化疗及非化疗组神经母细胞瘤干细胞标志物的表达及意义

目的探讨干细胞标志物CD133、ABCG2、CD117及nestin在神经母细胞瘤化疗组及非化疗组患儿中的表达及意义。方法收集上海交通大学附属新华医院小儿外科保存完好的20例神经母细胞瘤肿瘤组织的石蜡标本,按术前是否经历化疗分为术前化疗组和未化疗组,每组各10例,采用免疫组化SupperVision法检测4种标记物在肿瘤组织中的表达。结果CD133、ABCG2、CD117及nestin干细胞标志物在未化疗神经母细胞瘤组织中的平均阳性细胞率低于化疗后残留神经母细胞瘤组织中阳性细胞率的平均值,差异无统计学意义（P〉0．05）。两组患儿年龄、性别、分期及组织分型比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论儿童神经母细胞瘤中可能存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞对常规化疗药物具有耐药性。     

Apelin/APJ在小儿神经母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨Apelin/APJ (putative receptor protein related to the angiotensin receptor AT1)系统与小儿神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)发生发展的关系。方法收集10例NB患儿术后肿瘤组织及对应的癌旁肾上腺组织,采用免疫组化法检测Apelin及APJ蛋白在肿瘤及癌旁组织中的表达; Real-time PCR方法和Western blotting技术检测Apelin/APJ mRNA及蛋白的表达水平,采用ELISA方法检测NB患儿及健康儿童血浆中Apelin-36的水平。结果在收集的NB病例中,免疫组化结果显示,Apelin蛋白主要定位于神经母细胞瘤的细胞浆,呈强阳性表达,而APJ蛋白则主要在肿瘤胞核内表达,呈棕黄色颗粒,表达强阳性或中等阳性,两者均在对照组癌旁肾上腺组织中表达呈阴性或者弱阳性;与瘤旁组织比较,NB组织中Apelin、APJ mRNA和Apelin及APJ蛋白的表达水平均显著升高,且差异有统计学意义(P 0. 05)。NB患儿血浆Apelin-36的水平显著高于健康儿童对照组的水平(P 0. 05)。结论 Apelin/APJ系统在小儿神经母细胞瘤组织中高度表达,提示该系统与NB的发生发展密切相关。     

肾母细胞瘤组织中PTEN、PDCD4的表达及意义

目的 探究肾母细胞瘤组织中具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN及肿瘤抑制因子PDCD4 mRNA和蛋白表达及其临床病理联系。方法 采用RT-PCR和免疫组织化学法检测39例肾母细胞瘤和对照组15例癌旁2cm肾组织中PTEN、PDCD4 mRNA和蛋白表达,结合临床病理资料进行分析。结果 39例肾母细胞瘤组织中PTEN和PDCD4 mRNA均发生表达下调,且两种分子的mRNA的光密度在癌旁组织与肿瘤组织中比值均大于2。肾母细胞瘤组PTEN、PDCD4蛋白表达阳性率分别为17.95％、33.33％,远低于癌旁对照组阳性率93.33％、100％,差异有统计学意义(P＜0.05)。肾母细胞瘤组PTEN、PDCD4蛋白表达下调与患儿年龄、组织分级及临床分级、有无淋巴结转移等多种临床病理因素密切相关(P＜0.05)。肾母细胞瘤组与对照组PTEN、PDCD4蛋白表达在不同性别患儿中的差别不具有统计学意义(P＞0.05)。经直线相关分析,在肾母细胞瘤组织中PTEN与PDCD4蛋白表达存在正相关性(r= 0.877629,P＜0.05)。结论 肾母细胞瘤中PTEN及PDCD4 mRNA及蛋白与癌旁对照组织相比表达明显下调,可作为评价肾母细胞瘤生物学行为的参考指标。     

Kail／CD82表达水平与神经母细胞瘤转移的关系探讨

目的探讨Kail／CD82表达水平与神经母细胞瘤转移之间的关系。方法选取40例各期神经母细胞瘤石蜡标本,采用RT—PCR检测KailmRNA的表达;采用免疫组化检测Kai1基因的蛋白产物CD82的表达水平,研究其与神经母细胞瘤转移之间的关系。结果RT．PCR监测显示：有淋巴结或远处转移的神经母细胞瘤KailmRNA的相对含量为0．0748±0．0063,而无转移者为0．4576±0．0226,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化显示：无转移的神经母细胞瘤CD82的阳性表达率为71．43％;而有淋巴结或远处转移者阳性表达率为31．58％,差异有统计学意义（P〈0．05）,有骨髓浸润者与无骨髓浸润者Kail／CD82的表达无统计学意义（P〉0．05）。结论Kail／CD82表达水平可作为判断神经母细胞瘤是否转移的一个潜在标志。     

肾母细胞瘤黑色素抗原基因-1mRNA的表达及临床意义

目的探讨小儿肾母细胞瘤中黑色素抗原基因-1（MAGE-1）mRNA的表达及意义。方法用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）方法检测32例肾母细胞瘤组织、10例瘤旁组织、6例无瘤肾组织的MAGE-1mRNA的表达情况,并分析MAGE-1mRNA的表达与。肾母细胞瘤的病理分型、临床分期之间的关系。结果所有标本均有不同程度的MAGE-1mRNA表达,表达程度按肿瘤组织、瘤旁组织、无瘤组织依次降低。肿瘤组织是瘤旁组织的1．40倍（t=0．853,P〉0．05）,是无瘤对照组的2．58倍（t=2．35,P〈0．05）。MAGE-1mRNA在肾母细胞瘤组织中的表达与病理分型及临床分期均无关（P〉0．05）。结论MAGE-1mRNA在肾母细胞瘤组织中呈高表达,提示MAGE-1mRNA可望成为肾母细胞瘤免疫治疗的靶抗原。     

hsacirc0005777在肝母细胞瘤中的表达及对细胞增殖周期的影响研究

目的探索环状RNA hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤中的表达及对肝母细胞瘤细胞增殖周期的影响。方法实验细胞包括人肝母细胞瘤细胞株HepG2和HUH6, 将实验细胞培养在含10%胎牛血清及1%双抗的DMEM培养基中, 置于37℃、5% CO2的恒温培养箱中。实验组织标本包括肝母细胞瘤肿瘤及癌旁组织标本, 来源于中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科住院患儿手术切除的组织。所有肿瘤组织标本和癌旁组织标本在手术切除后, 均立即浸泡在RNA later保存液中防止RNA降解, 随后放在-80℃冰箱保存。在肝母细胞瘤细胞株中转染hsa_circ₀005777过表达质粒, 为过表达组;未转染过表达质粒的细胞株作为阴性对照, 为对照组。检测内容包括:①鉴定hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤细胞株中的性质及分布情况;②检测hsa_circ₀005777在肝母细胞瘤肿瘤、癌旁组织组织标本和肝母细胞瘤细胞株中的表达情况;③检测过表...     

USP22在神经母细胞瘤中的表达及意义的初步研究

目的观察肿瘤干细胞标记物泛素特异性肽酶22(USP22)蛋白在神经母细胞瘤中的表达,探讨其在神经母细胞瘤发生发展过程中的作用。方法用免疫组化法检测USP22蛋白在68例神经母细胞瘤组织和瘤旁组织细胞中的表达,结合临床资料分析其与临床病理学特征的关系。结果免疫组织化学染色结果显示USP22主要在肿瘤细胞核中呈阳性表达,而瘤旁组织中呈阴性表达。进一步统计分析,USP22在Ⅲ~Ⅳ期肿瘤中的表达水平高于Ⅰ~Ⅱ肿瘤(P0.05);USP22在有淋巴结转移组的表达水平明显高于无淋巴结转移组(P0.05);而USP22在神经母细胞瘤中的表达水平与性别、年龄、大小、肿瘤部位、病理分型等参数无相关性(P0.05)。结论 USP22在神经母细胞瘤细胞中有表达,其表达水平与肿瘤的临床分期及是否淋巴结转移有相关性,与性别、年龄等参数无明显相关性。     

肾母细胞瘤血小板衍化内皮细胞生长因子mRNA的表达及其临床意义

目的探讨小儿肾母细胞瘤中血小板衍化内皮细胞生长因子（PD-ECGF）mRNA的表达及其临床意义。方法用逆转录多聚酶链反应（RTPCR）方法检测30例肾母细胞瘤组织、8例瘤旁、4例无瘤肾组织的PD-ECGF mRNA的表达情况，并分析PD-ECGF mRNA的表达与肾母细胞瘤的病理分型、临床分期、转移及预后之间的关系。结果所有标本均有不同程度的PD-ECGF mRNA的表达，表达程度呈肿瘤组织、瘤旁组织、无瘤组织依次降低。肿瘤组织是瘤旁组织的1．22倍（t=0．855，P〉0．05）；瘤旁组织是无瘤对照组的2．07倍（t=2．65，P〈0．05）；肿瘤组织是无瘤对照组的2．53倍（t=2．05，P〈0．05）。在肾母细胞瘤组织中PD-ECGF mRNA的表达与病理分型无关（F=0．691，P〉0．05），与临床分期也无关（F=0．05，P〉0．05），但有转移者的PD-ECGFmRNA的表达高于无转移者。全部病例获得随访，平均随访50,2个月（17～75个月），术中已发现转移和术后转移复发共18例，死亡7例。所有转移、复发患儿的PD-ECGF mRNA水平是无转移、复发患儿的1．72倍（t=2．2766，P〈0．05）；是无瘤对照组的2．9倍（t=2．608，P〈0．05）。用PD-ECGF mRNA的表达预测肾母细胞瘤转移、复发及死亡的敏感性为83．3％，特异性80．0％。结论PD-ECGF mRNA在肾母细胞瘤组织中呈高表达，与其预后密切相关。提示PD-ECGF mRNA的表达对判断肾母细胞瘤预后有一定的意义。     

COX-2在肾母细胞瘤中的表达及意义

目的通过研究COX-2在肾母细胞瘤中的表达，探讨COX-2与肾母细胞瘤的关系。方法应用免疫组织化学SABC法柃测25例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织标本及10例瘤旁肾组织标本（距肿瘤边缘2cm的肾组织标本）中COX-2的表达情况。结果COX-2在肾母细胞瘤中阳性表达率为84％，对照组阳性表达率为10％，两者比较，差异有统计学意义（χ^2=16．753，P〈0．001）。伴有淋巴结转移的肾母细胞瘤患儿淋巴结COX-2阳性表达率高于无淋巴结转移者（χ^2=9．000,P〈0．01）。COX-2的阳性表达率随临床分期的增加而增高。COX－2的阳性表达率与肾母细胞瘤的临床分期呈正相关（r=0．966，P〈0．05）。结论COX－2的阳性表达率有随肾母细胞瘤临床分期的升高而增高的趋势，提示COX-2可能参与了肾母细胞瘤的发生发展过程，可为肾母细胞瘤的治疗和预防开辟新的途径。     

HA117调节DPF3表达对神经母细胞瘤分化的影响

目的 探讨HA117及DPF3在儿童神经母细胞瘤(NB)中的表达及意义,及其对NB分化的影响和可能机制.方法 运用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、免疫组化法检测HA117、DPF3在35例NB、8例节细胞神经母细胞瘤(GNB)和10例神经节细胞瘤(GN)中的表达水平.构建HA117过表达和空载慢病毒,分别转染SH-SY5Y细胞株,构建HA117过表达组和对照组.采用qRT-PCR和Western Blot检测HA117和DPF3的RNA和蛋白质表达水平.采用10 μmol/L维甲酸诱导HA117过表达组和对照组细胞,普通光学显微镜观察细胞形态,免疫荧光法检测神经特异性标志物MAP2蛋白质表达,Western Blot检测HA117过表达组和对照组细胞MAP2、NSE蛋白质的表达情况.结果 HA117的RNA在NB中的相对表达量为30.14±15.96,明显高于GNB/GN的1.03±0.37(P＜0.05),DPF3的mRNA在NB中的表达量为0,81±0.17,明显低于GNB/GN的3.14±1.09(P＜0.05),与HA117的表达趋势相反.免疫组化检测发现DPF3在GNB/GN中呈强阳性表达,在分化中的NB中呈弱阳性表达,在未分化/分化差的NB中呈阴性表达.过表达HA117可在mRNA和蛋白水平明显下调SH-SY5Y中DPF3的表达.经10 μmol/L维甲酸诱导7d后,对照组细胞生长明显减慢,细胞长出突起,发生神经元样分化;HA117过表达组SH-SY5Y的MAP2、NSE的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 HA117和DPF3的表达可能与NB的分化相关,HA117可能通过下调DPF3的表达抑制NB的分化.     

HA117编码蛋白、P-gp和bcl-2在儿童急性白血病中的表达及意义

目的 探讨HA117编码蛋白、B细胞白血病/淋巴瘤-2（bcl-2）和P-糖蛋白（P-gp）在急性白血病（AL）患儿骨髓单个核细胞中的表达及临床意义.方法 通过免疫组织化学（SP）方法检测37例AL患儿中HA117编码蛋白、bcl-2、P-gp的表达情况,以15例非恶性血液病患儿为对照.结果 （1）AL组患儿HAll7编码蛋白、bcl-2及P-gp的阳性表达率分别为64.86％、62.16％和37.84％;AL组HA117编码蛋白表达阳性率明显高于对照组（P =0.033）;三种蛋白在急性髓细胞白血病组和急性淋巴细胞白血病组表达阳性率差异无显著性.（2）HA117编码蛋白在初诊组表达阳性率明显高于对照组（P =0.021）,而完全缓解组与对照组比较差异无显著性（P =0.098）.（3）AL患儿HAll7编码蛋白与bcl-2的表达水平呈正相关性（P=0.0001,r=0.593）.结论 新基因HA117可能参与了儿童AL的耐药机制,对儿童AL的预后有一定的预示作用,并在肿瘤的发生、发展和耐药中可能与抗凋亡基因bcl-2存在协同作用.     

神经母细胞瘤组织及裸鼠荷瘤细胞RECK和MMP-14的表达及临床意义

目的检测RECK及膜型基质金属蛋白酶-14（MMP-14）在神经母细胞瘤患者蜡块标本中的表达,进一步检测将患者新鲜肿瘤标本原代培养建立的细胞系接种于裸鼠后自建的裸鼠原位荷瘤及转移瘤细胞系中二者的表达,比较裸鼠两种细胞中二者的表达差异及临床意义。方法首先采用PV-6000免疫组化方法检测临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例及节细胞神经瘤蜡块标本10例中RECK及MMP-14蛋向的表达。其次应用RT-PCR法检测自建裸鼠原位荷瘤及转移瘤细胞中RECK及MMP-14mRNA的表达。结果RECK蛋白在神经母细胞瘤组织中低表达（16．7％）,并随肿瘤浸润深度的加深及远处转移的发生而降低（P=0．015）。MMP-14蛋白在神经母细胞瘤组织中高表达（58．3％）,并随肿瘤浸润深度的加深及远处转移的发生而增高（P=0．002）。裸鼠原位荷瘤细胞系中RECKmRNA的表达较裸鼠转移瘤细胞系中明碾增高（t=3．012,P〈0．05）,MMP-14mRNA表达则明显降低（t=2．802,P〈0．05）。结论本研究提示,RECK及MMP-14蛋白和基因可能与神经母细胞瘤的浸润、转移有关,RECK及MMP-14可能在小儿神经母细胞瘤的发生、发展中起重要作用。     

产前诊断肾上腺肿块26例诊疗分析

目的：回顾近10年间我们诊治的产前B超发现的26例肾上腺肿块患儿临床资料,探讨B超检查发现胎儿肾上腺肿块的诊断和治疗。方法2003年6月至2012年12月本院收治经产前B超发现的新生儿肾上腺肿块26例,均进行了手术治疗,对该组病例进行回顾性分析和随访。结果肾上腺肿块患儿26例;男16例,女10例;所有病例均进行了肿瘤肉眼完整切除＋后腹膜肿大淋巴结清扫手术（其中1例因肿瘤浸润同侧肾脏而行肿瘤及受累肾脏一并切除术）。术后病理证实为肾上腺神经母细胞瘤17例,肾上腺血肿5例,海绵状血管瘤2例,成熟畸胎瘤和嗜铬细胞瘤各1例。神经母细胞瘤组与非神经母细胞瘤组在肿块大小（P＝0.04,P＜0.05）,B 超肿块内有血流信号（P＝0.03,P＜0.05）、增强CT肿块内有强化（P＝0.01,P＜0.05）上比较,差异有统计学意义。在巨大儿所占该组比例（体重＞4 kg）（P＝0.363）、随机尿VMA/Crea 检查（P＝0.389）两个方面比较,差异无统计学意义。结论通过评估肿块大小、肿块内血流信号（B超）和肿块内有强化（增强CT）等即可对神经母细胞瘤做出较为准确的诊断。而出生体重和随机尿VMA/Crea在鉴别诊断中意义不大。较大的新生儿肾上腺实质性肿块多数为肿瘤,如神经母细胞瘤等,建议出生后尽早手术,如果手术切除彻底则术后可不必化疗;较小的囊性肿块可能为肾上腺血肿,出生后血肿可变小或者消失。4s期神经母细胞瘤建议进行术后化疗,通常新生儿时期化疗耐受性较差,通常预后不佳。     

血管内皮生长因子-C在儿童实体肿瘤生长转移中的表达

目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在儿童实体肿瘤神经母细胞瘤及肾母细胞瘤中的表达。方法对33例神经母细胞瘤和30例肾母细胞瘤标本进行VEGF—C免疫组织化学分析,神经母细胞瘤Ⅲ期8例,Ⅳ期25例,远处转移25例,其中淋巴结转移5例,组织病理满意型(FH)20例,组织病理不满意型(UFH)13例;肾母细胞瘤Ⅰ Ⅱ期15例,Ⅲ Ⅳ期15例,远处转移12例,肾门、腹主动脉旁淋巴结受累5例,FH22例,UFH8例。结果神经母细胞瘤Ⅲ期VEGF-C阳性率37.5%(3/8),Ⅳ期32%(8/25),FH45%(9/20),UFH30.8%(4/13),远处转移32%(8/25),淋巴结转移66.7%(4/6),肾母细胞瘤Ⅰ Ⅱ期26.7%(4/15),Ⅲ Ⅳ期40%(6/15),FH27.3%(6/22),UFH25%(2/8),远处转移33.3%(4/12),淋巴结转移60%(3/5)。VEGF-C的表达与肿瘤的临床分期及病理类型无显著意义,而与淋巴结的转移存在显著意义(P<0.05)。结论VEGF-C的表达与肿瘤淋巴结的转移存在密切相关。     

UBE2C在神经母细胞瘤组织表达及临床意义分析

目的 通过检测泛素偶联酶2C（UBE2C）在神经母细胞瘤（NB）患儿中的表达情况,分析其表达与NB患儿的临床特征及预后的相关性。方法 收集上海交通大学医学院附属新华医院2012年1月至2015年1月51例NB患儿术后石蜡包埋的组织样本,通过免疫组织化学方法检测其UBE2C 蛋白的表达水平。回顾性分析NB患儿的临床特征,采用Kaplan-Meier法分析其生存曲线。 结果 51例患儿中,男女比例为1.8∶1,中位诊断年龄为36个月（3.3～156.0个月）,中位随访时间为25.6个月（5.5～42.7个月）。免疫组化结果显示,Ⅲ、Ⅳ期患儿UBE2C蛋白表达的阳性率（90.0%）明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳs期患儿（47.6%）（P＜0.001）;复发NB患儿的UBE2C表达阳性率（91.3%）明显高于无复发者（57.1%）（P＝0.001）。生存曲线分析显示, UBE2C蛋白阳性表达组预后较差（P＝0.006）。结论 UBE2C的表达与NB的分期及复发密切相关,UBE2C表达阳性提示NB患儿预后不良。UBE2C可能在NB侵袭、转移和复发过程中发挥重要的作用,有望成为NB潜在的生物标记物和治疗新靶点。     

地高辛对非霍奇金淋巴瘤raji细胞侵袭能力的影响及作用机制研究

目的　了解强心苷类药物地高辛对非霍奇金淋巴瘤raji细胞侵袭能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法　选取河北医科大学第四医院病理科2010年10月至2013年12月手术切除的非霍奇金淋巴瘤组织标本30例,采用免疫组化S-P方法检测非霍奇金淋巴瘤T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam-1）及Ras相关的C3肉毒素底物1（Rac-1）蛋白表达情况;通过细胞侵袭实验以及实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术检测不同浓度地高辛作用于raji细胞后Tiam-1、Rac-1表达水平变化。结果　免疫组化结果显示,非霍奇金淋巴瘤中Tiam-1蛋白染色阳性率（70%）及Rac-1蛋白染色阳性率（73.33%）均高于正常淋巴结组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。相关分析结果显示,Tiam-1及Rac-1具有相关性,相关系数r＝0.757（P＜0.01）。细胞侵袭实验结果显示,不同浓度组地高辛作用raji细胞48 h后,随着作用浓度的增加侵袭率下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。实时荧光定量PCR结果显示,不同浓度的地高辛分别作用于raji细胞48 h,各组之间Tiam-1及Rac-1的相对表达量差异有统计学意义（P＜0.05）,并随着作用浓度的增加相对表达量降低。结论　强心苷类药物地高辛可通过调节Tiam-1及Rac-1因子的表达对淋巴瘤侵袭及转移起到一定抑制作用。     

RECK及MMP-14蛋白在神经母细胞瘤组织中的表达及与肿瘤转移关系的研究

目的 检测RECK蛋白及膜型基质金属蛋白酶MMP-14在神经母细胞瘤中的表达,探讨其在神经母细胞瘤的发生、发展、浸润和转移中的作用.方法 选择临床及病理资料齐全的存档神经母细胞瘤蜡块标本36例,另取节细胞神经瘤蜡块标本10例作对照.采用第二代通用型二步法监测系统(PV-6000)免疫组织化学方法 检测RECK及MMP-14蛋白的表达.结果 RECK蛋白在神经母细胞瘤组织中低表达(16.7%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而降低(P=0.015<0.05).MMP-14在神经母细胞瘤组织中高表达(58.3%),并随肿瘤浸润深度的加深、远处转移的发生而增高(P=0.002<0.05).神经母细胞瘤组织中RECK与MMP-14蛋白的表达呈负相关(r=-0.418,P<0.05).结论 神经母细胞瘤组织中RECK低表达,而MMP-14高表达.RECK及MMP-14可能成为评估神经母细胞瘤发生浸润转移的重要指标.