岩白菜素通过下调PI3K-AKT-mTOR通路抑制恶性胶质瘤的恶性生物学行为

目的 探究岩白菜素对恶性胶质瘤细胞的抑制作用及可能机制。方法 常规培养U251和U87细胞,以一定浓度梯度（0、0.5、1、2、4、8μM）的岩白菜素与U251和U87细胞共孵育,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测集落形成能力,Transwell小室迁移和侵袭实验检测纵向迁移能力,划痕愈合实验检测横向迁移能力,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡,免疫印迹检测PI3K-AKT-mTOR通路的变化,MTT检测与PI3K抑制剂共孵育后岩白菜素对U251细胞抑制作用的变化。同时利用MTT评估岩白菜素对正常人脑胶质HEB细胞的细胞毒性。结果 与一定浓度梯度的岩白菜素共孵育后,MTT法检测发现U251和U87细胞的增殖能力以时间依赖性和浓度依赖性下降,平板克隆形成实验检测发现U251和U87细胞的集落形成能力浓度依赖性下降,Transwell小室迁移和侵袭实验检测发现U251细胞的纵向迁移和侵袭能力浓度依赖性下降,划痕愈合实验发现U251细胞的横向迁移能力浓度依赖性下降,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测发现与一定浓度的岩白菜素共孵育后凋亡细胞增多,免疫印迹检测发现,总PI3K...     

异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及JAK2/STAT3通路的影响

 目的 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移及Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法 采用MTT法测定不同浓度的异丙酚对胶质瘤U87细胞和人正常星型胶质细胞HEB生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定2、5、10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞体外迁移能力的影响,蛋白印迹法(WB)测定10 μM异丙酚对胶质瘤U87细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果 与对照组相比,5、10、25、50、100 μM异丙酚均能显著抑制胶质瘤U87细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),后续选择2、5、10 μM异丙酚进行实验。与对照组相比,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理后,侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验说明,胶质瘤U87细胞经2、5、10 μM异丙酚处理48 h后,迁移能力分别降低了(19.69±2.67)%、(41.41±3.28)%、(59.75±2.91)%,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。且胶质瘤U87细胞中JAK2蛋白磷酸化水平、STAT3蛋白磷酸化水平明显下调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 异丙酚可能通过下调JAK2/STAT3信号传导通路相关蛋白表达,抑制胶质瘤U87细胞增殖、侵袭、迁移能力。     

miR-221/222激活Akt通路增加恶性胶质瘤的放射抗性

目的 探讨miR-221/222增加恶性胶质瘤放射抗性的机制。方法 实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测U251、U87及LN229系胶质瘤细胞在接受照射后3和6 h miR-221/222的表达水平;通过平板克隆形成实验,观察敲低U251、U87及LN229系胶质瘤细胞miR-221/222后肿瘤细胞放射敏感性的变化;染色质免疫沉淀技术(ChIP)检测c-jun与miR-221/222的结合情况;虫荧光素酶活性报告试验验证PTEN是miR-221/222的靶基因;使用Western blot检测敲低胶质瘤细胞miR-221/222后的相关蛋白的表达;通过胶质瘤裸鼠模型,观察敲低miR-221/222后放射治疗的效果。结果 U251、U87及LN229系胶质瘤细胞在接受照射后miR-221/222的表达上调(t=5.48~29.21,P<0.05);敲低胶质瘤细胞miR-221/222后,其放射敏感性提高(F=1 202.22,1 789.12,1 012.32,P<0.05); c-jun转录调控miR-221/222的表达; PTEN是miR-221/222的靶基因(t=13.16,P<0.05);Western blot检测显示,敲低胶质瘤细胞miR-221/222后,pAkt及DNA-PKcs的表达下调,PTEN和GSK-3β的表达上调,Akt表达保持稳定;体内实验结果显示,敲低miR-221/222的表达联合放射治疗可显著抑制胶质瘤的生长(F=56.36,P<0.05)。结论 放射可诱导胶质瘤细胞miR-221/222的表达上调,miR-221/222通过激活Akt通路增加恶性胶质瘤的放射抗性。     

miR-1抑制SDF-1表达和分泌调控HMSC-bm向肝癌细胞迁移

目的 明确肿瘤抑制性micro RNA-1（miR-1）能否通过抑制SDF-1的表达和分泌,调控骨髓间充质干细胞（HMSC-bm）向肿瘤组织的转移.方法 （1）分别利用miR-1表达质粒pSuper-miR-1和miR-1反义寡核苷酸,在肝癌细胞系HepG2中过表达或下调miR-1,Western blot和酶联免疫吸附实验分别检测肝癌细胞蛋白裂解物和培养上清液中SDF-1的表达和分泌水平;（2）构建融合SDF-1 3UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因载体,将其与pSuper-miR-1共转染HEK293细胞,利用双萤光报告基因检测系统检测重组萤光素酶的表达情况.（3）利用pSuper-miR-1或miR-1反义寡核苷酸转染接种于Transwell下层小室的HepG2细胞过表达miR-1或下调miR-1水平,检测TransweH上层小室HMSC-bm向下层小室HepG2肝癌细胞的迁移情况.结果 （1）在肝癌细胞,HepG2过表达miR-1能够显著抑制SDF-1蛋白表达和分泌,而下调miR-1水平则能够诱导SDF-1的表达和分泌.（2） miR-1能够抑制携带SDF-1 3UTR的pGL3重组萤光素酶报告基因活性.（3）在Transwell下层小室的HepG2细胞中过表达miR-1后,上层小室中HMSC-bm向下层小室迁移细胞数量显著减少,而下调下层小室HepG2细胞中miR-1表达水平,则明显增加HMSC-bm向HepG2肝癌细胞的迁移.结论 miR-1能够直接抑制肝癌细胞SDF-1的表达和分泌,并藉此降低肝癌细胞对HMSC-bm的趋化作用.     

MIIP基因对人胶质瘤细胞U87增殖能力与放疗敏感性影响

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人胶质母细胞瘤细胞系U87放疗敏感性的影响。方法采用过表达MIIP基因慢病毒转染U87细胞,通过Western blot实验检测转染效率;MTT实验检测MIIP基因对U87细胞活力的影响;应用平板克隆形成实验,评价放射线照射对MIIP过表达组与对照组克隆形成能力的影响;进一步应用Western blot实验检测RAD51蛋白与BCL2蛋白的表达情况。结果 MIIP基因过表达可以抑制神经胶质瘤细胞U87的增殖能力。上调MIIP基因,抑制U87细胞的克隆形成能力,并提高放疗敏感性。放疗前与放疗后,MIIP基因均抑制RAD51蛋白与BCL2蛋白的表达。结论过表达MIIP基因抑制U87细胞的增殖能力与克隆形成能力;MIIP基因可提高U87细胞放疗敏感性,其机制与RAD51、BCL2信号转导通路相关。     

MiR-138在脑胶质瘤患者血清表达的生物学效应及临床意义

目的 探讨脑胶质瘤患者血清微小RNA-138（microRNA-138,miR-138）表达变化及其生物学效应。方法 选择脑胶质瘤患者60例、健康体检者60例,采用实时荧光定量PCR技术检测2组血清miR-138表达,受试者工作曲线确定血清miR-138检测对脑胶质瘤的诊断价值;体外对脑胶质瘤细胞系U251和U87分别转染miR-138类似物（miR-138 mimic）与阴性对照（miR-NC）,通过MTT实验与Transwell实验测定脑胶质瘤细胞增殖、侵袭及转移。结果 与健康体检者比较,脑胶质瘤患者血清miR-138表达明显下降（t=14.60,P<0.01）,且随脑胶质瘤患者恶性程度的增加,miR-138表达量逐渐减少;曲线下区域面积为0.75（95%置信区间为0.65-0.85,P=0.00）,当截断值为2.19时,其诊断脑胶质瘤的灵敏度为92%、特异性为52%。MTT实验表明miR-138表达增加抑制脑胶质瘤细胞增殖。Transwell实验表明miR-138表达增加抑制脑胶质瘤细胞侵袭及转移。结论 脑胶质瘤患者血清miR-138呈现低表达,对诊断脑胶质瘤具有较高的诊断效率,miR-138可作为一种肿瘤抑制因子参与脑胶质瘤的发生发展。     

miR-633通过调节蛋白激酶B影响缺氧诱导H9C2细胞生物学功能研究

目的探讨miR-633对缺氧诱导的H9C2细胞生物学功能调节作用。方法缺氧诱导培养H9C2细胞,利用实时定量荧光PCR检测缺氧后细胞中miR-633表达情况。通过MTT实验和Transwell实验检测缺氧对细胞增殖和迁移的调节作用。在缺氧H9C2细胞中下调miR-633的表达,通过MTT实验和Transwell实验检测miR-633对缺氧后细胞增殖和迁移的调节作用。miRDB软件预测miR-633可能打靶的蛋白,荧光素酶报告基因实验分析miR-633对蛋白激酶B(AKT)的靶向调节作用。通过Western blot检测miR-633对缺氧后H9C2细胞中AKT、细胞周期素D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)与基质金属蛋白酶2(MMP2)的影响。结果缺氧诱导后H9C2细胞中miR-633表达上调,缺氧诱导抑制H9C2细胞的增殖和迁移能力。MTT和Transwell实验证明,miR-633受到抑制后能够显著促进H9C2细胞的增殖和迁移。miR-633与AKT的3′UTR区域具有结合位点,miR-633可以抑制AKT的生物学活性,下调miR-633能够促进AKT、Cyclin D1、bcl-2与MMP2蛋白的表达。结论 miR-633可以通过调节AKT的活性促进缺氧诱导的H9C2细胞的增殖与迁移。     

过表达迁移侵袭抑制蛋白基因对人巨细胞病毒转染U87细胞特性影响

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人巨细胞病毒(HCMV)感染的神经胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法采用过表达的MIIP基因慢病毒转染HCMV感染的U87细胞,通过Western-blot检测其转染效率,并将细胞分为为实验组(U87+HCMV/MIIP)、对照组(U87+HCMV/CMV4)和空白组(U87+HCMV)。采用CCK-8检测过表达的MIIP基因对HCMV转染的U87细胞增殖情况的作用;采用Transwell迁移实验检测对细胞迁移情况的影响;采用Transwell体外侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。结果实验组细胞的MIIP蛋白表达量与对照组和空白组比较,明显上调(P<0.05);细胞的增殖能力与对照组和空白组比较,明显降低(P<0.05);细胞的侵袭力与对照组和空白组比较,明显减弱,且细胞数显著下调(P<0.05);迁移能力与对照组和空白组比较,显著降低(P<0.05)。结论 HCMV感染的U87细胞在MIIP基因过表达后增殖、侵袭及迁移能力均受抑制。     

人参皂甙20(R)-Rg3对人胶质瘤U87侵袭的影响

目的探讨人参皂甙20(R)-Rg3体外对人胶质瘤系U87细胞侵袭的影响及可能机制。方法采用MTT法检测Rg3对U87细胞黏附纤维连接蛋白能力的影响。采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测Rg3对U87细胞侵袭能力的影响。采用明胶酶活性方法检测Rg3对U87细胞MMP-9和MMP-2蛋白表达的影响。结果 Rg3(12.5、25、50 ng/L)作用24 h后,U87细胞黏附纤维连接蛋白能力逐渐降低,呈显著的浓度依赖性(P<0.05)。体外侵袭实验显示不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞侵袭能力逐渐降低。明胶酶活性检测表明增殖,不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞中基质金属蛋白酶MMP-2蛋白酶原及其活性片段的表达逐渐减少,呈显著的浓度依赖性。结论 Rg3能显著抑制U87细胞的黏附和侵袭能力,可能与Rg3降低MMP-2蛋白酶原及其活性片段表达减少有关。     

腺病毒介导PTEN和TIMP-2抑制胶质瘤U87体外侵袭力的研究

目的　探讨腺病毒介导PTEN和TIMP 2对人脑胶质瘤细胞体外侵袭力的抑制作用。方法　用含PTEN和TIMP 2基因的重组腺病毒载体体外转染人胶质瘤细胞系U87,用RT PCR、Westernblot检测目的基因与蛋白表达。通过Boyden小室法检测U87转染前后细胞体外侵袭力的变化 ,同时采用胶原酶谱法分析MMP 2、MMP 9酶的相对活性。结果　转染AdPTEN、AdTIMP 2后U87细胞中目的基因与蛋白的表达上调 ,U87、AdX gal、AdPTEN、AdTIMP 2和PTEN TIMP 2的侵袭细胞数分别为 5 5 6 4± 13 2 7、4 8 2 6± 14 75、35 2 7± 10 94、2 7 38± 12 81和 19 16± 5 4 5 ,转染靶基因后U87细胞的体外侵袭力受到明显抑制 ,联合转染后侵袭力的抑制更明显 ,这与MMP的改变并不完全一致。结论　重组腺病毒载体介导的PTEN与TIMP 2联合基因治疗可能是抗胶质瘤侵袭的一个有用方法     

Optimization of the system of medical service of students of Cadet Schools of the Ministry of Defense of the Russian Federation

One of the factors of the successful military career guidance Cadet schools students is preserving and promoting their health. Medical support of children and adolescents aged 10-17 years should include the full range of medical and preventive measures defined for this group. The state of providing outpatient care for pupils at the Cadet School in St. Petersburg was studied. These results show that full medical care in accordance with the standards can be based only on children's health clinics. It is important that the organization of medical support pupils cadet schools should be cooperate with civilian health care.     

Estimation of accumulated dose of radiation by method of ESR-spectrometry of dental enamel of mammals

ESR-spectrometry was used to investigate radiation-induced paramagnetic centers in enamel of mammals: carnivores (polar bear and fox), ungulates (reindeer, European bison, moose), and man. Values at half the microwave power saturation of the radiation signal, P_1/2, evaluated at room temperature, was found to range from 16 to 26 mW for animals and man. A new approach to discrimination of the radiation induced signal from the total ESR spectrum of reindeer enamel is proposed. ‘Dose-response’ dependencies of enamel of different species mammals were measured within the dose range from 0.48 up to 10.08 Gy. Estimations of ‘radiosensitivity’ enamel of carnivores and ungulates showed good agreement with radiosensitivity enamel of man by ESR method.     

带状疱疹83例误诊原因分析

带状疱疹是由水痘—带状疱疾病毒引起的皮肤科常见疾病。其主要的病理损害,一是受累神经的严重炎症性浸润,继而导致受侵犯神经节内神经细胞变性、坏死;二是皮肤的水泡。迅速抑制神经节和相应的感觉神经纤维的充血、水肿和坏死,防止粘连形成,达到迅速镇痛、改善皮损,缩短病程及防止后遗症的发生是治疗的关键。因而,尽早明确诊断,     

海马头部浅沟消失对海马硬化诊断价值的探讨

目的　探讨海马头部浅沟消失对海马硬化的诊断价值。方法　对 18例经组织学检查证实的海马硬化患者的MRI检查资料和 18例年龄相匹配的对照组进行回顾性分析 ,观察海马头部浅沟的显示情况、海马头部大小和信号改变。结果　 18例海马硬化患者中 ,16例硬化侧海马头部浅沟消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟明显变浅 ,几乎消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟存在。硬化侧海马头部均有萎缩 ,并在T2 WI和液体衰减恢复 (FLAIR)成像呈高信号。海马头部浅沟消失对海马硬化诊断的敏感性为 88.9% ,特异性为 10 0 %。结论　海马头部浅沟消失是诊断海马硬化的一个可靠征象 ,结合患侧海马有萎缩性改变和T2 加权成像信号增高 ,可肯定诊断海马硬化。     

肝癌转移机制研究进展

肝癌细胞的侵袭和转移是肝癌治疗失败和患者致死的主要原因，因此，了解肝癌侵袭转移的相关机制十分重要。肿瘤转移是一个多步骤的复杂的生物学过程，多个因素参与了肿瘤转移的调控，癌基因的表达上调、抑癌基因的失活、免疫基因的失调、肿瘤细胞间粘附作用的丧失、新生血管的形成、蛋白水解酶的合成、细胞的迁移能力增强、肿瘤细胞和基底膜的粘附等等，都是促进肿瘤转移复发的重要因素。     

跟骨骨折临床治疗探讨

目的：探讨跟骨骨折的分型与临床治疗措施的选择。方法：自2002年1月-2008年1月，选择我科收治的跟骨骨折患者中的100例，分为手术组与非手术组，其中非手术组50例，手术组50例；男85例，女15例。结果：手术治疗组患者术后跟部疼痛不适、行走受限较非手术组明显轻。结论：手术治疗能大限度恢复跟骨的解剖结构，减少跟骨骨折所致的并发症。