RGDS-GG-KLAKLAKK多肽对人骨肉瘤细胞黏附迁移和侵袭力的影响

目的 研究多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对体外培养人骨肉瘤细胞MG-63黏附迁移和侵袭力的影响,并探讨其作用机制.方法 将不同浓度(0、25、50、75、100μmoL/L)的多肽RGDSGG-KLAKLAKK与MG-63细胞混合培养,用比色法测量多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对MG-63细胞黏附力的抑制作用,通过transwell小室侵袭模型检测多肽对MG-63细胞侵袭力的影响.观测多肽对骨肉瘤细胞自发肺转移模型抗肿瘤转移的影响.结果 MG-63骨肉瘤细胞对纤维连接蛋白(Fn)的黏附被多肽GDS-GG-KLAKLAKK对明显抑制(P<0.05).25、50、75、100 μmol/L的多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对MG-63细胞侵袭力的抑制率分别为(18.3±2.9)%、(28.5±4.8)%、(40.4±5.6)%和(66.7±7.8)%,对比空白对照组(0μmol/L多肽)差异有统计学意义(P<0.05).多肽RGDS-GG-KLAKLAKK对MG-63骨肉瘤细胞浸润能力有明显抑制作用.MG-63骨肉瘤细胞接种于裸鼠后给予多肽RGDS-GG-KLAKLAKK治疗,与对照组比较,有明显的肺重减轻、肺转移灶减少(P<0.05).结论 多肽RGDS-GG-KLAKLAKK能够抑制人骨肉瘤MG-63细胞的体外黏附、侵袭和转移.     

百里醌对人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的抑制作用

目的 探讨百里醌对体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的影响及其机制.方法 百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞计数CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot检测SaOS-2细胞中Caspase-3、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Smac的表达.结果 不同浓度(20、40、80μmol/L)百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞存活率分别为(75.5±4.2)%、(62.1±6.7)%和(52.5±4.9)%;细胞早期凋亡率分别为(8.1±0.7)%、(13.2±1.1)%和(20.2±1.7)%;百里醌作用后,SaOS-2细胞出现典型凋亡的形态学改变;百里醌可明显上调Caspase-3和Smac在SaOS-2细胞中的表达,而显著抑制XIAP的表达.结论 百里醌具有抑制体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长和促进细胞凋亡的作用,可能是通过上调人骨肉瘤SaOS-2细胞中Caspase-3和Smac的表达和下调XIAP的表达而实现.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effect of thymoquinone on the growth of human osteosarcoma cell line SaOS-2 in vitro.Methods After human osteosarcoma SaOS-2 cells were treated with different concentrations of thymoquinone, the proliferation was measured by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. The flowcytometry (FCM) was used to determine apoptosis of SaOS-2 cells. The morphological changes of SaOS-2 cells were observed under the fluorescence microscopy after DAPI staining. Western blotting was used to detect the protein expression of Caspase-3, X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) and Smac.Results Thymoquinone obviously suppressed proliferation of SaOS-2 cells in a dose-dependent manner, and the apoptosis rate was (8.1±0.7)%, (13.2±1.1)% and (20.2±1.7)% respectively when the concentrations of thymoquinone exposed were 20, 40 and 80 μmol/L. After treatment with thymoquinone, the expression of Caspase-3 and Smac was up-regulated in SaOS-2 cells, and thymoquinone treatment significantly decreased the XIAP levels in SaOS-2 cells.Conclusion Thymoquinone has the anti-tumor effect on the human osteosarcoma SaOS-2 cells in vitroprobably by up-regulating the expression of Caspase-3 and Smac and down-regulating the expression of XIAP.     

硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响

目的 研究硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响，并探讨其可能的机制。方法 应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率、倒置显微镜观察细胞形态、AnnexinV法检测细胞凋亡、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测bcl-2及bax基因的表达，观察硫化砷对骨肉瘤细胞株MG-63诱导凋亡的作用。结果 硫化砷可明显抑制MG-63细胞的增殖，1．0mg／L浓度的硫化砷作用24h后，MG-63细胞的抑制率可达26．43％。倒置显微镜观察被硫化砷抑制的MG-63细胞呈典型的凋亡改变．流式细胞仪检测凋亡率与硫化砷处理时间、处理浓度呈正相关。在硫化砷的作用下，MG-63细胞的bcl-2表达下调，而bax表达无明显改变．结论 硫化砷可有效地诱导骨肉瘤细胞凋亡，bcl-2表达下调是诱导细胞凋亡的重要机制。     

熊果酸对人骨肉瘤MG63细胞的影响

目的 探讨熊果酸(UA)对人骨肉瘤MG63细胞的影响作用及其机制.方法 体外培养骨肉瘤MG63细胞,应用浓度为10、20、50、100 μmol/L的熊果酸干预骨肉瘤MG63细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞中骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP-6的mRNA的表达,并应用蛋白印记技术检测相应蛋白的表达水平.结果 熊果酸干预组的肿瘤细胞增殖被明显抑制,72 h时100 μmol/L组的增殖活性为(0.25±0.03),而10μmol/L组的增殖活性为(0.86±0.10),差异有统计学意义(P＜0.05),各浓度组在24、48、72 h时的增殖活性差异均有统计学意义(P＜0.05);BMP-2和BMP-6 mRNA和蛋白的表达水平在实验组和对照组间差异均有统计学意义(P＜0.05),而两对照组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 熊果酸能够抑制骨肉瘤MG63细胞的增殖,并能够促进细胞中BMP-2和BMP-6的表达.     

维甲酸对人骨肉瘤细胞抑制增殖和诱导分化的影响

目的探讨维甲酸对人骨肉瘤（HOS）细胞抑制增殖和诱导分化的影响。方法不同浓度的维甲酸作用HOS细胞,采用噻唑蓝法、倒置相差显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞生长曲线;软琼脂集落形成实验观察细胞生长和侵袭能力的变化;流式细胞仪测定细胞周期变化。结果维甲酸可明显抑制HOS细胞增殖,并呈现剂量和时间的依赖性;细胞形态呈明显的良性分化,瘤细胞的软琼脂集落形成率明显降低;维甲酸能够延缓细胞周期G1～S进程,阻滞细胞于G1期。细胞周期测定结果显示：未经诱导物处理的对照组细胞处于G0/G1期的细胞比例为31.19%;经维甲酸处理之后,实验组细胞G0/G1期的细胞比例上升为57.94%。结论维甲酸对HOS细胞有明显的抑制增殖和诱导分化作用。     

三氧化二砷对U2-OS人骨肉瘤细胞形态及细胞凋亡的影响

目的研究三氧化二砷在体外对人骨肉瘤细胞(U2-OS)形态及细胞凋亡的影响。方法以不同浓度三氧化二砷(0.5、1.0、1.5μmol/L)作用骨肉瘤细胞,15 mg/L 5-FU作为阳性对照,采用荧光显微镜观察细胞核形态及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果各浓度的三氧化二砷对骨肉瘤细胞(U2-OS)的形态均有影响,随着三氧化二砷浓度的升高,细胞核发生固缩越明显,细胞凋亡率越高,与正常对照组相比,差异具统计学意义。结论三氧化二砷可导致骨肉瘤细胞(U2-OS)细胞核发生固缩坏死和凋亡,凋亡率与三氧化二砷浓度有依赖关系,在一定浓度范围内随浓度增高而增高。     

几丁糖对体外培养成骨肉瘤细胞生长的影响

几丁糖（Ｃｈｉｔｏｓａｎ）（又名壳聚糖、甲壳胺），是几丁质脱乙酰基衍生物，文献报道其医学用途广泛，具有促进伤口愈合、防止组织粘连、抗凝血、降脂、降胆固醇、抗溃疡作用；不仅对某些肿瘤细胞有抑制作用，而且也是多种抗肿瘤药物的良好载体，同时能活化机体免疫系...     

反义pEGFP-C1-Survivin对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的 观察Survivin反义核酸载体对人骨肉瘤细胞株MG-63生物学行为的抑制效应,并探讨其机制.方法 MTY检测转染前后MG-63细胞增殖抑制率的变化,Boyden小室体外侵袭实验测定转染前后侵袭能力变化.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后Ang-2基因mRNA表达的变化.结果 噻唑蓝(MTT)检测显示转染后骨肉瘤细胞增殖明显受抑制,转染组抑制率达到23.4%,与各对照组之间差异有统计学意义(P<0.01),脂质体组、空质粒组和空白组之间差异无统计学意义(P>0.05).RT-PCR分析显示转染组MG-63中Ang-2基因mRNA的表达较转染前明显下降,与其他组之间差异有统计学意义(P<0.01),而另3组之间差异无统计学意义(P>0.05).Boyden小室体外侵袭实验测定显示转染组侵袭百分数为17.9%,与其他各组间差异有统计学意义(P<0.01).结论 Survivin反义核酸可以显著抑制人骨肉瘤细胞株MG-63的增殖、侵袭能力,部分逆转其恶性表型,这可能与其下调Ang-2的表达有关.     

Survivin反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞的抑制作用

我们以骨肉瘤OS 73 2细胞为对象 ,在明确其高表达Survivin基础上 ,尝试通过合成靶向Survivin的反义寡核苷酸(ASODN)转染OS 73 2细胞 ,以封闭Sur vivin表达 ,探讨ASODN对骨肉瘤细胞凋亡 /增殖的影响及其对化疗药物的促进作用。一、材料与方法1.材料 :人骨肉瘤细胞株OS 73 2购自北京积水潭医院骨科研究所。针对Survivin基因翻译起始密码区 ,设计合成ASODN (上海生工公司 ) ,序列为 5′CCCAGCCTTCCAGCTCCTTG 3′ ,并设正义 (senseoligonucleotide ,SODN )对照 ,序列为 5′GTTCCTCGACCTTCCGACCC3′ ,两组寡核苷酸均…     

外源性一氧化氮对骨肉瘤细胞株HOS生长能力的影响

目的：研究外源性一氧化氮对骨肉瘤细胞株（ＨＯＳ）体外生长能力的影响。方法：用不同浓度的ＳＮＰ（Ｓｏｄｉｕｍ Ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ,硝普纳）作用于体外培养的ＨＯＳ细胞株,经细胞作用产生外源性一氧化氮,通过Ｇｒｉｅｓｓ比色法、ＭＴＴ比色法,观察ＨＯＳ细胞株一氧化氮的产生量及对细胞株生产情况的影响。结果：随着ＳＮＰ浓度的增加,ＨＯＳ细胞一氧化氮的产生量逐渐增加而细胞存活数量逐渐减少,以ＳＮＰ２００     

反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究

[目的]研究人骨肉瘤细胞MG63中反义RNA对Survivin表达的抑制作用。[方法]培养骨肉瘤细胞MG63，采用RT—PCR的方法克隆人Survivin基因编码区cDNA。构建Survivin的反义诱导表达载体。转染MG63细胞，G418筛选稳定转染的细胞系。稳定转染的细胞系，以ZnSO4 120μmol／L诱导，HE染色、Survivin免疫细胞化学染色透射电镜等形态学观察。绘制生长曲线。RT—PCR检测各组细胞Survivin的表达。Annexin V法检测细胞凋亡。[结果]RT—PCR从MG63细胞mRNA扩增了Survivin编码区cDNA，约420bp。构建了pMDNA3-anti—Survivin重组质粒。转染MG63细胞，G4181000μg/ml筛选4周后，建成稳定转染细胞系。通过ZnSO4 120μmol／L诱导，电子显微镜观察可见MG63／pMDNA3-anti—Survivin细胞出现凋亡。免疫细胞化学染色可见诱导后的MG63／pMDNA3-anti—Survivin Survivin蛋白表达明显降低。AnnexinV染色后发现pMDNA3-anti—Survivin细胞，在ZnSO4诱导48h后凋亡率达到11％，较对照组高出3倍。[结论]Survivin的反义RNA能够有效的抑制Survivin的表达，从而抑制肿瘤生长，并促进肿瘤细胞凋亡．     

Survivin基因干扰RNA对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

[目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建Survivin shRNA表达载体pSilence2．1-neo-Survivin，转染骨肉瘤细胞系MG-63，筛选稳定表达的克隆，倒置显微镜观察各组细胞形态学变化，RT-PCR、Weston-blot方法检测转染后Survivin mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。[结果]转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降，其抑制率分别为85．08％和81．14％；细胞增殖受到显著抑制，培养48h后与空白组比较，抑制率达63．4l％；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变，转染组凋亡率为24．54％。[结论]靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

靶向Survivin的小分子干扰RNA对骨肉瘤细胞的体内外抑制作用

目的 观察靶向Survivin基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体对人骨肉瘤细胞MG-63的体内外抑制作用.方法 体外构建Survivin siRNA表达载体pSilence2.1-neo-Survivin,转染骨肉瘤细胞株MG-63、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学(SP)法检测转染前后Survivin mRNA及蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,建立裸鼠移植瘤模型,记录瘤体形成时间及肿瘤生长.结果 转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降,转染后mRAN表达抑制率为85.08%,增殖指数为空白组的28.20%;细胞周期分析显示:shRNA组G0/G1期细胞明显增多,而G2/M期、S期细胞数目减少;吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变,转染组凋亡率为24.54%;稳定转染组细胞裸鼠体内致瘤能力降低,转染组成瘤时间为(13.2±2.0)d,空白组为(6.5±1.6)d,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).4周时同空白组相比转染组瘤体体积小62.89%(P＜0.01),重量轻59.07%(P＜0.01).结论 靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞MG-63增殖,促进细胞凋亡;明显抑制人骨肉瘤细胞的致瘤活性及裸鼠移植瘤的生长.     

靶向Survivin和FoxM1B的shRNA对人脑质瘤干细胞生长和凋亡的影响

目的 观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤干细胞生长和凋亡的影响.方法 培养脑胶质瘤干细胞;依据靶基因序列设计siRNA,建立可克隆入pSilencerTM3.1-H1neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统,鉴定正确后扩增质粒;利用脂质体转染法(LipofectaminTM 2000)转染脑胶质瘤干细胞,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot在mRNA和蛋白水平检测目的 基因的表达,并分别采用噻唑蓝(MTT)法和Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤干细胞的生长抑制率及凋亡率.结果 成功构建Survivin、FoxM1B shRNA表达质粒;RT-PCR结果显示在第3、5、7天Survivin和FoxM1B的灰度值分别为80.27±11.65、77.41±10.99、78.10±8.84及72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57;Western blot检测Survivin和FoxM1B在第3、5、7天的灰度值分别为72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57及76.55±18.01、73.57±15.41、72.05±11.46.而细胞生长抑制率和凋亡率增加,双干扰组较单干扰组较为明显.结论 成功构建Survivin,FoxM1B shRNA表达质粒.shRNA转染脑胶质瘤干细胞后,目的 基因表达明显下降,从而抑制脑胶质瘤干细胞的增殖,促进凋亡.而双干扰效果更为显著.     

人骨肉瘤组织中Survivin mRNA的表达及与细胞凋亡的关系

目的　观察人骨肉瘤中Survivin基因表达 ,探讨其与细胞凋亡关系及对骨肉瘤生物学行为的影响。方法　采用原位杂交、免疫组织化学技术、DNA原位末端标记技术对 3 8例骨肉瘤、15例骨软骨瘤、5例正常骨组织SurvivinmRNA及骨肉瘤中Caspase 3蛋白和细胞凋亡进行检测。结果　较正常骨 (0 % )和骨软骨瘤 (6.7% ) ,SurvivinmRNA显著表达于骨肉瘤 (65 .8% )中 ,并与骨肉瘤WHO分型和转移有关 (P <0 .0 5 ) ;骨肉瘤中Caspase 3蛋白与凋亡细胞阳性率分别为71.1%和 63 .2 % ,凋亡指数 (AI)均值为 8.3 % ;Survivin阴性组AI显著高于阳性组 (P <0 .0 1) ;Sur vivin与Caspase 3表达不相关。 结论　Survivin选择性表达于骨肉瘤中 ,通过抑制细胞凋亡 ,参与骨肉瘤发生发展 ,其可能是判断骨肉瘤预后的重要参考指标。     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体-人血清白蛋白甲氨蝶呤偶联物的抗肿瘤作用

目的　应用化学交联法制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体 (OSMcAb) 人血清白蛋白(HSA) 甲氨蝶呤 (MTX)偶联物并进行体外细胞毒性实验。方法　采用碳二亚胺、活化酯及SPDP法制备OSMcAb HSA MTX间接偶联物 ;同时应用活化酯法制备出OSMcAb MTX ;并进行体外靶细胞结合实验、细胞毒性实验和集落形成抑制实验。结果　化学交联法制备出的偶联物的性质及药物含量稳定。抗体蛋白活性保存良好。集落形成抑制实验中 ,OSMcAb HSA MTX、OSMcAb MTX的IC5 0 (μg/L)分别为 2 .5 5 0± 0 .114、2 .710± 0 .14 5 ,它们杀伤作用均明显大于游离MTX(IC5 0为 5 .5 10± 1.5 2 9) (P <0 .0 5 )。 2 4h细胞毒性实验中 ,OSMcAb HSA MTX、OSMcAb MTX的对MG 63细胞、T2 4细胞的IC5 0 (μg/L)分别为 66.5 :3 785和 79.8:3 0 2 5 ,偶联物杀伤作用在靶细胞明显强于非靶细胞 (P <0 .0 1)。结论　以化学交联法制备OSMcAb HSA MTX偶联物方法可行 ;偶联物OSMcAb HSA MTX在体外具有良好的抗肿瘤作用。     

Survivin在骨肉瘤中的表达及其与血管内皮生长因子的相关性研究

目的:探讨凋亡抑制蛋白Survivin在骨肉瘤中的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性.方法:采用免疫组织化学S-P法检测Survivin、VEGF在骨肉瘤和正常骨组织中的表达.结果:Survivin基因在骨肉瘤中的阳性表达率为63.15%,VEGF在骨肉瘤中的阳性表达率为55.26%,二者在正常骨组织中均未见表达;Survivin 阳性表达与患者的年龄、性别及肿瘤部位无关,与Enneking外科分期及WHO组织学分型有相关性;Survivin的表达与VEGF的表达呈正相关.结论:(1)Survivin在骨肉瘤中呈高表达,参与骨肉瘤的发生发展,可作为判断骨肉瘤预后的重要参考指标.(2)Survivin、VEGF的表达对肿瘤血管形成可能起重要作用,联合检测二者的表达对了解肿瘤血管形成的机理有一定意义.     

骨肉瘤中Survivin与Caspase-3的表达及其相关性研究

[目的]探讨Survivin、Caspase-3在骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的关系。[方法]采用免疫组化法检测骨肉瘤及正常骨组织中Survivin和Caspase-3的表达，运用TUNEL方法检测细胞的凋亡。[结果]在77％的骨肉瘤组织中Survivin阳性表达，显著高于正常组织；Caspase-3蛋白在骨肉瘤和正常组织中的阳性表达率分别为65％和89％，差异有显著性；在骨肉瘤中，Survivin和Caspase-3的表达呈负相关；Survivin呈阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显低于Survivin呈阴性组（P〈0．01）；Caspase-3呈阳性的骨肉瘤中细胞凋亡指数明显高于Caspase-3呈阴性组（P〈0．01）。[结论]Survivin、Caspase-3参与了骨肉瘤的发展，Survivin可能通过抑制Caspase-3的活性从而发挥其抑制骨肉瘤细胞凋亡作用。