鲜壁虎活性组分对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨鲜壁虎活性组分对人肝癌BEL．7404细胞增殖及凋亡的影响。方法将鲜壁虎活性组分冻干粉配制为不同浓度的溶液,并作用于肝癌BEL-7400细胞。以MTT法检测不同浓度的鲜壁虎活性组分对肝癌BEL-7400细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析各组细胞的凋亡情况。结果不同浓度的鲜壁虎活性组分均对肝癌BEL-7404细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量．时间依赖效应,实验组的抑制率均较对照组显著提高（P〈0．05）。不同浓度的鲜壁虎活性组分均能诱导肝癌BEL-7404细胞凋亡,高浓度组（2560p,g／m1）的作用更为明显（P〈O．05）。结论鲜壁虎活性组分可显著抑制BEL-7404细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：探讨康莱特注射液诱导人肝癌细胞凋亡的作用。为康莱特注射液治疗肝癌提供理论依据。方法：采用免疫组织化学及透射电镜技术观察康莱特注射液对肝癌细胞凋亡的影响。结果：肝癌细胞经康莱特注射液培养24h后,其凋亡的百分率明显高于对照组和空白组,有显著性差异（P＜0．05）,且组织细胞凋亡在50％以上者占44．12％（15／34）,而对照组及空白组无1例凋亡超过50％;电镜相可见较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,凋亡小体形成等。结论：康莱特注射液能诱导肝癌细胞发生凋亡;诱导细胞凋亡可是康莱特注射液治疗作用的重要机制。     

Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)发酵液中提取,最近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用。本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用。方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Westernblot蛋白电泳测定Caspase-3活性。结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48h后,Hoechst33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生。结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用。     

RNA干扰SMYD3基因表达对诱导肝癌细胞凋亡的影响

背景与目的:SMYD3(SETandMYNDdomain-containingprotein3)基因的表达蛋白是一种组蛋白甲基转移酶,参与肿瘤细胞增殖与凋亡的调控。本研究旨在探讨利用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)抑制SMYD3基因表达对肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:RT-PCR、免疫组织化学法分别检测SMYD3在肝癌细胞和肝癌组织中的表达。构建小发夹状RNA(smallhairpinRNA,shRNA)干扰质粒Pgenesil-1-s1、Pgenesil-1-s2及无干扰效应质粒Pgenesil-1-hk并转染入肝癌细胞HepG2,阻抑其表达SMYD3,以空质粒Pgenesil-1转染组为对照。Westernblot检测阻抑效应;MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞术及TUNEL检测细胞凋亡。结果:SMYD3在肝癌组织和多种肝癌细胞中表达明显增强。shRNA转染HepG2细胞后:SMYD3蛋白表达下调75%～85%;细胞增殖明显受抑制,抑制率高达60.95%～72.14%;流式细胞术结果显示Pgenesil-1-s1组HepG2细胞凋亡率(17.68±2.36)%、Pgenesil-1-s2组(19.07±1.78)%,均显著高于Pgenesil-1-hk组[(1.44±0.28)%]及Pgenesil-1组[(0.47±0.12)%](P<0.01);TUNEL检测的凋亡指数结果与流式细胞术检测结果类似。结论:SMYD3高表达于多种肝癌细胞及肝癌组织;RNAi能特异性下调SMYD3的表达,抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡,提示其可能为治疗肝癌提供新的途径。     

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl—2表达下调的研究

探讨表没食子儿茶素没食子酸酯「（－）－ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ－３－ｇａｌｌａｔｅ,ＥＧＣＧ」诱导胃癌ＭＣＧ－８０３细胞和肝癌ＢＥＬ－７４０２细胞凋亡的作用及其凋亡在基因ｂｃｌ－２产物表达的改变。方法：用ＭＴＴ法,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测ＥＧＣＧ处理,ＭＧＣ－８０３细胞和ＢＥＩ－７４０２细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化。结果：ＥＧＣＧ以剂量依赖的方     

p21WAF1/CIP1过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响

目的 探讨Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达对人肝癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响。方法 用带有Ｐ２１的真核表达载体ＰＣＥＰ,经基因转染,使其在有Ｐ５３突变的人肝细胞癌细胞系（ＨＣＣ－９２０４）中表达;通过流式细胞仪、透射电镜和ＤＮＡ电泳确定凋亡的凋亡细胞。结果 转基因后Ｇ１期细胞增加,并且在Ｇ１期前出现一凋亡峰,凋亡细胞占被检细胞总数的２２．５％;电下可见部分细胞体积缩小,胞膜完整,有出芽现象,细胞     

芬太尼对人肝癌细胞bel-7404生长与凋亡的影响

目的探讨芬太尼对人肝癌细胞bel-7404生长及凋亡的影响。方法体外培养人肝癌bel-7404细胞,分F1、F2、F13、F4,4个实验组和1个对照组,实验组分别在RPMI-1640培养液中加入5ng／ml（F1）、50ng／ml（F2）、500ng／ml（F3）、5000ng／ml（F4）芬太尼,对照组不加芬太尼,所有样本孵育24h后,用倒置显微镜观察细胞形态学改变,应用MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖活性,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率与细胞周期。结果各实验组人肝癌bel-7404细胞MTT和克隆形成率明显低于对照组（P〈0．01）,细胞凋亡百分比显著高于对照组（P〈0．05）。芬太尼浓度≥50ng／ml时,随着浓度的增加,凋亡率逐渐增高,细胞周期中G0／G1期比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐减少,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论芬太尼可剂量依赖性抑制人肝癌细胞bel-7404的生长,干扰肝癌细胞增殖周期,诱导肝癌细胞凋亡。     

环磷酰胺诱导小鼠HAC肝癌细胞凋亡和抑制增殖的体内实验研究

目的 探讨环磷酰胺对荷瘤鼠ＨＡＣ肝癌细胞凋亡和增殖的影响。方法 建立小鼠ＨＡＣ肝癌荷瘤模型,用ＴＵＮＥＬ法和免疫组化法检测环磷酰胺作用下,ＨＡＣ肝癌细胞的凋亡和ＰＣＮＡ表达的变化。结果 １５ｍｇ／ｋｇ环磷酰胺的抑瘤率４３％。ＨＡＣ肝癌细胞的凋亡指数１．９３％,较荷瘤对照组１．１１％明显升高（Ｐ〈０．０５）。增殖指数３５．７５％,较荷瘤对照组５６．３８％明显下降（Ｐ〈０．０１）。结论 环磷酰胺有诱导     

Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的:探讨 sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白( albumin,ALB)、甲胎球蛋白 (α-fetoprotein,AFP)表达的影响.方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响.结果:血清饥饿状态下cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖.半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6 h后线粒体膜电位较0 h时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).AFP mRNA及蛋白分泌水平均明显降低,但对ALB mRNA及蛋白分泌影响不明显.结论:Cyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用.     

顺铂诱导人肝癌细胞凋亡机理研究

顺铂是多种化疗方案的核心药物,在对人卵巢癌细胞和大鼠肝癌细胞的研究中,发现其具有诱导凋亡的作用。本实验从细胞形态、ＤＮＡ裂解片段、细胞周期、ＤＮＡ断裂点末端标记,凋亡相关基因观察顺铂诱导人肝癌细胞凋亡的作用机理。1　材料与方法1.1　细胞培养及药物人肝癌细胞ＳＭＭＣ-7721,引自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。在含10%小牛血清的ＲＰＭＩ-1640培养基(Ｇｉｂｃｏ产品),37℃,5%ＣＯ2条件下培养。顺氯氨铂(ｃｉｓｐｌａｔｉｎ,ＤＤＰ齐鲁制药厂出品,批号:960601),用含10%正常大鼠血清的ＲＰＭＩ-1640培养液配制,ＤＤＰ终…     

顺铂对肝癌细胞BEL-7404、BEL-7404/ADM 中hTERT表达的研究

目的 观察不同浓度及作用时间顺铂对BEL-7404、BEL-7404/ADM肝癌细胞hTERT-mRNA表达及影响。方法 以不同浓度顺铂处理BEL-7404细胞24h、48h、72h后,RT-PCR检测hTERT-mRNA表达。结果 不同浓度DDP处理48h、72h后,BEL-7404细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,与对照组比较有显著性差异,对比BEL-7404/ADM细胞,随着DDP剂量和作用时间的增加,hTERT活性也呈减弱趋势。结论 顺铂可降低BEL-7404、BEL-7404/ADM细胞hTERT-mRNA表达,表现为明显的时间及浓度的依赖性。     

miR-16对人肝癌细胞BEL-7402增殖与凋亡的影响

背景与目的：miR-16和miR-15a基因复合体位于人13q14区域的DLEU2基因内含子内,是目前公认的抑癌基因之一。该基因区域的缺失与多种实体肿瘤有关,miR-16同时促进肿瘤细胞的凋亡。该研究旨在探讨miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人肝癌细胞BEL-7402分为miR-16感染组(加入LV-hsamiR-16-1慢病毒)和阴性对照组(加入阴性对照病毒),采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光的强度;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析miR-16对人肝癌细胞BEL-7402的细胞周期与凋亡的影响。结果：CCK-8检测结果显示,感染组细胞增殖能力明显降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,阴性对照组BEL-7402细胞周期中G₁期细胞百分率数值明显下降,但S及G₂/M期细胞的百分率均明显上升(P<0.05)。miR-16促进BEL-7402肝癌细胞凋亡。结论：miR-16抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,miR-16有望成为临床肝癌靶向治疗的新靶点。     

康莱特抑制肝癌细胞侵袭能力及其对相关基因MMP-9表达的影响

目的探讨康莱特（Kanglaite,KLT）对肝癌细胞株BEL-7404侵袭能力的抑制作用及其对相关基因MMP-9mRNA和蛋白表达水平的影响。方法据前期MTT实验结果选用A组（含KLT80μL/mL）、B组（含DDP10 mg/L）和C组（DMEM空白对照）对BEL-7404细胞进行48小时处理,用细胞迁移实验及Transwell小室法检测细胞的侵袭能力的变化,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测各组BEL-7404细胞中MMP-9mRNA及蛋白的表达水平。结果对BEL-7404细胞作用48小时后,A、B两组细胞的迁移速率及侵袭穿膜细胞数、MMP-9 mRNA及蛋白表达水平均较C组明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.001）;而A、B两组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 KLT可通过下调MMP-9表达而抑制肝癌BEL-7404细胞株的侵袭能力;同时对BEL-7404细胞侵袭能力的抑制,80μL/mL KLT与10 mg/L DDP显示同样的抑制效果与机制。     

甘草提取物的有效部位诱导人宫颈癌HeLa细胞株凋亡及对凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响

目的 研究甘草提取物的有效部位(GL)体外诱导HeLa细胞凋亡情况及对Caspase家族蛋白表达的调控,进一步阐明GL的抑癌机制。方法 将25 μg/mL的GL作用于HeLa细胞24 h后,采取MTT比色法,吖啶橙/溴乙锭荧光双染法,透射电子显微镜法,观察GL诱导HeLa细胞凋亡情况,并采用Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平的变化。结果 MTT结果显示,GL可以有效抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量-时间相关性。AO/EB双染色及透射电镜观察发现GL作用HeLa细胞24 h后,可见大量早期凋亡细胞。Western blot测定结果显示,药物组Pro-caspase-9蛋白表达量与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);Cleaved-caspase-3蛋白表达量高于对照组。结论 GL能够促进Caspase-3、Caspase-9酶原活化,具有体外诱导HeLa细胞凋亡的作用。     

肝干细胞与肝癌干细胞

正常肝干细胞在致癌因素作用下发生基因突变，获得无限增殖能力成为肿瘤干细胞，肿瘤干细胞分化成各种分化等级、表型不一的肿瘤。在正常肝干细胞转化成肝癌干细胞的过程中保留了一些干细胞表型特征和进一步向相对成熟细胞分化的能力。正常肝干细胞是肝癌重要起源。     

EGCG诱导胃癌和肝癌细胞凋亡及bcl-2表达下调的研究

目的：探讨表没食子儿茶素投食子酸酯[（－）－epigallocatechin-3-gallate,EGCG]诱导胃癌MGC－803细胞和肝癌BEL－7402细胞凋亡的作用及其调亡相关基因bcl-2产物表达的改变。方法：用MTT法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测EGCG处理MGC-803细胞和BEL-7402细胞后,他们在形态学和生化方面的改变以及bcl－2蛋白表达水平的变化。结果：EGCG以剂量依赖的方式抑制MGC－803细胞和BEL－7402细胞的生长,其IC50值分别为188．52和264．53μg／ml。200～300μg／ml的EGCG处理MGC-803细胞和BEL-7402细胞24～36h,在琼脂糖凝胶电泳上可见凋亡细胞特征性的“梯状”带和PI染色流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰;流式细胞术显示EGCG以时间依赖的方式下调bcl-2蛋白的表达。结论：EGCG对胃癌MGC-803细胞和肝癌BEL-7402细胞生长具有抑制作用,其机制之一是诱导这两株肿瘤细胞的凋亡。诱导细胞凋亡的机制可能与其下调bcl-2蛋白的表达水平有关。     

siRNA表达载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制研究

目的探讨经载体介导的RNA干扰对肝癌细胞周期蛋白E1表达抑制效率。方法针对周期蛋白E1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段，连接到pSilencer1．0-U6载体上构建siRNA真核表达载体；脂质体转染法将上述重组质粒转人BEL-7402肝癌细胞株。RT—PCR分析周期蛋白E1表达抑制率；流式细胞术测细胞周期S期和凋亡细胞比率；MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线。结果重组载体介导肝癌细胞BEL-7402周期蛋白E1抑制率达62％；转染重组质粒32h测得S期细胞为19％，空载体转染对照为27％；转染重组质粒96h流式细胞术测得凋亡细胞为13．1％，高于空载体对照的6．6％；细胞生长曲线作图表明，重组载体转染组细胞生长明显减缓。结论肝癌细胞周期蛋白E1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰成功抑制，进而导致细胞生长受抑并诱导凋亡；本研究为探索肝癌的RNAi治疗提供了初步的实验依据。     

番茄红素对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 研究番茄红素对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 取对数生长期人肝癌HepG2细胞,分别给予不同浓度番茄红素(5、10、20 μg/ml)和顺铂(40 μg/ml)进行干预,48 h后通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting技术检测Bax、Bcl-2、激活型Caspase-3蛋白表达.结果 干预48 h后,空白对照组人肝癌HepG2细胞增殖抑制率为0,番茄红素(5、10、20 μg/ml)组和顺铂组分别为(21.3±4.2)％、(40.5±7.6)％、(63.8±9.1)％和(37.8±5.9)％,差异有统计学意义(F=37.905,P=0.000);它们分别与空白对照组比较,差异均具有统计学意义(t=208.124,P=0.000;t=394.637,P=0.000;t=628.592,P=0.000;t =257.168,P=0.000).番茄红素(10、20μg/ml)组细胞周期G0-G1期比例分别为(54.0±2.9)％、(67.3±3.6)％,与空白对照组(37.9±1.5)％比较,差异有统计学意义(t =4.508,P=0.024;t=10.673,P=0.006);番茄红素(10、20 μg/ml)组G2-M期比例分别为(8.5±0.6)％、(4.7±0.5)％,与空白对照组比较(18.4±0.8)％,差异有统计学意义(t=9.975,P=0.008;t=13.864,P=0.003).番茄红素组(5、10、20 μg/ml)和顺铂组细胞凋亡指数分别为(19.5±4.8)％、(43.0±9.2)％、(67.6±10.1)％和(36.9±6.8)％,与空白对照组[(3.6±1.7)％]比较均显著升高,差异有统计学意义(t=18.617,P=0.001;t=34.295,P=0.000;t=51.437,P=0.000;t =29.804,P=0.000).番茄红素(10、20 μg/ml)组和顺铂组Bel-2、Bax表达及Bax/Bcl-2比值分别为0.42±0.09、0.43 ±0.14、1.02±0.39,0.27±0.08、0.76 ±0.19、2.81 ±0.85和0.34 ±0.11、0.31 ±0.09、0.91 ±0.40,与空白对照组(0.59 ±0.17、0.18 ±0.06、0.31 ±0.12)比较,Bcl-2表达显著下调,差异具有统计学意义(t=4.327,P=0.023;t=11.064,P=0.006;t =5.182,P=0.018),Bax表达显著上调,差异具有统计学意义(t=9.837,P =0.008;t=17.349,P=0.001;t=10.165,P=0.007),Bax/Bcl-2比值显著升高,差异均具有统计学意义(t=11.521,P=0.006;t=18.194,P=0.001;t=9.537,P=0.008).番茄红素(5、10、20 μg/ml)组和顺铂组激活型Caspase-3蛋白表达分别为0.25 ±0.07、0.34 ±0.11、0.46 ±0.18和0.17 ±0.05,与空白对照组(0.08±0.03)比较,差异具有统计学意义(t=8.307,P=0.009;t=13.067,P=0.006;t=16.218,P=0.003;t=5.202,P=0.019).结论 番茄红素能够通过抑制细胞增殖并促进其凋亡而对人肝癌HepG2细胞生长起到一定的抑制作用,其机制可能与番茄红素能够影响细胞周期进程并调节凋亡相关基因蛋白表达有关.