冠心病患者血清同型半胱氨酸、miR-1、miR-126和 miR-208的相关性分析

目的：结合冠状动脉狭窄程度,探讨冠心病患者血清同型半胱氨酸（ Hcy）与微小RNA（ miR-1、miR-126及miR-208）之间的相互关系。方法选取行冠脉造影术的患者共102名,根据造影结果分为对照组和观察组,检测Hcy、miR-1、miR-126及miR-208水平,同时对冠脉造影结果进行评价并计算Gensini积分,应用相关及线性回归分析Hcy、miRNA（ miR-1、miR-126、miR-208）以及Gensini积分的相互关系。结果观察组血清Hcy、miRNA（miR-1、miR-126、miR-208）水平均高于对照组,血清Hcy、miR-1和miR-126水平分别与Gensini积分呈正相关[相关系数（r）分别为0．575、0．649、0．499,P均＜0．01],偏相关分析校正后它们之间仍然呈正相关（ r’分别为0．693、0．621、0．532,P均＜0．05）;而血清Hcy与miR-1、miR-126水平亦呈正相关（r分别为0．513、0．56,P均＜0．01）,偏相关分析校正后排除年龄,体重指数,高血压和高脂血症病史的影响,其间仍然呈正相关（r’分别为0．599、0．614,P均＜0．05）,而与miR-208无显著相关性。结论血清Hcy、miRNA（miR-1、miR-126、miR-208）均是评价冠心病的独立危险因素,其水平均随着冠脉病变严重程度的加重而增加。     

miR-125b、miR-29a和miR-155-5p作为诊断结核性脑膜炎生物标志的研究

目的 探讨结核性脑膜炎患者脑脊液及血浆中 microRNA (miR)-125b、 miR-29a 和 miR-155-5p 的表达水平及其临床意义。方法 收集 20 例结核性脑膜炎患者（结脑组）和 20 例原发性头痛患者（对照组）的脑脊液和血浆, 分别提取总 RNA, 使用实时定量 PCR 方法分别检测脑脊液和血浆中 miR-125b、 miR-29a 及 miR-155-5p 的表达水平。结果 与对照组相比, 结脑组脑脊液、 血浆中 miR-29a、 miR-125b 表达水平明显上调, 结脑组血浆中 miR-155-5p 表达水平明显上调, 差异均有统计学意义 （均 P<0.01）, 而 2 组脑脊液中 miR-155-5p 表达水平比较差异无统计学意义。结论 miR-125b、 miR-29a 和 miR-155-5p 可能参与了调节结核性脑膜炎的发生、 发展过程, miR-125b和 miR-29a有可能作为潜在的诊断结核性脑膜炎的生物学标志。     

老年重症肺炎病人血清微小 RNA-146a、微小 RNA-223、微小 RNA-21、微小 RNA-124水平及其与预后的关系

目的探究老年重症肺炎病人血清微小 RNA(miR)-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及其与预后的关系。方法选取 2018年 2月至 2020年 3月郑州大学第二附属医院诊治的 128例老年重症肺炎病人、 130例普通肺炎病人分别为重症肺炎组、普通肺炎组,并纳入同期 128例体检健康者为健康组。比较三组血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;分析老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平与 TNF-α的相关性;比较不同预后老年重症肺炎病人临床资料和血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124水平;分析老年重症肺炎病人死亡的影响因素;分析血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α对老年重症肺炎病人预后的预测价值。结果普通肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 1.67±0.56、1.64±0.55、1.71±0.57、(12.78±4.30)ng/L,重症肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 2.32±0.78、2.27±0.76、2.39±0.80、(23.64±7.92)ng/L,高于健康组的 1.03±0.35、1.01±0.34、0.99±0.33、(5.43±1.84)ng/L、(P<0.05)普通肺炎组、重症肺炎组血清 miR-124表达水平分别为 0.71±0.24、0.37±0.13,低于健康组的 1.07±0.37(P<0.05);重症肺炎人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水组病,平高于普通肺炎组( P<0.05)血清 miR-124表达水平低于普通肺炎组( P<0.05);老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、 miR-21表达水平与 TNF-α呈正,相关( P<0.05)血清 miR-124表达水平与 TNF-α呈负相关( P<0.05);死亡组老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α水平及有,呼吸系统疾病史、吸烟史、机械通气占比高于生存组( P<0.05),血清 miR-124表达水平、氧分压水平低于生存组( P<0.05); miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α、机械通气是老年重症肺炎病人死亡的危险因素( P<0.05);血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α预测老年重症肺炎病人预后的曲线下面积( AUC)分别为 0.84、0.88、0.82、0.66、0.68,其灵敏度分别为 72.5%、80.4%、82.4%、60.8%、60.8%,特异度分别为 85.7%、81.8%、79.2%、67.5%、72.4%。结论老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平较高,与 TNF-α水平呈正相关; miR-124表达水平较低,与 TNF-α水平呈负相关。且测定血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平有助于临床预测老年重症肺炎病人的预后情况。     

Suppression of miR-21 and miR-155 of macrophage by cinnamaldehyde ameliorates ulcerative colitis

Ulcerative colitis (UC) is a major form of inflammatory bowel disease which involved mucosal immune dysfunction. Cinnamaldehyde (CA) is major active compound from cinnamon, a useful traditional medicine in Asia which shows superior antibacterial and anti-inflammatory activity. In this study, we investigated the effects of CA on UC both in vivo and in vitro. We showed that CA attenuated the symptoms of DSS-induced colitis, including loss of body weights, disease activity index (DAI), shortening of the colon lengths and infiltration of inflammatory cells. Moreover, CA decreased the pro-inflammatory cytokines and NLRP3 inflammasome, miR-21 and miR-155 in colon tissues, in addition, the percentage of macrophages was reduced based on the surface marker F4/80 and IL-10 secretion in CA-treated group, suggesting that the CA ameliorate the UC via activation of macrophage. Herein, the effects of CA on macrophage cells were examined in vitro. We found that CA reduced the level of proinflammatory cytokines, such as TNF-α, IL-1β, IL-6, in the activation of RAW264.7, human macrophage-like cells U937, and primary peritoneal macrophages. Furthermore, the suppression of NLRP3 inflammasome, miR-21 and miR-155 was also found in CA-treated LPS-stimulated RAW264.7 cells. CA also reduced the production of reactive oxygen species, the phosphorylation of AKT, mTOR and COX2 protein level in the RAW264.7. Meanwhile, data revealed that transferred miR-21 or miR-155 inhibitor suppressed levels of IL-1β and IL-6, whereas miR-21 or miR-155 mimics increased expressions of these, and CA suppressed these expressions. Our results indicate that CA could ameliorate DSS-induced colitis through inhibition of NLRP3 inflammasome activation and miR-21 and miR-155 levels in colons and macrophage, suggesting that CA might be a potentially effective drug for UC.     

miR-224和 miR-378e在大肠癌组织中的表达及其临床意义

【摘要】 目的 探讨miR-224 和 miR-378e 在原位大肠癌癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达差异， 并分析其临床意义。 方法 miRNA 表达谱芯片技术检测大肠癌癌组织和癌旁组织标本中表达差异的miRNA， 运用荧光实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）验证其结果，并分析其与临床病理资料之间的关系。 结果 miRNA 表达芯片分析发现， 与正常黏膜组织比较， miR-224在大肠癌组织中表达显著上调， miR-378e在大肠癌组织中表达显著下调， 并被 real-time PCR 所证实。 miR-224 在不同组织学类型癌组织中表达差异有统计学意义， miR-378e 在不同浸润深度癌组织中表达差异有统计学意义， miR-224 表达与组织学类型有关， miR-378e 表达与大肠癌浸润深度有关。 结论miR-224具有潜在的癌基因作用， miR-378e具有潜在的抑癌基因作用， miR-224和 miR-378e可作为     

miR-18a和miR-18b在结肠癌中的表达及其临床意义

目的 探讨miR-18a和miR-18b在结肠癌中的表达及其临床意义.方法 选取手术切除的原发性结肠癌标本20例,采用实时荧光定量PCR分析miR-18a和miR-18b的表达.结果 相对于癌旁组织,20例结肠癌组织中miR-18a表达下调(P＜0.05);其表达与TNM分期及浸润深度有关(P＜0.05).而miR-18b在癌组织中的表达则上调(P＜0.05),其表达与TNM分期、浸润深度和远处转移无明显关联.结论 miR-18a可能参与了结肠癌的发展.     

miR-223 敲减慢病毒的构建

目的 构建 miR-223 敲减慢病毒, 为进一步研究 miR-223 的功能提供工具。方法 采用 Invitrogen 公司miR-RNAi 在线设计工具, 根据 miR-223 成熟体序列设计了一对互补寡核苷酸片段,退火产物连接至 pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR 载体, 经酶切连入 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP 载体, 构建了 miR-223 敲减慢病毒质粒, 利用293T 细胞将其包装成病毒, 并感染 ST2 细胞, 观察感染效率并用 qRT-PCR 检测 miR-223 成熟体表达。结果 酶切鉴定及测序结果显示成功构建了 miR-223 敲减慢病毒载体, miR-223 敲减慢病毒包装并感染靶细胞, 表达绿色 GFP荧光蛋白的细胞约占细胞总数的 80%~90%, 病毒滴度为 1×109 PFU/mL, 感染效率达 90%。感染 miR-223 敲减慢病毒的细胞 miR-223 表达量（0.31±0.03）低于阴性对照（1.00±0.09）, 为阴性对照的 31%, 差异有统计学意义（n=3, t=15.091, P＜0.05）。结论 成功构建了 miR-223 敲减慢病毒,为进一步研究miR-223 的功能准备了条件。     

糖尿病心肌病与miR-1/miR-206和胰岛素样生长因子表达的关系

目的探讨糖尿病心肌病与miR-1/miR-206和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达量之间的关系。方法C57BL/6小鼠经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病心肌肥大模型,两个月后,取心脏组织,采用Real-Time PCR检测糖尿病心肌病相关基因心房钠尿肽(ANP),B型尿钠肽(BNP),转录共激活因子(P300)和IGF-1以及miR-1/miR-206表达。结果在糖尿病心肌病小鼠模型中,糖尿病心肌病相关基因ANP、BNP、P300、IGF-1基因表达水平显著升高(P<0.01)。同时miR-1/miR-206表达水平显著降低(P<0.01)。结论糖尿病心肌病小鼠miR-1/miR-206以及IGF-1的表达有显著变化,表明在糖尿病心肌病发病过程中可能是由miR-1/miR-206通过调控IGF-1的表达起作用。     

微小RNA-93与微小RNA-106b在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的检测喉鳞状细胞癌中mir-93与mir-106b的表达并分析其喉癌发生发展中的意义。方法利用looped-primer Real-time PCR检测喉鳞状细胞癌及癌旁正常石蜡包埋组织中mir-93、mir-106b的表达情况,并结合临床病理参数分析其临床意义。结果 (1)喉鳞状细胞癌中mir-93和mir-106b的表达量均高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P=0.017,P=0.019)。(2)mir-93和mir-106b的表达与临床分期呈正相关(r=0.380,r=0.467);mir-93和mir-106b的表达在T3、T4期较T1、T2期差异具有统计学意义(P=0.002,P=0.000);mir-93和mir-106b的表达与淋巴结转移呈正相关(r=0.442,r=0.300)。结论 mir-93和mir-106b的高表达可能会促进喉鳞状细胞癌的发生和发展,可能在喉癌分化、浸润、转移的过程中发挥重要作用。     

miR-27a和miR-181b表达水平在胃癌早期诊断的价值

目的研究外周血中miR-27a、miR-181b的表达水平在胃癌早期的诊断价值。方法采用RT-PCR法检测46例胃癌患者(A组)、27例胃癌前病变患者(B组)及21例健康人(C组)外周血浆中miR-27a、miR-181b的表达水平。结果与C组相比,A组和B组血浆中miR-27a、miR-181b的表达明显增加(P<0.01或P<0.05),ROC曲线下面积分别为0.876、0.770和0.769、0.749;而A组和B组miR-27a、miR-181b表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血浆中miR-27a、miR-181b有作为胃癌早期诊断标志物的潜力。     

炎症性肠病的微小 RNA-377、微小 RNA-31表达及其与肠道菌群相关性

目的探讨微小 RNA-377(miR-377)、微小 RNA-31(miR-31)在炎症性肠病血清中的表达及其与肠道菌群相关性。方法选取 2016年 5月至 2019年 6月保定市第一中心医院收治的 110例炎症性肠病病人为研究组,其中活动期 69例、缓解期 41例,同时选取同院体检的健康志愿者 60例为对照组;采用 qRT-PCR法检测血清 miR-377、miR-31的表达量;根据表达量平均值将病人分为 miR-377低表达组 53例、 miR-377高表达组 57例、 miR-31低表达组 57例、 miR-31高表达组 53例,比较分析 miR-377、 miR-31表达量与肠道菌群［肠球菌( EC)、酵母菌( SB)、双歧杆菌( BL)、消化球菌( PS)、小梭菌( CD)、肠杆菌( EMB)、葡萄球菌(SP)、拟杆菌(BD)、乳杆菌(LC)、真杆菌(ES)］数量的相关性;采用 ELISA法检测血清白细胞介素 -34(IL-34)、C反应蛋白(CRP)的水平;采用电化学发光法检测血清降钙素原(PCT)的水平;采用 Pearson法分析 miR-377、miR-31表达量与 IL-34、CRP、PCT水平的相关性。结果与对照组比较,研究组血清中 miR-377、miR-31的表达水平显著升高［(0.96±0.16)(2.23±0.50)(0.97±0.24)比     

miR-486、 miR-499 在肺癌患者血浆中的表达及临床价值

目的 探讨 miR-486 和 miR-499 在肺癌患者血浆中的表达及临床意义, 分析其在非小细胞肺癌 （NSCLC）和小细胞肺癌（SCLC）中表达的差异。方法 收集 35 例肺癌患者（其中 NSCLC 组 21 例, SCLC 组 14 例）及 30 例健康者（对照组）血样标本, 运用 qPCR 的方法测定各组血浆 miR-486、 miR-499 的表达量, 分析 NSCLC 和 SCLC 患者血浆中 miR-486 和 miR-499 的表达量与各临床特征的关系。对所有入组者血浆 miRNA 的相对表达量进行 ROC 曲线分析, 计算曲线下面积（AUC）、 最佳临界值及其敏感度和特异度。结果 NSCLC 和 SCLC 组中血浆 miR-486、 miR-499 的相对表达量均低于对照组（P＜0.05）。NSCLC 组血浆 miR-486 在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义; 而 TNM 分期越晚、 分化程度越低, miR-499 表达越低（P＜0.05）。SCLC 组分期越晚, miR-486 表达越低;而 miR-499 在不同临床特征患者间表达差异均无统计学意义。miR-486 诊断肺癌的 AUC 为 0.83（95%CI 为 0.73~ 0.93）, 敏感度和特异度分别为 90.0%和 68.6%, 最佳诊断界值为 1.02; miR-499 诊断肺癌的 AUC 为 0.75（95%CI 为 0.62~0.88）, 敏感度和特异度分别为 60.0%和 94.3%, 对肺癌的最佳诊断界值为 0.32。结论 血浆 miR-486、 miR-499 在肺癌患者中表达下调, 可能预示预后不良, 有望作为肺癌潜在筛查及预后的指标。     

LncRNA CDKN2B-AS1 relieved inflammation of ulcerative colitis via sponging miR-16 and miR-195

BackgroundThis study was aimed to explore the differential expression of lncRNA CDKN2B-AS1-miR-195-5p/miR-16-5p axis in ulcerative colitis (UC) and its role in regulating UC pathogenesis.MethodsOne hundred and eighty-seven UC patients and one hundred and fifty-two healthy volunteers were recruited, and their blood samples were collected. Inflammatory cytokines in serum were determined with ELISA, and lncRNA CDKN2B-AS1, miR-195-5p and miR-16-5p levels were detected with RT-PCR. Then pcDNA3.1-CDKN2B-AS1, si-CDKN2B-AS1, miR-195-5p mimic, miR-195-5p inhibitor, miR-16-5p mimic and miR-16-5p inhibitor were transfected into HT29 cells, and proliferation and apoptosis of the cells were assessed. Dual-luciferase reporter gene assay was implemented to identify the sponging relationship between lncRNA CDKN2B-AS1 and miR-195-5p/miR-16-5p.ResultsCDKN2B-AS1 level was negatively correlated with levels of inflammatory cytokines, including TNF-α, IL-6 and sIL-2R, yet miR-16-5p and miR-195-5p levels were negatively correlated with the CDKN2B-AS1 level. The CDKN2B-AS1 combined with miR-16-5p and miR-195-5p also achieved an optimum efficacy in differentiating between light and medium UC, light and severe UC, as well as medium and heavy UC. Furthermore, pcDNA3.1-CDKN2B-AS1 depressed expressions of IFN-γ, IL-8, IL-1β and TNF-α in HT29 cells (P < 0.05), and strengthened proliferation of the cells (P < 0.05). CDKN2B-AS1 also sponged and regulated miR-16-5p and miR-195-5p in HT29 cells, and miR-16-5p and miR-195-5p could reverse the effect of CDKN2B-AS1 on inflammatory cytokine production, barrier function and apoptosis of HT29 cells (P < 0.05).ConclusionLncRNA CDKN2B-AS1 regulated inflammation of UC by sponging miR-195-5p and miR-16-5p, providing an alternative for diagnosis and treatment of UC.     

miRNA－223,－99a 检测在儿童急性白血病中的临床应用

目的：探讨骨髓微小RNA（MicroRNA,miRNA）－223、－99a检测在儿童急性白血病（AL）中的临床应用。方法收集30例急性白血病患儿的骨髓染色及临床资料,分为复发组（ n ＝13）和缓解组（ n ＝17）,另选取健康体检儿童8例作为对照组,采用实时荧光定量PCR（ Realtime－PCR,RT－PCR）技术检测儿童骨髓miR－223和 miR－99a的表达。比较分析以上两标志物在儿童急性白血病疾病中的变化。结果复发组和缓解组miR－223和miR－99a表达与对照组比较,差异均有统计学意义（ P ＜0．01）;复发组miR－223和miR－99a表达与缓解组比较差异有统计学意义（ P ＜0．01）。复发组和缓解组miR－223和 miR－99a表达呈负相关（r值分别为－0．529、－0．587, P ＜0．01）。结论骨髓miR－223和miR－99 a表达与儿童急性白血病的病变发展有关,其可作为儿童急性白血病诊断和治疗的分子标志物。     

大鼠miR-142-3p、 miR-145-3p表达模式分析

摘要： 目的 筛选并鉴定对大鼠乳腺发育和泌乳调控起关键作用的微 RNAs （miRNAs）。方法 以 U6 为内参基因, 运用实时荧光定量 PCR, 比较 miR-142-3p、 miR-145-3p 在泌乳 21 d 大鼠乳腺、 肝、 心、 脾、 肺、 肾、 卵巢、 子宫各器官的组织样品表达量的差异及不同泌乳阶段 （1、 7、 21 d） 乳腺组织 miR-142-3p、 miR-145-3p 的表达规律。结果 miR-142-3p 在泌乳 21 d 各组织的表达存在差异, 乳腺中的表达量显著高于心、 脾、 肺、 肾、 卵巢和子宫, 仅次于肝中的表达量 （P < 0.05）。miR-145-3p 在乳腺中的表达量显著高于肝、 脾和肾, 而在心、 肺、 卵巢和子宫中差异无统计学意义 （P > 0.05）。乳腺组织在泌乳 1、 7、 21 d 比较, miR-142-3p 的相对表达量持续下调, 而 miR-145-3p 的相对表达量先下调后上调。结论 miR-142-3p 和 miR-145-3p 在大鼠各组织及不同生理时期存在表达差异; miR-142-3p 可通过调节靶基因催乳素受体 （Prlr） 来调控乳腺的发育和泌乳的形成, miR-145-3p 可能具有与 miR-145、 miR-145-5p 相似的功能。     

血清miR-122和miR-155在丙戊酸钠诱导小鼠仔鼠肝损伤中的表达

目的探讨血清miR-122和miR-155在丙戊酸钠(VPA)致小鼠仔鼠肝损伤过程中的动态表达及其与肝损伤的关系。方法 4周龄昆明小鼠按随机数字表法分为对照组30只和实验组56只。实验组又分为7组,分别给予VPA 375 mg·kg-1·d-1连续灌胃1、3、5、7、14、21和28 d;对照组又分为5组,分别于1、7、14、21和28 d给予1 mL生理盐水灌胃,留取血清及肝组织。HE染色观察肝组织病理改变;全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST);实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测血清miR-122和miR-155表达水平。结果肝组织病理学结果显示,实验组肝细胞出现不同程度的空泡变性。3、5、7 d时肝细胞胞浆内可见少量炎性细胞,21 d时大量肝细胞变性坏死,28 d时大量肝细胞再生。血清ALT与AST均呈现下降-升高的趋势。实验组给药后miR-122表达水平下调,7 d时降至最低点(下降了81%),之后上调;而miR-155的表达趋势与miR-122相反,7 d时达到最高点,是对照组的2.88倍。miR-122与ALT和AST呈正相关(rs...