大半夏汤提取物对食管癌EC9706细胞恶性生物学行为及JAK1/STAT3通路的影响

目的 观察大半夏汤提取物对食管癌EC9706细胞恶性生物学行为及JAK1/STAT3通路的影响,以期为食管癌的防治提供参考。方法 人食管癌EC9706细胞分别以半夏汤提取物（200、100、50、25、12.5μg/mL）、STAT3信号通路抑制剂（Stattic,4、3.5、3、2.5、2μmol/L）处理,MTT法检测细胞抑制率,拟合细胞抑制率-浓度曲线计算50%抑制浓度（IC50）。人食管癌EC9706细胞分为空白对照组、大半夏汤组、Stattic组与大半夏汤+Stattic组。大半夏汤组、Stattic组分别以IC50浓度的大半夏汤提取物及Stattic干预,大半夏汤+Stattic组予以大半夏汤提取物及Stattic联合干预,空白对照组不做特殊处理。MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测各组GES-1细胞侵袭能力;q RT-PCR法及Western blotting法检测JAK1/STAT3信号通路相关mRNA及蛋白表达情况。结果 随着大半夏汤提取物、Stattic干预浓度的增加,EC9706细胞的抑制率增加（P <0.05）;拟...     

人参皂苷Rg3通过干预细胞周期和诱导凋亡影响人食管癌Eca9706细胞生长

目的:研究人参皂苷Rg3对人食管癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法:MTT法检测人参皂苷Rg3对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制,用流式细胞仪分别检测细胞周期和凋亡情况。结果:在25²00μg/ml范围内,不同浓度人参皂苷Rg3能抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性。53μg/ml、86μg/ml、141μg/ml人参皂苷作用Eca9706细胞48h,细胞周期在S期的比例明显增多,细胞凋亡率明显增加。结论:人参皂苷Rg3可能通过干预细胞周期和凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。     

半夏泻心汤及其拆方对胃腺癌SGC-7901细胞周期和凋亡的影响

目的:从细胞增殖、凋亡、细胞周期角度,研究半夏泻心汤治疗胃癌机制。方法:把半夏泻心汤拆分为苦降、辛开和补益3个组方,1×104细胞/孔接种于96孔板,药物浓度为4,2,0.5,0.125 g·L-1,MTT法检测细胞增殖;1×105/孔接种于6孔板,全方和苦降高、低浓度为0.5,0.125 g·L-1,辛开和补益高、低浓度为4,2 g·L-1,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。观察半夏泻心汤及其拆方对胃癌细胞SGC-7901增殖、细胞周期和凋亡的影响,并与5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)比较。结果:半夏泻心汤全方及苦降、辛开组方能够抑制SGC-7901细胞增殖,全方IC50为1.645 g·L-1,苦降组为1.446 g·L-1,辛开组为3.867 g·L-1;它们增加SGC-7901细胞S期和G0-G1期百分比,促进细胞凋亡,高浓度强于低浓度,但补益组方对此没有作用。结论:半夏泻心汤及其拆方能够一定程度的抑制细胞增殖,以苦降组为最,补益组作用甚微,其机制可能与药物阻滞细胞至G1/S期和诱导细胞凋亡有关。     

子宫内膜癌中STAT3蛋白的表达及临床价值

目的探讨子宫内膜癌中信号转导和转录激活因子(STAT3)蛋白的表达及临床价值。方法选取子宫内膜癌患者53例,采用组织芯片技术和免疫组织化学法检测患者子宫内膜癌组织和癌旁正常组织的STAT3蛋白表达,比较2种组织中STAT3蛋白的阳性表达情况,分析STAT3 mRNA与年龄、病理分期、肌层浸润、分化程度、淋巴结转移等临床病理参数的关系。结果子宫内膜癌组织的STAT3蛋白阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P0.05)。≥50岁患者STAT3 mRNA阳性表达率高于50岁患者,但无显著性差异(P0.05)。病理分期依Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的顺序,STAT3 mRNA阳性表达率呈现出明显的升高趋势。分化程度依G1期、G2期、G3期的顺序,STAT3mRNA阳性表达率呈现出明显的升高趋势。肌层浸润50%患者STAT3 mRNA阳性表达率明显高于肌层浸润≤50%患者。有淋巴结转移患者STAT3 mRNA阳性表达率明显高于无淋巴结转移患者(P0.05)。结论子宫内膜癌组织中STAT3蛋白为阳性高表达,STAT3 mRNA阳性表达情况与病理分期、肌层浸润、分化程度、淋巴结转移等临床病理参数有关。     

半夏泻心汤对糖尿病胰岛β细胞凋亡的影响

目的探索基于调和胃肠法的半夏泻心汤对糖尿病MIN6胰岛β细胞凋亡的影响。方法 MIN6胰岛β细胞正常培养后,MTT法测定半夏泻心汤适宜的预处理浓度及时间和TBHP适宜的造模浓度及时间后,采用不同浓度的半夏泻心汤和对照药预处理细胞12 h后TBHP建立细胞凋亡模型,进行细胞分组,分为模型组(TBHP组)、对照组(control组)、半夏泻心汤不同预处理浓度组(BXXXT组)和对照药(LI组)预处理组。分别采用MTT、Hoechst33342、TUNEL种方法测定各组细胞的凋亡,Westernblot法检测各组细胞Caspase-3的表达。结果半夏泻心汤适宜的预处理时间及浓度是0. 25mg/mL、0. 5 mg/mL、1 mg/mL干预12 h; TBHP适宜的造模浓度及时间是400μM干预4 h; 3种方法均提示半夏泻心汤中(P 0. 05)、高剂量(P 0. 05)组均可抑制MIN6细胞的凋亡;半夏泻心汤高剂量组可上调Caspase-3的表达(P 0. 05)。结论半夏泻心汤可抑制TBHP诱导的MIN6胰岛β细胞的凋亡,其可能是通过调节Caspase-3的表达实现的,这为临床治疗糖尿病提供了依据。     

半夏泻心汤对胃腺癌SGC-7901细胞形态及STAT3通路相关蛋白的影响

目的:研究半夏泻心汤及其拆方对胃腺癌SGC-7901形态的影响及诱导其凋亡的机制。方法:把半夏泻心汤拆分为苦降(黄芩:黄连=3:1)、辛开(干姜:半夏=3:4)、补益(人参:甘草=3:3)3个组方,采用倒置显微镜观察用药后细胞形态变化,采用S-P免疫组化法检测半夏泻心汤全方及其拆方组对凋亡相关基因STAT3、P-STAT3的表达。结果:倒置显微镜下显示,不同浓度的半夏泻心汤全方组、苦降组(黄芩、黄连)及辛开组(干姜、半夏)作用于SGC-7901胃癌细胞株48小时后均能使细胞密度下降,细胞出现变圆、萎缩、不贴壁的现象;高浓度下的半夏泻心汤全方组,苦降组(黄芩、黄连),辛开组(干姜、半夏)作用于SGC-7901胃癌细胞48h后均能使STAT3、P-STAT3蛋白表达降低,与空白组阳性比例(39.12%,41.12%)相比,均有明显降低(14.45%、13.65%,13.41%、17.32%,21.42%、19.01%),其效果强于低浓度,补益组(人参、甘草)则无效。结论:半夏泻心汤全方及苦降组(黄芩、黄连)、辛开组(干姜、半夏)可抑制肿瘤细胞的生长,改变细胞的形态。其抑制细胞生长可能与干预STAT3转录因子的表达,促进肿瘤细胞凋亡有关。     

熊胆粉对肝癌移植瘤裸鼠STAT3通路的影响

目的观察熊胆粉对肝癌皮下移植瘤裸鼠信号转导与转录激活因子3（STAT3）通路及其下游靶基因的影响,探讨熊胆粉治疗肝癌的作用机制。方法采用人肝癌细胞株HepG_2构建裸鼠皮下移植瘤模型,待皮下移植瘤形成后,将裸鼠随机分为熊胆粉组和对照组,每天分别给予熊胆粉和生理盐水,连续给药3周,每周测量体重和瘤体积2次,给药结束,剥取瘤体称量瘤重及计算抑瘤率;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（TUNEL）检测瘤组织的细胞凋亡情况;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bcl2-associated X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（BcI-2）、周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）mRNA表达;免疫组化测定磷酸化的信号转导与转录活化因子3（p-STAT3）、增殖细胞核抗原（PCNA）、Bax、Bcl-2、CDK4、cyclinD1蛋白表达。结果熊胆粉显著抑制肿瘤的体积和瘤重,与对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。TUNEL法结果显示熊胆粉显著促进肝癌细胞凋亡。RT-PCR结果显示熊胆粉促进Bax表达而抑制Bcl-2、CDK4、cycIinD1 mRNA表达。免疫组化结果显示熊胆粉促进Bax表达而抑制p-STAT3、PCNA、BcI-2、CDK4、cyclinD1蛋白表达。结论熊胆粉可以通过调控STAT3通路抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡。     

半夏泻心汤含药血清对大鼠胃Cajal间质细胞凋亡相关蛋白表达及eNOS、NO分泌的影响

目的 探讨半夏泻心汤治疗胃肠动力障碍性疾病的可能作用机制.方法 30只SD大鼠随机分为半夏泻心汤组和去离子水组,每组15只,分别给予半夏泻心汤及去离子水12.15g/(kg·d)灌胃7天,制备半夏泻心汤药物血清及去离子水血清.小鼠胃Cajal间质细胞(ICC)分为空白组,去离子水血清组及5％、10％、15％半夏泻心汤血...     

清燥救肺汤对肺癌JAK2/STAT3信号通路及其下游凋亡相关蛋白表达的影响

目的:观察清燥救肺汤对肺癌细胞凋亡和Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路及其下游凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为环磷酰胺(CTX)组,模型组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。在小鼠右腋下注射Lewis肺癌细胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺汤高、中、低剂量组分别以清燥救肺汤11,5.5,2.75 g·kg^-1·d^-1,造模前2周开始灌胃给药,CTX组以CTX 50 mg·kg^-1·(2 d)-1腹腔注射给药,模型组以等体积的生理盐水灌胃给药,接种后继续给药,2周后处死各组小鼠并取瘤组织;免疫组化法(IHC)检测肺癌组织JAK2蛋白磷酸化水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测STAT3,Bax,Cyclin D1的表达;透射电镜(TEM)观察肺癌细胞的凋亡情况。结果:与模型组比较,清燥救肺汤高、中剂量组,CTX组肺癌细胞JAK2,STAT3蛋白磷酸化水平明显降低,Bax蛋白表达明显升高,Cyclin D1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。透射电镜结果显示,与模型组比较,清燥救肺汤高、中、低剂量组和CTX组均出现显著的凋亡现象。结论:清燥救肺汤能明显促进肺癌细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路,上调其下游Bax蛋白表达,下调其下游Cyclin D1蛋白表达有关。     

从细胞凋亡和周期研究旋覆归连方抑制食管癌Eca9706细胞增殖作用

目的:从细胞增殖、周期和凋亡研究旋覆归连方治疗食管癌作用机制.方法:体外培养食管癌细胞株Eca9706,MTT法检测旋覆归连方抑制细胞增殖作用,观察其时效和量效;1×105/孔细胞接种于6孔板,加入15,25,60 mg·L-1的药物作用48 h,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果:旋覆归连方具有很强的抑制Eca9706增殖作用,具有剂量依赖性,IC50 58.11mg·L-1;质量浓度15,25,60 mg·L-1在96 h内抑制率依时增加;早、晚期凋亡率用药组与阴性对照组相比明显增高(P＜0.05);细胞G1/G0期比率也明显增加(P＜0.05),60 mg·L-组出现了明显的凋亡峰.结论:旋覆归连方能抑制食管癌细胞的增殖,具有浓度和时间依赖性,可能与其阻滞了细胞G1/G0期和诱导细胞凋亡有关.     

半夏泻心汤含药血清对胃癌微环境中BMSCs生长增殖的影响

目的:观察半夏泻心汤及不同配伍药组含药血清对胃癌微环境中骨髓间充质干细胞(BMSCs)生长增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:设BMSCs常规培养为空白组;模型组采用transwell小室将人胃癌BCG-823细胞与大鼠BMSCs非接触共培养建立胃癌微环境;半夏泻心汤及不同配伍含药血清组(全方组、辛开组、苦降组、甘补组)在上室内加入体积浓度为10%的相应配伍药含药血清。倒置显微镜观察BMSCs细胞形态、噻唑蓝(MTT)比色法观察BMSCs的增殖率,流式细胞术(FCM)检测BMSCs的细胞周期,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测原癌基因(c-Myc)和端粒酶逆转录酶(TERT)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测c-Myc和TERT mRNA的表达。结果:全方组、辛开组、苦降组、甘补组含药血清在4,5,6,7 d对BMSCs的增殖有明显抑制作用,全方组明显优于甘补组(P0.05);第7天的检测结果显示全方组、辛开组、苦降组、甘补组含药血清均可降低c-Myc和TERT表达水平,升高G1期细胞比例,降低S期细胞比例,全方组明显优于甘补组(P0.05)。结论:半夏泻心汤及不同配伍药组含药血可抑制胃癌微环境中BMSCs的异常增殖,半夏泻心汤全方为最佳配伍。     

半夏泻心方配伍药组含药血清对人胃癌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的研究半夏泻心方不同配伍药组含药血清对人胃癌BGC-823细胞凋亡及凋亡相关基因的影响。方法采用S-P免疫组化法检测凋亡相关基因bcl-2、bax的表达。结果半夏泻心方配伍中辛开组、苦降组和由其组成的辛苦组凋亡指数显著高于辛甘组、苦甘组、甘补组和全方组(P<0.05),呈剂量-效应关系。辛苦组可显著下调bcl-2基因的表达,上调bax基因的表达。结论半夏泻心方中辛开、苦降的配伍形式可能通过促进bax的蛋白表达、抑制bcl-2蛋白表达达到诱导细胞凋亡作用。辛开、苦降配伍后(辛苦)有显著的协同增效趋势,而其它配伍药群可能存在拮抗作用。提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的主要治则治法之一。     

通莲I号方及其拆方对食管癌Eca109细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 研究通莲I号方及其拆方在不同浓度下对食管癌Eca109细胞形态和生长周期的调节作用;探讨该方抑制食管癌细胞增殖的机制。 方法: 将Eca109细胞以1×10⁶个/皿密度接种于Φ100 mm培养皿中,以10％小牛血清DMEM培养液培养,37 ℃,5%饱和湿度的CO₂培养箱孵育,细胞贴壁24 h,分别加入浓度为25~3 200 mg·L^-1倍比梯度的通莲I号方(T)、清热解毒拆方(Q)、活血行气拆方(H)、滋阴养血拆方(Z)等4方提取液,孵育48 h后,MTT比色法检测细胞增殖变化、光镜观察细胞形态、流式细胞技术(FCM)测定细胞周期。 结果: T,Q,H的IC₅₀值分别为386,771,729 mg·L^-1;与空白对照组(C)相比,T,Q,H 3方显著影响Eca109细胞周期变化:G1期细胞所占比率分别为69.43%,60.84%,61.90%。同时,T,Q,H组细胞的S期与C组比较,均有显著性差异(P<0.05),T方作用最强。而Z方对细胞的抑制作用较弱,与C组无显著性差异。 结论: 通莲I号方通过抑制细胞进入S增殖期从而干预食管癌Eca109细胞生长,各拆方具有协同作用,全方作用最优。     

常山水提醇沉物对EC9706细胞周期、凋亡、能量代谢的影响

目的从细胞增殖、凋亡、细胞周期、能量代谢角度,研究常山水提醇沉物抗食管癌细胞EC9706的作用及机制。方法用MTT法检测EC9706细胞活性,流式细胞术检测药物对食管癌EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测药物对EC9706细胞能量代谢的影响。结果不同浓度常山水提醇沉物作用48 h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.01),可以有效促进细胞凋亡(P<0.05),将EC9706细胞阻滞于S期和G2/M期(P<0.05),并且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P<0.01)。结论以上结果表明,常山水提醇沉物可能通过干预细胞周期、凋亡及能量代谢抑制食管癌EC9706细胞增殖。     

半夏泻心汤对糖尿病大鼠胃窦Cajal间质细胞及干细胞因子的影响

目的 观察半夏泻心汤对糖尿病（diabetes mellitus,DM）大鼠胃窦Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICCs）及干细胞因子（stem cell factor,SCF）表达的影响。方法 将60只健康雄性DM大鼠随机分成对照组、模型组、半夏泻心汤组（中药组）和多潘立酮组（西药组）。一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ,55 mg/kg）制作糖尿病大鼠模型。中药组给予半夏泻心汤［5.4 g/（kg？d）］灌胃,西药组给予多潘立酮［5 mg/（kg？d）］灌胃,模型组及对照组每天给予等体积蒸馏水,持续灌胃8周后,检测各组大鼠体重及血糖,给予半固体营养糊灌胃测定胃残留率,利用免疫组化和图像分析观察胃窦c-kit阳性ICCs及SCF表达。结果 与对照组比较,模型组体重减轻,血糖及胃残留率升高,c-kit阳性ICCs及SCF平均光密度值显著降低（P〈0.05）。与模型组比较,两个用药组多饮、多食及多尿症状减轻,精神状态好转,体重、c-kit阳性ICCs及SCF平均光密度值明显增加（P〈0.05）,胃残留率降低（P〈0.05）;中药组血糖降低（P〈0.05）,且中药组c-kit阳性ICCs平均光密度高于西药组（P〈0.05）。结论 半夏泻心汤可以促进糖尿病大鼠胃窦肌间神经丛c-kit ICCs及SCF的表达,对受损的DM大鼠胃窦ICCs、SCF有部分恢复作用,可改善糖尿病大鼠的胃动力障碍。     

甘草次酸对人食管癌Eca9706细胞生长的抑制作用及机制

目的:研究甘草次酸对人食管癌细胞生长的抑制作用及对细胞凋亡的影响。方法:Eca9706细胞接种于96孔板,每孔104个细胞/100μL,培养24 h贴壁,分别加入含不同浓度甘草次酸的培养液100μL,质量浓度分别为95,114,138,166,200 mg·L-1,另设对照孔(加培养液100μL和与溶解药物等量的DMSO),每组设8个复孔。细胞培养48 h,MTT法检测甘草次酸对人食管癌细胞Eca9706增殖的抑制,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况。结果:在95~200 mg·L-1质量浓度甘草次酸能有效抑制Eca9706细胞增殖,且呈剂量依赖性,(P<0.05)。83,108,133 mg·L-1的甘草次酸作用Eca9706细胞48 h,细胞凋亡率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。激光共聚焦显微镜下对照组细胞膜绿色荧光,以早期凋亡为主,甘草次酸高、低剂量组细胞膜绿色荧光、核红色荧光较多,既有早期凋亡,又有晚期凋亡。结论:甘草次酸可能通过诱导细胞凋亡对食管癌Eca9706细胞增殖起抑制作用。