三角叶黄连内生真菌的多样性及其抑菌活性的筛选

目的分离和鉴定三角叶黄连Coptis deltoidea根状茎、叶柄及叶中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用平板法分离菌株,对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基的颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行分类鉴定;选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌的发酵上清液进行体外抑菌试验。结果从三角叶黄连中分离获得的297株内生真菌,分属2目、3科、32属;抑菌实验表明:22株内生真菌的发酵液对指示菌均有不同程度的抑制作用,其中6号内生真菌同时对两种致病菌的抑菌效果明显。结论三角叶黄连内生真菌在种类、不同部位呈多样性分布,且部分内生真菌的代谢产物具有较强的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

响应面法优化凤丹内生真菌发酵工艺探究

目的 研究响应面法优化一株凤丹优势内生真菌发酵工艺。 方法 在单因素试验结果的基础上,运用响应面法设计,对凤丹优势内生真菌发酵工艺进行优化。 结果 最优发酵工艺为蔗糖含量20 g·L-1,酵母浸膏含量5 g·L-1,KH₂PO₃含量1.00 g·L-1,K₂HPO₃含量1.00 g·L-1。在该条件下,发酵所得的菌丝体实际生物量为1.647 g。 结论 实验所得数据的多元回归模型与实际情况较好拟合,表明该优化工艺稳定可靠,通过响应面法最终获得了凤丹内生真菌最优发酵工艺。     

川芎内生真菌PCR-DGGE分析条件的建立和优化

目的采用PCR-DGGE反应技术体系分析川芎内生真菌的群落结构。方法以栽培的川芎根茎为材料,利用PCR-DGGE技术,对基于ITS区的PCR-DGGE体系的变性剂梯度范围、电泳时间进行了优化。结果最佳变性剂梯度的范围为45%～80%,最佳电泳时间为160 min。结论所用方法简便快捷,为进一步研究川芎内生真菌的群落结构分析奠定了基础。     

忽地笑鳞茎中产加兰他敏内生真菌的分离与鉴定

目的筛选产加兰他敏的内生真菌,为生产加兰他敏寻找新的途径。方法以忽地笑鳞茎为实验材料,分离内生真菌,利用HPLC对其发酵代谢产物进行检测,筛选能产生加兰他敏的菌株。结果从忽地笑鳞茎中分离出5株内生真菌,经HPLC分析,真菌GF-1能产生加兰他敏。经初步鉴定,GF-1为半知菌亚门(Deuteromycotina)青霉属(Penicillium LK.ex Fries)。结论忽地笑内生真菌有希望成为生产加兰他敏的新资源。     

野生刺五加内生真菌的分离与鉴定

目的:研究药用植物刺五加的内生真茵.方法:对采自伊春的刺五加茎采用组织分离法对内生真菌进行分离,光学显微镜下现察真菌形态,进行种属鉴定.结果:从野生刺五加茎中分离获得25株内生真菌,分属于4目、7科、9属.结论:充分体现刺五加内生真菌的丰富多样性.     

一种安徽产野生铁皮石斛内生真菌的分离鉴定及其组织分布

目的 分离鉴定安徽地区野生铁皮石斛内生真菌,旨在丰富其内生真菌资源种类。 方法 通过组织块法对内生真菌进行分离,运用形态学和分子生物学方法进行鉴定。结果 从中分离得到11株内生真菌,鉴定为5属11种。 结论 铁皮石斛内生真菌种类资源广泛分布,为研究其与宿主石斛共生关系提供理论依据。     

植物内生真菌次生代谢稳定性的探讨

内生真菌是一种新型可再生资源,已经成为寻找新型先导化合物的源泉,也是中药资源开发利用的热点.内生真菌次生代谢的生物不稳定性以致迄今没有一株内生真菌能够进行工业化生产,已成为开发内生真菌资源的瓶颈.本文探讨内生真菌次生代谢的生物不稳定性产生的原因.     

具有生物碱转化活力的4株喜树内生真菌的鉴定

从喜树（Camptotheca acuminata Decne）的根、枝条、叶和果实中分离纯化了48株内生真菌，其中菌株J-3、J-4、J-5、J-8对盐酸罂粟碱、硫酸长春碱等天然活性产物具有转化能力。采用PCR技术对这4株真菌rD-NA的ITS区进行扩增、测序，得到4株真菌的ITS序列，用Blast调出与菌株ITS同源的序列，用DANMAN6．0软件中的Multiple Sequence Alighment进行同源性分析，构建系统进化树，并辅以生理形态指标进行种属鉴定。菌株J-3、J-4分别鉴定为Phomopsis acuminata J-3和Phomopsis acuminata J-4；J-5鉴定为Phomopsis acuminata J-5；J-8鉴定为Phomopsis acuminata J-8。上述工作为充分利用药用植物内生真菌对天然活性产物进行微生物转化，丰富天然化合物类型并进行构效关系的分析提供了基础。     

海洋真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化研究

目的 对海洋来源真菌Penicillium sp.产抗肿瘤天然产物brefeldin A的发酵优化,以期获得高产率目标化合物。方法 运用单因素实验设计,重点考察了培养方式、发酵培养基组成 (如碳源、氮源、盐度等)以及培养条件 (温度、摇床转速)等因素。结果 最佳发酵条件为：马铃薯200 g/L,麦芽糖10 g/L,淀粉20 g/L,海盐15 g/L,28 ℃, 摇床转速160 r/min,培养14天。结论 在该发酵条件下,brefeldin A的实际产量达到40 mg/L,较优化前提高了近10倍。     

一株海洋真菌产青霉酸的发酵优化研究

目的 对一株海洋真菌Penicillium janthinellum HK1-6的青霉酸代谢产物进行发酵优化,以期获得足量的化合物研究青霉酸对水稻纹枯病菌的拮抗性。方法 采用正交实验设计对真菌HK1-6产青霉酸的土豆液体培养基进行优化,采用高效液相色谱法对青霉酸产量进行定量分析。结果 研究表明,真菌HK1-6高产青霉酸的土豆液体培养基各因素最优水平为葡萄糖30 g,土豆200 g,海盐10 g,pH为4,产量可达0.908 g/L,而原发酵条件下青霉酸产量约为0.423 g/L。结论 真菌HK1-6采用最优土豆液体培养基发酵后,青霉酸的产量显著提高,产量较原培养条件提高约2.1倍。     

三角叶黄连胚胎学研究

目的:探讨三角叶黄连种子败育的胚胎学原因.方法:研究三角叶黄连胚胎发育过程,与正常胚胎发育作比较.结果:三角叶黄连花药具有4个小孢子囊,花药壁由4~5层细胞组成,即:表皮、药室内壁、中层和绒毡层.绒毡层为腺质型.在小孢子母细胞减数分裂时期,胞质分裂为同时型,四分体排列为四面体型.心皮下部闭合,上端开裂.胚珠倒生,双珠被,厚珠心,外珠被由5层细胞组成,内珠被由2~3层细胞组成,珠心由4~5层细胞组成,只由内珠被形成珠孔.大孢子四分体线形排列,胚囊发育为蓼型.其异常现象为:小孢子四分体时期以后包围小孢子的胼胝质退化消失,绝大多数小孢子逐渐呈空瘪状态败育;胚囊发育完成后开始退化,导致胚珠中空.结论:小孢子发育异常和胚珠的退化是三角叶黄连只开花不结实的根本原因.     

大狼毒内生真菌的分离、鉴定与抑菌活性研究

目的 分离和鉴定大狼毒根中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 用组织块法分离,点植法对分离菌株进行分类鉴定;选择3种人类病原细菌作为指示菌进行体外抑菌试验.结果 分离获得内生真菌41株,鉴定为1纲、4目、6科、15属;其中9株有稳定的抑菌活性,尤其对大肠杆菌有显著抑制作用.结论 大狼毒根中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源.     

HPLC法测定栽培河套大黄中土大黄苷的含量

目的:建立 HPLC 法测定栽培河套大黄中土大黄苷的含量。方法:采用 ZORBAX Eclipse XDB—C_(18)(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-乙腈-水(35:5:60)为流动相,流速:1.0 mL·min~(-1),检测波长为320 nm,采用外标法定量测定。结果:土大黄苷进样量在0.206～2.06μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率(n=6)为99.31%,RSD 为0.82%。结论:本方法操作简便,结果准确可靠,适用于栽培河套大黄中土大黄苷的含量。     

栽培河套大黄根、茎、叶中游离蒽醌类成分的含量分析

目的:利用 HPLC 法测定栽培河套大黄根、茎、叶中游离蒽醌的含量。方法:采用 Agilent Zorbax SB-C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸(85:15)为流动相,流速:1.0mL·min~(-1),检测波长为254nm,理论板数按大黄素峰计算不低于3000。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分的线性范围分别为0.046～0.232μg(r=0.9998)、0.069～0.343μg(r=0.9999)、0.063～0.314μg(r=0.9995)、0.060～0.298μg(r=0.9994)、0.032～0.161μg(r=0.9997)。河套大黄样品1(根)中上述5种成分的回收率(n=6)分别为97.31%(RSD 为1.3%),96.73%(RSD 为2.2%),98.85%(RSD 为1.9%),98.96%(RSD 为1.0%),98.11%(RSD 为2.3%)。河套大黄根中上述5种成分的含量依次为0.42%～0.48%,0.06%～0.08%,0.40%～0.47%,1.90%～2.40%,0.44%～0.62%;茎中的含量依次为0,0,0.08%～0.1%,0.01%,0.03%～0.06%;叶中的含量依次为:0.01%,0,0.62%～0.90%,0.01%,0.05%～0.07%。结论:栽培河套大黄根、茎、叶中均含有游离蒽醌,其中根的含量最高,叶次之,茎最少;根中游离蒽醌最高为大黄酚,其次为大黄素甲醚,芦荟大黄素与大黄素的含量基本相同,大黄酸的含量最低。可针对河套大黄中含量较高的游离蒽醌进行开发。     

栽培河套大黄根、茎、叶中游离葸醌类成分的含量分析

目的：利用HPLC法测定栽培河套大黄根、茎、叶中游离蒽醌的含量。方法：采用Agilent Zorbax SB-C18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以甲醇-0．1％磷酸（85：15）为流动相，流速：1．0mL·min^-1，检测波长为254nm，理论板数按大黄素峰计算不低于3000。结果：芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚5种成分的线性范围分别为0．046-0．232峭（r=0．9998）、0．069-0．343μg（r=0．9999）、0．063-0．314μg（r=0．9995）、0．060-0．298μg（r=0．9994）、0．032-0．161μg（r=0．9997）。河套大黄样品1（根）中上述5种成分的回收率（n=6）分别为97．31％（RSD为1．3％），96．73％（RSD为2．2％），98．85％（RSD为1．9％），98．96％（RSD为1．0％），98．11％（RSD为2．3％）。河套大黄根中上述5种成分的含量依次为0．42％-0．48％，0．06％-0．08％，0．40％-0．47％，1．90％-2．40％，0．44％-0．62％；茎中的含量依次为0，0，0．08％-0．1％，0．01％，0．03％-0．06％；叶中的含量依次为：0．01％，0，0．62％-0．90％，0．01％，0．05％-0．07％。结论：栽培河套大黄根、茎、叶中均含有游离蒽醌，其中根的含量最高，叶次之，茎最少；根中游离蒽醌最高为大黄酚，其次为大黄素甲醚，芦荟大黄素与大黄素的含量基本相同，大黄酸的含量最低。可针对河套大黄中含量较高的游离蒽醌进行开发。     

元胡生物碱的化学研究 Ⅵ.元胡叔胺生物碱的反相高效液相色谱法测定

用反相高效液相色谱法分离了元胡块茎中6个主要叔胺生物碱即(—)-四氢非洲防己胺(A),(±)-四氢巴马亭(B),(+)-紫堇碱(C),(—)-四氢小檗碱(D),四氢黄连碱(E),(+)-海罂栗碱(F)。并用外标法测定了这些生物碱在元胡生药样品及醋制品中的含量。本法用Nucleosil10 C₁₈层析柱(2.6mm×25 cm),甲醇—水(70:30)为流动相,紫外λ280 nm检测,流速0.8ml/min。方法简便、快速,准确,重现性好。