NFATc1与OX40-OX40L在ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中的表达及意义

目的 探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)与OX40-OX40配体(OX40L)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)中的表达及意义.方法 选取16只ApoE-/-小鼠作为手术组,应用颈动脉硅胶圈植入法快速制作斑块模型;另选16只C57BL/6J小鼠作为对照组.免疫组化检测颈动脉粥样斑块中NFATc1表达,RT-PCR和流式细胞术分别检测淋巴细胞NFATc1、OX40及OX40L mRNA和蛋白表达.结果 NFATc1在手术组颈动脉斑块中显著表达,而在对照组中不表达;手术组NFATc1、OX40、OX40L mRNA和蛋白表达均明显高于对照组(P＜0.01);ApoE-/-小鼠NFATc1与OX40、OX40L表达均呈正相关(r分别为0.938、0.964,P＜0.01).结论 NFATc1与OX40-OX40L在AS发生发展中发挥着重要作用,NFATc1可能是受OX40-OX40L调控的下游分子.     

OX40-OX40L在人单核细胞和冠脉斑块中的共同表达

目的 探讨细胞刺激分子OX40及其配体OX40L在人单核细胞及冠状动脉粥样硬化斑块(冠脉斑块)中的表达.方法 采用荧光技术、流式细胞术检测Ox40、OX40L在单核细胞表面的表达,免疫组化方法检测在冠脉斑块中的表达.结果 OX40、OX40L在人单核细胞能连续表达,且细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和INF-γ能明显刺激其表达;冠脉斑块中能共同表达OX40L(肩部和底部)和OX40(广泛),而动脉壁其它部分不表达.结论 人单核细胞表面及冠脉斑块中能共同高表达OX40和Ox40L.     

激活血管平滑肌细胞OX40-OX40L系统对其增殖及迁移能力的影响

目的 研究OX40-OX40L轴的激活对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移能力的影响.方法 原代培养大鼠主动脉VSMC并传代,培养液中添加OX40L(0、0.1、1、10或20 mg/L)刺激24 h,或在培养基中加入选定浓度OX40L 10 mg/L,刺激6、12、24、36、48 h.以CCK-8法测定VSMC增殖率,以划痕法测定VSMC迁移率.结果 在OX40L浓度从0～20 mg/L范围内,刺激24 h后,VSMC的增殖、迁移能力的增强与OX40L浓度呈剂量依赖性,并明显大于OX40L 0 mg/L组(P＜0.05).OX40L浓度达到10 mg/L时,VSMC的增殖、迁移能力已接近最大值.应用10 mg/L的OX40L刺激不同时间(6、12、24、36、48 h)后,发现随着刺激时间的延长,VSMC增殖、迁移能力逐渐增强;刺激至24 h,VSMC增殖能力达到最大值.结论 OX40-OX40L轴的激活可能通过促进VSMC的增殖及迁移影响动脉粥样斑块的进展.     

雷帕霉素对小鼠脾淋巴细胞走后门殖及产生细胞因子的影响

目的：研究雷帕霉素（RAPA）对ConA、PHA、LPS诱导的小鼠脾细胞增殖反应,混合淋巴细胞反应,脾T淋巴细胞亚型及细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α含量的影响。方法：MTT法测定淋巴细胞增殖实验、混合淋巴细胞反应,流式细胞法测定脾T淋巴细胞亚型,结晶紫染色法测定TNF-α,E-LASI法测定IL-2,IFN-γ。结果：RAPA可显著抑制ConA、PHA和LPS诱导的小鼠脾细胞增殖和混合淋巴细胞反应（MLR）,对小鼠脾T淋巴细胞亚型无明显影响。RAPA还可明显抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2,IFN-γ,但对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α无效。结论：RAPA抑制小鼠免疫功能的作用机制与CsA不同。     

玉郎伞多糖对体外BALB/C小鼠淋巴细胞和巨噬细胞分泌细胞因子的影响

目的:探讨玉郎伞多糖（YLSPS）体外对BALB/C小鼠淋巴细胞、巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、γ-干扰素（IFN-γ）及白细胞介素-2（IL-2）的影响及作用机制。方法:分离BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞,分为空白对照组、LPS或ConA对照组和各浓度YLSPS组(50,100,200 mg·L^-1),MTT法检测脾淋巴细胞增殖,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的浓度,RT-PCR法检测TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2 mRNA的表达。结果:各浓度YLSPS组能剂量依赖性地促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞增殖和TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-2的分泌,显著增强这些细胞因子的mRNA的表达（P<0.01或P<0.05）。结论:YLSPS体外能促进BALB/C小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-6,其作用机制可能与上调上述细胞因子mRNA表达有关。     

OX40Ig修饰大鼠脂肪间充质干细胞的实验研究

目的 构建含OX40融合蛋白（OX40Ig）基因修饰的大鼠脂肪间充质干细胞（ADSCs）即ADSCsOX40Ig,探讨其 在体外对淋巴细胞的免疫调节作用。方法 构建pcDNA3.1（+）/OX40Ig融合基因表达载体,采用核转染技术转染大 鼠ADSCs,Western blot检测ADSCs中OX40Ig表达水平。ADSCs与大鼠异基因淋巴细胞共培养后分为对照组（反应 细胞+刺激细胞）、ADSCs组（反应细胞+刺激细胞+ADSCs）及ADSCsOX40Ig组（反应细胞+刺激细胞+ADSCsOX40Ig）,MTT法 检测淋巴细胞增殖抑制率,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测淋巴细胞内干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-10及 转化生长因子（TGF）-β mRNA表达。结果 经测序鉴定验证,pcDNA3.1（+）/OX40Ig质粒构建成功,转染ADSCs后 OX40Ig蛋白呈高表达;与ADSCs组比较,ADSCsOX40Ig显著增强异基因淋巴细胞增殖抑制率（P＜0.05）;对照组、ADSCs 组及 ADSCsOX40Ig组的 IFN-γ mRNA 相对表达水平依次降低,而 IL-10、TGF-β mRNA 相对表达水平依次升高（P＜ 0.05）。结论 ADSCsOX40Ig较单纯ADSCs能更好地发挥对异基因淋巴细胞的免疫调节作用。     

哮喘患者外周血T细胞OX40及血清sOX40L的表达和临床意义

目的 探讨支气管哮喘患者外周血T细胞OX40及血清可溶性OX40配体(sOX40L)的表达及意义.方法 流式细胞术检测65例支气管哮喘患者(发作期哮喘、缓解期哮喘)及30例健康志愿者(对照组)外周血T细胞表面OX40的表达水平,ELISA检测血清sOX40L的表达量,并测定用力1秒呼气率(FEV1％)、呼出气一氧化氮(FeNO)、外周血嗜酸性粒细胞(EOS)计数、总免疫球蛋白E(IgE)及哮喘控制测试问卷(ACT)评分.结果 发作期哮喘组患者外周血CD4+T细胞上OX40表达水平及血清sOX40L含量均显著高于缓解期患者和对照组(P＜0.05).相关分析显示,发作期哮喘组OX40表达与FeNO表达、EOS和IgE呈正相关;血清sOX40L表达与FeNO和EOS呈正相关,与FEV1％呈负相关.结论 OX40及血清sOX40L在哮喘患者外周血中异常增加,可作为反映支气管哮喘的炎性浸润程度和疾病严重程度的生物学指标.     

体外阻断CD137-CD137L途径抑制移植物抗宿主病的免疫效应

目的探讨体外阻断活化的供鼠T淋巴细胞CD137-CD137L共刺激途径抑制供鼠淋巴细胞的免疫反应。方法应用雄性供鼠BALB/c脾淋巴细胞为反应细胞,雌性受鼠C57BL/6脾淋巴细胞为刺激细胞,进行混合淋巴细胞培养(MLC)。设单抗实验组(加抗CD137L单抗)和对照组(不加抗CD137L单抗),初次和再次MLC第1、3、5、7天采用流式细胞术检测CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞;RT-PCR法检测培养的细胞IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平。结果实验组CD3+CD8+T细胞明显低于对照组(P<0.01);实验组IL-2、IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01);实验组IL-10表达明显高于对照组(P<0.01)。结论体外MLC中,应用抗CD137L单抗孵育供鼠脾T淋巴细胞主要抑制供鼠CD3+CD8+T细胞的增殖,抑制Ⅰ类细胞因子IFN-γ及IL-2的表达,促进Ⅱ类细胞因子IL-10的表达。     

重组人IL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的影响

为了探讨重组人IL-18(rhIL-18)对核辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用,对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、IFN-γ、GM-CSF、IL-4和脾细胞抗体形成量,观察rhIL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果表明与对照组比较,rhIL-18能够提高核辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用rhIL-18组的细胞因子水平高于核辐射损伤前应用rhIL-18组;但对IL-4分泌能力和脾细胞抗体形成量没有影响。结论:rhIL-18具有促进核辐射损伤小鼠脾细胞分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。     

OX40和OX40L在胃癌及癌前病变中的表达分析

目的研究Oxford 40（OX40）和OX40配体（OX40L）在胃癌及癌前病变中的表达及其意义。方法收集复旦大学附属中山医院内镜中心胃部内镜黏膜下剥离术标本43例,分为慢性非萎缩性胃炎、胃黏膜上皮轻中度不典型增生、胃黏膜上皮重度不典型增生或胃癌3组,采用EnVision二步法检测各种病变中OX40、OX40L的实质细胞表达,并分析其与病变临床病理特征的关系。结果 OX40的实质细胞表达在胃黏膜上皮重度不典型增生中较胃癌、胃黏膜上皮轻中度不典型增生、慢性非萎缩性胃炎中高（P〈0.05）。OX40L的实质细胞表达在胃黏膜上皮轻中度不典型增生、胃黏膜上皮重度不典型增生或胃癌中较慢性非萎缩性胃炎中高（P〈0.05）。结论 OX40、OX40L参与机体抗不典型增生和抗肿瘤免疫反应,其表达的变化可能与胃癌的发生、发展有关。     

Therapeutic strategies for the costimulatory molecule OX40 in T-cell-mediated immunity

The T cell co-stimulatory molecule OX40 and its cognate ligand OX40L have attracted broad research interest as a therapeutic target in T cell-mediated diseases. Accumulating preclinical evidence highlights the therapeutic efficacy of both agonist and blockade of the OX40–OX40L interaction. Despite this progress, many questions about the immuno-modulator roles of OX40 on T cell function remain unanswered. In this review we summarize the impact of the OX40–OX40L interaction on T cell subsets, including Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg, Tfh, and CD8⁺ T cells, to gain a comprehensive understanding of anti-OX40 mAb-based therapies. The potential therapeutic application of the OX40–OX40L interaction in autoimmunity diseases and cancer immunotherapy are further discussed; OX40–OX40L blockade may ameliorate autoantigen-specific T cell responses and reduce immune activity in autoimmunity diseases. We also explore the rationale of targeting OX40–OX40L interactions in cancer immunotherapy. Ligation of OX40 with targeted agonist anti-OX40 mAbs conveys activating signals to T cells. When combined with other therapeutic treatments, such as anti-PD-1 or anti-CTLA-4 blockade, cytokines, chemotherapy, or radiotherapy, the anti-tumor activity of agonist anti-OX40 treatment will be further enhanced. These data collectively suggest great potential for OX40-mediated therapies.     

紫草素对特应性皮炎小鼠TSLP/OX40L通路及Th1/Th2平衡的影响#br# #br#

摘要：目的　探究紫草素对特应性皮炎（AD）小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）/OX40配体（OX40L）通路及辅助性T细胞（Th）1/Th2平衡的影响。方法　采用局部外涂2,4-二硝基氟苯（DNFB）法制备AD小鼠模型。采用随机数字表法将模型小鼠分为模型组,紫草素低（20 mg/kg）、中（30 mg/kg）、高（40 mg/kg）剂量组和阳性对照组（泼尼松龙,10 mg/kg）,每组15只;另取15只作为正常对照组。各给药组大鼠按10 mL/kg灌胃相应药物,模型组和正常对照组灌胃等体积溶剂,每日1次,连续15 d。分别于给药后第5、10和15天观察小鼠搔抓行为;于给药后第7、15天评价小鼠皮损状况;末次给药结束后,HE染色观察小鼠皮损组织病理学变化;流式细胞术检测小鼠外周血中Th1/Th2比例;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中TSLP、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-4和干扰素（IFN）-γ水平;Western blot法检测小鼠皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平。结果　与正常对照组相比,模型组小鼠搔抓行为增加,皮肤炎性损伤加重;皮损组织中表皮和真皮区域均有密集的炎性细胞浸润,表皮增厚;外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,外周血Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平显著下降（P＜0.05）。与模型组相比,紫草素低、中、高剂量组小鼠第5、10、15天的搔抓行为减少,第7、15天皮肤炎性损伤依次减轻（P＜0.05）;小鼠表皮和真皮区域炎性细胞浸润和表皮增厚依次减轻,外周血Th2细胞、TSLP、TNF-α和IL-4水平以及皮损组织TSLP和OX40L蛋白表达水平依次降低（P＜0.05）,Th1细胞、Th1/Th2比例和IFN-γ水平依次升高（P＜0.05）。结论　紫草素可能通过抑制TSLP/OX40L通路维持AD小鼠外周血中Th1/Th2平衡,改善皮肤炎性损伤。     

抗CD40抗体增强宫颈癌肽疫苗的治疗作用

目的：探讨抗CD40抗体对宫颈癌肽疫苗治疗作用的影响。方法将乳头状病毒结构性蛋白 E7表位肽（ E749－57,H－2Db限制性,CD8 T细胞表位）与Toll样受体7配体（Gardiquimod）组成疫苗,C57BL／6小鼠给予疫苗及抗CD40抗体免疫后取得外周血及脾组织CD8 T细胞,利用流式细胞仪分析特异性CD8 T细胞数量,Elisa检测CD8 T细胞与TC－1细胞（表达HPV E7蛋白的小鼠宫颈癌细胞）共孵育后干扰素（ INF－γ）表达水平。另取15只皮下荷瘤小鼠,监测免疫后肿瘤生长速度。结果与单用疫苗组相比,抗 CD40抗体明显增加小鼠外周血肿瘤特异性 CD8 T细胞数量（16．50±0．8185％ vs 9．747±1．834％,P＝0．0282）,且内源性CD8 T细胞体外与TC－1细胞共孵育可以分泌INF－γ,体内显著抑制皮下肿瘤生长（ P＜0．001）。结论抗CD40抗体增强肽疫苗诱发的免疫应答,有潜力成为一种良好的佐剂。     

OX40、OX40L分子在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究OX40、OX40L分子在乳腺癌发生、发展中的作用。方法运用免疫组化S-P法检测OX40、OX40L分子在58例乳腺癌中的表达,并分析它们与乳腺癌临床病理指标的关系。结果OX40、OX40L分子在乳腺癌组织的阳性表达均显著高于正常乳腺上皮(均为P<0.01),且与临床分期、肿瘤瘤块大小均显著相关(均为P<0.01),与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论OX40、OX40L分子在乳腺癌中的发生、发展中起着不同程度的作用,其检测可对肿瘤恶性程度判定、预后判断和进一步治疗提供依据。     

辛伐他汀对变态反应性脑脊髓炎小鼠INF-γ和IL-10表达的影响

目的研究辛伐他汀(Simvastatin)对实验性变态反应性脑脊髓炎(experiment allergic en-cephalomyelitis,EAE)小鼠肿瘤坏死因子-γ(INF-γ)和白细胞介素-10(IL-10)表达的影响,探讨该药物对EAE保护作用的免疫调节机制。方法通过皮下注射MOG33-55肽段诱导小鼠急性EAE模型,实验分为EAE给药组、EAE对照组和正常对照组。观察各组小鼠体重等变化,测定EAE发病高峰期血清、培养的单核细胞及脾细胞培养上清液的INF-γ和IL-10水平。结果辛伐他汀能降低EAE小鼠的发病率,减轻了症状的严重程度,并能显著降低EAE小鼠血清、单个核细胞及脾细胞培养上清中INF-γ水平,升高IL-10水平。结论辛伐他汀可能通过其抑制INF-γ和上调IL-10的表达,调节免疫状态,从而对小鼠EAE起到保护作用。     

Cancer combinatorial immunotherapy using anti-OX40 agonist and anti-PD-L1 antagonist: a patent evaluation of US2018256711A1

Introduction: OX40 is checkpoint inhibitor in cancer that coordinates the downregulation of the proliferation of antigen-specific lymphocytes. There is a great need to discover and develop new therapies focused on inhibiting the action of OX40 and consequently improving the immune response in the various types of cancer. Authors of patent US2018256711A1 propose a method to eradicate cancer that utilizes anti-OX40 agonist antibody in combination with anti-PD-L1 antagonist antibody.

Areas covered: Patent US2018256711A1 describes a method of cancer combinatorial treatment consisting of the utilization of a pharmaceutical cocktail containing anti-OX40 and an anti-PD-L1 antibody.

Expert opinion: The results of the clinical trials only support trials regarding the tolerability of combinatorial therapy, even when the objectives of determining the safety and pharmacokinetics of the treatment are proposed.     

Antimetastatic effect of an immunomodulatory arabinomannan extracted from Mycobacterium tuberculosis strain Aoyama B,Z-100, through the production of interleukin-12

In this study, the role of interleukin (IL)-12 on the antimetastatic effect of Z-100 was investigated using wild-type C57BL/6 mice or IL-12p40 knockout (IL-12p40 KO) mice inoculated with highly metastatic B16F10 melanoma. When C57BL/6 mice were inoculated with B16F10 melanoma (2x10(5) cells/mouse i.v.), Z-100 (10 mg/kg i.p.) significantly suppressed the pulmonary metastasis of B16F10 melanoma 14 d after tumor inoculation. On the other hand, the antimetastatic effect of Z-100 was not observed in IL-12p40 KO mice inoculated with B16F10 melanoma. These results indicate that IL-12 is essentially required for the appearance of the antimetastatic effect of Z-100. Since helper T (Th) 2 cell responses have been reported to have a role in tumor metastasis, the regulatory effect of Z-100 on the immune balance of Th1/Th2 cell responses was investigated. In both C57BL/6 mice and IL-12p40 KO mice bearing B16F10 melanoma, Th1 cytokine production (IL-2, interferon-gamma) was significantly suppressed as compared with those in normal mice. On the other hand, Th2 cytokine production (IL-4, IL-10) in these mice was increased. The administration of Z-100 (10 mg/kg i.p.) in C57BL/6 mice bearing B16F10 melanoma improved the balance of Th1/Th2 cell responses from the Th2-dominant state to the normal state. However, the improvement of Th1/Th2 cell responses by Z-100 was not observed in IL-12p40 KO mice bearing the same tumors. In addition, Z-100 significantly increased IL-12 production by macrophages in a concentration-dependent manner, while Z-100 significantly decreased IL-10 production by these cells in vitro. These results suggested that up-regulation of IL-12 production and down-regulation of IL-10 production by Z-100 are related to the improvement of Th1/Th2 cell responses from the Th2-dominant state to the normal state, which resulted in suppression of tumor metastasis.     

PD-L1和OX40靶点肿瘤免疫疗法研究进展

恶性肿瘤作为危害人类健康最严重的疾病之一,其诱因较多、早期无明显症状且易发生转移.随着分子生物学技术的发展和对肿瘤病理机制深入研究,肿瘤免疫疗法逐渐成为人类研究的重点.其中免疫检查点PD-L1是肿瘤免疫治疗经典靶点,它可以与PD-1结合通过激活信号通路抑制T细胞活性,促进肿瘤生长.2016年,第一个PD-L1抑制剂阿特...