三种全蝎粉水提液不同活性部位的蛋白质含量测定及其抗肿瘤活性研究

目的：比较三种全蝎粉水提液各活性部位的蛋白质含量及其对肺癌细胞的抑制作用。方法：野生全蝎粉经过仿胃肠道的酶解液,发酵全蝎粉、野生全蝎粉的水提溶液,分别超滤、冻干,浓缩液用MTT法测定对肺癌细胞的抑制率。结果：三种全蝎粉水提液各活性部位对肺腺癌细胞的抑制率与空白对比差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论：不同方法处理的全蝎粉各活性部位均对肺癌细胞有抑制作用,且多为低浓度抑制率较高,小分子寡肽对肺癌细胞的抑制作用最好。     

猪皮胶原肽的抗氧化活性研究

目的:研究不同分子量猪皮胶原肽的抗氧化特性,筛选出抗氧化活性较强的组分。方法:采用仿生酶解技术酶解新鲜猪皮得到酶解原液,酶解原液经超滤得到M1 k Da、1 k DaM3 k Da、M3 k Da 3个不同分子量肽段,猪皮经水提取得到猪皮水提液,上述5组分分别冻干,得到冻干粉。对不同分子量范围的猪皮胶原肽5组分进行肽含量测定和抗氧化性研究,包括对DPPH·自由基、O2-·自由基及·OH自由基的清除实验。结果:各组分的肽含量分别为酶解原液组分64.62%、1~3 k Da组分62.63%、大于3 k Da组分62.13%、水提液组分60.57%、小于1 k Da组分59.75%。各组分清除DPPH·自由基能力顺序为:小于1 k Da组分1~3k Da组分酶解原液组分水提液组分大于3 k Da组分;各组分清除O2-·自由基能力顺序为:小于1 k Da组分酶解原液组分1~3 k Da组分大于3 k Da组分水提液组分;各组分清除·OH自由基能力顺序为:小于1 k Da组分1~3 k Da组分酶解原液组分大于3 k Da组分水提液组分。结论:不同分子量的猪皮胶原肽组分均有一定的抗氧化活性,其中M1 k Da组分具有较强的自由基清除能力。     

发酵全蝎粉杀酶前后各活性部位蛋白含量及抗癌活性研究

目的比较发酵全蝎粉杀酶前后各活性部位蛋白含量及对肺腺癌细胞(A549)的抑制作用。方法发酵全蝎粉经超声提取,杀酶后通过超滤、冻干浓缩后,浓缩液用MTT法测定对肺腺癌细胞(A549)的抑制率。结果用单因素方差分析比较组间差异,发酵全蝎粉杀酶前后分段蛋白对A549的抑制率与空白对照组有显著性差异,P0.01。结论发酵全蝎粉杀酶前后均有一定的抗肿瘤作用,发酵全蝎粉杀酶前后均为寡肽类小分子蛋白抗肿瘤活性最强。杀酶后3K Da-30K Da段蛋白抗肿瘤活性有所增强,3K Da段蛋白抗肿瘤活性有所减小,30K Da段蛋白抗肿瘤活性无明显变化。     

发酵前后不同分子量段全蝎白术混合品体外抗肿瘤研究

目的研究全蝎白术混合发酵品的抗肿瘤活性,确定药物抗肿瘤的活性部位。方法依据双指标优化提取工艺的最优条件对全蝎白术混合发酵品进行超声提取。采用超滤手段,分别用截留量为5kD和10k D的超滤膜对水提液进行超滤分段,测定各分子量段中蛋白质和多糖的含量,采用MTT法检测体外抗肿瘤活性,并以未发酵品做对照。结果各分子量段对2种肿瘤细胞抑制效果具有差异性,醇沉上清液对肿瘤细胞的抑制效果最好,其次为分子量段10 kD全蝎白术混合发酵品,且全蝎白术混合发酵品对肿瘤细胞抑制作用显著优于未发酵品。结论全蝎白术混合发酵品对乳腺癌细胞、喉癌细胞均有较高的抑制作用,其活性部位主要为醇沉上清液和分子量段10 kD全蝎白术混合发酵品。     

发酵前后全蝎粉中水溶性活性物质的含量比较研究

目的:对全蝎粉发酵前后水溶性活性物质的含量进行比较。方法:全蝎粉、发酵全蝎粉经过超声水提,分别采用改良Lowry法测定蛋白质的含量、苯酚-硫酸法测定多糖的含量、磷测定法测定磷的含量进而计算出核酸的含量。结果 :全蝎粉发酵前蛋白含量为136.332 mg·g~(-1),发酵后33.885 mg·g~(-1);全蝎粉发酵前多糖含量为5.832 mg·g~(-1),发酵后为12.024 mg·g~(-1);而全蝎粉发酵前核酸含量为24.789 mg·g~(-1),发酵后为58.034 mg·g~(-1)。结论:全蝎发酵前的蛋白含量较高,而全蝎发酵后的多糖和核酸含量较高。     

鸦胆子蛋白质组成分析及其酶解物细胞毒性研究

对鸦胆子进行蛋白质组成分析,并对其球蛋白酶解物细胞毒性进行研究。采用顺序抽提法提取鸦胆子清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4类蛋白组分,并用凯氏定氮法进行定量;采用不同种蛋白酶水解鸦胆子球蛋白,MTT法考察其小分子量(≤3 k Da)酶解物对人乳腺癌MCF-7的细胞毒性。结果表明:鸦胆子总蛋白含量为17.47%,清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白、谷蛋白和残渣蛋白分别占总蛋白含量的15.01%,8.11%,2.47%,44.92%,23.62%;球蛋白的胃蛋白酶酶解物(≤3 k Da)对人乳腺癌MCF-7具有显著的细胞毒性,且作用72 h后,IC_(50)为(6.52±0.01)mg·L~(-1)。鸦胆子蛋白质含量较为丰富,其多肽组分具有明确的体外细胞毒性,可进一步开发抗肿瘤活性成分。     

冬虫夏草水提液和醇提液HPLC指纹图谱分析

目的:建立冬虫夏草水提液和醇提液的高效液相指纹图谱。方法:采用高效液相色谱对20批冬虫夏草和2批发酵冬虫夏草菌粉的水提液和醇提液进行分析;并对所获得的色谱数据进行相似度计算和聚类分析。结果:建立了冬虫夏草水提液和醇提液指纹图谱,水提液指纹图谱确定了7个共有峰,醇提液指纹图谱确定了8个共有峰;冬虫夏草水提液和醇提液指纹图谱相似度评价结果均显示20批冬虫夏草样本的相似度系数大于0.9,2批发酵冬虫夏草菌粉的相似度系数小于0.9;冬虫夏草水提液和醇提液共有峰聚类分析结果均显示,20批冬虫夏草与2批发酵冬虫夏草菌粉分别聚为不同类。结论:本文所建立的方法稳定可靠,可以对冬虫夏草质量进行综合评价,为其提高产品质量控制提供了依据。     

四种产地全蝎粉可溶性蛋白质SDS-PAGE法分离研究

目的:探索四种产地野生全蝎粉中可溶性蛋白质SDS-PAGE法所获得电泳图谱条带的一致性,并确定其大致分子量。方法:采用55%乙醇提取、75%以上乙醇沉淀的方法获得全蝎粉可溶性蛋白质,考马斯亮蓝法测定其蛋白质含量,SDS-PAGE法和Quantity one软件测定全蝎粉可溶性蛋白质的相对分子量。结果:山东平邑、山东龙口、山东长清、山东沂源四种产地全蝎粉的水溶性蛋白饱和溶液中的蛋白含量分别为4.006,2.894,3.795,4.649 mg/mL;四种产地全蝎粉可溶性蛋白质通过SDS-PAGE法均获得了7条较清晰的电泳谱带,对应的相对分子量分别为42.563,33.938,27.060,22.354,19.402,3.422,1.929 KDa。结论:这7条全蝎可溶性蛋白质的特征谱带可用于中药全蝎粉的真伪鉴别。     

不同分子量锁阳多糖体外抗氧化活性的研究

目的研究不同提取方法对锁阳多糖提取效果的影响及不同分子量锁阳多糖体外抗氧化活性。方法全面考察锁阳多糖的提取方法,对比不同提取方法对多糖得率的影响。应用膜分离技术对精制后的锁阳多糖进行分离,分别得到分子量CP1(MW100k Da)、CP2(MW:50k Da~100k Da)、CP3(MW:10k Da~50k Da)三种多糖,进行体外抗氧化研究。结果相较于其他提取方法,酶解协同超声法提取锁阳多糖得率最高,可达29.4%。不同分子量的锁阳多糖均具有一定的总还原力,对超氧阴离子、DPPH自由基都具有较好的清除作用。在一定浓度范围内,其清除能力随着多糖浓度增加而增强,呈现量效关系;综合比较不同分子量锁阳多糖抗氧化能力,CP2分子段多糖抗氧化能力强于CP1和CP3。结论酶解协同超声法可作为锁阳多糖提取的新方法,在锁阳总多糖中,分子量在50k Da~100k Da的多糖开发利用价值较大。     

全蝎粉最优提取工艺探讨

目的：研究未发酵全蝎粉的最优酶解工艺。方法：以酶解温度、时间和酶底比为考察因素,用正交试验设计法设计实验,并用改良lowry法测定此条件下蛋白质含量筛选酶解的最佳工艺条件。结果：仿胃酶解以实验方案A2B3C1所得蛋白质含量最高,仿肠酶解以A1B2C2实验方案所得蛋白质含量最高。结论：在pH值为2.0的环境下,用酶底比2.0%的胃蛋白酶酶解60min的仿胃酶解工艺最优,在pH值为7.5的环境下,用酶底比5.0%的胃蛋白酶酶解300min的仿肠酶解工艺最优。     

夏枯草酶解水提液分级醇沉及其抗HSV-1活性

目的探究夏枯草酶解水提液分级醇沉部分的成分组成及其抗HSV-1活性。方法利用纤维素酶酶解法选择性提高夏枯草多糖的提取率,对其酶解水提液进行分级醇沉,用细胞病变效应(CPE)实验对各浓度的乙醇沉淀进行活性测试,根据细胞试验计算EC_(50)。筛选出夏枯草水提液中抗HSV活性最优的部分,采用大孔树脂D301对夏枯草酶解水提液分级醇沉中具有抗HSV-1活性的部分进行分离纯化,除去多酚及蛋白质类成分,得到多糖含量较高的部分,并测试该部分的抗HSV活性。结果夏枯草粉末经纤维素酶酶解后的水提液分级醇沉沉淀中,20%、30%乙醇的沉淀具有良好的抗HSV-1活性,其ED_(50)分别为60.79、42.45μg/mL,40%乙醇以上的分级沉淀无活性或活性较弱。经大孔树脂D301纯化后的夏枯草多糖纯度可达77.78%,但其抗HSV活性反而丧失。结论夏枯草多糖含量高低与其抗HSV活性强弱并不呈正相关,可为进一步研究研究其有效部位及构效关系提供参考。     

一大分子量香菇多糖的提取分离纯化

目的 研究从香菇子实体中提取分离纯化得到分子量在4.0×105 Da以上的精制香菇多糖.方法 用碱提-醇沉法提取香菇粗多糖,设计正交试验优化碱提工艺,并通过脱色、超滤分离纯化得到分子量在4.0×105Da以上的精制香菇多糖.苯酚-硫酸法测定总糖量,高效凝胶色谱法测定分子量,紫外光谱检测蛋白质和核酸.结果 正交试验证实碱的浓度是影响提取工艺的主要因素,最优碱提工艺为提取温度为25℃,碱的质量分数为5％,提取时间为24h,苯酚-硫酸法测定超滤后香菇多糖的含糖量为95.00％,高效凝胶色谱法测定香菇多糖的重均分子量为6.054×105Da,紫外光谱中在260 nm、280 nm波长处没有吸收峰.结论 碱提-醇沉法提取香菇粗多糖工艺简单,纯化后的香菇多糖为分子量均一的多糖组分,不含核酸和蛋白质,为以后的结构研究和药理药效研究奠定了基础.     

全蝎粉酶解工艺最佳用酶的初步筛选

目的从四种蛋白酶中选出酶解全蝎粉的最佳用酶,来制备抗肿瘤多肽。方法以蛋白质的水解度、对肺腺癌细胞A549细胞的抑制率为指标,同时以全蝎粉水提物作为对照组,评价胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶对全蝎粉的水解效果。结果胃蛋白酶对全蝎粉的水解度为8.47%,且不同的药物浓度对肺腺癌A549细胞的抑制率比对照组低,其IC50为14.7427 mg/ml;胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶的水解度分别为25.12%、12.37%、11.13%,不同的药物浓度对肺腺癌A549细胞的抑制率比对照组高,其IC50分别为0.6878 mg/ml、0.7073 mg/ml、0.8306 mg/ml;对照组的IC50为5.9386 mg/ml。结论全蝎粉酶解工艺的最佳用酶是胰蛋白酶,其次是胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶,而胃蛋白酶可以去除。     

野生全蝎粉与酵解和酶解提取物抗肿瘤效果比较研究

目的:比较不同方法处理的野生全蝎粉提取物对三种癌细胞的抑制作用。方法:野生全蝎粉、发酵全蝎粉及未发酵粉分别经仿胃肠道酶解,醇、水提物的冻干粉用MTT法测定对肿瘤细胞的抑制率。结果:用单因素方差分析比较组间差异显著性,表明全蝎不同方法处理的醇、水提取物冻干粉对食管癌细胞、乳腺癌细胞、肺腺癌细胞的抑制率与空白组之间均有显著性差异,P0.05。结论:全蝎醇、水提物冻干粉对食管癌(Eca-109)、乳腺癌细胞(MCF-7)的生长有不同程度的抑制作用,全蝎酵后酶前、酶后提取物对乳腺癌细胞(MCF-7)的生长、全蝎的酵后酶前提取物及酶解物对肺腺癌细胞(A549)的生长均有不同程度的抑制作用。     

九香虫水提液化学成分及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用

目的研究九香虫水提液化学成分及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用。方法制备九香虫水提液,采用GC-MS法分析九香虫水提液化学成分,利用SDS-PAGE电泳分析其蛋白组成。采用MTT法与形态学观察法检测九香虫水提液对人乳腺癌细胞MDA-MB-453、HCC-1937及小鼠乳腺癌细胞4T1增殖的抑制作用。结果九香虫水提液主要化学成分为L-苹果酸、L-核糖、半乳糖酸等;蛋白含有量为0. 843 mg/m L;蛋白分子量主要分布在75、35、30、25、12 k Da;水提液对人乳腺癌MDA-MB-453、HCC-1937细胞及小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖具有显著抑制作用,且呈剂量相关性,IC50值分别为0. 142、0. 059、0. 190 g/m L。结论九香虫水提液主要为氨基酸、脂肪酸、糖类物质,蛋白含有量较高,对人乳腺癌MDA-MB-453、HCC-1937细胞及小鼠乳腺癌4T1细胞的体外增殖具有显著抑制作用。     

全蝎白术白头翁混合发酵品不同极性部位体外抗病毒研究

目的探讨全蝎白术白头翁混合发酵品(SAPHFP)不同极性部位体外抗病毒作用及可能活性成分的含量。方法对SAPHFP分别采用超声水提、50%、80%乙醇回流提取,提取物通过MTT法分别对RSV、EV71、COX-B2、HSV四种病毒株进行体外抗病毒作用的实验;采用Lowry法、苯酚-硫酸法及NaNO_2-AlCl_3-NaOH比色法分别测定三种极性部位中的总蛋白、总多糖及总黄酮的含量。结果 SAPHFP三种提取成分中,50%乙醇提取物对病毒的抑制率最好,尤其是对EV71和HSV病毒,TI指数分别为46.30、56.82。三者的体外抗病毒有效率均高于阳性对照药利巴韦林;SAPHFP的50%乙醇提取液与未发酵品比较,感染了HSV病毒的正常细胞其存活率显著提高;水提液中总蛋白、总多糖、总黄酮含量最高,分别为:177.1269、517.7191、9.624298。结论 SAPHFP水提、50%、80%乙醇提取物体外对四种病毒均有一定的抑制作用,体外抗以上病毒株的活性与供试品中所含的总蛋白、总多糖、总黄酮含量不完全成对等关系。     

超滤对当归多糖组分总糖含量和蛋白含量的影响

目的探讨超滤分离当归多糖组分的可行性及其对各组分总糖含量和蛋白含量的影响。方法新鲜岷县当归经80%无水乙醇回流除去脂溶性成分,水提醇沉提取当归粗多糖。将当归粗多糖用蒸馏水溶解,反复冻融除蛋白后,超滤分离出不同分子量的当归多糖组分,并测定各组分的总糖含量及蛋白含量。结果超滤得到分子量分别为10~30 kD,30~300 kD和>300 kD的3个组分,其颜色分别为棕褐色、淡黄色、类白色;总糖含量分别为40.15%,62.12%和80.33%;蛋白含量分别为2.88%,0.98%和0.74%;当归多糖中以分子量>300 kD的当归多糖组分为主,占当归干重的5.48%。结论超滤分离当归多糖,可得到总糖含量较高而蛋白含量较低的主要组分,且操作简单,适于规模化生产。     

中药复方水提液对人牙周膜成纤维细胞增殖和总蛋白含量影响的实验研究

目的:观察中药复方水提液在不同浓度下对人牙周膜成纤维细胞(HPLF)增殖和总蛋白含量的影响.方法:运用细胞生物学方法,通过MTT法和考马斯亮蓝染色法测定HPLF增殖和总蛋白含量的变化.结果:中药复方水提液浓度在1×10-7～1×10-3g/mL时,均能明显促进HPLF增殖,与对照组比较.有显著性差异,且在1×10-3g/mL浓度时作用效应最大;中药复方水提液浓度在1×10-4～1×10-3g/mL,能够明显增加HPLF总蛋白的合成,与时照组比较,有显著性差异.在此范围内,中药复方水提液的作用显示出明显的浓度依赖效应和时间依赖效应.结论:中药复方水提液可促进HPLF增殖及蛋白质合成.     

阿胶低肽酶解液超滤工艺的实验研究

目的:优选阿胶低肽酶解液的最佳超滤工艺.方法:通过考察超滤膜材质、酶解液的预处理方法、药液浓度、分子量截留值、操作压力及温度等因素对透过速率的影响,优选最佳工艺条件.结果:最佳超滤工艺为:取50 g阿胶粉制成阿胶低肽酶解液,稀释至1 000 mL,水浴预热至40℃,在柱压(0.15±0.01)MPa下分别经过截留分子量30 kD、3 kD的超滤膜超滤,并水洗一次.结论:该超滤工艺损失少、快速、高效.     

不同方法加工全蝎的对比研究

目的:研究不同加工方法对全蝎药材质量的影响,为规范化养殖确定合理的加工方法提供理论依据。方法:分别用清水煮烘、盐水煮烘、直接烘干以及烫死烘干4种方法对全蝎进行加工,观察其外观性状,测定其出干率、蛋白质含量、氨基酸含量、各种元素含量等指标,并对其水与乙醇提取液紫外吸收成分差异进行比较,依据上述指标对4种加工方法进行综合评价。结果:盐水煮烘全蝎出干率最高,清水煮烘者最低,其它方法之间无显著性差异;不同方法加工的全蝎失水状况不一,外观性状有一定差异;盐水煮烘全蝎的浸出物含量最高,清水煮后烘干者最低,其它处理之间无显著性差异;清水煮烘全蝎的蛋白质含量最高,盐水煮烘者最低,其它方法之间无显著性差异;总氨基酸含量以直接烘干者最高,盐水煮烘者最低;总灰分和酸不溶性灰分以盐水煮后烘干者最高,清水煮后烘干者最低,其它方法之间无显著性差异;各种元素含量变化不甚规律,但总体上以直接烘干者最高;不同方法加工全蝎的水与乙醇提取液的紫外吸收成分基本一致,在最大吸收波长与最大吸收度方面有一定差异,水提液以烫死烘干全蝎的吸收度最大,醇提液以直接烘干全蝎最大。结论:进行全蝎加工宜采取沸水烫死后烘干。