合肥地区耐多药结核分枝杆菌异烟肼、链霉素及 乙胺丁醇耐药相关基因位点表达研究

目的研究耐多药结核分枝杆菌异烟肼(INH)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)耐药相关基因位点的表达情况。方法选取该院2013年1月至2017年12月临床分离的101株耐多药结核分枝杆菌,利用测序法和基因芯片法分别检测INH、SM和EMB耐药相关基因及突变位点。结果 101株耐多药结核分枝杆菌中对SM耐药率69.3%;对EMB耐药率51.4%;对SM和EMB二者均耐药的耐药率44.5%。基因芯片法检出95例INH耐药相关基因突变,其中katG基因315M位点突变率为77.8%;inhA基因-15M位点突变率为89.4%。检出64例rpsL SM耐药相关基因,其中43M位点突变率为89.0%;88M位点突变率为11.0%。检出47例embB EMB耐药相关基因,以306M2位点突变为主,突变率为68.0%。测序法检出98例INH耐药相关基因突变,katG基因突变以315位点为主突变率为73.4%;inhA基因突变以-15位点为主突变率为87.7%;oxyR-ahpC基因-12和-10位点突变率分别为10.2%和8.2%。检出68例SM耐药相关基因突变,rpsL基因以43位点为主突变率为86.8%;rrs基因512、513、516位点突变率分别为5.9%、8.8%、8.8%。检出50例EMB耐药相关基因embB以306位点为主突变率为88.0%。结论耐多药结核分枝杆菌INH、SM及EMB耐药基因位点表达可作为结核分枝杆菌临床检测耐药性的有效依据,为提高耐多药结核分枝杆菌耐药性检测的敏感度,应将INH耐药相关oxyR-ahpC基因和SM耐药相关rrs基因纳入我国快速分子诊断产品中。     

膜芯片技术对结核分枝杆菌耐药性检测的研究

目的 验证膜芯片技术在结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药性检测中的应用价值.方法 收集393例临床标本（包括痰液、尿液、胸腔积液、腹水标本）,根据结核分枝杆菌耐药位点的DNA序列,设计用于检测rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因常见突变类型的膜芯片,对上述临床标本进行检测,并将其与传统微生物敏感性试验结果进行比较,对不相符结果用聚合酶链反应产物直接测序（PCR-DS）进行验证.结果 以常规培养法为金标准,膜芯片法扩增结核分枝杆菌的敏感性、特异性、准确性分别为90.4%、98.8%和95.7%,其对结核分枝杆菌RFP、INH、SM和EMB耐药性检测的敏感性分别为92.3%、83.3%、68.8%和83.3%;准确性分别为98.6%、97.3%、96.6%、和98.5%;特异性均达到100.0%.结论 膜芯片法检测结核分枝杆菌耐药性具有较高的敏感性、特异性和准确性,可作为常规微生物敏感性试验的补充.     

线性探针法检测云南地区结核分枝杆菌耐药的应用评价

目的评价线性探针法的检测效能,探讨云南地区耐药结核分枝杆菌的基因突变规律。方法采集云南地区肺结核患者的407份涂阳痰标本,采用线性探针法进行耐药性检测,同时采用比例法药敏试验作为对照。结果线性探针法检测异烟肼(INH)耐药的敏感性为71.84%,特异性为97.29%;检测利福平(RFP)耐药的敏感性为88.36%,特异性为94.38%;检测耐多药(MDR)的敏感性为67.46%,特异性为94.54%,阳性预测值为87.63%,阴性预测值为86.24%。传统药敏试验与线性探针法均显示INH耐药的125株菌中kat G 315位点发生突变的有116株(92.80%),inh A发生突变的有14株(11.20%),同时发生kat G 315和inh A突变的有5株(4.00%)。RFP耐药菌株中,rpo B基因突变频率从高到低依次是531或533位(59.69%)、526位(25.58%)、516位(8.53%)。结论云南地区耐药结核分枝杆菌的基因突变有自己的特点。线性探针法对结核分枝杆菌进行耐药性检测具有较高的敏感性、特异性。在耐药率较高的定点医院和耐药高危人群中,线性探针法检测MDR具有较高的阳性预测值和阴性预测值,其结果具有较好的参考价值。     

番禺地区结核分枝杆菌耐药状况及耐药谱分析

目的探析番禺地区结核分枝杆菌的耐药情况与耐药谱。方法选择2011年2月至2014年2月期间番禺地区就诊的结核病患者1 033例,并对其分离株进行菌种鉴定。检测其对利福平(RIF)、异烟肼(INH)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)的耐药性。并进一步分析对INH耐药的结核分枝杆菌的耐药谱分布情况。结果 1 033株结核菌株中,总耐药率为42.01%(434/1 033),其中,初始患者耐药率低于复治患者(40.32%比48.20%),两者耐药率具有统计学差异(χ2=4.440,P=0.035)。男性患者耐药率低于女性患者(37.18%比57.55%),两者耐药率具有统计学差异(χ2=31.826,P0.01)。30~60岁年龄段患者耐药率最高,30岁、30~60岁和60岁3个年龄段耐药率(28.78%比48.31%比27.68%)比较差异有统计学意义(χ2=48.852,P0.01)。所检测的RIF、INH、SM及EMB耐药顺序为INH(14.98%)RIF(13.36%)SM(9.11%)EMB(4.56%)。155株INH耐药株中,同时耐RIF的有46(29.68%)株,耐多药率为4.45%(46/1 033)。结论番禺地区结核分枝杆菌的耐药情况较严重,与患者年龄、性别等有关,应加强对耐药杆菌的检测,采取有效的防控措施。     

结核杆菌耐药性调查与基因突变分析

目的了解结核分支杆菌耐药性与基因突变情况,分析耐药表型与基因突变的相关性。方法从临床标本中分离培养、鉴定结核分支杆菌;应用药敏试验、单链探针反向杂交试验技术(LiPA)和基因测序分析结核分支杆菌耐药性与基因突变情况。结果50株结核分支杆菌中,12株耐异烟肼(INH),7株耐利福平(RFP),15株耐链霉素(SM),2株耐乙胺丁醇(EMB)。LiPA检测耐RFP菌株,4株rpoB基因531位TCG→TTG突变;耐INH菌株中5株KatG基因315位AGC→ACC突变;耐SM菌株中6株、SM敏感株1株rpsl基因43位AAG→AGG突变,1株耐SM菌株rpsl基因88位AAG→AGG突变;rrs基因未检测到突变;1株耐EMB菌株与1株EMB敏感株的embB基因306位发生ATG→GTG突变。结论本市结核分支杆菌的耐药性增加的趋势显著,加强监测与综合干预非常必要。     

两种分枝杆菌鉴定及耐药检测方法在肺泡灌洗液中的应用价值

目的运用荧光聚合酶链反应(PCR)溶解曲线法和Gene Xpert MTB/RIF法快速检测支气管肺泡灌洗液中的分枝杆菌及利福平耐药突变,并将两种方法进行比较,评价两种方法的灵敏度、特异度及临床应用价值。方法收集该院2018年10月至2019年8月收治的门诊和住院患者支气管肺泡灌洗液标本102例,运用荧光PCR溶解曲线法和Gene Xpert MTB/RIF法分别检测分枝杆菌及利福平耐药突变,评价两种方法的检测能力。结果在102例灌洗液标本中荧光PCR溶解曲线法检出结核分枝杆菌57例,非结核分枝杆菌2例,其检出分枝杆菌的灵敏度为100.00%,特异度为100.00%,检出利福平耐药15例,检出率为26.32%。Gene Xpert MTB/RIF法检出结核分枝杆菌57例,其检出分枝杆菌的灵敏度为96.61%,特异度为100.00%,检出利福平耐药13例,检出率为22.81%,两种方法的符合率为96.61%。与荧光PCR溶解曲线法比较,Gene Xpert MTB/RIF法耗时更短,操作方法更为简便,但荧光PCR溶解曲线法在分枝杆菌鉴定,尤其是非结核分枝杆菌的鉴定与分型方面更有优势。结论荧光PCR溶解曲线法和Gene Xpert MTB/RIF法在分枝杆菌检测和利福平耐药突变检测方面均有较高的灵敏度和特异度,两种方法有较高的符合率。临床医师可根据病原学诊断的具体要求选择合适的实验方法,为临床诊断和早期治疗提供较好的实验室支撑。     

耐多药结核分枝杆菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性研究

目的 研究耐多药结核分枝菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性. 方法 比例法检测84株耐多药结核分枝杆菌的乙胺丁醇(EMB)耐药性,基因测序检测embB基因的突变,2检验分析二者之间的相关性. 结果 84株耐多药结核分枝杆菌中有43株(51.2%)对EMB耐药,41株(48.8%)对EMB敏感,57株耐多药菌株(67.9%)的embB基因发生突变.在43株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为40株(93.0%),而41株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为17株(41.5%),embB基因在耐药菌株中的突变频率远高于敏感菌株(2=25.58,P=0.00).embB306是最常见的突变位点,其在耐药菌株的突变率也高于敏感菌株(2=12.37,P=0.00),embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确性分别为93.0%和65.1%,58.5%和73.2%,76.2%和69.0%. 结论 EMB耐药的产生与embB基因和embB306突变有关,二者用于检测EMB耐药有一定的参考意义.     

浙江省衢州市结核分枝杆菌耐药监测调查

目的 了解浙江省衢州市结核分枝杆菌临床分离株耐药状况, 为结核病的防治提供参考依据。 方法 收集2010年全年衢州4县2区6家医院肺结核就诊病例痰标本,用改良罗氏培养基进行病原分离,鉴别培养基培养法进行菌型鉴定。对分离到的结核分枝杆菌采用比例法对4种一线抗结核药物,异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB),和二线抗结核药物氧氟沙星(OFX)、卡那霉素(KM)进行药物敏感性检测,用 SPSS 11.0统计软件进行统计分析。 结果 371 株结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物,INH、RFP、SM和 EMB全部敏感的菌株为292株(78.71%),对二线抗结核药物OFX和KM全部敏感的菌株为337株(90.84%);耐药菌株89株(23.99%),其中,单耐药菌株51株(13.75%),耐多药菌株21株(5.66%),多耐药株14株(3.77%),广泛耐药株3株(0.81%)。结核分枝杆菌对4种一线药物INH、RFP、SM和 EMB的耐药率分别为15.36%(57/371)、7.01%(26/371)、11.86%(44/371)和3.23%(12/371);对2种二线药物OFX和KM的耐药率分别为7.82%(29/371) 和2.42%(9/371)。326例初治患者的耐药率为INH 10.12%(33/326)、RFP 2.45%(8/326)、SM 8.90%(29/326)、EMB 1.23%(4/326)、OFX 3.68%(12/326)、KM 1.53%(5/326),非耐药80.98%(264/326),耐多药1.84%(6/326);45例复治患者的耐药率为INH 53.33%(24/45)、RFP 40.00%(18/45)、SM 33.33%(15/45)、EMB 17.78%(8/45)、OFX 37.78%(17/45)、KM 8.89%(4/45),非耐药40.00%(18/45),耐多药33.33%(15/45)。 结论 衢州市结核分枝杆菌的耐药情况较为严重,每种药物复治患者的耐药率均明显高于初治患者,在制定结核病防控策略时应给予充分重视,同时进一步加强高质量的全程监督短程化疗。     

西安市结核分枝杆菌耐药性初步调查

目的　了解西安市结核分枝杆菌临床分离株耐药状况。方法　采用抽样调查方法,于2005年5-8月调查收集西安市13个区（县）结防所门诊所有拟诊病例痰标本,用改良罗氏培养基进行病原分离,鉴别培养基培养法进行菌型鉴定。对分离到的结核分枝杆菌采用绝对浓度法对4种一线抗结核药物, 异烟肼（INH）、 利福平（RFP）、 链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）, 进行药物敏感性检测。结果　104株结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物, INH、 RFP、 SM和EMB,全部敏感的菌株为71株（68.3%）;耐药菌株33株（31.7%）,其中, 单耐药菌株12株（11.5%）,耐多药菌株21株（20.2%）。结核分枝杆菌对4种一线药物INH、 RFP、 SM和EMB的耐药率分别为24.0%（25/104）、 18.7%（19/104）、16.3%（17/104）和2.9%（3/104）。结论　西安市结核分枝杆菌的耐药情况较为严重,在结核病防治工作中应给予充分重视。     

绝对浓度法与比例法检测结核分枝杆菌药物敏感性的探讨

目的 将比例法与绝对浓度法检测结核分枝杆菌的药物敏感性进行比较.方法 分别用比例法与绝对浓度法检测128株结核分枝杆菌对4种抗结核药物异烟肼(INH)、链霉素(SM)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)的敏感性.结果 以比例法为标准,绝对浓度法检测4种药物的灵敏度分别为81.3%、90.9%、100.0%、30.4%,特异度分别为96.8%、95.0%、94.1%、97.1%.对SM敏感性的检测,绝对浓度法和比例法差异无统计学意义;而对INH、RFP和EMB的检测,两种方法差异有统计学意义(P＜0.05).结论 建议有条件的实验室可以开展比例法药物敏感性试验.