一氧化氮诱导心肌细胞预适应早期保护作用的信号转导途径

目的：探讨一氧化氮(NO)诱导心肌细胞预适应早期保护作用及可能的信号转导途径。方法：体外培养新生大鼠心肌细胞，分别以NO合成前体L-精氨酸(L-Arg)和NO供体SNAP处理细胞，观察心肌细胞在随后6h的缺氧损伤程度，以明确NO是否诱导心肌细胞预适应早期保护作用；分别以cGMP阻断剂亚甲基蓝、蛋白激酶C(PKC)抑制剂D-鞘氨醇、钙拮抗剂拉西地平和ATP敏感的钾通道[K(ATP)通道]阻断剂格列苯脲作用心肌细胞30min后加入SNAP作用60min，观察心肌细胞缺氧损伤程度，检测指标为心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：SNAP和L-Arg均可诱导心肌细胞预适应早期保护作用，一氧化氮合酶抑制剂L-NAME可阻断L-Arg的保护作用，亚甲基蓝可完全取消SNAP对缺氧心肌细胞的保护作用，D-鞘氨醇、拉西地平和格列苯脲均可减弱SNAP的作用。结论：NO可能通过cGMP依赖途径诱导心肌细胞预适应早期保护作用，而PKC的活化和钙通道、K(ATP)通道的开放是其下游重要的环节。     

AE3通过NO通路参与心肌细胞缺氧预适应的保护作用

目的从细胞水平探讨阴离子交换蛋白3(AE3)在心肌细胞缺氧预处理(APC)保护作用中的意义以及与NO通路的关系。方法以原代培养的SD新生乳鼠心肌细胞为研究对象,建立缺氧/复氧(A/R)损伤和缺氧预适应保护模型。心肌细胞随机分为4组,Control组、A/R组、APC组和NO合成酶抑制剂L-NAME组。RT-PCR和Western blot法分别测定AE3的mRNA和蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,生化自动分析仪测定LDH、CPK活性。结果 A/R处理后,心肌细胞AE3 mRNA转录及蛋白表达较Control组略增加。APC组AE3 mRNA转录及蛋白表达不仅均较Control组转录明显上调,而且较A/R组也明显上调。但预先加入NO合成酶抑制剂L-NAME则可抑制APC处理时AE3的表达增强,并取消APC的心肌保护作用。结论 AE3可能通过NO通路参与了心肌细胞APC的保护作用。     

丹参酮Ⅵ预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究丹参酮Ⅵ(Tanshinone Ⅵ,Tan)预处理对心肌细胞缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的保护作用及其机制.方法 以细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量等为观察指标,用终浓度分别为0.1、1和10 μmoL/L的Tan预处理原代培养大鼠乳鼠心肌细胞1 h,观察其对A/R损伤的保护作用及NO合成酶抑制剂L-NAME(0.1 mmol/L)、K+-ATP通道阻断剂格列苯脲(12 μmol/L)对其保护作用的影响.结果 Tan预处理能显著提高细胞存活率,降低LDH活性,呈剂量依赖性,且显著能增加SOD及GSH-Px活性,降低MDA含量,能对抗A/R损伤;L-NAME和格列苯脲能部分取消Tan预处理的上述保护作用.结论 Tan预处理对心肌细胞A/R损伤有显著的心肌细胞保护作用,其机制可能与NO生成、K+-ATP通道开放有关.     

蛋白激酶C在心肌预适应中的作用机制

心肌预适应后 ,内源性物质释放 ,分别作用于心肌中与G蛋白耦联的相应受体 ,蛋白激酶C激活并转位至细胞膜及细胞骨架 ,并可通过线粒体KATP通道、MAPK等通路引发心肌保护作用。在不同的动物中 ,分别发现不同的蛋白激酶C亚型激活转位。目前公认 :在参与心肌预适应过程的多种因素中 ,PKC起到了关键性作用 ,是多种因素作用的一条共同通路     

缺血预适应心肌保护作用的神经递质调节

缺血预适应是指心脏遭受短暂缺血后能耐受随后较长时间缺血损伤,是近年发现的一种预防心肌缺血损伤的有效措施。缺血预适应的心肌保护作用是心脏释放内源性心血管活性物质所介导。神经递质（儿茶酚胺、乙酸胆碱、降钙素基因相关肽、阿片肽等）可能是介导缺血预适应的内源性心肌保护物质。外源性应用神经递质能模拟缺血预适应的心肌保护作用。神经递质可同其它内源性活性物质相互作用。神经递质介导缺血预适应可能是通过与其相应受体结合,触发细胞内信息转导途径,激活蛋白激酶C产生心肌保护作用。     

Ca2+/PKC通路在大鼠缺氧复氧心肌细胞Egr-1高表达中的作用

目的:观察Ca2+/PKC通路在大鼠心肌细胞缺氧复氧状态下参与Egr-1高表达。方法:取生长5~6 d的大鼠心肌细胞分为对照(Control)组、缺氧复氧(H/R)组、溶剂(DMSO)组、EGTA组、维拉帕米(VER)组、H7组和BIM组。各组心肌细胞制作H/R模型。RT-PCR法检测培养心肌细胞中Egr-1 mRNA的表达水平。Western-blot法检测培养心肌细胞中Egr-1蛋白的表达水平。结果:与Control组相比,H/R组及DMSO组心肌细胞Egr-1 mRNA的表达水平明显增高(P<0.05);与H/R组相比,VER组、EGTA组、H7组、BIM组Egr-1 mRNA的表达明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,H/R组及DMSO组心肌细胞Egr-1蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与H/R组相比,VER组、EGTA组、H7组、BIM组Egr-1蛋白的表达明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在大鼠心肌细胞缺氧复氧状态下,Ca2+/PKC信号通路参与介导了Egr-1的高表达。     

丹参联合缺血预适应对缺血性心肌损伤的保护作用

目的:研究丹参(SM)联合缺血预适应(IP)对缺血性心肌损伤的保护作用.方法:以整体麻醉SD大鼠心脏冠状动脉左前降支结扎/松开作为缺血/再灌注动物模型,观察对心律失常程度和心肌梗塞范围的影响。结果:IP能减轻复灌性心律失常的严重程度,缩小心肌梗塞范围;SM能缩小心肌梗塞范围;SM联合IP与单纯IP比较,心肌梗塞范围进一步缩小;SM联合IP与单纯SM比较,心律失常严重程度和心肌梗塞面积均进一步减小。结论:SM能加强IP的心肌保护作用     

ATP敏感性钾通道在药理预适应心肌保护中的作用研究进展

心肌保护的有效措施是建立在对心肌缺血(Ischemia)及缺血,再灌注(Ischemia／Reperfusion,I／R)损伤深入认识的基础上,目前认为心肌缺血预处理(IPC)是最强有力的、可再生的内源性心肌保护的有效措施。尽管对。IPC的保护机制仍有争论,但大多数观点认同ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channels)是心肌预处理保护作用的重要环节亦或最终效应器。     

缺血预适应在缺血性脑卒中患者神经功能中的保护作用

目的　研究缺血预适应在缺血性脑卒中患者神经功能中的保护作用及疗效。方法　选取2019年6月至2021年6月聊城市第三人民医院收治的110例缺血性脑卒中患者,进行前瞻性随机平行对照研究,采用随机数字表法将患者分为A组和B组,每组55例。A组男23例,女32例;年龄52～74（62.78±4.77）岁;B组男27例,女28例;年龄51～73（61.48±4.59）岁。B组采用常规药物治疗,A组在B组的基础上采用远隔缺血后适应治疗。比较两组临床疗效,治疗前、治疗3个月后美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）、日常生活能力Barthel指数（BI）评分及梗死灶体积、血清S100蛋白（S100β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、新喋呤（Npt）、半乳糖凝集素3（GAL3）、血液流变学指标（血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、纤维蛋白原）水平。计数资料采用χ²检验,计量资料采用t检验。结果　治疗3个月后,A组临床总有效率为94.55%（52/55）,高于B组的81.82%（45/55）,两组比较,差异有统计学意义（χ²=4.274,P=0.039）;治疗3个月后,A组NIHSS评分为（9.74±1.83）分,低于B组的（12.25±2.82）分,BI评分为（75.26±5.38）分,高于B组的（62.47±6.02）分,两组比较,差异均有统计学意义（t=5.496、11.748,均P<0.001）;治疗3个月后,A组梗死灶体积为（3.35±1.02）cm³,缩小幅度优于B组［（3.79±1.11）cm³］,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗3个月后,A组全血低切黏度为（5.08±0.79）mPa·s、全血高切黏度为（4.22±0.51）mPa·s、血浆黏度为（1.17±0.34）mPa·s、纤维蛋白原为（2.86±0.34）g/L,均低于B组的（6.63±1.02）mPa·s、（4.85±0.62）mPa·s、（1.36±0.40）mPa·s、（3.53±0.42）g/L,两组比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）;治疗3个月后,A组血清S100β为（1.37±0.38）μg/L、NSE为（15.28±3.37）μg/L、Npt为（6.95±1.78）nmol/L、GAL3为（9.68±2.27）g/L,均低于B组的（1.74±0.46）μg/L、（19.72±4.73）μg/L、（9.07±2.24）nmol/L、（11.94±3.04）g/L,两组比较,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论　缺血预适应辅助治疗缺血性脑卒中患者可进一步提升疗效,可有效改善患者日常生活能力及神经功能,缩小梗死灶体积,调节血液流变学状态,促进病情恢复。     

蒺藜皂苷预适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨蒺藜皂苷(GSTT)预适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 56只大鼠随机分假手术组(Sham)、缺血/再灌注(I/R)组、缺血预适应组(IP)、阳性药(尼可地尔1.0mg·kg-1)组、GSTT100、30、10mg·kg-1组。采用分光光度法测定血清乳酸脱氢酶(LDH),二氨基二苯甲烷(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)水平。ELISA法测定血清TNF-α与IL-6的含量。光学显微镜下观察受损心肌病理组织学改变,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌组织内caspase-3表达。结果与模型组比较,GSTT100、30mg·kg-1组LDH、MDA含量明显降低,SOD活性明显升高(P<0.01),TNF-α及IL-6含量也明显降低,凋亡细胞数明显减少(P<0.01),caspase-3表达下降,心肌组织形态明显改善。结论蒺藜皂苷预先给药对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,能减少自由基生成,抑制细胞凋亡。     

雷米普利对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的研究雷米普利(RAM)对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法链脲佐菌素致糖尿病大鼠被随机分为缺血/再灌注(I/R)、缺血预适应(IPC)和RAM3组。RAM组每天用RAM(1mg·kg-1)灌胃,IPC和I/R组用等体积生理盐水灌胃。4wk后各组动物均经历心肌缺血/再灌注损伤,IPC组于缺血前行心肌缺血预适应。连续监测心电图,检测心肌梗死范围、心肌细胞凋亡、凋亡蛋白Bcl-2与Bax表达,光镜下观察心肌形态学改变。结果与I/R组比较,RAM及IPC组ST-段抬高幅度降低,室早出现时间推迟,持续时间缩短,室速、室颤发生率降低,心肌梗死范围缩小,心肌细胞凋亡减轻,Bcl-2/Bax比值升高。结论连续4wk应用RAM可减轻糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤。     

Characterization of a critical role for CFTR chloride channels in cardioprotection against ischemia/reperfusion injury

Aim:

To further characterize the functional role of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) in early and late (second window) ischemic preconditioning (IPC)- and postconditioning (POC)-mediated cardioprotection against ischemia/reperfusion (I/R) injury.

Methods:

CFTR knockout (CFTR^−/−) mice and age- and gender-matched wild-type (CFTR^+/+) and heterozygous (CFTR^+/-) mice were used. In in vivo studies, the animals were subjected to a 30-min coronary occlusion followed by a 40-min reperfusion. In ex vivo (isolate heart) studies, a 45-min global ischemia was applied. To evaluate apoptosis, the level of activated caspase 3 and TdT-mediated dUTP-X nick end labeling (TUNEL) were examined.

Results:

In the in vivo I/R models, early IPC significantly reduced the myocardial infarct size in wild-type (CFTR^+/+) (from 40.4%±5.3% to 10.4% ±2.0%, n=8, P<0.001) and heterozygous (CFTR^+/-) littermates (from 39.4%±2.4% to 15.4% ±5.1%, n=6, P<0.001) but failed to protect CFTR knockout (CFTR^−/−) mice from I/R induced myocardial infarction (46.9%±6.2% vs 55.5%±7.8%, n=6, P>0.5). Similar results were observed in the in vivo late IPC experiments. Furthermore, in both in vivo and ex vivo I/R models, POC significantly reduced myocardial infarction in wild-type mice, but not in CFTR knockout mice. In ex vivo I/R models, targeted inactivation of CFTR gene abolished the protective effects of IPC against I/R-induced apoptosis.

Conclusion:

These results provide compelling evidence for a critical role for CFTR Cl⁻ channels in IPC- and POC-mediated cardioprotection against I/R-induced myocardial injury.     

PGN刺激对低氧诱导RASF表达VEGF的影响

目的 观察TLR2配体肽聚糖（PGN）刺激对低氧诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RASF）表达低氧诱导因子1 α（HIF-1 α）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响.方法 分离RASF 6例,建立体外培养体系,将RASF分为对照组、CoCl2组、PGN组和CoCl2＋PGN组,qRT-PCR检测HIF-1 α表达,ELISA检测VEGF表达,siHIF-1 α后ELISA检测VEGF表达.结果 CoCl2组RASF表达HIF-1 α和VEGF水平高于对照组（P＜0.05）,PGN刺激能明显增强CoGl2诱导RASF表达HIF-1 α和VEGF的水平（P＜0.05）,干扰HIF-1 α后明显下调PGN协同CoCl2诱导RASF产生VEGF的效应（P＜0.05）.结论 TLR2信号激活能明显增强低氧诱导RASF产生VEGF的能力,干扰HIF-1 α是RA治疗的有效策略.     

硝酸甘油与丁丙诺啡合用抗大鼠心肌缺血的药理性预适应研究:早期心脏保护作用

目的　研究硝酸甘油 (nitroglycerin ,NG)和丁丙诺啡(buprenorphine,BU)两药单用及合用抗心肌缺血的药理性预适应的早期保护作用。方法　♂Wistar大鼠分为 5组 ,行 30min冠脉结扎缺血 / 2h再灌。各组手术之前行不同处理 ,Sham组静注等容积NS ,早期预适应 (EIP)组行 3个循环5min缺血 / 5min再灌预处理 ,BU组静注盐酸丁丙诺啡 1 0mg·kg-1,NG组静注NG 0 3mg·kg-1,B +N组分别给上述剂量BU和NG。各组均于给药前、后及缺血和再灌期连续监测心率、血压、ST 段和心律失常情况 ;测定缺血 30min和再灌 2h血浆LDH、CK ;再灌 2h后行心肌HE染色与TTC染色定性和定量测定心肌坏死情况。结果　与Sham组比较 ,BU组明显推迟缺血期心律失常出现时间 ,缩短室早持续时间 (P <0 0 1) ,降低二联律和室速发生率 ;降低缺血期血LDH(P <0 0 5 )水平 ,缩小心肌坏死面积 (P <0 0 1) ,但未降低血CK水平和缺血期ST 段抬高。与Sham组比较 ,NG组明显降低缺血和再灌期ST段 (P <0 0 1)、降低缺血期血LDH(P <0 0 1)和CK(P <0 0 5 )水平 ,缩小心肌坏死面积 (P <0 0 1) ,减轻HE染色心肌坏死程度 ,缩短心律失常持续时间。药物合用后与Sham组比较 ,不仅明显降低缺血和再灌期ST段、血LDH和CK水平 ,缩小心肌坏死面积 (P <0 0 1) ,减轻HE     

H-89对大鼠心肌细胞膜电流的影响

目的评估蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89对大鼠心室肌细胞膜主要离子通道和转运体的影响。方法应用全细胞膜片钳技术观察H-89对胶原酶分解的成年SD大鼠心室肌细胞膜离子电流L-型钙电流(ICa-L)、电压门控钠电流(INa)、内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)和钠钙交换体电流(INa/Ca)的影响。结果1～10μmol.L-1H-89可浓度依赖性抑制ICa-L、INa、Ito(P<0.05);对IK1有更强的抑制作用,在较低浓度(5μmol.L-1)时即可完全抑制IK1(P<0.05),与0.5mmol.L-1氯化钡的作用类似。但在1～10μmol.L-1浓度范围内H-89对INa/Ca无明显作用(P>0.05)。结论H-89对心肌细胞膜电流的影响可能是其对通道的直接作用或间接通过抑制PKA所致。     

不同时间吗啡预处理对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用

目的观察吗啡预处理对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用并寻找有效预处理的产生时间。方法健康雄性BALB/c小鼠56只,随机分为假手术组（Sham组,n=8）、脑中动脉栓塞组（MCAO组,n=8）和吗啡预处理组（MP组,n=40）,吗啡预处理组又分为5个亚组,分别于预处理后0.5、12、24、48、72h行脑中动脉栓塞,每组8只。缺血后6h,通过神经功能评分、测定脑梗死面积及脑水肿率,观察吗啡预处理对小鼠局灶性脑缺血损伤的作用。结果与MCAO组比较,吗啡预处理能明显改善12h及24h组小鼠神经功能评分,减少脑梗死面积及水肿率（P〈0.05）,而0.5、48、72h时点则未见明显变化（P〉0.05）。结论吗啡预处理能减轻小鼠局灶性脑缺血损伤,其保护作用可能存在时间效应。     

Protective effect of edaravone against hypoxia-reoxygenation injury in rabbit cardiomyocytes

1 We examined whether edaravone (Eda), a clinically available radical scavenger, directly protects cardiomyocytes from ischemia/reperfusion (I/R) injury, and whether the timing of its application is critical for protection. 2 Cardioprotective effects of edaravone were tested in the modified cell-pelleting model of ischemia and under exogenous oxidative stress (hydrogen peroxide: H2O2) in isolated adult rabbit ventricular cells. Cell death and reactive oxygen species (ROS) generation were detected using propidium iodide (PI) and DCFH-DA, respectively. These parameters were evaluated objectively using flow cytometory. 3 Hypoxia and reoxygenation aggravated the proportion of dead cells from 32.2+/-1.8% (Baseline) to 51.3+/-2.7% (Control). When 15 microm edaravone was applied either throughout the entire experiment (Through) or only at reoxygenation (Reox), cell death was significantly reduced to 39.9+/-1.8% (P<0.01 vs Control) and 43.3+/-2.5% (P<0.05 vs Control), respectively. In contrast, when edaravone was applied 10 min after reoxygenation, its protective effect disappeared. Cardioprotection by edaravone was more remarkable than that afforded by other free radical scavengers, such as ascorbate and superoxide dismutase (SOD). There is a positive correlation between the cardioprotective effect of edaravone and the extent of ROS reduction. 4 Edaravone blunted the H2O2-induced changes in electrical properties, and significantly prolonged the time to contracture induced by H2O2 in single ventricular myocytes. 5 Taken together, edaravone directly protects cardiomyocytes from I/R injury by attenuating ROS production, even when applied at the time of reoxygenation, suggesting that edaravone could be a potent cardioprotective therapeutic agent against hypoxia-reoxygenation injury.     

Genistein后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤保护作用的机制初探

目的探讨Genistein后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤产生保护效应的可能机制。方法实验分7组:假手术组、缺血/再灌注组、Genistein组,ICI182780组,正钒酸钠组,Genistein+ICI182780组,Genistein+正钒酸钠组;利用Langendorff离体心脏灌流技术,建立离体大鼠心脏局部缺血/再灌注Genistein后处理模型,应用工具药物雌激素受体拮抗剂(ICI182780)和酪氨酸磷酸酶抑制剂(正钒酸钠)给予干预,观察干预前后,离体心脏局部缺血/再灌注Genistein后处理模型大鼠心肌梗死面积、心肌酶和心功能等指标变化。结果与对照组相比,缺血再灌注组增高了心肌梗死区面积,降低了心脏灌流漏出液样品中超氧化物歧化酶(SOD)活力、左室收缩压(LVSP)-左室舒张压(LVEDP)恢复率等(P<0.05)。经不同药物干预后,ICI182780组、正钒酸组、Genistein+ICI182780组的心肌梗死区面积占危险区面积的百分比高于Genistein组(P<0.05),T-SOD活力低于Genistein组(P<0.05)。结论Genistein后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤所发挥的保护作用,与Genistein本身具有的雌激素特性有关;而其本身具有的酪氨酸蛋白激酶抑制作用,对心肌保护是不利的。