自然杀伤细胞在机体免疫中的作用及机制研究进展

<正>自然杀伤细胞由造血干细胞分化发育而来,成熟的NK细胞主要分布于肝、脾和外周血,骨髓中含量很少。NK细胞占人外周血淋巴细胞的10%~20%,在肝脏中约占30%,但在发生一些肝脏疾病时,NK细胞比例可达90%[1]。NK细胞是具有细胞溶解作用、能够分泌免疫调节因子的效应淋巴细胞。NK细胞与T/B淋巴细胞不同,它同时具有固有免疫和适应性免疫的特征。本文主要阐述NK细胞调     

人脾内自然杀伤细胞的不均一性

自然杀伤(NK)细胞约占外周血淋巴细胞的10～15%,是一组不均一的淋巴细胞亚群。它具有非MHC 限制性溶解肿瘤细胞和抗病毒感染的能力,此外NK 细胞还有调节免疫反应及造血功能的作用。随着NK 细胞作用的研究进展,其在器官组织中的分布及其与功能的联系的研究变得越来越重要了。NK 细胞特异性抗体NKH1(CD56)的研制有助于NK 细胞的作用及其表面分子的研究。最近有许多文章报道了人外周血NK 细胞的分布及其不均一性。现认为NK 细胞是     

NK细胞可溶性KIR3DL1分子检测双夹心ELASA的建立

<正>自然杀伤细胞(natural killer cells,NK细胞)是固有免疫中一类十分重要的淋巴细胞,约占循环淋巴细胞总数的15%。目前根据CD56和CD16的表达水平可将NK细胞分为CD56hi、CD56dim和CD56-CD16+3个亚群。由于NK细胞不表达T细胞受体(T cell receptor,TCR)和B细胞受体(B cell receptor,BCR),如何区别"自己"和"非己"一直是个     

中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及功能研究

目的通过研究中国恒河猴外周血淋巴细胞免疫表型及其功能, 为以恒河猴为模型的研究提供数据参考。方法通过优选抗体克隆和荧光配色, 确定了主要淋巴细胞亚群检测和T细胞功能检测Panel, 并用此方法分析15只健康中国恒河猴外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中T、B、NK等多种细胞亚群的比例, 以及在非特异性刺激条件下T细胞分泌细胞因子的能力。结果成功建立了两套多色流式Panel, Panel 1可同时检测细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T-lymphocyte, CTL)、滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell, Tfh)、调节性T细胞(regulatory T cells, Treg)、B细胞和NK细胞等多种淋巴细胞亚群, Panel 2可检测多种T细胞亚群功能和免疫检查点分子的表达。中国恒河猴PBMCs中主要淋巴细胞亚群比例的平均值分别为T细胞(75.32±7.73)%、B细胞(13.22±7.50)%、NK细胞(0.88±0.48)%、Tfh细胞(0.73±0.27)%、Treg细胞...     

肝脏天然免疫系统对HBV感染及肝脏免疫致病的新解释

近期研究表明，肝脏NK细胞、NKT细胞、γδT细胞占肝脏淋巴细胞总数的2／3左右，如此庞大的肝脏天然免疫淋巴细胞在乙型肝炎病毒(HBV)感染及其免疫致病中发挥何种效应，引起了学者们的高度关注。传统理论认为CD4^ T细胞和CD8^ T细胞在抗HBV感染及其引起的免疫损伤中起主导作用，但仅占肝脏淋巴细胞总数1／3的这类T细胞能否承担肝脏抗HBV免疫与损伤的全部职责，值得重新定位。     

早孕外周血及蜕膜中NK细胞表型及T淋巴细胞亚群的变化

目的: 检测孕妇外周血及蜕膜中T淋巴细胞亚群和NK细胞表型, 探讨它们与母-胎界面免疫耐受的关系.方法: 收集20例早孕同一患者的蜕膜组织及外周血, 密度梯度离心法分离出淋巴细胞, 流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、 T细胞含量及其表面分子CD16、 NKG2A、 NKG2D表达水平.结果: 蜕膜自然杀伤(dNK)细胞占蜕膜淋巴细胞(57.15±4.0)%, 外周血自然杀伤(pNK)细胞占外周血淋巴细胞(11.46±1.58)%; dNK细胞表面CD16的表达明显低于pNK细胞, 二者分别(10.3±3.9)%与(95.6±2.6)%(P＜0.05); dNK细胞表面NKG2A的表达明显高于pNK细胞, 二者分别为(87.10±4.5) %与(27.5±4.2)% (P＜0.01), dNK细胞NKG2D的表达水平与外周血NK细胞相近, 分别为(88.70±4.1)%与(93.10±3.6)% (P＜0.05); 蜕膜中的CD4 T淋巴细胞的表达低于外周血中CD4 T淋巴细胞, 二者分别为(13.70±1.0)%与(15.85±2.4)% (P＜0.05), 蜕膜中CD8 T淋巴细胞表达明显低于外周血中CD8 T淋巴细胞, 二者分别为(15.23±1.5)%与(18.85±1.73)%(P＜0.01).结论: 妊娠期蜕膜中的NK细胞及T淋巴细胞可能是同维持母-胎界面的免疫耐受的重要原因.     

导入NKG5—SV基因增强细胞杀伤活性的研究

目的研究免疫效应蛋白NKG5的拼接异构体基因NKG5-SV导入外周血自然杀伤细胞(NK细胞)对其杀伤活性的影响.方法Percoll细胞分离液分离外周血NK细胞,流式细胞仪检测分离后CD56阳性细胞浓度.以逆转录病毒为载体将NKG5-SV基因和对照基因LacZ导入NK细胞,Northernblot检测NKG5-SV的表达,K562细胞杀伤实验检测病人NK细胞转染NKG5基因前后和正常人NK细胞的NK活性.结果Percoll分离后的淋巴细胞CD56阳性细胞为77.44%,分离前为15.88%.病人NK细胞经NKG5-SV基因转染后NKG5-SVmRNA表达增高.病人NK细胞、NK-LacZ细胞、NK-NKG5-SV细胞和正常人NK细胞对K562的杀伤活性分别为5.96%±0.38%、6.03%±0.42%(P＞0.05)、27.67%±0.18%(P＜0.01)、30.33%±0.83%(P＜0.01).结论免疫效应蛋白基因导入NK细胞,可增强NK细胞的杀伤活性.     

T-bet和Eomes对细胞免疫功能的调控作用

T-box expressed in T cells(T-bet)和Eomesodermin(Eomes)是调控I型效应T细胞的重要转录因子,对CD4I型辅助T细胞(Th1细胞)、NK细胞、CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)等的分化发育和功能调控有重要作用。机体的抗肿瘤免疫主要依赖T淋巴细胞介导的适应性免疫应答和NK细胞介导的固有免疫应答。T-bet和Eomes通过调控这些免疫细胞影响抗肿瘤免疫应答,对肿瘤的发生、发展及转归有重要意义。     

自然杀伤细胞活化性受体及其配体的研究进展

自然杀伤细胞(NK)是固有免疫应答的重要淋巴细胞,其在抗肿瘤、抗病毒免疫应答中发挥关键性作用.然而,肿瘤、病毒可通过调控相应配体、受体的表达影响NK细胞活性,形成相应的免疫逃逸机制.故对NK细胞活化性受体、配体及其生物学功能的研究很有意义.     

NK细胞的活化及其介导的抗病毒作用

NK细胞是一类独特的淋巴细胞亚群,占人外周血淋巴细胞的10%～15%,其表面标志为CD3-CD19-CD16+CD56+。根据CD56分子的表面密度,将NK细胞分为:CD56bright和CD56dim两个亚群,前者以分泌细胞因子为主,后者以杀伤功能为主。NK细胞不表达T细胞的表型(CD3或TCR),也不表达B细胞的表型(CD19或BCR)。NK细胞具有如下特点:①强大的细胞毒活性。它对刺激因素产生的应答十分迅速,而且免疫应答强度高。②杀伤活性无需抗原刺激,也不受MHC分子的限制。病毒感染或恶性转化细胞的     

白细胞介素对NK细胞的调控作用及其分子机制

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是一种大颗粒淋巴细胞,能够介导非特异性免疫应答,在机体抗肿瘤、抗感染等过程中发挥重要作用。白细胞介素通过影响NK细胞的分化、成熟、增殖和细胞毒作用参与对其免疫功能的调控。本文综述了白细胞介素对NK细胞功能的调控作用及其可能的分子机制。     

恢复期SARS患者淋巴细胞亚群分布及其与T淋巴细胞Ag-NOR含量相关性的初步分析

目的　通过检测恢复期SARS患者外周血淋巴细胞亚群分布及其与T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白 (Ag NOR)含量的相关性分析 ,探讨恢复期SARS患者的免疫状态及淋巴细胞亚群与活性状态改变的关系。方法　以流式细胞术检测患者外周血淋巴细胞亚群 ,用KL型免疫图像分析系统检测外周血T淋巴细胞Ag NOR ,对两者进行相关分析。结果　恢复期患者T淋巴细胞总数及CD4 +亚群基本正常 ,而CD8+亚群偏高 ,CD4 +/CD8+降低 ,CD4 +/CD8+<1的比例占 37.4 % ,激活T细胞中以CD8+细胞为主。B细胞比例正常。NK细胞明显低于对照组。重症患者CD4 +、CD4 +/CD8+、CD1 9+CD5+降低及CD8+、CD3+HLA DR+升高。 50岁以上及使用大剂量激素患者CD3+HLA DR+升高。淋巴细胞Ag NOR的含量 (IS % )在正常范围 ,但患者IS值呈偏态分布 ,低于正常范围者占 4 4.99%。淋巴细胞Ag NOR的含量与CD3+、NK、CD3+HLA DR+、CD3+CD2 5+在统计学上具有相关性。结论　恢复期SARS患者免疫功能趋于恢复正常 ,但部分患者的淋巴细胞亚群数量及淋巴细胞活性仍未恢复正常 ,这些病人在临床症状得到改善之后 ,尚需一定时间的观察随访 ,以了解SARS病毒对人体免疫机能的长期影响。     

CD34~+CD38~+造血干细胞移植MISTRG小鼠的人源化免疫特征研究

目的研究人脐带血CD34~+CD38~+造血干细胞移植入MISTRG免疫缺陷小鼠体内的人源化免疫特征。方法利用Ficoll密度梯度离心法从新生儿脐带血中分离单个核细胞,并结合免疫磁珠法分选hCD34~+造血干细胞,然后经体外扩增培养后利用流式细胞技术检测CD34~+CD38~+细胞的比例。取2×105细胞数注射至辐照后的新生MISTRG小鼠肝脏内,分别于第3、6、9、12周采血检测人源免疫细胞的分化与表达情况。结果免疫磁珠法分选人的CD34~+CD38~+造血干细胞纯度高达92.0%。移植小鼠外周血中的hCD45~+细胞初始浓度水平大于10.0%,淋巴细胞群包含人源T(hCD3~+CD45~+)、B(hCD3-CD19~+)和NK(hCD3-CD56~+)淋巴细胞,其中B(hCD3-CD19~+)淋巴细胞所占比值最大(初始水平为49.0%±7.4%),髓系细胞群则主要由巨噬细胞组成(初始水平为82.3%±4.5%)。小鼠外周血中hCD45~+细胞比值和T细胞占免疫细胞的比值随着时间的推移逐渐下降,B淋巴细胞和巨噬细胞所占的比例逐渐升高,而NK细胞基本完全消失。结论人源CD34~+CD38~+造血干细胞在新生MISTRG小鼠中可有效分化为人源淋系和髓系免疫细胞。在移植后的12周内hCD45~+细胞的比例逐渐下降,MISTRG免疫缺陷小鼠最佳的人源化免疫系统维持时间为第3～6周。     

自体外周血造血干细胞移植后造血重建中CD226分子在NK细胞上表达的变化

本文应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察自体外周血造血干细胞移植患者造血重建中,CD226分子在CD56bright和CD56dimNK细胞亚群表达的变化.结果显示,在自体外周血造血干细胞移植造血重建中,于干细胞回输第12天,CD56 NK细胞占外周血淋巴细胞百分率为26.6%,其中CD56bright亚群,占CD56 NK细胞87.3%;CD56 CD226 细胞占CD56 NK细胞92.1%,CD56brightCD226 细胞占CD56 CD226 细胞89.9%.在自体外周血造血干细胞移植造血重建中,CD56bright亚群是NK细胞造血重建最早出现并占优势的一个亚群, CD226分子可能作为一种分化标记主要表达在CD56bright亚群上.     

NKT细胞:独特的T淋巴细胞亚群

NKT细胞是一种特殊类型的T淋巴细胞 ,同时表达NK细胞和T淋巴细胞标记 ,具有较为恒定的TCRα链和独特的CD1限制性 ,参与自身免疫、感染免疫、抗肿瘤免疫和移植免疫等多种免疫反应 ,被认为是连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁     

浆细胞样树突状细胞与其他免疫细胞相互关系研究进展

浆细胞样树突状细胞(pDC)是一类近年来被认识并证明在免疫应答与免疫耐受中发挥重要作用的免疫细胞,其功能特点在于活化后大量快速分泌Ⅰ型IFN,并能够通过Ⅰ型干扰素途径增强自然杀伤细胞(NK细胞)、T淋巴细胞、B淋巴细胞以及树突状细胞(DC)的功能,之后分化为一类独特的成熟DC,参与调节T细胞功能,从而有效地连接了固有免疫和适应性免疫.     

9.1C3分子对人NK细胞和T细胞细胞毒作用的抑制效应

目的探讨9.1C3分子是否作为抑制型受体调节NK细胞和T细胞的杀伤功能。方法用抗CD56抗体和羊抗鼠IgG免疫磁珠分离混合淋巴细胞培养中活化的淋巴细胞 ,分选CD56 细胞和CD56 -细胞分别作为效应细胞。采用重导向杀伤实验(redirectedkillingassay,RKA)观察抗9.1C3抗体对效应细胞杀伤小鼠肥大细胞瘤细胞P815作用的影响。结果发现人NK细胞和T细胞对P815细胞均有一定的杀伤作用 ,在效靶比为4∶1 ,2∶1和1∶1时 ,NK细胞和T细胞的杀伤率分别为:6.4% ,3.4% ,1.1%和21.2 % ,16.7 % ,6.5 %。用抗CD16和抗CD3抗体分别刺激NK细胞和T细胞时 ,它们对P815细胞的细胞毒作用显著增强 ;在相同的效靶比例 ,它们对P815的杀伤率分别为:47.1 % ,32.2% ,19.1 %和64.4 % ,50.3% ,39.5 %。但用抗9.1C3抗体刺激效应细胞时 ,不仅NK细胞的杀伤作用完全被抑制 ,CD16介导的NK细胞的杀伤作用也被明显下调 ,其杀伤率仅为18.5 % ,9.7 %和7.0 % ;但对CD3介导的T细胞的杀伤作用只轻度被抑制。结论9.1C3分子可能是一种新的抑制型杀伤细胞受体 ,对NK细胞和T细胞细胞毒作用的负调节可能有所不同。     

恶性淋巴瘤患者的NK细胞活性降低

近年来,许多实验室特别强调自然杀伤(NK)淋巴细胞在抗肿瘤监护(antitu-mor surveillance)中的作用。在体外培养中,已证明NK细胞对于许多培养的靶细胞,尤其是来源于恶性肿瘤的靶细胞是具有自发性细胞毒性的。在数种小鼠模型中,已证明高的体外(in vitro)NK活性与体内(in vivo)对肿瘤的抵抗性之间存在着密切的相关性。此外,还有报道称,注射富含NK的淋巴细胞群体可以延缓肿瘤在体内的生长。然而在人体中,对于NK细胞在免疫监护中的作用问题还仅仅是推断性的。作者报道在59例未经处理的恶性淋巴瘤     

巨细胞病毒感染下调肾移植受者NK细胞CD226和CD16的表达

目的探讨肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染对自然杀伤(NK)细胞活化性受体CD226以及CD16表达的影响。方法采用流式细胞术分别检测肾移植术后CMV感染期和稳定期、肾移植术后稳定期受者和健康对照者NK细胞CD226和CD16的表达。结果肾移植受者发生CMV感染者与CMV感染恢复期、稳定受者组和健康对照组NK细胞占淋巴细胞比例均无明显差异。但CMV感染组外周血CD226~+NK细胞占NK细胞比例为(75.06±13.65)%,显著低于健康对照的(88.28±11.98)%和肾功能稳定组的(87.53±6.43)%;感染恢复期患者CD226~+NK细胞比例恢复至(88.37±8.91)%,与稳定受者组和健康对照组均无显著差异。CMV感染组的NK细胞CD226平均荧光强度(MFI)与稳定受者组和健康对照组均无显著差别,而CMV感染恢复期患者NK细胞CD226的MFI明显高于上述3组。CMV感染组CD16~+NK细胞占NK细胞比例下降为(75.06±13.65)%,显著低于稳定受者组的(88.28±11.98)%和健康对照的(90.35±10.07)%,而恢复期CD16~+NK细胞比例回升到(86.30±14.01)%,与稳定受者组和健康对照组无显著性差异。NK细胞CD16的MFI在感染期和恢复期与稳定受者组和对照组均未见显著性差异。结论 CMV感染可引起NK细胞CD226和CD16表达下调,而在感染恢复期CD226和CD16表达恢复,提示CD226和CD16参与肾移植受者NK细胞抗CMV感染的过程。     

自然杀伤活性——一种功能而不是细胞类型的定义

在过去十五年中,许多实验室研究了非免疫的“正常”宿主淋巴细胞的细胞毒功能。这种功能的特征是一种正常淋巴细胞对NK敏感的靶细胞的非MHC限制性的溶解作用,凡在短期(3—6小时)实验中表现这种溶解作用的细胞传统上都称为“NK”细胞。然而,这种根据功能活性所作的不精确的定义现已导致不少混乱,主要原因是发现表型甚至属性极不相同的细胞均能显示NK活性,因而这些细胞都被称为NK细胞。