615小鼠胚胎移植初探

目的 提高615小鼠胚胎移植成功率。方法 采用经超量排卵的615雌鼠与正常雄鼠交配，取受精卵，再经手术分别将单胚卵、双胚卵移入发情的假孕雌鼠的输卵管中，妊娠产仔。结果 单胚卵移卵后妊娠率为63．3％、产仔率为35．8％；双胚卵移入第1．5天、第0．5天的假孕雌鼠妊娠率为0.72％，后者的产仔率为52．7％；结论 移植双胚卵可提高615小鼠的胚胎移植成功率。     

哺乳动物着床过程的形态学和功能变化

受精以及受精卵的早期发育,发生在输卵管中,一般动物为3～4天;也有长达16天者,如蝙蝠。进入子宫后的胚胎发育阶段,不同种属也有差异,一般是发育到桑椹期或胚泡早期;也有发育到具有内胚层的胚泡期才进入子宫的,如蝙蝠。着床时间一般开始于交配后6～7天,食肉类为12～13天,牛在20天以后,而大鼠、小鼠在交配后5天着床。着床是发生在胚泡滋养外胚层与子宫内膜之间的一个极其复杂的生理过程,包括一系列形态、生理及生化方面的变化。     

家兔生殖生理的主要指标

11一J.J.....,..ei,.‘.“刃,..月.月...月..,;J ......,..月J,,.、....d排卵前LH峰值(交配后、小时)1~2囊胚腔形成LH水平系列变化(ng/ml血清)受精部位 交配前22沿输卵管下行速度 交配后30分钟154自卵巢至壶腹一峡部接合处(分钟, 60分钟1,110进入卵丘凝栓) 90分钟885胚胎进入子宫(交配后,小时) 12。分钟1,343着床时间(交配后、天) 300分钟245妊娠期(天) 1天40精子获能时间(小时) 5天38射精量(毫升)排卵时间(交配后、小时)93/‘~131/:精子数(百万/毫升)受精时间(排卵后、小时)(精子钻入卵子)1~2精子抵达受精部位时间(小时)卵裂速度(交配…     

家兔早期胚胎标本的制作

在胚胎学的教学中,早期发育标本多取材于鸡胚,学生无法观察到从受精卵到胚泡的真实标本。为了满足需要,我们制作了家兔受精卵到胚泡变化过程的标本。现将方法介绍于后。一,为使交配成功,预先选择好雌雄家兔。初次交配最适兔龄,雄兔10个月,雌兔8个月,发育良好。雌兔必须在动情期,可见其外阴呈紫红色,肿胀,分泌物多。此外,雌兔在分娩后第1～2天,流产后第3～4天,出现发情,也可进行交配。从交配成功之时算起(交配成功的标志是雄兔自雌兔背上跌倒在地,“咕”叫一声),分别在不同时间,于耳缘静脉注射空气致死孕兔。剖腹取出卵巢、输卵管及子宫。二、在输卵管与子宫交界处剪断,用10mL注射器     

体外受精与卵母细胞单精子显微注射周期中不同受精过程对胚泡形成的影响

目的:比较体外受精(IVF)或卵母细胞单精子显微注射(ICSI)中胚泡与早期卵裂胚胎的质量。设计:回顾性研究。机构:第三不孕治疗中心。患者:对104例患者同时获取的同胞卵母细胞分别进行IV F或ICSI。干预:随机选择卵丘复合体(n=1358)进行IV F或ICSI。主要观察指标:胚胎发育与胚泡形成率。评估胚泡质量与周期效率。结果:ICSI中早期胚胎卵裂率(37.1%)高于IVF(14.1%)。两种操作方法受精后第2天<4-细胞胚胎与第3天<8-细胞胚胎比例相近。ICSI与IVF总体胚泡形成率无差异(ICSI50.2%vsIVF54.8%),高质量胚泡比例亦无差异(ICSI31.3%vs I…     

大鼠胚泡着床障碍动物模型的建立

目的 建立大鼠胚泡着床障碍动物模型.方法 将与雄性大鼠交配后的成年雌性SD大鼠随机分为正常组、小剂量组(5 mg/kg)、中剂量组(6 mg/kg)、大剂量组(8 mg/kg),小剂量组、中剂量组、大剂量组于妊娠第3天皮下一次性注射不同剂量的米非司酮,于妊娠第8天观察大鼠胚泡着床率及平均着床胚泡数,筛选最佳造模剂量.结果 与正常组相比,小剂量组和中剂量组着床率和平均着床胚泡数均显著降低(P＜0.01).中剂量组的着床率和平均着床胚泡数低于小剂量组组,差异无统计学意义(P＞0.05).当剂量达到8 mg/kg时,胚泡着床被完全抑制.结论 于妊娠第3天皮下注射5 mg/kg的米非司酮,可建立稳定可靠的大鼠胚泡着床障碍模型.     

紧急避孕的时间选择

紧急避孕是指未防护的性交或避孕措施失败后几天内采用的一种紧急补救措施 ,目的是预防非意愿妊娠发生 ,以减少人工流产率。每个妇产科医生都应该掌握紧急避孕知识和技能 ,及时为妇女提供各种紧急避孕服务。1　紧急避孕药物的作用机理与效果的计算紧急避孕药物的作用机理随用药时间的不同而异。排卵前用药可抑制卵泡生长发育 ,阻止排卵或使排卵延迟。排卵后用药作用于子宫内膜 ,孕卵受精后一般 5～ 6天到达宫腔 ,紧急避孕药常在性交后 72小时内服用 ,使药物有足够的时间作用于子宫内膜 ,致使胚泡不能着床。宫内节育器的作用机理为干扰受精和…     

婴幼儿急性肠套叠延迟诊断15例

婴幼儿肠套叠是小儿外科最常见的急腹症之一。我院自 1 988年 1月～ 1 998年 1 2月共收治婴幼儿急性肠套叠 79例 ,其中有 1 5例在病程超过 48小时后才明确诊断。现分析如下 :1　临床资料本组男 9例 ,女 6例 ,年龄 6个月～ 2 7个月 ,平均 1 1 3个月。其中 6个月～ 1 2个月 8例 ,占 5 3 3% ;1 3个月～ 1 8个月 4例 ,占2 6 7% ;1 8个月以上 3例 ,占 2 0 %。起病至来院就诊时间 2～ 2 7小时 ,平均 1 7 5小时。起病至确诊时间 ,48～ 72小时 1 1例 ,占73 3% ;72小时以上 4例 ,占 2 6 7% ;最长 1例达 88小时。临床表现 :陈发性哭闹 1 5例 ,占 1 …     

体外受精-胚胎移植后输卵管残端妊娠一例

患者,28岁,G3P0.6年前曾两次人工流产、一次左侧输卵管妊娠行左侧输卵管切除术,至今未孕.本次因右侧输卵管积水、左侧输卵管已切除而行体外受精-胚胎移植助孕.采用GnRHa-FSH-HCG长方案超排卵,共获卵7只,均受精,经体外培养3天,选择4个胚胎(其中4细胞期1个,6细胞期2个,8细胞期1个),在B超引导下移入宫腔内,术后平卧2小时.     

外伤性闭合性肠破裂的诊治

我院 1990年 12月～ 2 0 0 0年 12月收治外伤性闭合性肠破裂 5 0例 ,占同期腹部外伤 6 2 5例的 8% ,现报道如下。1　临床资料本组 5 0例 ,男 42例 ,女 8例 ;年龄 4～ 6 8岁。入院时间最短 1小时 ,最长 4天 ,入院距手术时间最短 2小时 ,最长 2 4小时。交通肇事致伤 2 5例 ,挤压伤 12例 ,坠落伤 5例 ,其它损伤 8例。损伤部位 :十二指肠 3例 ,小肠 38例 ,结肠 9例。2　治疗结果治愈 48例 ,死亡 2例 ,死亡率 4%。3　讨论3.1　早期诊断　肠裂后 ,肠内容物进入腹腔 ,迅速导致弥漫性腹膜炎 ,若诊断不及时 ,将严重影响治疗结果 ,我们通过临床观察 ,…     

两种2-细胞鼠胚体外培养方法比较

目的应用鼠胚质控中的小鼠胚胎体外培养模型,探讨两种胚胎培养方式（四孔皿与微滴法）在单胚观察时间上的差异以及对2-细胞鼠胚体外发育潜能的影响。方法取6-8周龄的昆明白雌性小鼠。采用HMG10IU促排卵,48 h后注射HCG 10IU促卵泡成熟,取形态正常的2-细胞鼠胚。每5-10个胚胎培养在含500μL培养基的四孔皿中（A组）,或单个胚胎接种在含50μL的培养微滴中（B组）。培养后,每隔24 h在倒置显微镜下观察一次,计算单胚观察时间,并检测24 h时的≥4细胞胚形成率、48 h的融合胚形成率7、2 h的囊胚与扩张囊胚形成率、96 h囊胚孵化率。结果两种培养方式于同一试验条件下分别试验5次,A组培养83个胚胎,B组培养69个2-细胞鼠胚。在每一个观察点上,微滴培养的单胚观察时间远超过四孔皿培养（P〈0.001）。但两组各时间点的胚胎发育率相似,无显著差异（P〉0.05）。结论尽管微滴单胚培养方式的胚胎暴露培养箱外时间长,但与四孔皿多胚培养方式比较,两者间2-细胞鼠胚的体外发育潜能相似。     

着床期小鼠子宫内膜Trophinin基因表达研究

目的:研究细胞粘附分子Trophinin在着床期小鼠子宫内膜的表达.方法:收集孕1～6天的小鼠子宫内膜,采用RT-PCR技术测定Trophinin mRNA的表达水平.结果:未孕鼠及孕D1、D2未检测到其表达,孕D3、D4、D5大量表达,D6仅有少量表达或不表达.结论:Trophinin mRNA在小鼠子宫内膜的表达时间与胚泡着床时间一致,提示Trophinin可能参与了胚泡对子宫内膜的粘附.     

妊娠第3天高质量胚胎数目可预测体外受精(卵母细胞单精子显微注射)周期中的妊娠率和胚泡着床率

本研究旨在评估妊娠第3天高质量胚胎数目(胚胎达8个细胞期,分裂率<20%)对胚泡着床率和妊娠率的预测价值。在一私立体外受精(IVF)中心进行前瞻性观察研究,选择189例妇女行IVF(卵母细胞单精子显微注射),并至少有4个受精卵,在第3天移植3个胚胎。对受试者妊娠率和胚泡着床率进行比较。所有受试者均接受了3个胚胎的移植。根据第3天高质量胚胎的数目,将受试者分为5组(分别为0,1,2,3,>3)。5组妊娠率分别为2.9%,33.3%,45.5%,39.4%和64.3%;胚泡着床率分别为2.0%,17.0%,20.5%,19.3%和35.7%。对1,2和3组进行比较,妊娠率和胚泡着床率无显著性差异(当…     

实验小鼠问答(续二)

(65)雌小鼠是否在动情期排卵? 答;雌小鼠是在动情周期中的动情期排卯。一般自发排卵发生在动情期开始后8-11小时,但也有2-3小时内即排卵者。 (66)雌小鼠动情期历时多久? 答:小鼠属于自发性排卵和多动情期的哺乳类动物,但由于遗传,营养、环境等因素的影响,动情周期中的动情期也常有差异。在每天光照14小时(5:00-19:00)和暗期10小时(19:00-5:00)的实验室条件下,动情期常从16:00开始,持续约14小时(也有报告6-12小时的)。在此期间,雌鼠处于愿意与雄鼠交配的状态。 (67)雌小鼠产后动情发生在何时? 答:雌小鼠产后动情期发生很早,大约在产后21-28小时,甚至6-12小时或更短,但下一次动情期     

人类胚胎干细胞技术的操作过程

目前在研究中使用最普遍的胚胎是冷冻胚胎 ,即不育治疗诊所多余的或废弃的胚胎 ,它们是用不育夫妇的精卵培育的人工受精胚胎 ;第 2种是新胚胎 ;第 3种是克隆胚胎 ,即用人类细胞克隆的胚胎。人类受精卵在发育 5ｄ后的胚胎被称为胚泡 ,胚泡是个针尖大小的细胞球。在第 6天 ,胚泡内部的细胞群开始形成 ,细胞群中含有适合研究用的干细胞 ,这些细胞事实上能够形成人体的所有细胞 ,如果植入子宫中 ,它们将转变为胎儿。科学家从胚泡中取出干细胞 ,然后放到培养液里。他们可以在培养皿中让干细胞生长成多种不同的组织 ,包括可以跳动的心脏细胞 ,但这…     

茶多酚对醋氨酚致大鼠胚泡微核诱导作用的影响

作者采用细胞生物学与细胞遗传学方法，评价茶多酚（TP）对醋氨酚（Ace）致大鼠着床前胚泡遗传物质损伤的预防作用。结果表明，大鼠孕第3天igAce0．5g/kg（阳性阴道涂片为孕第0天），呈明显的胚泡微核诱导作用，胚泡微核率为122‰，具微核胚泡率为33．3％，而孕第0～3天每天igTP0．1、0．2和0．4g/kg后再给同剂量Ace，则胚泡微核率和具微核胚泡率均显著降低，分别为6．2‰、4．1‰、3．7‰和18．3％、14．3％、12．5％，并呈良好的剂量依赖关系。提示TP对Ace致大鼠胚泡遗传物质损伤有预防作用，其机制可能与抑制细胞色素P450的活性，降低Ace在体内代谢有关。     

超排卵对着床的影响及中药帮得孕的改善作用

目的:观察超排卵对小鼠着床的影响和中药帮得孕的改善作用。方法:仿照临床超排卵方案,运用腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)10IU,于48h后注射绒毛膜促性腺激素(HCG)10IU的方法造模。观察妊娠第8天正常组、超排卵组、不同剂量帮得孕组小鼠胚泡着床率和平均胚泡着床点数。伊文思蓝染色观察妊娠第5天子宫内膜血管通透性情况,HE染色观察妊娠第5天子宫内膜蜕膜化情况,免疫组化和Western blot方法观察妊娠第5天子宫内膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果:与正常组相比,超排卵组着床率明显下降(P<0.05),与超排卵组相比,帮得孕各剂量组着床率均明显提高(P<0.05);超排卵抑制小鼠子宫内膜血管渗透性,延缓子宫内膜蜕膜化,抑制子宫内膜MMP-9表达,中药帮得孕则有利于促进子宫内膜血管渗透性、促进内膜蜕膜化、促进MMP-9表达。结论:超排卵可致着床障碍,与超排卵药物抑制血管渗透性、抑制子宫内膜蜕膜化和抑制内膜基质降解有关,帮得孕可以一定程度上降低和抵消超排卵这种不良的影响,有利于胚泡成功着床。     

解剖、生理和组胚学

041 767　小鼠胚泡黏附时子宫内膜Galectin - 1的变化 /潘　卫…∥生殖与避孕 — 2 0 0 4 ,2 4 ( 3) —1 2 9～ 1 34采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析妊娠d5小鼠胚泡黏附时着床点、着床旁子宫内膜总蛋白 ,以同龄未交配鼠子宫内膜为对照 ,差异蛋白质组学显示PI约 5 1、分子量约 1 5ku的蛋白点在着床点、着床旁子宫内膜表达上调 ,且在着床点更明显。对此蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间 ,质谱测定其胶内酶解后的肽质量指纹谱 (PMF)。结果 :Mascot∶PMF在SWISS -PROT数据库查询为鼠源性Galectin- 1。RT -PCR结果显示d5孕小鼠…     

早胚发育期兔输卵管蛋白的初步研究

输卵管蛋白在受精、克服早期胚胎发育阻滞起着非常重要的作用,在早胚发育的某一时段,特异性糖蛋白(OviductGlycoproteinOGP)已得到深入研究。本研究从胚胎早期发育的过程,对输卵管蛋白的分泌和OGP及相关分子对胚胎早期发育的影响进行了初步研究。1　材料和方法11　选择6～8kg普通级雌性新西兰白兔30只;30～35gSPF级雌性KM小鼠50只。选用交配后34～36h(2细胞期)、36～48h(4细胞期)、58～60h(16细胞期)的实验兔分别10只,每个输卵管用去离子水1ml冲洗收集。样品3500rmin,取上清液752紫外分光光度计测蛋白浓度。样品抽真空,再定容稀释至4m…     

层粘连蛋白在小鼠胚胎早期发育期间的表达与分布

目的:研究发育不同阶段早期小鼠胚胎中层粘连蛋白(1aminin,LN)的表达与分布变化,以进一步探讨LN与胚胎细胞分化及着床的关系.方法:取植入前发育不同阶段的单个小鼠胚卵,应用免疫荧光间接法和酶免疫组织化学ABC等方法观察早期胚胎中LN的表达时间、强弱及分布状况.结果:从原核期、Ⅱ细胞期至Ⅷ细胞期胚,卵裂球内均可见LN强免疫荧光或棕色LN阳性反应颗粒,卵裂球外间质中LN则为阴性反应.到桑椹胚期,卵裂球内及间质中同时出现LN阳性反应物质.早期胚泡中LN主要分布在内细胞团,滋养层细胞间质中也有分布.晚期胚泡滋养层细胞内LN表达增强,细胞间质中转为阴性,近内细胞团侧的滋养层与内细胞团处,均表达出LN强阳性反应.结论:早期小鼠胚胎的卵裂球中含有LN;桑椹胚期LN在细胞间质中出现;胚泡侵入子宫内膜期间近内细胞团侧的滋养层细胞及内细胞团中的LN含量增加;小鼠早期胚胎中LN与其发育及粘附着床正相关.