兔角膜内皮细胞损伤与修复过程的形态学观察

本研究以高浓度无环鸟苷行家兔眼前房内注射，造成角膜内皮损伤，应用角膜内皮显微镜及扫描电镜观察其损伤及修复过程的形态学改变。结果表明：注药后３日，内皮细胞损伤最重，出现变性、坏死等改变，７日开始修复，１４日基本修复。     

中期保存的兔角膜内皮细胞的形态学观察

目的　通过对兔角膜内皮细胞形态结构的观察 ,了解中期保存对内皮细胞的影响。方法　前房内注入M K液 ,全眼球保存兔角膜。在保存 1、3、5、7d后 ,分别进行角膜内皮显微镜检查、角膜内皮细胞活性染色及电镜学检查。结果　随着保存时间的延长 ,角膜内皮细胞的活性不断降低。尤其在保存 7d后 ,角膜内皮细胞存活率及六边形细胞百分率明显下降。超微结构显示细胞膜连续性破坏 ,细胞器丢失 ,细胞死亡。结论　角膜中期保存液保存角膜的最佳时间为 1～ 5d。     

真空冷冻干燥和保存兔角膜内皮细胞活性的实验研究

目的 :观察真空冷冻干燥和保存的兔角膜的内皮细胞活性。方法 :真空冷冻干燥和保存兔角膜后 ,检测内皮细胞密度 ,存活率。结果 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜复水后 ,角膜内皮细胞密度为 (2 339± 2 0 5 .73)个 /mm2 ,存活率 78.5 7%。结论 :真空冷冻干燥和保存的兔角膜经过复水后可以保持角膜内皮细胞的活性     

原发性青光眼患角膜内皮细胞的改变

目的 探讨原发性开角型和闭角型青光眼患者的角膜内皮细胞密度及形态的变化。方法 青光眼患者６８人１２５只眼,与患者年龄相匹配的正常人３２人６３只眼。除外角膜病、眼部炎症、外伤及接受过内眼手术的眼。采用非接触型角膜内皮显微镜观察、测量角膜内皮细胞密度和细胞面积等各项指标,用Ｇｏｌｄｍａｎ压平式眼压计测量眼压;分析比较不同类型青光眼各组角膜内皮细胞各项测量指标的差异。结果 青光眼组角膜内皮细胞密度「（２     

兔角膜内皮细胞的新法培养

目的：介绍一种全新的角膜内皮细胞培养方法。方法：在体视显微镜下撕下角膜后弹力层及内皮细胞层并剪切成小块,分置于培养皿中,将盖玻片叠加在组织块上进行培养。结果：角膜内皮细胞很快自组织块迁移生长,结论：本法培养内皮细胞不需用酶,具有简便,可靠,不易污染,细胞量大的优势,值得推广。     

VitE对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的探讨Vitamin E对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法前房内分别注入M-K液,以及含有25、50、100mol／L Vitamin E的M—K液,全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后,分别进行角膜内皮细胞活性染色以及角膜内皮显微镜检查。结果保存后实验组内皮细胞存活率高于对照组。保存后各实验组的六边形细胞百分率、细胞平均密度均较对照组高。结论在角膜中期保存液中加入一定剂量的Vitamin E,能够提高内皮细胞的抗氧化能力,延长角膜的保存时间。     

三种不同方法保存的兔角膜内皮细胞形态学观察

目的 通过观察兔角膜内皮细胞形态,了解不同保存方法和不同保存时期及时间点对角膜内皮细胞活性和密度的影响.方法 采用短期湿房4 ℃保存6 h、D-X角膜中期保存液4 ℃保存3 d、长期深低温保存3个月,取3组各自限定时间的保存角膜片进行检测,分别行角膜内皮细胞茜素红和台盼蓝活性染色、光学显微镜观察及图像分析.结果 长期深低温保存后的兔角膜内皮细胞活性率、细胞密度及六边形细胞率低于前两组,细胞面积高于前2组,均具有统计学差异.结论 正确掌握3种方法,维持角膜内皮细胞生物活性,虽然深低温保存方法对角膜内皮细胞活性和密度有一定影响,但其活性率在80%以上,仍在角膜移植手术可接受的范围内.     

硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的影响

目的 探讨硒对中期保存的兔角膜内皮细胞的保护作用及机制。方法 前房内分别注入M-K液，以及含有3μmol／L、5μmol／L、8μmol／L亚硒酸钠的M-K液后。全眼球保存兔角膜。在保存1、3、5d后。分别行内皮细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力检测、角膜内皮细胞活性染色、角膜内皮显微镜检查。结果 保存后实验组GSH-Px活力明显高于对照组。保存3d及5d后实验组内皮细胞存活率高于对照组。内皮显微镜显示。保存后的六边形细胞百分率各实验组均较对照组高。保存5d后实验组细胞平均密度高于对照组。结论 在角膜中期保存液中加入一定剂量的硒，能够提高内皮细胞的抗氧化能力，延长角膜的保存时间。     

屈光性角膜切除术对兔角膜内皮细胞的影响

目的：探讨ArF准分子激光对角膜内皮细胞的影响。方法：运用ArF准分子激光对15只新西兰白兔（30眼）行冰同深度（100、200、300μm）屈光性角膜切除术（PRK），通过扫描和透射电镜观察急性期角膜内皮细胞的形态和结构变化。结果：消融深度为100μm和200μm的标本中，角膜内皮细胞的形态和结构没有变化。切削深度为300μm组中扫描电镜示术后30min可见角膜内皮细胞明显水肿，面积增大（195μm^2),形态不清，内皮细胞表面微绒毛减少其细胞间的连接也不肾密。术后3d内皮细胞水肿较前减轻（169μm^2)，微绒毛增多。术后7d时内皮细胞恢复至正常状态（128μm^2)。结论：一定深度的准分子激光才会对角膜内皮细胞造成影响，且随着时间的推移这种损伤会得到修复。     

Morphological Characteristics of the Endothelial Ceils of Corneas of Rabbits Preserved by Desiccation

The endothelial cells of the corneas of rabbits preserved by desiccation for vari-ous duration showed no hexagonal form of normal cells but broad bean-like nuclci afterdouble staining with alizarin red and trypan blue.Scanning electron microscopic examina-tion revealed interdigitation at the intercellular junction together with intercellularvacuoles and cellular edema.Transmission electron microscopic examination showedincomplete nuclear membrane,karyopyknosis,vacuoles and remnant organellae in thecytoplasm.Partial penetrating keratoplasties were done in 37 rabbits(37 eyes)with pre-served corneas.The grafts remained transparent for a minimum of 4 days to a maximumof over 1 year,and 7 grafts remained transparent for more than 30 days.Staining ofthe transparent grafts revealed normal hexagonal endothelial cells in mosaic arrange-ment.We assumed that after transplantation of the preserved cornea the endothelial cellsregained their activities owing to the nutrient effect of the aqueous humor.     

蒲黄单体对内皮细胞的保护作用：形态学研究

体外培养血管内皮细胞。模拟体内纤维蛋白予以损伤,并给予中药蒲黄单体以观察其对内皮细胞的保护作用,实验借助扫描电镜观察内皮细胞形态变化。结果表明:(1)内皮细胞与纤维蛋白接触48小时后,细胞明显皱缩,多数细胞脱落或解体;(2)同时加入蒲黄单体组,细胞损伤明显减轻,脱落减少,多数细胞排列规则,形态正常,尤以单体Y_4的保护作用更显著;(3)血管平滑肌细胞在同样纤维蛋白作用条件下,其形态无明显改变。     

同型半胱氨酸对大鼠脑微血管内皮细胞抑制的实验研究

目的通过培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响。方法将培养的BMVEC分成两大组,将其与不同浓度的Hcy(50、200μmol/L和1、2 mmol/L)和(或)无CuSO4(4μmol/L)共同培养18 h,分别利用噻唑蓝、细胞苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察BMVEC细胞的生长及凋亡情况。结果BMVEC在CuSO4的协同下与不同浓度的Hcy培养18 h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过1 mmol/L的Hcy对BMVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加。结论高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长。     

诱导正常血管内皮细胞具备肿瘤血管特性的研究

[目的]探讨用肿瘤细胞培养上清液诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)是否具备肿瘤血管内皮细胞的特性,旨在寻找一种简便的方法,解决肿瘤血管内皮细胞不易获得的难题.[方法]HUVEC用含不同浓度人肝癌细胞株HepG2培养上清的条件培养液培养,3-(4,5-二甲基噻唑)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑盐法(MTS)检测其增殖率,免疫细胞化学法结合图像定量分析测量血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤内皮标记物1和8(TEM1、TEM8)的mRNA表达.[结果]含体积分数10%、20%、40%HepG2培养上清的条件培养液培养,HUVEC增殖率分别为71%、89%、109%.HUVEC用含体积分数50%HepG2培养上清液的条件培养液培养后,VEGFR2平均光密度值明显高于对照组(P＜0.05),且TEM1及TEM8呈阳性表达,而对照组不表达.[结论]HepG2上清液促进HUVEC增殖,增殖后的HUVEC具备肿瘤血管内皮细胞的特性.     

创伤失血性休克家兔血浆中循环内皮细胞与一氧化氮及内皮素相关性研究

目的探讨创伤失血性休克家兔血浆中一氧化氮（NO）、内皮素（ET）浓度及循环内皮细胞（CEC）数变化的相关性。方法16只家兔,随机均分为创伤失血性休克组和对照组。创伤失血性休克组休克模型,经股动脉快速放血使动脉血压降至6．7kPa,维持90min,然后回输血液及等量的复方氯化钠。对照组处理同休克组,但未放血。两组分别在休克前、休克末、复苏末、复苏后45、90、180min同时测定血浆NO、ET和CEC水平变化。结果血浆NO水平在休克后逐渐升高,显著高于休克前和对照组水平（P〈0．05或P〈0．01）,此后一直维持较高水平,180min时达到高峰;休克后ET及CEC水平显著增加,并显著高于对照组及休克前（P〈0．01）,复苏后逐渐下降。结论创伤失血性休克后血浆NO、ET、CEC水平变化在其病理生理过程有一定意义。     

外周血内皮祖细胞体外培养分化研究

目的从人外周血中分离、培养和鉴定内皮祖细胞(EPCs),并观察其在体外增殖分化过程中各种细胞表型的变化。方法采用密度梯度离心方法获得外周血单个核细胞,体外进行诱导、分化和扩增,于培养第7天选择免疫荧光(DiI-acLDL/FITC-UEA-Ⅰ)鉴定EPCs,并且用流式细胞仪和RT-PCR方法观察上述细胞在第0、4、10和21天的CD34、CD31、KDR和eNOS的表达变化。结果外周血单个核细胞在培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样等形态;第7天免疫荧光染色表明,约70%的细胞呈双荧光阳性;流式细胞仪分析显示,CD31和KDR表达在体外培养过程中逐渐升高,至第21天分别达到(72.1±11.2)%和(81.0±12.5)%,而CD34在第10天达到高峰(38.0±13.4)%后,第21天下降为(28.3%±12.2)%;RT-PCR结果表明,第4、10和21天eNOS的表达逐渐增强。结论本试验成功从外周血单个核细胞中分离培养出EPCs,在其体外扩增分化为成熟内皮细胞的过程中,CD31、KDR和eNOS等内皮细胞标志表达逐渐增强,而CD34的表达在内皮祖细胞的成熟分化过程中略有下降。     

小儿骨髓内皮细胞和内皮祖细胞的培养及鉴定

目的探索小儿骨髓内皮细胞和内皮祖细胞的分离培养,为组织工程血管、补片或带瓣管道的制备找新的种子细胞来源.方法采集小儿骨髓,梯度密度离心法分离单核细胞,内皮细胞培养液EGM-2培养,种植于提前包埋了纤维连接蛋白的培养皿进行体外扩增,分别取48 h内贴壁细胞和48 h后贴壁细胞,应用免疫组化和免疫荧光技术鉴定内皮细胞系列标志:CD34、CD31、FLK-1、VE-Cadherin和Ⅷ因子以及祖细胞标志CD133.结果经过梯度密度离心和贴壁法选择的细胞表达内皮细胞特异性抗原CD34、CD31、FLK-1、VE-Cadherin和Ⅷ因子,部分表达CD133.培养至第5代细胞形态基本相似,细胞总数可以达到108以上.结论自小儿骨髓可以分离培养出内皮细胞和内皮祖细胞并能体外扩增,可以作为构建组织工程血管、补片或带瓣管道的种子细胞来源.