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1.
目的 观察转染解聚素- 金属蛋白酶17- 短发夹RNA(ADAM17-shRNA)的MCF-7 乳腺癌
细胞在裸鼠体内的生长效果并探索其作用机制。方法 将30 只裸鼠随机分为转染组(接种转染ADAM17-
shRNA 的MCF-7 乳腺癌细胞)、空载体组(接种转染shNC 的MCF-7 乳腺癌细胞)及对照组(接种正常
MCF-7 细胞)。分别在各组裸鼠右侧鼷部皮下种植细胞悬液0.2 ml/ 只,观察各组荷瘤裸鼠的生长状态、饮
食及体重变化。第28 天处死裸鼠并取出移植瘤。采用HE 染色观察组织学形态;Western blot 检测肿瘤局
部ADAM17、磷酸化表皮细胞生长因子受体(p-EGFR)、表皮细胞生长因子受体(EGFR)、磷酸化的蛋白激
酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK) 及细胞外调节蛋白激酶(ERK) 的
表达。结果 对照组、空载体组及转染组移植瘤最终体积分别为(639.821±15.429)、(643.350±15.543)
和(240.233±10.536)mm3,3 组不同时间点瘤体体积比较有差异(P <0.05);不同组别瘤体体积比较有差
异(P <0.05)。HE 染色结果显示,移植瘤组织呈乳腺浸润性导管癌特征,对照组与空载体组无明显差异,转
染组较对照组、空载体组坏死多。转染组肿瘤组织中ADAM17、EGFR、p-EGFR、Akt、p-Akt、ERK 及
p-ERK 的蛋白表达水平低于对照组和空载体组(P <0.05)。结论 ADAM17-shRNA 可有效抑制MCF-7 乳
腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长。EGFR-PI3K-Akt 和EGFR-MEK-ERK 信号传导通路参与ADAM17-shRNA
的抑制作用。 相似文献
2.
目的 观察Survivin-shRNA 对A431 皮肤鳞状细胞癌的作用效果,探讨核因子κB(NF-κB)在
Survivin-shRNA 对皮肤鳞状细胞癌(SCC)抑制作用中的分子生物学机制。方法 构建Survivin-shRNA 腺病
毒载体,筛选最佳干扰序列。将培养好的A431 细胞混悬液皮下接种于裸鼠,复制A431 裸鼠移植瘤模型,随机
分为空白对照组、阴性对照组、Survivin-shRNA 转染组和Res 阳性对照组,每组5 只,瘤内注射相应试剂,第
20 天处死所有裸鼠,取瘤组织分别测量瘤体积、瘤重,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;HE 染色观察细胞形
态;TUNEL 检测细胞凋亡情况;Western blot 法测定Survivin、IκB、P65、P53、Caspase-3 蛋白的表达。结果
Survivin-shRNA 转染组或Res 阳性对照组的裸鼠移植瘤,瘤体积及瘤重降低,与空白对照组及阴性对照组比
较差异有统计学意义(P <0.05);TUNEL 检测结果示Survivin-shRNA 转染组、Res 阳性对照组的裸鼠移植瘤,
细胞凋亡率增高,与空白对照组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P <0.05);Survivin-shRNA 转染组及
Res 阳性对照组可见肿瘤细胞较少,分布稀疏,有变性的液化坏死灶,癌细胞皱缩变圆,胞核固缩;SurvivinshRNA
转染组或Res 阳性对照组裸鼠移植瘤,Survivin、P65 蛋白的表达均降低,与空白组对照组及阴性对照组
比较,差异有统计学意义(P <0.05),IκB、P53、Caspase-3 蛋白表达增高,与空白对照组及阴性对照组比较,
差异有统计学意义(P <0.05)。结论 Survivin-shRNA 可以抑制皮肤鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的生长,其机制
之一可能是通过抑制NF-κB 信号通路,活化抑癌基因P 53,进而促进肿瘤细胞凋亡,抑制SCC 移植瘤的生长。 相似文献
3.
目的 探讨PAX2稳转细胞系构建及生物学作用。方法 选择处于对数生长期大鼠肾小管上皮细胞,实验分为稳转组、空载组、对照组。稳转组采用阳离子脂质体转导将pEGFP-PAX2转入大鼠肾小管上皮细胞,空载组采用同样方法配置空载质粒转染溶液,对照组不添加质粒转染溶液。经G418筛选,建立稳定转染细胞系。通过细胞划痕实验及Transwell实验检测PAX2稳转细胞系的细胞迁移率及细胞侵袭作用。结果 应用G418筛选14 d,稳转组大鼠肾小管上皮细胞有明显克隆长出,建立PAX2基因稳定转染肾小管上皮细胞系。稳转组在荧光显微镜下可见绿色荧光,基因融合表达获得成功。稳转组细胞PAX2条带密度与β-action吸光度比值为(1.00±0.04),空载组为(0.83±0.03),对照组为(0.85±0.04),3组吸光度比值比较,差异有统计学意义(F=398.7,P<0.05);其中稳转组吸光度比值高于空载组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕后18 h,对照组、空载组和稳转组细胞迁移率分别为(39.34±5.34)%、(40.56±7.54)%和(83.72±7.12)%,3组细胞迁移率比较,差异有统计学意义(F=431.8,P<0.05);其中稳转组细胞迁移率高于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组细胞培养48 h后,对照组、空载组和稳转组迁移细胞分别为(23.33±3.63)、(22.00±8.14)、(45.67±7.14),3组迁移细胞数比较,差异有统计学意义(F=248.5,P<0.05);其中稳转组迁移细胞数高于对照组和空载组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 pEGFP-PAX2质粒成功转染大鼠肾小管上皮细胞,并成功筛选出高效稳定表达PAX2的稳转细胞系。PAX2稳转增加了肾小管上皮细胞的迁移及侵袭能力。 相似文献
4.
目的探讨POFUT1对人胃腺癌裸鼠移植瘤微血管生成的影响及其作用机制。方法制备人胃腺癌BGC823的POFUT1慢病毒低表达及对照组、过表达及对照组细胞模型,分别命名为shRNA-POFUT1-BGC82组、shRNA control-BGC823组、PLV-POFUT1-BGC823组及PLV control-BGC823组。采用皮下成瘤的方法,分别用这4组细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型(每组5只),观察和测算肿瘤体积。30d后处死裸鼠并取瘤,采用免疫组化方法检测裸鼠瘤组织中VEGF和CD31的表达;Western印迹法检测裸鼠瘤组织中POFUT1和VEGF的表达。结果20只裸鼠全部成瘤,实验过程无死亡。与PLV control组相比,PLV-POFUT1组裸鼠肿瘤体积显著增加(P<0.05);shRNA-POFUT1较shRNA control组裸鼠肿瘤体积明显偏小(P<0.05)。免疫组化结果显示,与PLV contro1组相比,PLV-POFUT1组瘤组织中VEGF和CD31表达显著增高(P<0.05);与shRNA control组相比,shRNA-POFUT1组则明显降低(P<0.05)。与shRNA control组相比,shRNA-POFUT1组POFUT1和VEGF蛋白表达水平均显著下调;PLV-POFUT1组较PLV contro1组,其POFUT1和VEGF蛋白水平均显著增强(P<0.05)。结论过表达POFUT1可以显著促进裸鼠移植瘤的增殖和肿瘤微血管形成,低表达POFUT1可抑制裸鼠移植瘤的增殖和肿瘤微血管形成,表明POFUT1在人胃
腺癌裸鼠移植瘤的微血管形成中起着重要的作用,其机制可能与VEGF密切相关。 相似文献
5.
目的探讨联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸(AsODN)对裸鼠胆囊癌生长抑制作用。方法建立裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型,选择36只裸鼠随机分为3组:对照组、正义寡核苷酸(sODN)组和AsODN组,裸鼠瘤体内分别注射PBS、Survivin和Bcl-2sODN、Survivin和Bcl-2AsODN,12d后处死裸鼠,测量瘤体体积及质量,计算抑瘤率;苏木精-伊红染色观察瘤体组织学变化;免疫组织化学方法检测Survivin及Bcl-2蛋白的表达。结果AsODN组裸鼠瘤体平均体积显著低于对照组、sODN组(F=24.469,q=8.802、7.569,P〈0.01),其体积抑瘤率为55.53%,sODN组为9.90%;AsODN组裸鼠瘤体平均质量显著低于对照组、sODN组(F=25.376,q=3.168、20.737,P〈0.01),其质量抑瘤率为56.24%,sODN组为8.47%。AsODN组瘤体中可见大量的凋亡细胞。免疫组化证实AsODN组Survivin表达明显降低,同sODN组相比差异有显著意义(F=15.103,q=5.883、7.191,P〈0.01);Bcl-2表达亦明显降低,同sODN组相比差异有显著性(F=6.632,q=4.793、4.030,P〈0.05)。结论联合转染Survivin和Bcl-2AsODN可下调Survivin和Bcl-2表达,诱发细胞凋亡,从而抑制裸鼠胆囊癌种植瘤的生长。 相似文献
6.
RNAi沉默Survivin基因抑制人鼻咽癌细胞生长 总被引:1,自引:0,他引:1
目的观察RNA干扰沉默Survivin基因对人鼻咽癌CNE2细胞在体内外生长的抑制作用。方法将Survivin特异性shRNA表达载体pGenesil-1-survivin经Lipofectamine。”2000介导转染人鼻咽癌CNE2细胞,经G418筛选获得稳定转染的CNE2细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测Survivin基因mRNA和蛋白表达水平;噻唑蓝(MTF)法检测细胞增殖能力的变化。以稳定转染细胞建立裸鼠荷瘤模型,观测瘤体积的变化,绘制移植瘤生长曲线。结果流式细胞仪检测pGenesil-1-survivin细胞转染百分率为(87.13±2.21)%;RT.PCR和Westernblot结果显示,pGenesil-1-survivin组对人鼻咽癌CNE2细胞SurvivinmRNA和蛋白的抑制率分别为64.55%和51.24%,均较随机序列构建载体的阴性对照(pGenesil-1-NC)组和空白对照组明显下调(均P〈0.05);MTT结果显示,pGenesil-1-survivin组细胞增殖能力明显较pGenesil-1-NC组和空白对照组降低(均P〈0.05);体内实验表明,pGenesil-1-survivin组较pGenesil-1-NC组和空白对照组能有效抑制BALB/C裸鼠人鼻咽癌的生长(均P〈0.05)。结论沉默Survivin基因可以有效抑制人鼻咽癌CNE2细胞在体内外的增殖,Survivin基因有望成为鼻咽癌基因治疗的有效靶点。 相似文献
7.
非小细胞肺癌中FHIT蛋白的表达及其与Survivin和Ezrin蛋白表达的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究FHIT蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与Survivin和Ezrin蛋白表达的关系,探讨其在NSCLC病变中的作用及其临床意义。方法:应用组织芯片技术结合免疫组化法检测60例NSCLC组织、54例肺良性病变组织中FHIT、Survivin和Ezrin蛋白的表达。结果:FHIT蛋白在NSCLC中的阳性表达率为51.7%(31/60),显著低于肺良性病变的87.0%(47/54)(P〈0.01);FHIT的表达与性别、淋巴结转移及组织学类型相关(P〈0.05),与患者的年龄、肿瘤大小、临床分期、肿瘤细胞的分化程度无关(P〉0.05);NSCLC组织中FHIT表达与Survivin和Ezrin表达呈显著负相关(r=-0.636,P〈0.01;r=-0.714,P〈0.01),而Survivin和Ezrin表达无相关关系(r=0.157,P〉0.05)。结论:NSCLC中FHIT失表达,Survivin和Ezrin高表达,FHIT、Survivin和Ezrin在NSCLC的发生、发展中相互作用,联合检测FHIT、Survivin和Ezrin的表达有助于判断肺癌的预后。 相似文献
8.
目的探讨TNF—α对鼻咽癌放射敏感性的影响。方法裸鼠体内移植瘤实验观察CNE-2Z、H5、S1放射后的体内增殖能力,采用HE染色观察各组裸鼠移植瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率,免疫组织化学染色和图像分析法检测不同方法处理的s1裸鼠移植瘤组织中Caspase-3和Survivin的表达。结果鼻咽癌细胞CNE-2Z存在放射敏感性异质性,S1细胞是具有放射抵抗潜能的亚克隆株。TNF-α联合放射治疗对s1裸鼠移植瘤生长有明显抑制作用(P〈0.01),TNF—α联合放射治疗组中瘤组织坏死程度、核分裂指数、肺转移率和淋巴结转移率与生理盐水联合放射治疗组比无明显差异(P〉0.05)。TNF—α联合放射治疗组S1裸鼠体内移植瘤细胞核中Caspase-3表达高于单独TNF—α处理组(P〈0.05);各组S1裸鼠移植瘤细胞浆中Caspase-3及Survivin的表达无明显差异(P〉0.05)。结论TNF—α联合放射治疗可能通过影响胞核中Caspase-3表达抑制鼻咽癌裸鼠移植瘤生长。 相似文献
9.
目的研究靶向人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA)对裸鼠人脑胶质瘤中hTERT基因表达的抑制作用,以及影响肿瘤增殖并诱导细胞凋亡的作用,为脑胶质瘤的基因治疗探讨新的依据。方法体外培养人脑胶质瘤U251细胞株,建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型。将成功造模的36只裸鼠随机分为3组(每组12只)。hTERT shRNA组肿瘤体内原位注射hTERT质粒shRNA(pshRNA)20μg+脂质体60μl+PBS;PBS组肿瘤体内原位注射PBS 150μl;空质粒组肿瘤体内原位注射空质粒20μg+脂质体60μl+PBS。观察肿瘤生长情况。苏木精-伊红染色观察肿瘤组织的病理改变,Western blot检测hTERT蛋白的表达,钙依赖性磷脂结合蛋白V+碘化丙啶双染流式细胞仪测凋亡率。结果成功建立稳定的裸鼠U251细胞皮下移植瘤模型。治疗5周后hTERT shRNA组肿瘤体积较PBS组和空质粒组明显缩小,抑瘤率为58.2%;病理学检查hTERT shRNA组肿瘤生长受到抑制,肿瘤细胞散在稀疏,可见大量肿瘤细胞坏死及凋亡;Western blot示hTERT shRNA组hTERT蛋白表达受抑制;流式细胞仪检测hTERT shRNA组肿瘤细胞凋亡率明显高于PBS组和空质粒组(P〈0.01)。结论hTERT shRNA可在裸鼠移植瘤体内有效发挥作用,抑制人端粒酶逆转录酶蛋白在体内表达,从而能有效抑制裸鼠胶质瘤增殖生长,促进肿瘤细胞凋亡。 相似文献
10.
目的:建立人胶质瘤荷瘤裸鼠模型,探讨HOXA4对胶质瘤U251细胞体内生长的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其机制。方法:采用慢病毒转染,建立胶质瘤U251细胞稳转同源异型盒基因A4(HOXA4) siRNA细胞系(si-HOXA4)和稳转空载体阴性对照U251细胞系(si-NC)。取对数生长期U251、si-NC和si-HOXA4细胞接种于BALB/c裸鼠颈背部皮下,建立荷瘤裸鼠模型,命名为对照组、si-NC组和si-HOXA4组。观察各组裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线;培养21 d处死裸鼠后剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积和质量;qRT-PCR法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、CTNNB1和Gsk3β mRNA相对表达量;免疫组织化学(IHC)法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、β-catenin、Gsk3β、CyclinD1和P53蛋白表达水平。结果:si-HOXA4组裸鼠肿瘤体积和质量小于si-NC组和对照组(P<0.05);si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中HOXA4 mRNA相对表达量和HOXA4蛋白表达水平低于其他2组(P<0.05);与si-NC组和对照组比较,si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中CTNNB1 mRNA相对表达量降低(P<0.05),β-catenin和CyclinD1蛋白表达水平亦降低(P<0.05),但Gsk3β和P53蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:抑制人胶质瘤U251细胞HOXA4表达可在体内通过Wnt/β-catenin信号通路调控CyclinD1和P53蛋白的表达,从而抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长。 相似文献
11.
SNCG shRNA suppressed breast cancer cell xenograft formation 总被引:1,自引:0,他引:1
12.
刘虹 《中国现代医学杂志》2012,22(4):15-19
目的探讨Notch1基因在人肝细胞癌HepG2细胞裸鼠移植瘤中的作用。方法于裸鼠腋下接种0.2×108/mL的HepG2细胞悬液,建立人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:未处理组(接种PBS悬浮的未转染细胞)、空载体转染组(接种空载体转染的细胞)和Notch1转染组(接种靶向Notch1基因的siRNA转染的细胞)。连续2周观察转染荷瘤裸鼠的生长情况,采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)研究肿瘤组织中的细胞凋亡,利用R T-PCR和蛋白质印迹技术检测肿瘤组织中Notch1、bcl-2和bax mR NA和蛋白的表达。结果 Notch1 siRNA转染组中肿瘤的生长明显受到抑制,其肿瘤的重量为(0.685±0.138)g,显著低于未处理组(2.896±0.513)g和空载体转染组(2.776±0.623)g(F=29.672,均P<0.01)。TUNEL结果表明,Notch1 siR NA转染组每500个细胞中凋亡的细胞数为(91±3),明显高于未处理组(10±3)和空载体转染组(11±2)中细胞凋亡的数目(P<0.05);此外,RT-PCR和Western印迹结果表明Notch1 siRNA转染组中裸鼠肿瘤组织Notch1和bcl-2 mRNA和蛋白表达均显著下降,而bax的表达显著上升,3组间比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论降低Notch1基因的表达能抑制人肝细胞癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长,诱导HepG2细胞凋亡,后者可能与bax表达的上升和bcl-2表达的下调相关。 相似文献
13.
膜联蛋白A7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立针对膜联蛋白A7(annexin A7)的shRNA(small hairpin RNA)稳定转染的小鼠肝癌细胞株Hca-F,为后续研究奠定基础.方法:构建3条针对annexin A7的shRNA(shRNA1、2、3),分别与pSilencer连接,构建表达载体并分别转染Hca-F细胞,在mRNA和蛋白质水平比较3条shRNA对annexin A7表达的抑制作用,筛选抑制效果最好的shRNA转染Hca-F.稳转后用含400 μg/ml G418的完全培养基筛选,获得annexin A7表达稳定下调的Hca-F细胞株后传代扩增,应用Western印迹法检测Hca-F细胞annexin A7蛋白的表达,并与空载体转染组及正常对照组进行比较.结果:经DNA测序鉴定,所得到干扰序列与GenBank中序列一致;筛选出其中shRNA1对annexin A7的表达抑制效果最好.pSilencer-shRNA1转染Hca-F细胞株后,annexin A7蛋白的表达远低于空载体转染组和正常对照组(0.318 6 vs 0.798 7,0.824 3,P<0.05),而后二者间无统计学差异.结论:成功建立了annexin A7表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株,为后续研究奠定了基础. 相似文献
14.
目的:研究HCV—NS4B对肝细胞Caspase-3及Survivin表达的影响,探讨HCV—NS4B对肝细胞凋亡的影响及相关机制。方法:通过转染丙型肝炎病毒非结构蛋白4B(HCV—NS4B)至L02肝细胞中,设置三组细胞(空白对照组、空白载体PCXN2组、PCXN2-NS4B组),利用流式细胞仪检测各组Caspase-3的表达情况,免疫组化方法观察三组中Survivin的表达情况。结果:PcxN2-Ns4B转染入LO2细胞并有稳定表达,流式细胞术检测各组Caspase-3的表达情况:空白对照组、转染PCXN2组及PCXN2-NS4B组均有Caspase-3表达,分别为:(23.45±1.57)%、(23.17±1.79)%及(4.34±0.59)%,空白对照组、转染PCXN2两组差异无统计学意义(P〉0.05),而空白对照组、转染PCXN2组与PCXN2-NS4B组间比较差异有统计学意义(P〈0.01)。免疫组化方法检测Survivin的表达情况:空白对照组阳性表达率为25%,PCXN2组表达率为16.67%,PCXN2-NS4B组表达率为75%,空白对照组、转染PCXN2两组差异无统计学意义(P〉0.05),而空白对照组、转染PCXN2组与PCXN2-NS4B组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:①NS4B转染入肝细胞后有稳定表达;②NS4B可抑制Caspase-3表达、促进Survjvin的表达;③HCV~NS4B可能抑制Caspase-3表达、促进Survivin的表达而抑制肝细胞凋亡。 相似文献
15.
[摘要]目的: 探讨ZIC1基因转染联合姜黄素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法: 将慢病毒载体pLV Zic1 PGK Puro稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过蛋白质印迹法检测转染后MDA-MB-231细胞ZIC1蛋白的表达水平。通过MTT法检测抑制率在50%左右的姜黄素浓度,并作为后续实验的标准加药浓度。以ZIC1空载不加姜黄素为对照组,空载加姜黄素、转染不加姜黄素及转染加姜黄素为实验组,以MTT法检测ZIC1、姜黄素及ZIC1联合姜黄素对MDA-MB-231细胞黏附的影响;用划痕实验检测各组细胞的迁移能力;用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果: 乳腺癌细胞转染ZIC1质粒后,ZIC1蛋白呈阳性表达,而转染空载体细胞中ZIC1蛋白表达阴性。细胞增殖抑制率在50%左右的姜黄素浓度为5 mg/L,以此作为标准加药浓度。与对照组比较,转染组、姜黄素组及转染联合姜黄素组乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖受到明显抑制,凋亡率明显增高(均P<0.05)。其中,ZIC1转染联合姜黄素对细胞增殖的抑制及凋亡诱导作用更明显(P<0.05)。结论: ZIC1基因与姜黄素对乳腺癌的抑制存在协同作用。 相似文献
16.
Bcl-2短发夹状RNA增强甲氨喋呤对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:观察Bcl-2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)与甲氨喋呤(methotrexate,MTX)联用后对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:45只裸鼠注射Raji细胞悬液制备裸鼠人淋巴瘤模型,将聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)与Bcl-2 shRNA载体质粒(本实验室制备)的混合物及MTX直接注入肿瘤内,观察Bcl-2 shRNA及联合MTX对肿瘤生长的影响。在用药21 d后无痛处死动物,分离皮下肿瘤,称重,计算抑瘤率;H-E染色观察肿瘤组织的病理形态;以RT-PCR法检测Bcl-2 mRNA在肿瘤内的表达情况。结果:Bcl-2 shRNA与MTX联用组移植瘤的生长最慢,与单用Bcl-2 shRNA和MTX相比差异有统计学意义(P<0.05)。处理结束后剥离瘤块,Bcl-2 shRNA组瘤质量与阴性shRNA组、空质粒组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2 shRNA与MTX联用对裸鼠移植瘤生长的抑制率最高,高于Bcl-2 shRNA和MTX的单用组(P<0.05)。H-E染色可见使用Bcl-2 shRNA组及MTX组出现明显的凋亡和组织坏死。瘤组织的单细胞悬液经RT-PCR检测显示Bcl-2 mRNA表达在Bcl-2 shRNA组均显著下降(P<0.05),而对照组则无明显变化。结论:Bcl-2 shRNA可增强MTX对人淋巴瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用。 相似文献
17.
目的 探讨E74样因子5(ELF5)过表达对结直肠癌细胞的生长和侵袭能力以及裸鼠成瘤的影响.方法 人结直肠癌SW480和HT-29细胞分为5组:LV-GFP组,转染空载体LV-GFP慢病毒;LV-ELF5组,转染重组LV-ELF5慢病毒;shRNA-NC组,转染空载体shRNA-NC慢病毒;shRNA-ELF5组,转染... 相似文献
18.
腺病毒介导RNA干扰抑制血管内皮生长因子的表达治疗人肺腺癌的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:构建针对人血管内皮生长因子(VEGF)的腺病毒载体pAd-Easy/VEGF,应用RNA干扰的方法,观察其在体内和体外对人肺腺癌细胞株A549生长的抑制作用.方法:应用PCR构建RNA干扰pAd-Easy/VEGF腺病毒载体,并利用该线性化质粒用Lipofectamine 2000转染293细胞,制备携带人VEGF的腺病毒转染A549细胞.荧光显微镜和流式细胞仪观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的转染效率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测VEGF mRNA的表达,MTT比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线.同时制备裸鼠A549细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况.结果:pAd-Easy/VEGF重组质粒经测序证实已把预设人VEGF基因RNA干扰的siRNA模板序列插入载体.转染重组腺病毒及空病毒24 h后流式细胞术测得转染效率分别为100%、99.7%.pAd-Easy/VEGF组VEGF表达水平较生理盐水对照组明显降低.pAd-Easy/VEGF组细胞生长明显减缓.pAd-Easy/VEGF治疗组肿瘤体积和质量明显小于对照组(P<0.01).结论: pAd-Easy/VEGF介导的VEGF shRNA能有效抑制A549细胞中VEGF的表达,并在体内抑制肿瘤生长. 相似文献