麦冬类药材及其混淆品的性状及显微鉴别研究

目的 通过对不同产地的麦冬类药材及其混淆品进行系统的生药学研究，为不同产地的麦冬Ophiopogonjaponicus及其混淆品的鉴定提供科学依据。方法 采用性状鉴别法、常规显微鉴别法及偏振光显微鉴别法进行对比研究，结合大型图像拼接及实时景深扩展技术获取全息彩色影像数据，对麦冬的2种道地药材川麦冬、浙麦冬；山麦冬2个基原品种短葶山麦冬Liriope muscari，湖北麦冬L.spicata var. prolifera；及其他常见麦冬类药材混淆品种阔叶山麦冬L.platyphylla、金边阔叶麦冬L.platyphylla var. variegata共32批次药材进行系统的性状及显微鉴别研究。结果 性状鉴别从麦冬类药材及其混淆品外观、质地、长度/直径比例及横断面能将基本区分6种麦冬类药材及其混淆品；横断面显微首次获取全息彩色影像数据，木化部位及草酸钙针晶在偏振光下具有清晰可辨的识别度，麦冬类药材及其混淆品中柱部分中柱比（中柱直径与横断面直径的比值）、石细胞层数、韧皮部束个数、木质部导管层数差异较大；粉末显微草酸钙结晶长度、石细胞璧厚度及内皮层直径具有微小差异。结论 该方法简便易行，能快速鉴别麦冬类药材及其混淆品种。     

绞股蓝属植物及其混淆品乌蔹莓的PCR-RFLP鉴别研究

目的：寻找简便、可重复的分子标记方法对绞股蓝属Gynostemma植物及其混淆品乌蔹莓Cayratia japonica进行鉴别。方法：对7种常见药用绞股蓝属植物及其混淆品乌蔹莓的6个cpDNA片段进行PCR 扩增，再利用TaqⅠ，HpaⅡ，EcoRⅠ，RsaⅠ，HhaⅠ，HindⅢ等6种限制性内切酶分别对扩增片段进行消化。结果：36种DNA片段/内切酶组合中，trnK1f -trnK2r片段与RsaⅠ组合可将乌蔹莓从绞股蓝属植物中区分出来，产物清晰、结果稳定。结论：PCR-RFLP分析方法可有效区分常见绞股蓝属植物与其混淆品乌蔹莓。     

蚂蝗及其混淆品菲牛蛭的高效毛细管电泳法鉴别

目的 探求更为快捷、准确的水蛭药材的鉴定方法.方法 采用高效毛细管电泳法对蚂蝗和混淆品菲牛蛭进行蛋白多肽的分析.条件为石英毛细管 (75 μm×57 cm ),电解缓冲液为20 mmol/L,硼酸盐溶液(pH 8.5),电压为20KV,检测波长254 nm.结果 蚂蝗与菲牛蛭的高效毛细管电泳图谱之间有明显差异,重复性良好.结论 高效毛细管电泳可作为鉴定方法,用于快速准确地鉴别蚂蝗与菲牛蛭.     

正交试验法优选菲牛蛭饲料配方研究

目的 优化菲牛蛭Poecilobdella manillensis的人工饲料3种主要成分配比,确定饲料的最佳配方。方法 采用湿土网箱法养殖菲牛蛭,以存活率和个体体质量增长率为考察指标,采用L₉(3⁴) 正交试验法,考察血球蛋白粉（NP-90）、血浆蛋白粉（NP-2002）和维生素C（VC）3个因素,优选菲牛蛭人工饲料。采用层次分析法统计正交试验,分析各因素各水平对试验结果的影响权重。结果 以菲牛蛭存活率为考察指标时,3种因素对成活率的影响为VC＞NP-90＞NP-2002,以0 NP-90、1% NP-2002和0.05% VC组合为最佳;以菲牛蛭个体体质量增长率为考察指标时,3种因素对个体体质量增长率的影响大小依次为NP-2002＞NP-90＞VC,饲料配方以0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC组合为最优。层次分析表明,各因素对正交试验的指标值影响的主次顺序为NP-90＞NP-2002＞VC,0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC的权重最大,正交试验的最优方案为0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC。按0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC及其他成分配制饲料饲喂菲牛蛭,进行验证试验,结果饲料组菲牛蛭成活率达100%,个体体质量增长率达19.91%。结论 按0.5% NP-90、3% NP-2002和0.05% VC及其他成分配制饲料可作为菲牛蛭人工饲料。     

双水相萃取-凝胶色谱联用法提取菲牛蛭中的水蛭素

 目的 建立水蛭素的双水相萃取-凝胶色谱联用提取法。方法 以抗凝血酶活性单位（ATU）为指标,在优化双水相萃取工艺条件基础上,建立以广西菲牛蛭消化液为原料的聚乙二醇/硫酸铵双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素新工艺。结果 在所考察的实验范围内,水蛭素对照品双水相萃取最佳工艺条件是：PEG 2000、(NH₄)₂SO₄、NaCl质量分数依次为22%、20%、0.04%,萃取液温度35 ℃、pH 6.0;萃取物经凝胶色谱除杂以后,得到纯度较高的产品。实验建立的提取工艺处理水蛭素对照品ATU回收率达到81.92%,粗提液分离纯化及小规模工艺放大实验ATU回收率分别为80.34%、80.36%。所获产品比活性达到3 210.27 ATU·mg^-1、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳及光谱扫描结果与水蛭素对照品相同。结论 双水相萃取-凝胶色谱联用提取水蛭素效果较好。
     

香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别

目的 建立聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法快速鉴别香加皮与其混淆品五加皮、地骨皮，避免因基原混乱影响用药安全。方法 从CGIR数据库获取的香加皮DSS标记序列，对香加皮DSS序列进行酶切位点分析，筛选香加皮与五加皮、地骨皮间差异位点，选择香加皮的特异性酶切位点Cla I，设计PCR-RFLP反应引物，对影响PCR-RFLP反应的退火温度、循环数、Taq酶、不同型号PCR仪、酶切时间等条件进行考察。利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对不同产地香加皮与五加皮、地骨皮进行适用性考察。结果 在退火温度59 ℃、循环数为40个时，香加皮与五加皮、地骨皮样品经过特异性引物进行PCR扩增后，可出现清晰明亮的片段，酶切时间30 min，香加皮药材及其基原物种均可产生约140 bp和290 bp的目的片段，而2种混淆品五加皮和地骨皮药材及其基原物种只在250~500 bp有一条约430 bp的目的片段。该方法能对香加皮及其混淆品五加皮、地骨皮进行准确鉴别。结论 建立了香加皮与五加皮、地骨皮的PCR-RFLP鉴别方法，稳定性好、灵敏度高、适用性好，为香加皮与五加皮、地骨皮的质量控制提供参考。     

宽体金线蛭的特异性PCR分子鉴定

[目的] 实验旨在通过寻找宽体金线蛭单核苷酸多态性（SNP）位点,设计宽体金线蛭的特异性鉴别引物,建立宽体金线蛭特异性聚合酶链式反应（PCR）检测方法,实现对宽体金线蛭及其常见混伪品的快速鉴别。[方法] 通过比对宽体金线蛭与其常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I（COI）序列,寻找宽体金线蛭COI基因序列内SNP位点,设计特异性鉴别引物。[结果] 进行PCR后仅宽体金线蛭能够扩增得到149 bp的条带,混伪品不能扩增出明显目的条带。向扩增产物中加入SYBR Green I核酸染料染色,宽体金线蛭样品在紫外灯下显黄绿色荧光,混伪品不显荧光。[结论] 该方法能够准确快速鉴别宽体金线蛭与其常见混伪品,为中药材市场上宽体金线蛭的快速鉴别提供技术支持。     

清热养胃合剂的质量标准

目的:建立清热养胃合剂质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对制剂中牛至、金莲花进行鉴别,其中牛至的薄层色谱鉴别采用咖啡酸为对照品,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:7.5:1)为展开剂;金莲花的薄层色谱鉴别采用芦丁为对照品和金莲花对照药材,以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:0.8)为展开剂。采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,高效液相色谱法测定芦丁的含量。结果:清热养胃合剂中的牛至、金莲花的薄层色谱具有鉴别特征、斑点清晰,与相应对照品均呈相同的鉴别反应;总黄酮含量测定中芦丁在0.134~0.670 mg线性关系良好(r=0.9999),平均回收率98.42%,RSD 1.2%。含量测定中芦丁在0.400~4.000 μg有良好的线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为98.91%,RSD 1.2%。结论:鉴别方法专属性强、灵敏度高;定量方法简便快速、结果准确且重复性好,可用于控制清热养胃合剂的质量。     

黄芩及其同属近缘种的DNA条形码鉴定研究

目的 利用DNA条形码鉴定技术,快速、准确地鉴别黄芩及其同属近缘种（易混品）。方法 提取黄芩及其同属近缘种的DNA,对ITS和psbA-trnH序列扩增和测序,计算物种种内种间Kimura 2-parameter （K2P）遗传距离。采用相似性搜索法、最近距离法、构建Neighbor-joining（NJ）系统聚类树等方法进行鉴定分析。结果 黄芩及其同属近缘种种间的ITS和psbA-trnH序列的遗传距离为0.067 97～0.088 80和0.050 61～0.057 37,明显大于黄芩种内的遗传距离0～0.006 40和0～0.003 11。ITS和psbA-trnH分子系统树显示,黄芩8个居群个体均聚为一单系分支,支持率均为100%,与其5个同属近缘种很好地区分开。3种鉴定方法表明,ITS和psbA-trnH序列适合鉴别黄芩及其同属近缘种。结论 ITS和psbA-trnH序列可以有效准确鉴别中药材黄芩及其近缘种。     

识别真伪水蛭

水蛭又名蛭蝚、马鳖,为水蛭科动物日本医蛭、宽体金线蛭、茶色蛭等的全体。其中,日本医蛭的干燥品称“水蛭”;宽体金线蛭的干燥品称为“宽水蛭”;茶色蛭的干燥品称为“长条水蛭”。水蛭性平,味咸苦,有毒,入肝、膀胱经,具有破血、逐瘀、通经的功效,为破逐瘀血之要药,用于治疗癥瘕、积聚、蓄血、妇女经闭、干血成痨、跌扑损伤、目赤肿痛、眼生云翳等症。     

败酱草及其混伪品的显微鉴别特征与HPLC指纹图谱研究

目的 对败酱草Herba Patriniae及其市场常见混伪品的显微鉴别特征和HPLC指纹图谱进行研究,明确不同品种的败酱草及其混伪品间的差异,为败酱草的准确鉴定提供技术保障。方法 收集败酱草正品药材黄花败酱和白花败酱,市场常见败酱草混用品异叶败酱、菥蓂和苣荬菜,采用显微鉴别方法对5种药材粉末的显微特征进行研究;优化败酱草总皂苷的提取工艺,比较不同品种的总皂苷含量;建立败酱草及其混伪品的HPLC指纹图谱,基于指纹图谱相似度评价、聚类分析和主成分分析,对败酱草及其混伪品进行鉴别和药材质量的综合评价。结果 败酱草及其混伪品药材粉末的显微特征存在显著差异;优化了败酱草总皂苷的提取工艺,结果表明,败酱草及其混伪品总皂苷含量存在差异;建立了败酱草及其混伪品共26批的HPLC指纹图谱,共标定了11个共有峰,明确了败酱草及其混伪品指纹图谱的差异,通过相似度分析、聚类分析和主成分分析,可将败酱草及其混伪品进行准确区分;综合评价分析结果表明,败酱草及其混伪品的得分差异较大,其中正品白花败酱和黄花败酱的得分最高。结论 获得了败酱草及其市场常见混伪品在粉末的显微特征和HPLC指纹图谱的差异,为败酱草的准确鉴...     

基于HRM的常见伞形科香辛料快速鉴定

目的:4种香辛料小茴香、孜然、葛缕子、莳萝子与其混伪品蛇床子、防风子因外形特征相似,易混淆使用,带来安全隐患。针对鉴别困难的问题,建立高分辨率熔解曲线(HRM)分析法,以实现简便、快速鉴别的目的。方法:收集这4种香辛料及常见混伪品蛇床子、防风子共23份样本,作为参照样本,提取总DNA,基于内转录间隔区2(ITS2)序列通过聚合酶链式反应(PCR)进一步确定物种,并应用HRM技术建立检测方法和熔解曲线模型。香辛料市场收集这4种香辛料共17份样本,作为市场样本,通过HRM技术鉴定物种是否与标签相符。结果:小茴香、孜然、葛缕子、莳萝子、蛇床子、防风子的熔解曲线均表现出良好差异性,能明显区分开;17份市场样本中,编号N1和N3样品熔解曲线与标签显示的莳萝子熔解曲线具有明显差异,进一步测序结果显示二者均为毒芹子。结论:HRM技术能实现小茴香等伞形科香辛料及其混伪品间的可视化鉴别,可作为DNA条形码技术的有力补充,在中药资源鉴定中应用前景广阔。     

基于实时景深扩展-大图影像拼接与偏振光显微鉴别技术的柴胡及其4种混淆品的生药学研究

目的 基于实时景深扩展-大图影像拼接与偏振光显微鉴别技术,对柴胡2个基原品种柴胡Bupleurumchinense或狭叶柴胡B.scorzonerifolium及4种市场常见混淆品（竹叶柴胡B.marginatum、藏柴胡B.marginatumvar.stenophyllum、锥叶柴胡B. bicaule、大叶柴胡B. longiradiatum）的性状、微性状及显微鉴别特征进行系统的对比研究,为柴胡的鉴别及质量控制提供科学依据。方法 性状鉴别研究采用性状及微性状鉴别法,显微鉴别研究采用普通光明场与偏振光暗场对比观察法,结合实时景深扩展成像、大图影像拼接技术,拍摄获取药材组织横切面全息彩色影像图。结果 获取了柴胡及其混淆品的性状及微性状影像数据,首次获取了该类药材横切面显微鉴别普通光及偏振光全息彩色影像数据。对柴胡2个基原品种及其4种混淆品进行了系统的生药学研究。与《中国药典》2020年版相比,性状鉴别补充研究了精细微性状鉴别特征,对柴胡药材根或根茎的上、中、下部位横切面进行对比观察,确定了柴胡药材根或根茎上部横切面组织构造最具特征性,为最佳的横切面显微研究部位。结论 可以综合应用性...     

地龙的多重位点特异性PCR鉴别

目的:近年来,中药材地龙的商品价格不断上涨,市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失,难以区分。因此,急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法:根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点,从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合,构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系,从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果:在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段,沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段,栉盲环毛蚓可得到475 bp片段,其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论:该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。     

柴胡及其常见伪品的DNA指纹鉴定

目的:建立柴胡及其伪品DNA指纹鉴别方法.方法:采用改良的CTAB法提取柴胡及常见伪品的干根基因组DNA,设计鉴别正品柴胡及其伪品的特异性引物,利用PCR扩增技术对正品柴胡及其伪品进行DNA指纹鉴定.结果:改良的CTAB法提取出大小为23 kb的基因组DNA条带,纯度在(1.71±0.11),且经特异引物PCR扩增,只有正品柴胡能扩增出173bp大小的片段,而伪品未能扩增出目的片段.结论:柴胡DNA具有特异性指纹特征,可作为市售柴胡的真伪鉴定依据.     

特异性PCR鉴别蜈蚣及其混伪品

目的:蜈蚣是我国传统的中药材,具有良好的药用价值。目前市场上蜈蚣的混伪品日益增多,临床用药的安全性和有效性难以保证。该研究建立了一种蜈蚣基原物种的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,以准确、简便的鉴别蜈蚣及其常见混伪品。方法:通过比较蜈蚣及其混伪品基原物种的COI基因序列差异,根据变异位点设计蜈蚣正品少棘巨蜈蚣的特异性鉴别引物WG-500.F和WG-500.R,采集蜈蚣原动物样本及药材样本,优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。结果:少棘巨蜈蚣原动物样本及蜈蚣正品药材使用设计的蜈蚣鉴别引物经PCR扩增和凝胶电泳后出约500 bp的单一明亮条带,其他混伪品如多棘蜈蚣、模棘蜈蚣、哈氏蜈蚣、海南蜈蚣等均无条带出现。结论:PCR鉴别方法可准确鉴别蜈蚣原动物和药材的真伪,具有高度特异性,为中药材蜈蚣的真伪鉴别提供了良好的科学依据。该方法具有简单、直观等特点,有利于广泛的普及与应用,在中药材鉴定方面有着广阔的应用前景。     

意大利牛舌草与其易混淆品的鉴定

目的:研究建立意大利牛舌草及其易混淆品的鉴别方法,为意大利牛舌草的质量控制提供依据。方法:采集不同产地的意大利牛舌草及其混淆品,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别和DNA分子鉴别方法,对意大利牛舌草及其混淆品进行鉴别研究。结果:意大利牛舌草与琉璃苣、倒提壶在显微、薄层色谱有较为明显的差异,DNA分子鉴定表明,意大利牛舌草及其混淆品的最小种间K-2-P距离大于种内最大K-2-P距离,邻接法(NJ)树中意大利牛舌草的样品聚为一支,琉璃苣、倒提壶混淆品分别表现出单系性,可明显区分开。结论:该文在对意大利牛舌草及混淆品的茎、粉末显微特征比较研究的基础上,采用药材显微鉴别、薄层色谱鉴别与DNA分子鉴定手段相结合的综合鉴别模式,确定了意大利牛舌草及其混淆品的鉴别要点,DNA分子鉴定技术对于意大利牛舌草及其混淆品的鉴别有较大的优势,该法专属性强、灵敏度高,是传统鉴别技术的重要补充,具有较大的潜力和应用前景。建议进一步提高和完善意大利牛舌草的质量标准,加强意大利牛舌草的质量控制。     

基于DNA条形码技术的民族药紫丹参及其近缘种鉴定研究

目的探讨DNA条形码技术在民族药紫丹参及其近缘物种鉴定中的应用,为紫丹参药材鉴定提供参考。方法建立紫丹参及其混伪品DNA条形码参照数据库,通过比对序列、分析变异位点、计算遗传距离和构建邻接树等分析数据,并应用该数据库对市场药材进行鉴定。结果 DNA条形码技术可有效鉴别紫丹参及其混伪品。结论 ITS2序列可作为紫丹参及其混伪品的鉴定条形码,该技术在民族药物种基原鉴定、标准制定和市场监管等实际应用中具有重要的应用价值。     

海龙及其常见伪品的RAPD鉴别

目的:提供一种鉴别中药材海龙及其伪品的方法.方法:采用随机引物扩增DNA技术,对拟海龙、刁海龙、尖海龙、粗吻海龙、海蠋鱼、宝珈海龙进行基于Nei ＆Li's相似系数的UPGMA聚类分析,并构建其鉴别模式.结果:从18条随机引物中筛选到LJ04,LJ09,LJ16,LJ19 4条引物能扩增出稳定可靠的条带.基于以上4条随机引物构建的聚类图能较好的从属水平区分各海龙样品,且与样品外观分析结果一致.基于LJ09,LJ19 2条引物的扩增结果构建的6种海龙的鉴别模式可以将海龙正品逐一鉴别出来.结论:随机引物扩增DNA技术能较好地鉴别海龙及其伪品.