二甲双胍对结肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

  目的 研究二甲双胍对人结肠癌细胞株SW480增殖、周期及凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制。方法 体外培养人结肠癌细胞株SW480,给予不同浓度二甲双胍干预,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Real time-PCR法检测相关基因mRNA的表达。结果 二甲双胍可以抑制SW480细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性。20mmol/L二甲双胍干预48h后与对照组相比,细胞G0/G1期比例升高,S及G2/M期比例均降低;细胞凋亡比率增高;Real time-PCR示周期相关基因CyclinD1 mRNA表达明显下调（P0.05),凋亡相关基因BCL-2 mRNA表达明显下调,CASP3及BAX mRNA 表达明显上调(P<0.01)。结论 二甲双胍能够抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,G0/G1期细胞周期阻滞,促进细胞凋亡;其机制可能与上调及下调某些周期、凋亡相关基因的mRNA表达有关。     

PARP-1抑制剂对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨PARP-1抑制剂3-aminobenzamide（3-AB）对骨肉瘤U2OS细胞增殖及凋亡的影响。方法常规培养骨肉瘤U2OS细胞,采用CCK-8法检测U2OS细胞的增殖和流式细胞术检测细胞凋亡,并用caspase-3活性测定试剂盒检测caspase-3活性和Western-blot技术检测Bcl-2、Bax的表达。结果 3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,且与剂量和时间呈相关性,流式细胞术检测结果显示3-AB能促进骨肉瘤细胞的凋亡,且呈时间相关性,3-AB刺激早期caspase-3活性增高,Western-blot显示3-AB刺激后随时间延长Bax的表达量逐渐升高,而Bcl-2的表达量则轻度升高后降低。结论 PARP-1抑制剂3-AB能抑制骨肉瘤细胞的增殖,促进其凋亡,这为PARP-1作为骨肉瘤治疗的新靶点提供了初步实验依据。     

二甲双胍对类风湿性关节炎患者滑膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨二甲双胍对类风湿性关节炎患者滑膜细胞增殖与凋亡的影响.方法 取类风湿性关节炎患者滑膜组织,用胰酶消化法分离其滑膜细胞,分别用流式细胞术和CCK-8法检测三种浓度的二甲双胍(10、20、30 mmol/L)对滑膜细胞增殖的影响,TUNEL和流式细胞仪检测滑膜细胞凋亡情况,ELISA法检测二甲双胍处理的滑膜细胞上清中的炎性因子和抗炎性因子.结果 三种浓度(10、20、30 mmol/L)的二甲双胍分别干预滑膜细胞24、48、72 h,均不同程度抑制了滑膜细胞的增殖,且成时间-浓度依赖性.CCK-8法检测结果显示20、30 mmol/L二甲双胍处理显著抑制了滑膜细胞的增殖(P＜0.05),流式细胞术结果表明20 mmol/L二甲双胍处理48 h后,Go/G1期滑膜细胞的百分比与对照组相比显著增加了约20％ (P ＜0.05),S期和G2/M期的细胞比例分别显著下降了9％和11％ (P ＜0.05).凋亡结果表明,20、30 mmol/L二甲双胍处理48、72 h,较对照组显著促进滑膜细胞的凋亡(P＜0.05),流式细胞术显示早期和晚期的滑膜细胞凋亡率约17.5％.检测炎性因子发现,20、30 mmol/L二甲双胍处理后显著降低炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平(P＜0.05),增加抗炎因子IL-10水平约66％和76％ (P ＜0.05).结论 二甲双胍可显著抑制体外培养的人滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡,可能与二甲双胍降低炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平和增加抗炎因子IL-10水平有关.     

穗花杉双黄酮对骨肉瘤细胞增殖及周期相关蛋白的影响

目的:研究穗花杉双黄酮(AF)对骨肉瘤细胞增殖的作用及其分子机制.方法:CCK-8法筛选AF抑制骨肉瘤细胞增殖的有效浓度,细胞周期流式法检测AF对骨肉瘤细胞G1期和S期分布的影响,免疫荧光法、荧光定量PCR法和Western blot法检测AF对骨肉瘤细胞增殖相关基因及蛋白表达的影响.结果:AF在浓度为75μmol/L...     

二甲双胍联合异羟肟酸对骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响

目的 研究二甲双胍(Met)联合异羟肟酸(SAHA)应用对人骨肉瘤细胞MG-63增殖和凋亡的影响。方法MTS法分别检测二甲双胍、SAHA和二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞生长的抑制作用;平板克隆实验检测二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞克隆形成能力的影响;流式细胞仪检测二甲双胍联合SAHA对MG-63细胞凋亡的影响;Western Blot检测联合用药后细胞周期和凋亡相关蛋白的变化。结果二甲双胍和SAHA分别对MG-63细胞生长有抑制作用,二甲双胍联合SAHA应用对MG-63细胞生长的抑制作用更加显著;二甲双胍联合SAHA应用与单药相比能够明显降低MG-63细胞克隆形成率,并且促进细胞凋亡;联合用药后P27,P21,Cyclin D1,Mcl-1,XIAP,Bim,Cytochrome C蛋白发生明显改变。结论二甲双胍联合SAHA应用与单药相比能够显著抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖,促进其凋亡,可见两药联用对肿瘤细胞的杀伤具有协同性。     

HIF-1α抑制剂YC-1对肝癌细胞增殖凋亡的影响及机制

目的 应用缺氧诱因因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)抑制剂YC-1处理SMMC7721肝癌细胞,观察不同药物浓度对SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用和对细胞周期及凋亡率的影响及其机制.方法 肝癌细胞系SMMC-7721分对照组和实验组.对照组细胞常规培养,实验组细胞施加...     

核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),C...     

γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法从宫颈癌患者手术切除的肿瘤组织分离肿瘤浸润淋巴细胞,固相抗体包被法体外扩增得到γδT细胞(效应细胞),与人宫颈癌HeLa细胞(靶细胞)按照不同的比例共培养24h或48h后,MTT法检测HeLa细胞增殖情况,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡。结果γδT细胞与HeLa细胞按不同效靶比共培养24h和48h后,MTT法检测结果显示,增殖率均较对照组显著降低(P<0.05)并显示了剂量依赖性,效靶比为32∶1时,50%以上的细胞停止增殖;γδT细胞与HeLa细胞(效靶比为4∶1)共培养24h后FCM分析结果显示,HeLa细胞凋亡率较对照组显著增强(P<0.01)。结论γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性,对细胞凋亡有促进作用。     

羟喜树碱对人胰腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究羟喜树碱（ＨＣＰＴ）体外抑制人胰腺癌细胞株ＳＷ－１９９０增殖并诱导其凋亡的作用。方法：体外培养的胰腺癌细胞经不同质量浓度（１．５６２．５,３．１２５,６．２５,１２．５,２５．５０,１００μｇ／ｍｌ）的ＨＣＰＴ处理２０￣２４ｈ后,用ＭＴＴ法测定细胞增殖情况,再分别以Ａｎｎｅｘｉｎ Ⅴ早期凋亡检测试剂盒、电子显微镜、流式细胞术和ＴＵＮＥＬ标记以及ｂｃｌ－２免疫细胞化学标记检测细胞凋亡情况。     

PINK1沉默对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨PTEN诱导激酶1(PINK1)沉默对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:将人肺癌细胞H2106分为3组:空白组(不处理)、阴性组(将shRNA-对照质粒转染入肺癌细胞中)、转染组(将shRNA-PINK1质粒转染入肺癌细胞中)。转染48 h后,检测各组细胞中PINK1等蛋白的表达、细胞增殖抑制率、细胞周期、细胞凋亡。结果:在转染12～72 h时,转染组细胞增殖抑制率高于空白组和阴性组,差异有统计学意义(P<0.05),空白组与阴性组差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组和阴性组对比,转染组S期细胞数量降低、G2/M期细胞数量增加、细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染组活性caspase3和Bax表达水平增加、PINK1和Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),空白组与阴性组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PINK1沉默可抑制肺癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,可能是肺癌治疗的另一个新靶点。     

百草枯对大鼠正常肝细胞系增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度百草枯对大鼠正常肝细胞系(BRL-3A)增殖和凋亡的影响。方法将传代培养的BRL-3A细胞分为药品空白组及低、中、高浓度组。向高、中、低浓度组和药品空白组中加入百草枯,使其终浓度依次为4.80、1.20、0.15、0.00μmol.L-1。24 h后噻唑蓝法检测细胞增殖活性;Western blot检测B细胞白血病家族蛋白Bcl-2、Bax和胱天蛋白酶caspase-9、caspase-3的表达变化。结果细胞增殖活性高浓度组低于药品空白组,差异有统计学意义(P<0.05);中、低浓度组与药品空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。细胞计数高浓度组低于药品空白组,差异有统计学意义(P<0.05);中、低浓度组与药品空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。随着染毒剂量的增加,促凋亡蛋白Bax、caspase-9、caspase-3表达增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达量则减少。结论百草枯能抑制BRL-3A细胞增殖,这种作用可能是通过调节凋亡相关蛋白表达实现的,但浓度较低时对细胞增殖反而有促进效应。     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

3'-羟基染料木素对3T3-L1细胞增殖与分化的影响及其机制

目的探讨3′-羟基染料木素对3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响及其机制。方法培养3T3-L1细胞,用3′-羟基染料木素干预,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和细胞计数法检测其对细胞增殖的影响,用5-溴脱氧尿嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU)掺入法检测其对前脂肪细胞内DNA合成的影响;用油红O染色法检测其对前脂肪细胞分化过程中脂质的堆积的影响;采用RT-PCR和蛋白免疫印迹技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体γ(peroxisome proliferator acti-vated receptorγ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)的mRNA以及蛋白的表达情况。结果用10～50μmol/L 3′-羟基染料木素分别处理前脂肪细胞24、48和72h,能促进前脂肪细胞增殖(P<0.05或P<0.01),且呈一定的量效关系;3′-羟基染料木素能浓度依赖性地促进前脂肪细胞内DNA合成(P<0.05);3′-羟基染料木素与噻唑烷二酮类药物罗格列酮(rosiglitazone,ROZ)相似,在10和50μmol/L浓度下能使前脂肪细胞的胞浆中出现较大量的脂滴(P<0.05或P<0.01);3′-羟基染料木素处理组中PPARγ和C/EBPα的mRNA与蛋白的表达增加(P<0.01)。结论 3′-羟基染料木素能够促进前脂肪细胞的增殖与分化,增加脂肪细胞分化过程中脂质的堆积,其机制可能与其促进PPARγ、和C/EBPα的mRNA与蛋白表达有关。     

靶向sKDR对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向可溶性血管内皮生长因子受体（sKDR）对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨KDR基因作为膀胱癌基因治疗靶点的可行性和有效性。方法：将人膀胱癌细胞T24分为sKDR转染组、未转染组和对照组,构建靶向sKDR真核分泌型表达质粒PCI-KDR,经Lipofctamine^TM2000转染T24细胞,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测能否与VEGF结合,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测稳定表达sKDR的T24细胞KDR基因表达水平,噻唑蓝比色法（MTT）检测sKDR对T24细胞增殖的作用,转移酶末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率,裸鼠皮下移植稳定表达sKDR的T24细胞,观察其成瘤性的改变。结果：与未转染组比较,转染组稳定表达sKDR的T24细胞其KDR mRNA表达水平升高了4.16倍,细胞增殖抑制率增加了55.1%（P<0.01）,细胞增殖速度明显缓慢并出现显著的凋亡峰。在裸鼠体内转染组与未转染组上述各项指标比较差异有显著性（P<0.01）,转染组肿瘤生长明显缓慢,成瘤能力受抑。结论：靶向sKDR能够在很大程度上抑制膀胱癌T24细胞增殖并促进其凋亡。     

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

Effects of ghrelin on the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes

The effects of ghrelin on the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes and the possible mechanisms were investigated in this study. 3T3-L1 preadipocytes were cultured in vitro and treated with different concentrations of ghrelin. Proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was evaluated by MTT method and mRNA levels of c-myc and thymidine kinase were detected by RT-PCR. Morphological changes of 3T3-L1 preadipocytes were observed and cell differentiation was measured by oil red O staining. The mRNA levels of peroxisome proliferator-activated receptor γ （PPARγ） and CAAT/enhancer binding protein （C/EBPa） in the cells at different differentiation stages were detected by RT-PCR. The results showed that ghrelin at concentrations of 10^-7 to 10^-15 mol/L could significantly promote preadipocyte proliferation （P〈0.05）, with the most pronounced effect observed at 10^-11 mol/L （P〈0.01）. Treatment of 3T3-L1 preadipocytes with ghrelin significantly increased the mRNA levels of c-myc and thymidine kinase （P〈0.01）. Morphological findings demonstrated that the great amount of lipid droplets appeared in the 3T3-L1 preadipocytes treated with ghrelin. Ghrelin could morphologically induce the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes into mature adipocytes. Ghrelin significantly increased the mRNA levels of PPAR7 and C/EBPα during the differentiation, when compared with control group （P〈0.05）. The mRNA levels of PPARγ and C/EBPα were obviously up-regulated with the differentiation of preadipocytes after the treatment of ghrelin. There were significant difference in the mRNA levels of PPARγ and C/EBPu on day 2 and day 8 of the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes （P〈0.01）. In conclusion, ghrelin could promote the proliferation and differentiation of 3T3-L1 preadipocytes by increasing the mRNA levels of PPARγ and C/EBPα and therefore enhance the sensitivity of adipocytes against insulin.     

格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响．方法：MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率,流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达,Western blotting检测蛋白表达．结果：联合应用两种药物后细胞存活率明显下降,凋亡比例略下降,细胞周期阻滞于G0／G1期,cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调．结论：两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降,联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用,进入凋亡途径细胞减少。     

儿茶素抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡作用研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞Cyclin D1,Bcl-2表达的影响,探讨EGCG抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法观察EGCG对肝癌细胞HepG2增殖的影响,免疫细胞化学法、Western blot法分别检测EGCG作用后Cyclin D1,Bcl-2的表达。结果 EGCG呈浓度依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖(P<0.05),免疫细胞化学和Western blot的结果均显示EGCG作用后Cyclin D1和Bcl-2的表达下调。结论 EGCG可能通过下调Cyclin D1,Bcl-2的表达,抑制HepG2细胞增殖的同时诱导细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

芦荟大黄素对Jurkat T细胞增殖和凋亡的作用及机制

目的 研究芦荟大黄素对Jurkat T细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨可能的机制.方法 应用细胞计数测定增殖,Hoechst/PI双染法及DNA片断化分析细胞凋亡特征,流式细胞术检测细胞周期分布.进一步应用二氢乙锭荧光染色测量活性氧产物,Western blotting检测胞浆细胞色素C(Cyt-c)的量,比色法检测caspase-3和caspase-9活性.结果 芦荟大黄素剂量和时间依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖.芦荟大黄素诱发细胞核皱缩,核DNA片断化,细胞周期出现亚G1期凋亡峰,且停滞于G2/M期.芦荟大黄素介导细胞内活性氧水平显著提高,线粒体释放Cyt-c量显著增加,caspase-3和caspase-9活性显著增强.结论 芦荟大黄素剂量依赖性地抑制Jurkat T细胞增殖并诱导其凋亡.诱导凋亡的机制中,包括增加活性氧产物和线粒体损伤途径.