composed of beta protein which is a fragment of the membrane receptor protein. Although fraction, other data suggest that whole molecules become abnormal and aggregate into PHF. On the other hand, beta protein is a small cleavage product of the precursor protein. It is not concluded yet whether abnormal precursor proteins exist or not. Recent research in this field is reviewed.     

乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白

随着人和各种生物的基因和基因组测序的完成,生物学和医学正处在一深刻变革的时代.基因组学(genomics)是指对人和其他生物类型基因组结构与功能的分析.基因组学可以分为结构基因组学(structural genomics)和功能基因组学(functional genomics),功能基因组学是指应用整体的研究技术阐明这些基因和蛋白的生物学功能.各种生物系统是一个复杂的系统,基因组中基因的序列是一个庞大的数据库,因此,需要发展一些强大的分析技术,代替传统的分析技术,对这些基因和蛋白质的功能进行研究.基因是 DNA 中的一些具有功能的单位,在遗传信息的流向中,首先转录生成中间产物 RNA,然后再翻译成具有生物学功能的蛋白质.蛋白质是执行生命活动的基本成分.作为基因的一段 DNA,一般包括调节基因序列和编码基因序列.功能基因组学的主要任务就是阐明这些基因及其编码产物的结构与功能、表达与调控.第一,人类不同个体之间的基因序列之间的区别;第二,人和人之间决定疾病状态和疾病的易感性基因;第三,引起疾病的各种病原体,还有包括大肠杆菌、酵母、果蝇、线虫、人等合成的每一种蛋白的功能;第四,这些不同的蛋白协同完成生命的活动的机制;第五,在特定的细胞类型和特定的时间内,并不是所有的基因都具有表达活性,决定选择性的表达和活动机制;第六,在多细胞生物中,不同的基因表达是形成不同的细胞和组织的机制.中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心,在成军博士、教授、主任医师、博士生导师的领导下,应用功能基因组学的研究技术,研究乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染之后,肝细胞基因组表达调节的改变及机制.这是肝炎病毒感染肝细胞之后,引起病毒性肝炎、肝硬化、肝细胞癌的发病机制.基因组计划完成之后,提供能了大量的人和其他生物类型的基因序列,即将完成了结构基因组学的任务,但是,功能基因组学的任务还有许多的工作要做.利用抑制性消减杂交(SSH)、基因芯片技术,酵母单杂交技术、酵母双杂交技术、噬菌体展示技术等对于调节肝炎病毒基因的复制和表达,肝炎病毒蛋白结合蛋白,肝炎病毒蛋白表达对于肝细胞基因表达谱的影响,从而为揭示肝炎病毒感染肝细胞的致病机制的研究,开辟新的研究方向.     

Evolution of protein structural classes and protein sequence families

In protein structure space, protein structures cluster into four elongated regions when mapped based solely on similarity among the 3D structures. These four regions correspond to the four major classes of present-day proteins defined by the contents of secondary structure types and their topological arrangement. Evolution of and restriction to these four classes suggest that, in most cases, the evolution of genes may have been constrained or selected to those genetic changes that results in structurally stable proteins occupying one of the four "allowed" regions of the protein structure space, "structural selection," an important component of natural selection in gene evolution. Our studies on tracing the "common structural ancestor" for each protein sequence family of known structure suggest that: (i) recently emerged proteins belong mostly to three classes; (ii) the proteins that emerged earlier evolved to gain a new class; and (iii) the proteins that emerged earliest evolved to become the present-day proteins in the four major classes, with the fourth-class proteins becoming the most dominant population. Furthermore, our studies also show that not all present-day proteins evolved from one single set of proteins in the last common ancestral organism, but new common ancestral proteins were "born" at different evolutionary times, not traceable to one or two ancestral proteins: "the multiple birth model" for the evolution of protein sequence families.     

Expression of hepatitis C virus core protein as a fusion protein with maltose binding protein

Putative hepatitis C virus core sequence was amplified from a serum sample positive for anti-C-100-3 and expressed inEscherichia coli. Approximately 62 kDa fusion protein with maltose binding protein containing 20 kDa hepatitis C core protein was obtained. The antibody to this protein was detected in 53 of 54 (98%) sera from hepatitis C virus ribonucleic acid-positive patients including 40 sera positive for anti-C-100-3 and 13 sera negative for anti-C-100-3. The antibody was also detected in all of 12 patients with acute hepatitis C showing the earlier detectability of the antibody than anti-C-100-3. Thus, the protein expressed from the amplified hepatitis C core sequence by the polymerase chain reaction would be useful for the diagnosis of hepatitis C.     

Gene and protein sequences of adenovirus protein VII, a hybrid basic chromosomal protein.

The sequences of both the gene and the corresponding protein of adenovirus major core protein VII have been determined. The precise location of this gene is between 43.37 and 44.90 map coordinates on the viral genome. Protein VII is 173 residues long and has a molecular weight of 19,258. Detailed analysis of its sequence has revealed four basic domains separated by several predicted alpha helices. It is proposed that intrachain folding of protein VII is driven by hydrophobic interactions of the alpha helices, leaving the basic domains of the protein to interact with DNA phosphates. Protein monomers may further associate with each other in the formation of hexameric nucleosome-like particles. The displacement and replacement of protein VII during the viral infectious cycle in the host cell appears to mimic the biology of nucleoprotamine during the processes of spermatogenesis and fertilization. The presence of a protamine-like domain affirms a hybrid histone/protamine molecular structure for protein VII, although it may resemble the protamine in function.     

丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白

0 引言1989年应用分子生物学技术发现了丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV),并证实可导致肝脏慢性疾病,是输血后肝炎的主要病因.全世界有1.7亿人感染 HCV,面临肝硬化和肝细胞癌的威胁.随着基因组测序工作的完成,随后就是研究基因的功能,其中基因表达蛋白质的功能的研究尤为重要,因为基因是通过蛋白质起作用的.蛋白质与蛋白质之间的相互作用揭示了蛋白质功能     

Prion protein interaction with stress-inducible protein 1 enhances neuronal protein synthesis via mTOR

Transmissible spongiform encephalopathies are fatal neurodegenerative diseases caused by the conversion of prion protein (PrP^C) into an infectious isoform (PrP^Sc). How this event leads to pathology is not fully understood. Here we demonstrate that protein synthesis in neurons is enhanced via PrP^C interaction with stress-inducible protein 1 (STI1). We also show that neuroprotection and neuritogenesis mediated by PrP^C–STI1 engagement are dependent upon the increased protein synthesis mediated by PI3K-mTOR signaling. Strikingly, the translational stimulation mediated by PrP^C–STI1 binding is corrupted in neuronal cell lines persistently infected with PrP^Sc, as well as in primary cultured hippocampal neurons acutely exposed to PrP^Sc. Consistent with this, high levels of eukaryotic translation initiation factor 2α (eIF2α) phosphorylation were found in PrP^Sc-infected cells and in neurons acutely exposed to PrP^Sc. These data indicate that modulation of protein synthesis is critical for PrP^C–STI1 neurotrophic functions, and point to the impairment of this process during PrP^Sc infection as a possible contributor to neurodegeneration.     

糖尿病患者尿液蛋白质质谱分析

H4蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术检测糖尿病患者和健康人尿液样本的蛋白质质谱,按糖尿病肾病的分期分组比较,结果得到一组特异性蛋白.筛选出预测准确率最高的4个差异蛋白质建立早期糖尿病肾病的人工神经网络模型并验证.