扁蓄苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨扁蓄苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响。方法以不同浓度的萹蓄苷作用于体外生长至对数期的MDA-MB-231细胞48 h后,采用噻唑蓝染色(MTT)法检测扁蓄苷对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色观察细胞染色质固缩情况,流式细胞术检测细胞周期,Western-blot检测PI3K/AKT信号通路核心蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平,RT-PCR技术检测通路下游细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl及周期相关蛋白CDK2基因表达情况。结果不同浓度的扁蓄苷(6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))作用于MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖活性受到抑制(P <0.01),且具有浓度依赖性;扁蓄苷(12.5、50、100μmol·L~(-1))作用细胞48 h后,细胞核染色质固缩;当扁蓄苷浓度为50μmol·L~(-1)时,S期细胞所占百分比显著增高(P <0.05),当扁蓄苷浓度为100μmol·L~(-1)时,G2/M期细胞所占百分比显著增高(P <0.05);随着扁蓄苷浓度的增加,通路核心位点PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P <0.01),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl、细胞周期蛋白CDK2基因表达水平下调(P <0.05)。结论扁蓄苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期、G2/M期,并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路下调Bcl-2、Bcl-xl、及CDK2基因表达进而诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖作用

目的探讨甘精胰岛素(insulin glargine)和人胰岛素(human insulin)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)的调节作用。方法使用不同浓度的甘精胰岛素和人胰岛素刺激人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,检测不同时间段的细胞增殖作用,探讨抑制ERK1/2激活对细胞增殖的影响。使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果甘精胰岛素和人胰岛素在1、10、100IU.L-1刺激MDA-MB-231细胞96h后均可轻度促进MDA-MB-231细胞增殖,相同条件下甘精胰岛素和人胰岛素的促增殖效应无差异。甘精胰岛素与人胰岛素以10IU.L-1分别刺激48、72、96h后两药均诱导细胞增殖,比较两种药物间增殖效应的差异无统计学意义。甘精胰岛素和人胰岛素均使S+G2/M期细胞比例增加,但两处理组间差异无显著性。ERK1/2抑制剂PD98059可抑制MDA-MB-231细胞增殖;但PD98059不影响甘精胰岛素和人胰岛素对MDA-MB-231细胞增殖的促进作用。结论甘精胰岛素和人胰岛素对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖有类似的轻度促进作用,该作用不依赖于ERK的激活。     

褐藻素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究褐藻素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度褐藻素处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK-8法测定细胞抑制率、Live/Dead^TM细胞成像试剂盒进行活死细胞荧光分析,TUNEL法、Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达,采用试剂盒检测Caspase-9和Caspase-3/7活性。结果:褐藻素处理MDA-MB-231细胞24 h时,16μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为68.79μmol·L^-1;处理48 h时,8μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为38.08μmol·L^-1;褐藻素对乳腺癌细胞的细胞活力和增殖的抑制作用表现出一定的时间和剂量依赖性(P<0.05)。与阴性对照组相比,16,32,64μmol·L^-1     

多硫代二酮哌嗪类化合物的研究进展

多硫代二酮哌嗪(Epipolythiodioxopiperazines,ETPs)是一类重要的主要由真菌产生的活性次级代谢产物,其结构特征为二酮哌嗪母核中含有硫桥;ETPs具有广泛的生物活性,例如:抗增殖、细胞毒、免疫抑制、抗病毒以及抗菌等。大量研究表明,分子中的硫桥结构是ETP类化合物保持活性的关键药效基团。据统计,截至2011年底,从天然界中共分离得到126个ETP类化合物。本文根据其结构中组成氨基酸以及修饰的不同将ETP类化合物分为15种结构类型,并就其来源、结构、生物活性、生物合成及其构效关系研究进行综述。     

NF-κB和MAPK信号通路参与金雀异黄酮诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

目的探讨金雀异黄酮(genistein)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的可能机制。方法采用MTT法观察金雀异黄酮对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;集落形成法观察金雀异黄酮对MDA-MB-231细胞集落形成能力的影响;金雀异黄酮干预MDA-MB-231细胞36 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3及NF-κB、ERK、p-ERK、JNK、p-JNK蛋白的表达。结果 MTT结果显示,金雀异黄酮呈时间、浓度依赖性抑制乳腺癌MDAMB-231细胞增殖;集落形成实验结果显示,金雀异黄酮能明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的集落形成(P<0.05);Western blot结果显示,金雀异黄酮干预乳腺癌MDA-MB-231细胞36 h后,与对照组相比,Bcl-2、NF-κB、p-ERK蛋白表达水平明显下调(P<0.05),Bax、caspase-3、p-JNK蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。结论金雀异黄酮能抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制NF-κB、ERK,激活JNK信号转导通路有关。     

EGCG对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallo-catechin-3-gallate,EGCG]对三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其可能作用机制。方法通过CCK-8实验观察不同浓度EGCG(10、20、40、80、160 mg.L-1)对MDA-MB-231细胞增殖的影响;Hoechst33258染色法观察EGCG对MDA-MB-231细胞凋亡的影响;JC-1法测定细胞线粒体膜电位;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性的变化;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose reg-ulatd protein 78,GRP78)和caspase-3蛋白表达变化。结果EGCG能明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,且随EGCG浓度的增加和作用时间的延长而增强,EGCG作用MDA-MB-231细胞12、24、48 h的IC50分别为69.1、40.4、29.4 mg.L-1。EGCG作用MDA-MB-231细胞24 h后,细胞出现体积变小、染色质聚集、细胞核边缘化等典型的凋亡形态学改变,且随EGCG浓度的增加,MDA-MB-231细胞凋亡率逐渐增加,线粒体膜电位明显降低,caspase-3活性明显增强,West-ern blot结果显示EGCG可抑制GRP78蛋白表达,增强活性caspase-3蛋白表达。结论 EGCG能够促进MDA-MB-231凋亡,其机制可能与内质网应激(Endoplasmic reticulumstress,ERS)引起的caspase-3激活有关。     

环九肽与人乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性结合的研究

目的探讨99Tc^m标记分子探针与人乳腺癌MDA-MB-231细胞的特异结合及生物分布。方法：Westernblot分析MDA-MB-231细胞和正常乳腺上皮细胞MCF-10A IL-11受体（IL-11R）蛋白的表达;荧光检测99Tc^m-DTPA-c（CG-RRAGGSC）与乳腺癌细胞的特异性结合及结合位点。18只荷瘤裸鼠随机分为6组（挖-3）,经尾静脉注入0．74MBq（0．1mL）分子探针,不同时间测量其在荷瘤鼠体内生物分布。结果：West-ernblot检测MDA-M13-231细胞IL-11R是MCF-10A细胞的6．7倍;荧光染色证实99Tc^m-DTPA-c（CGRRAGGSC）-FITC特异结合在MDA-MB-231细胞的胞质和胞膜中;乳腺癌细胞IL-11R结合分子探针具饱和性;分子探针在荷瘤鼠体内迅速、持续聚集在瘤体内,4h达峰值（17．63±1．73）％ID／g,其他脏器分布极少,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MDA-MB-231细胞呈IL-11R高表达,与环九肽具有高亲和力,99Tc^m标记环九肽放射性分子探针体内外能与之靶向特异结合。     

泽漆抑制三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞及其凋亡机制研究

目的 研究泽漆对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用及其作用机制。方法 用MTT法检测细胞活力;用荧光显微镜法测定MDA-MB-231细胞的活性氧（ROS）生成量;用流式细胞仪检测细胞的凋亡率;用TUNEL检测法检测细胞凋亡DNA碎片;用Western blot检测caspase-9、caspase-3、PARP等凋亡相关因子的水平变化。结果 MTT试验显示泽漆提取物对MDA-MB-231细胞具有显著的抑制作用,但作用可被ROS抑制剂NAC及caspase抑制剂Z-VAD-FMK所消除;荧光显微镜检测显示泽漆提取物能显著提高ROS的生成;流式细胞仪检测显示泽漆提取物处理后,PI染色阳性细胞明显增加,但被NAC减弱。Caspase-9、caspase-3在提取物处理后均转为激活形式,PARP被剪切。TUNEL法显示,提取物处理后细胞凋亡碎片明显增多,而提前加入ROS抑制剂NAC和caspase抑制剂Z-VAD-FMK能使泽漆提取物诱导凋亡的DNA碎片明显减少。结论 泽漆乙酸乙酯提取物可以有效抑制MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其作用机制可能与ROS过量生成所致的线粒体损伤途径有关。     

丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外血管生成拟态的抑制作用

目的:研究丹参酮ⅡA对乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外血管生成拟态的影响。方法:将培养的MDA-MB-231细胞分为丹参酮ⅡA组及对照组,应用MTT法检测细胞增殖活力的变化,体外管状形成试验检测管道形成能力的变化,通过RT-PCR和Western-blot技术检测细胞内与血管拟态形成相关基因表达的变化。结果:丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞增殖有明显抑制作用,并抑制体外管道形成和肿瘤细胞VEGF的mRNA表达。结论:丹参酮ⅡA能抑制MDA-MB-231细胞的体外血管生成拟态的形成和细胞增殖,其机制可能是通过抑制VEGF的表达而实现。     

冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的：研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法：体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24μmol/L冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果：冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高（P〈0.01）,具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调（P〈0.05）。结论：冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。     

全合成Jaspine B诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及DNA损伤

目的研究全合成Jaspine B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,并探讨其对细胞DNA的损伤。方法酸性磷酸酶法(APA)检测细胞增殖,荧光显微镜、透射电镜(TEM)观察细胞形态结构,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化,流式细胞技术检测凋亡率及线粒体膜电位(ΔΨm),Western blot检测凋亡相关蛋白表达,单细胞凝胶电泳(SCGE)检测DNA损伤。结果Jaspine B抑制细胞增殖,24、48、72h IC50分别为2.61、1.07、0.77μmol·L-1,其作用在一定范围内呈浓度和时间依赖性;细胞发生凋亡形态改变,生化特征上出现DNA梯状改变;1.50μmol·L-1及3.00μmol·L-1Jaspine B作用24h,早期凋亡细胞率分别为7.60%及15.48%,相应浓度作用48h,早期凋亡细胞率分别增至21.48%及23.60%;Jaspine B可引起ΔΨm明显下降、Cyt C水平增加,促使Caspase-3酶原剪切活化;Jaspine B作用24h,细胞出现明显DNA损伤。结论全合成Jaspine B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞抑制增殖、诱导凋亡并诱发DNA损伤,凋亡经由依赖胱天蛋白酶的内在途径发生。     

Anti-Cancer Effect of IN-2001 in MDA-MB-231 Human Breast Cancer

In recent years, inhibition of HDACs has emerged as a potential strategy to reverse aberrant epigenetic changes associated with cancer, and several classes of HDAC inhibitors have been found to have potent and specific anticancer activities in preclinical studies. But their precise mechanism of action has not been elucidated. In this study, a novel synthetic inhibitor of HDAC, 3-(4-dimethylamino phenyl)-N-hydroxy-2-propenamide [IN-2001] was examined for its antitumor activity and the underlying molecular mechanisms of any such activity on human breast cancer cell lines. IN-2001 effectively inhibited cellular HDAC activity (IC₅₀ = 0.585 nM) in MDA-MB-231 human breast cancer cells. IN-2001 caused a significant dose-dependent inhibition of cell proliferation in estrogen receptor (ER) negative MDA-MB-231 human breast cancer cells. Cell cycle analysis revealed that the gowth inhibitory effects of IN-2001 might be attributed to cell cycle arrest at G₀/G₁ and/or G₂/Mphase and subsequent apoptosis in human breast cancer cells. These events are accompanied by modulating several cell cycle and apoptosis regulatory genes such as CDK inhibitors p21^WAF1 and p27^KIP1 cyclin D1, and other tumor suppressor genes such as cyclin D2. Collectively, IN-2001 inhibited cell proliferation and induced apoptosis in human breast cancer cells and these findings may provide new therapeutic approaches, combination of antiestrogen together with a HDAC inhibitor, in the hormonal therapy-resistant ER-negative breast cancers. In summary, our data suggest that this histone deacetylase inhibitor, IN-2001, is a novel promising therapeutic agent with potent antitumor effects against human breast cancers.     

Cardiotoxin III suppresses MDA-MB-231 cell metastasis through the inhibition of EGF/EGFR-mediated signaling pathway

Cardiotoxin III (CTX III), a basic polypeptide isolated from Naja naja atra venom, has been shown to exhibit anticancer activity. Epidermal growth factor (EGF) and its receptor, EGFR, play roles in cancer metastasis in various tumors. We use EGF as a metastatic inducer of MDA-MB-231 cells to investigate the effect of CTX III on cell migration. CTX III inhibited the EGF-induced activation of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), and further suppressed cell invasion and migration without obvious cellular cytotoxicity. CTX III suppressed EGF-induced nuclear factor-kappaB (NF-κB) nuclear translocation and also abrogated the EGF-induced phosphorylation of EGFR, phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt, and extracellular regulated kinase (ERK)1/2. In addition, CTX III similar to wortmannin (a PI3K inhibitor) and U0126 (an up-stream kinase regulating ERK1/2 inhibitor) attenuated cell migration and invasion induced by EGF. Furthermore, the EGFR inhibitor AG1478 inhibited EGF-induced MMP-9 expression, cell migration and invasion, as well as the activation of ERK1/2 and PI3K/Akt, suggesting that ERK1/2 and PI3K/Akt activation occur downstream of EGFR activation. These findings suggest that CTX III inhibited the EGF-induced invasion and migration of MDA-MB-231 cells via EGFR-dependent PI3K/Akt, ERK1/2, and NF-κB signaling, leading to the down-regulation of MMP-9 expression. These results provide a novel mechanism to explain the role of CTX III as a potent anti-metastatic agent in MDA-MB-231 cells.