蓝氏贾第鞭毛虫特异性细胞骨架蛋白——贾第素研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫具有由微管、微丝和骨架蛋白构成的高度发达的细胞骨架系统.近年来,贾第虫的细胞骨架与其致病力的密切关系已经得到证实.在参与细胞骨架构成的众多蛋白质中,特异性细胞骨架蛋白——贾第素是其中重要的成分之一.对贾第素的研究不仅可为贾第虫细胞骨架的研究增添新的知识和研究资料,还可为贾第虫病的致病机制及抗贾第虫药物靶点的选择提供实验依据.     

蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白的分子生物学研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫作为真核生物的模型,越来越受到广大生物学学者的重视,贾第虫借助细胞骨架蛋白附着于宿主肠上皮细胞,导致贾第虫病。将蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白成分作为新药物开发靶点的研究与日俱增。本文综述了蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白的分子生物学研究方法及最新进展,为新药物的开发及贾第虫骨架蛋白的进一步研究提供有价值的资料。     

蓝氏贾第鞭毛虫潜在致病机制初探

蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)是一种常见的人兽共患寄生性原虫,由其导致的贾第虫病已被世界卫生组织列为危害人类健康的10种主要寄生虫病之一。近年来,贾第虫病的危害日益受到重视,然而贾第虫导致腹泻的致病机制尚不明确,可能与其细胞骨架蛋白、虫体分泌物、L-精氨酸代谢以及表面抗原变异、免疫学改变等多种因素有关,该文对与贾第虫致病机理相关的研究作一综述。     

质谱技术鉴定体外蓝氏贾第鞭毛虫的细胞骨架蛋白

目的用质谱技术鉴定体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的细胞骨架蛋白。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,提取虫体总蛋白,Bradford法测定蛋白质含量,样品经蛋白质2D-电泳后用硝酸银染色,扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量,获取蛋白质点匹配信息,然后挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF-MS)分析,鉴定其种类。结果虫体总蛋白质含量(4.8241±8)μg/ml。蛋白质二维电泳显示,蛋白点密集,约1 253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高,蛋白点颜色深且清晰、明亮。在胶图中随机选取80个匹配良好的蛋白点,经质谱分析,鉴别出5类46种蛋白质,其中细胞骨架蛋白6种(14个点),即α-贾第素、β-贾第素、γ-贾第素、δ-贾第素、中体素、鞭毛蛋白-1,代谢酶或相关蛋白18种(28个点),翻译转录蛋白5种(5个点),其他蛋白3种(3个点)、未知蛋白14种(14个点)。另有6个点未测出。结论质谱分析技术可用于体外蓝氏贾第鞭毛虫细胞骨架蛋白的鉴定。     

十二指肠贾第虫Rab11互作蛋白的筛选

目的 Rab11属于Rab小分子GTP酶家族,主要参与贾第虫外泌体样囊泡的产生。研究贾第虫囊泡运输中的分子机制,探寻贾第虫Rab11蛋白的互作蛋白至关重要。方法 通过分子克隆技术构建含His标签的原核表达质粒pET-32a-Rab11,经诱导表达和纯化,获得Rab11融合蛋白(rGdRab11)。用该蛋白免疫小鼠,制备抗血清,以此为抗体采用免疫荧光法观察Rab11蛋白的亚细胞定位。应用His-pull down联合质谱技术筛选贾第虫全虫蛋白中与Rab11蛋白互作的候选蛋白,并在GiardiaDB数据库和Revigo中对筛选的候选蛋白进行生物信息学分析。结果 成功表达和纯化出Rab11融合蛋白,并制备鼠源抗Rab11多克隆抗体。免疫荧光法观察Rab11蛋白定位于贾第虫滋养体细胞膜区域和细胞质中。共筛选出528个与Rab11特异性结合的候选互作蛋白,其中蛋白质评分大于20分的候选互作蛋白有517个,包括124个未知蛋白,393个已知蛋白。GO分析上述蛋白涉及组蛋白修饰、组蛋白单泛素化、代谢过程、建立或维持细胞骨架极性以及内吞等多种生物进程。结论 成功表达和纯化出Rab11融合蛋白,并制备了...     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫TCTP基因的克隆、表达和序列分析（英文）

目的克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)编码区,对其进行生物信息学分析和原核表达。方法根据WB株贾第虫TCTP编码区序列设计引物,以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得TCTP编码区片段,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物,采用Ni-NTA经亲和层析纯化重组蛋白。同时根据测序结果分析C2株贾第虫TCTP蛋白结构特征和进化关系。结果克隆了包含酶切位点全长470bp的C2株贾第虫TCTP编码区,构建了原核表达载体pET-28a(+)-TCTP,在Rosetta(DE3)中表达、纯化得到了相对分子量约18.5kDa的融合蛋白,与预期相符;测序结果显示C2株贾第虫TCTP序列与WB株相同,生物信息学分析显示贾第虫TCTP蛋白虽然序列长度较其它物种更短但与裂殖酵母TCTP空间结构相似,均由4个β折叠和3个主要的α螺旋组成,位于序列中部的不规则环状结构更小,仅9个氨基酸残基组成,在进化上与其它真核生物亲缘关系较远。结论成功克隆表达了贾第虫TCTP,为TCTP功能及贾第虫致病机制的研究提供了实验依据。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫TCTP基因的克隆、表达和序列分析

目的克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的翻译调控肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)编码区,对其进行生物信息学分析和原核表达。方法根据WB株贾第虫TCTP编码区序列设计引物,以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得TCTP编码区片段,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E. coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物,采用Ni-NTA经亲和层析纯化重组蛋白。同时根据测序结果分析C2株贾第虫TCTP蛋白结构特征和进化关系。结果克隆了包含酶切位点全长470 bp的C2株贾第虫TCTP编码区,构建了原核表达载体pET-28a(+)-TCTP,在Rosetta(DE3)中表达、纯化得到了相对分子量约18.5 kDa的融合蛋白,与预期相符;测序结果显示C2株贾第虫TCTP序列与WB株相同,生物信息学分析显示贾第虫TCTP蛋白虽然序列长度较其它物种更短但与裂殖酵母TCTP空间结构相似,均由4个β折叠和3个主要的α螺旋组成,位于序列中部的不规则环状结构更小,仅9个氨基酸残基组成,在进化上与其它真核生物亲缘关系较远。结论成功克隆表达了贾第虫TCTP,为TCTP功能及贾第虫致病机制的研究提供了实验依据。     

蓝氏贾第鞭毛虫的免疫逃避机制

蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)是一种世界性分布的机会性致病原虫,能够引起以腹泻为主要表现的贾第虫病,严重影响人类尤其是儿童的健康和发育。在贾第虫感染过程中,宿主的非特异性和特异性免疫系统均会产生强烈的抗贾第虫效应,但贾第虫通过抗原漂变、L-精氨酸饥饿等机制逃避和抑制宿主的免疫反应,引起宿主的长期或反复感染。本文对宿主的抗贾第虫免疫以及贾第虫的免疫逃避机制做一综述。     

C2株蓝氏贾第鞭毛虫SUMO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析及其催化活性区的原核表达

目的 克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的SUMO-Specific Protease(SENP)基因,并对其序列进行生物信息学分析,原核表达贾第虫SENP的催化活性区。方法 提取C2株贾第虫基因组DNA,以基因组DNA为模板获得SENP编码区全长片段,连入克隆载体pGM-T,测序后进行生物信息学分析;根据分析结果克隆SENP的催化活性区,构建其原核表达载体pET-28a(+)-SENPc,在E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot观察表达结果。结果 成功克隆了C2株贾第虫SENP编码区全长序列,生物信息学分析显示C2株贾第虫SENP蛋白序列与WB株相同,二级结构以无规则卷曲为主,其催化活性区位于126-497aa,被一段插入序列分割成两个部分;构建了SENP催化活性区原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达,在相对分子量约43 kD的位置出现目的 蛋白条带,与理论值相符。结论 成功克隆了贾第虫SENP基因并原核表达了其催化活性区,为贾第虫SENP蛋白功能的研究提供了基础。     

鼠贾第鞭毛虫中β贾第虫素的研究

肠贾第鞭毛虫(G.intestinalis)滋养体的几种蛋白质目前已研究清楚,其吸盘中有一类大约30kDa的结构蛋白,又称为贾第虫素(giardin),这种蛋白质具有酸性等电点,其编码序列已经测定。已知的有3种,分别为α、β和γ贾第虫素,相应的分子量大约为33kDa、29kDa和38kDa。而对鼠贾第鞭毛虫(G.muris)的研究很少,为了增进对宿主抗贾第虫的免疫应答的了解,本文作者用生物素对鼠贾第鞭毛虫的表面蛋白进行标记,通过双向凝胶电泳测定被生物素标记的蛋白质的