浙江省天南星族药用植物新鲜块茎的等电聚焦电泳分析

目的为天南星族药用植物的分类和鉴定提供依据.方法以聚丙烯酰胺/凝胶等电聚焦电泳(IEF)方法对天南星族植物7种4变种1变型18个样品蛋白质进行分析.结果不同属植物的电泳谱之间有明显差异.结论利用IEF谱带差异可准确地区分犁头尖属、半夏属和天南星属.     

全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析重组蛋白质药物电荷异质性

目的 分析德谷胰岛素、苏金单抗、阿柏西普和重组人生长激素4种重组蛋白质药物的电荷异质性,为其质量检控提供可靠且快速的分析方法。方法 利用iCE3全柱成像毛细管等电聚焦电泳(imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF)分析仪对待测重组蛋白质药物进行检测,将待测样品与载体两性电解质按一定比例混合,在1 500~3 000 V聚焦条件下进行检测。结果 德谷胰岛素等电聚焦电泳图为单峰,等电点平均值为5.25。苏金单抗共检测到4个等电点,其中等电点8.66为主峰,占总峰面积的67.78%。阿柏西普共检测到12个等电点,有6个等电点的峰面积占总峰面积>10%,RSD均<0.10%。重组人生长激素共有3个等电点,其中等电点5.45为主峰占总峰面积的87.60%。结论 利用iCIEF技术能够有效检测德谷胰岛素、苏金单抗、阿柏西普和重组人生长激素的电荷异质性。该方法对4种蛋白质药物的质量检控具有重要意义。     

原发性肾小球疾病尿蛋白的等电聚焦电泳（附26例临床报告）

本文采用等电聚焦电泳法测定了26例原发性肾小球疾病患者尿蛋白等电点（pl）的改变，并与圆盘电泳进行比较，探讨等电聚焦电泳的意义。病人与方法一、病人根据中华内科杂志编委肾脏病专业组1992年6月在安徽太平制定的原发性肾小球疾病分型、治疗及疗效标准，确诊为原发性肾小球     

一种改良的薄层等电聚焦电泳新方法

目的介绍一种高效新颖的IFE方法。方法采用簿层等电聚焦电泳。结果该方法简便实用,并可节省昂贵试剂的用量。结论此方法可用于药物蛋白质成分的研究。     

运用优化的毛细管等电聚焦电泳方法评价叶酸受体α单抗电荷不均一性

目的:用优化的cIEF方法分析叶酸受体α单抗(McAb)及其参照品的异构体分布,根据等电点差异,将样品带电荷的异构体分离开来,更好地评价叶酸受体α单抗电荷不均一性。方法:毛细管等电聚焦电泳条件:中性涂层的毛细管50μm×30cm(有效长度为20cm);阳极电泳缓冲液200mmo·lL-1磷酸,阴极电泳缓冲液300 mmo·lL-1氢氧化钠;聚焦电压25 kV,迁移电压30 kV,温度20℃检测波长280 nm。结果:用优化后的方法使样品的电荷异构体能够有效分离,电泳图谱与参照品电泳图谱一致。样品主峰峰面积百分比为60.59%,等电点为7.78,次主峰面积百分比为24.38%,等电点为7.59,主峰与次主峰分离度为1.185(USP)。连续5针进样,主峰面积百分比的RSD为7.05%,等电点的RSD为0.31%;次主峰面积的百分比RSD为5.99%,等电点的RSD为0.69%;待测样品在12 h内稳定。结论:采用优化的cIEF方法分析叶酸受体α单抗的电荷不均一性,具有更高的分离度,更好的重现性,为质量控制提供了更准确的手段。     

分析单克隆抗体电荷异质性的成像毛细管等电聚焦电泳技术平台方法的建立

目的  采用成像毛细管等电聚焦电泳技术（imaged capillary isoelectric focusing, iCIEF）建立分析单克隆抗体（单抗）电荷异质性的平台方法,并用不同亚型单抗（IgG1、IgG2、IgG4）确认该平台方法的适用性。方法  优化该平台方法的部分参数,包括两性电解质和阴极稳定剂体积、聚焦时间和尿素浓度。采用3种亚型单抗（IgG1、IgG2、IgG4）对该平台方法的专属性、精密度、线性、准确度和耐用性进行验证。结果   对样品（单抗）的处理条件为：3 mol/L尿素-0.5%甲基纤维素溶液70 μl、两性电解质（pH3~10）4 μl、阴极稳定剂（500 mmol/L 精氨酸）2 μl、等电点 6.14和9.99 Marker 各2 μl,最终完成0.2 mg/ml单抗（样品）的制备。检测参数：预聚焦1 500 V、1 min,聚焦3 000 V、8 min。该平台方法的专属性良好,制剂缓冲液对检测无干扰。重复检测6份平行样品以及不同分析员于不同时间检测12份样品各成分含量的相对标准偏差均符合规定的要求。单抗（样品）终浓度为0.1～0.3 mg/ml时,主要和酸性成分的线性决定系数（R2）≥0.99,碱性成分的线性R2≥0.98。该平台方法检测样品各成分的准确度为92～105%。耐用性实验设计结果表明,两性电解质（pH3~10）体积和毛细管批次对该平台方法有显著影响。结论  建立的iCIEF平台方法分离度较高,精密度、准确度和耐用性良好,为单抗制品的电荷异质性表征和质量控制提供了更有效的工具。