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抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选 总被引:15,自引:1,他引:14
目的 寻找抗HBV最佳反义寡核苷酸区段。方法 合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核酸(asON),加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG22.2.15,以ELSA法测定HBsAg、HBeAg含量。结果 互补于pre-S2翻译起始区的asON(序列Ⅰ)抗HBV基因表达作用最强(P〈0.02),对HBsAg、HBeAg的最高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的 相似文献
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目的筛选高效特异的抗HBV反义核酸药物。方法针对HBV包装信号ε起始区设计并合成硫代反义寡聚核苷酸(s-asODN)片段,通过ELISA检测法、MTT法、电子显微镜等观察,研究此s-asODN对HBsAg、HBeAg和HBcAg表达,以及对细胞毒性,细胞形态的影响。结果针对ε起始区的s-asODN显著抑制HBsAg、HBeAg和HBcAg的表达,其中,对HBeAg和HBcAg的抑制率分别为38.1%和58.7%高于S基因起始区(32.1%和37.2%,P<0.01),对HBsAg抑制率为82%,低于S基因起始区(93.41%),在实验浓度下s-asODN对细胞无毒性,对细胞形态无影响。结论HBV包装信号区是反义核酸抗HBV复制研究的重要的靶序列选择区域。 相似文献
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外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒前S/S基因变异的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的研究外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒(HBV)包膜抗原基因变异的意义。方法收集19例慢性乙肝患者的PBMC和配对血清,用PCR扩增PBMC及血清中HBV包膜基因片段(S,preS1,preS2),并对其中各5例PBMC及配对血清中的preS1和preS2基因片段,分别进行核苷酸序列分析。结果S、preS1和preS2片段在血清和PBMC中的检出率,分别为100%、947%、100%和0、263%、263%。与HBVADR序列比较,10份标本HBVDNA核苷酸序列分析,发现2份preS1和3份preS2的核苷酸序列,没有发生改变;8份preS1和7份preS2的核苷酸序列,均发生了一个至多个位点的点突变。结论PBMC中存在的包膜基因不完整,因而不会形成完整的HBV病毒颗粒,故不支持HBV可潜伏于PBMC并发展成为体内HBV再感染的来源。preS1点突变编码的氨基酸位点,集中在aa21~47区域,可能会影响HBV的吸附和穿入,及组织亲嗜性的改变。HBV亚基因片段在PBMC中,是否会影响细胞的功能,有待进一步研究。 相似文献
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外周血单个核细胞中乙型肝炎病毒前S/S基因变异?… 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究外周血单个核细胞(PBMC)中乙型肝炎病毒(HBV)包膜抗原基因变异的意义。方法 收集19例慢性乙肝患者的PBMC和配对血清,用PCR扩增PBMC及血清中HBV包膜基因片段9S,preS1,preS2),并对其中各5例PBMC及配对血清中的preS1和preS2基因片段,分别进行核苷酸序列分析。结果 S,preS1和preS2片段在血清和PBMC中的检出率,分别为100%,94.&%,1 相似文献
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逆转录病毒载体介导乙型肝炎病毒反义基因的转录表达 总被引:2,自引:0,他引:2
为了探索在真核细胞内转录表达乙型肝炎病毒(HBV)反义核酸的方法,用基因重组技术将HBV前C/C基因(PreC/C)和前S/S基因(PreS/S)片段反向插入逆转录病毒载体质粒,再将重组体分别转染PA317包装细胞,进而获得能够介导HBV反义基因向小鼠NIH3T3细胞转移表达的重组逆转录病毒。经分子杂交试验表明,含有HBV反义基因的重组逆转录病毒序列已经整合到转染的PA317细胞染色体上;转导的NIH3T3细胞内有HBV反义RNA转录表达。结论:逆转录病毒载体包装细胞系统能够介导HBV反义基因在真核细胞中转录表达,因而有可能利用反义技术和基因转移方法进行抗-HBV基因治疗 相似文献
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肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义 总被引:1,自引:1,他引:1
取225例人肝硬变活检组织石蜡切片,检测了HBVDNA及其5种抗原。分别用免疫组化ABC法检测HBxAg、pre-S_1和pre-S_2抗原;用PAP法检测HBsAg和HBcAg;用原位杂交方法检测HBVDNA;用免疫组化、原位杂交双标记方法检测HBVDNA和HBsAg、HBxAg或HBcAg。结果显示,阳性检出率HBsAg为70.0%(128/183例),pre-S_1抗原为64.4%(85/132例)、pre-S_2抗原为61.4%(81/132例),HBxAg为75.3%(113/150例),HBcAg为22.4%(39/174例),HBVDNA为62.4%(58/93例)。双标阳性检出率HBVDNA和HBsAg为37.3%(19/51例),HBVDNA和HBx-Ag为86.3%(44/51例),HBVDNA和HBcAg为39.2%(20/51例)。HBVDNA和HBV5种抗原阳性病例中80%以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明,在我国肝硬变的发生发展与HBV慢性感染有密切的关系。 相似文献
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应用S基因转染的Sp2/0细胞作为靶细胞研究HBV基因疫苗的细胞免疫应答 总被引:1,自引:0,他引:1
构建编码HBsAg 蛋白的重组真核表达质粒pCR3-1S作为HBV 基因疫苗, 免疫接种Ba1b/c 小鼠。以重组质粒pCR3-1S转染的Sp2/0 细胞作为靶细胞, 采用51Cr 4h 释放法, 体外检测免疫小鼠的淋巴细胞杀伤功能。结果显示, 与空载体对照组相比较, HBV基因疫苗可诱导Balb/c 小鼠产生HBV 特异性细胞毒性T 细胞应答( P> 0-05) , 提示以Sp2/0 基因转染的细胞作为靶细胞, 检测免疫Balb/c 小鼠淋巴细胞的杀伤功能是可靠的。 相似文献
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人巨细胞病毒反义寡核苷酸抗病毒活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒活性。方法根据HCMV立即早期基因UL36序列,设计并合成了3条与该基因互补的硫代反义寡核苷酸,以人胚肺细胞作为病毒感染的靶细胞做了体外抗病毒活性评价。结果研究结果显示作用于剪接供体的ASON具有较强的抗病毒活性。结论特异的ASON有一定的抗病毒活性,有可能作为一种新的手段用于人HCMV感染的防治 相似文献
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斑点杂交及RNA酶保护分析法检测反义HSP90基因转染细胞 … 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:检测HSP90反义核酸转染细胞后反义RNA的表达,方法:采用打点杂交及RNA酶保护分析法,结果:HSP90反义核酸转染细胞AH-SGC7901,AH-SGC7901/VCR,AH-HCC7402及AH-Ec109有HSP90反义RNA的表达。结论:ESP90反义RNA在AH-SGC7901,AH-SGC7901/VCR,AH-HCC7402及AH-Ec109细胞的表达,为进一步研究HSO90 相似文献
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通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV蛋白表达的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用半乳糖末端糖蛋白受体(ASGP-R)介导的内吞作用,将外源基因导入真核细胞,与脂质体介导的转染和细胞表面转铁蛋白受体(Tf-R)介导的内吞作用相比,虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移,但ASGP-R法具有肝细胞特异性,而脂质体法和Tf-R法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒(HBV)mRNAPreC/C区的核酶质粒pCMV-Ripc特异性导入肝细胞并发挥作用,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),评价核酶在细胞水平对HBV抗原表达的阻断作用。结果表明当核酶质粒pCMV-Ripc与HBV抗原表达质粒pUC-2HBV共转染HepG2细胞时,核酶对HBsAg和HBeAg表达的抑制率分别为55.29%和68.73%。 相似文献
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目的 :研究血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖与迁移在动脉粥样硬化 (AS)的早期、中期或AS进展期或血管事件的发病机制中的作用。方法 :采用改良的Boyden小室法检测VSMCs的迁移效应 ;以MTT法、3 H TdR掺入法、3 H 脯氨酸标记法和VSMCs计数评价VSMCs的增殖效应 ;将培养的VSMCs分为 5组 :2 %胎牛血清 (2 %FCS)组、AngⅡ组(其浓度为 10 -10 ~ 10 -6Mol/L)、Losartan组 (其浓度为10 -7~ 10 -5Mol/L)、MCP 1mcAb组 (终浓度为 10 μg/ml)和阳性对照组 (含 5 %的酵母多糖… 相似文献
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本文构建了含有HBsAg pre S区基因的真核表达载体pCMV4-pre S,经大量提取质粒并纯化后,肌肉注射Balb/c小鼠,共免疫3次,间隔两周,结果有3/7的小鼠血清抗pre S2抗体呈阳性。 相似文献
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应用S基因转染的Sp2/0细胞作为靶细胞研究HBV基因疫?… 总被引:2,自引:0,他引:2
构建编码HBsAg蛋白的重组真核表达质粒pCR3.1-S作为HBV基因疫苗,免疫接种Balb/c小鼠,以重组质粒pCR3.1-S转染的Sp2/0细胞作为靶细胞,采用^51Cr 4h释放法,体外检测免疫小鼠的淋巴细胞杀伤功能。结果显示,与空载体对照组相比较,HBV基因疫苗可诱导Balb/c小鼠产生HBV特生细胞毒性T细胞应答,提示以Sp2/0基因转染的细胞作为靶细胞,检测免疫Balb/c小鼠淋巴细胞 相似文献
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反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与 … 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究反义核酸的抗病毒作用。方法 设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)前S(PreS)基因区第951-968位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN),以20μg/g体重/日剂量对3只腹腔感染DHBV5.2毒株后,血清DHBsAg及DHBV DNA阳性鸭连续静脉注射10天,同时以等体积生理盐水注射另3只感染鸭作为对照。结果 对照鸭注射生理盐水后,血清DHBsAg及DHBV DNA阳性未 相似文献
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目的 研究FasL-mRNA在慢性乙型肝炎(CHB)肝组织中的表达及意义。方法 采用人工合成FasL寡核苷酸探针对CHB肝组织进行原位杂交检测。结果 肝组织浸润单个核细胞及肝细胞都不同程度检测出FasL-mRNA,阳性细胞主要分布在碎屑样坏死,灶状坏死周围。FasLmRNA还可在窦细胞中表达,结论 慢性乙型肝炎时肝细胞自身合成并表达FasL。同时FasL阳性细胞可能经Fas机制发生“细胞自杀”或“ 相似文献
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《中国生物医学工程学报(英文版)》1995,(4)
SERVETHESCIENTIFICRESEARCHBYINTERNETSERVETHESCIENTIFICRESEARCHBYINTERNETZhaoAifang;andZhangZhengguo(TheinstituteofBasicMedica... 相似文献
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目的 应用新型杆状病毒表达系统快速构建含有HBsAg基因的重组杆状病毒,高效表达HBsAg,为HBV诊断试剂、疫苗及治疗研究提供依据。方法 构建含有HBsAg基因的供体质粒pFB-BS,转化Bac-to-Bac杆状病毒表达试剂盒中的DH10Bac致敏菌,利用其含有的细菌Tn7转座繁忙将HBsAg基因重组至穿梭质粒Bacmid上,快速筛选出含有HBsAg基因的重组杆状病毒。结果 此重组病毒能在昆虫细 相似文献
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HBVC基因上游约 2 0 0bp序列(nt 16 0 0~nt 185 0 )是重要HBV基因调控区。T 176 2A 176 4(nt 176 4A→T ,nt 176 4G→A ,)变异在慢性HBV感染者是变异的热点。为了解我国HBV流行株C基因调节序列及变异情况 ,分别对 7例慢性无症状HBV携带者和 7例亚急性重症乙型肝炎患者HBVCP区序列进行了分析。1 研究对象 7例慢性无症状HBV携带者 (AsC) (3例来自广东地区 ,4例自东北地区 )、7例亚急性重症乙型肝炎患者 (FH) (为我科 1993~ 1996年间收治的住院患者 )。酶联免疫法检测HBV血清标志物。2… 相似文献