人乳头瘤病毒核酸检测方法进展

自1974年德国科学家Harald zur Hausen等提出人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)可能与子宫颈癌发病有关以来,国内外学者对HPV及其与疾病的关系做了大量研究.     

人乳头瘤病毒16型和18型E6蛋白单抗制备及其鉴定

目的开发能够用于检测HPV16、HPV18感染的诊断技术,原核表达HPV16E6、18E6重组蛋白,制备相应的单克隆抗体,为建立HPV的诊断方法提供物质基础。方法BL21-PET28a-16E6、BL21-PET28a-18E6工程菌株由该实验室前期构建,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导HPV16E6、18E6重组蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)、蛋白质免疫印迹法(Western blot)对HPV16E6、18E6重组蛋白进行鉴定,His亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。以纯化的重组蛋白HPV16E6、18E6为免疫原免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备相应单克隆抗体,间接法测抗体,酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。结果表达并纯化获得了HPV16E6、18E6蛋白,杂交瘤技术获得HPV16E6-2-G9、HPV16E6-2-F2、HPV18E6-3-H1杂交瘤细胞株,Western bolt结果显示,其分泌抗体可分别与HPV16E6、18E6特异性结合,用HPV16E6-2-G9、HPV18E6-3-H1制备的腹腔积液效价分别可达106。结论成功制备抗HPV16E6、18E6单克隆抗体,该抗体效价高,特异度好,为建立血清学诊断方法打下了基础。     

核酸扩增和反向点杂交技术检测人乳头瘤病毒的临床应用

目的了解门诊患者人乳头瘤病毒(HPV)感染及其型别(低危型:HPV6、11、42、43、44,高危型:HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4)分布情况,为HPV感染诊断和相关疾病防治提供依据。方法采用核酸扩增和反向点杂交技术检测714例临床怀疑HPV感染样本中23种HPV型别,对检测结果进行统计分析。结果 HPV阳性检出率为24.51%,其中低危型别感染率为8.40%,高危型别感染率为22.97%,单一型别感染率为19.05%,两种型别混合感染率为4.06%,3种或以上型别混合感染率为1.40%。各种HPV型别检出率超过5%者有6种:HPV 16型18.75%、HPV11型14.29%、HPV33型11.16%、HPV58型9.82%、HPV6和18型均为8.48%。其余型别为29.02%。结论本组病例中HPV感染率高达25%,本法设计的23种常见HPV型别中除HPV44、83、MM4外其余型别均被检出,其中高危型别感染率高达22.97%。因此,HPV及其分型检测作为妇女常规筛查项目对HPV感染诊断和宫颈癌等疾病的防治是十分必要的。     

人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒评价

目的评价人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测剂盒的性能。方法用HPV基因分型参考品作为标准品,按照抽验方案的要求对抽样的HPV核酸检测试剂盒[聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法]的准确度、特异度和检测限进行评价。结果准确度和检测限的结果均符合企业产品注册标准的要求,而特异度结果中存在着HPV型别交叉反应现象。结论医疗器械监督抽验工作应将国产和进口医疗器械产品的抽验工作均纳入体系,持续监测产品的性能。     

来宾地区妇女高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测结果分析

目的 分析来宾地区妇女高危型人乳头瘤病毒(HPV16、18)感染率及年龄特征,为预防HPV感染和宫颈癌防治提供理论依据.方法 采用高危型HPV(8个型)核酸定量检测试剂盒(聚合酶链反应荧光法),对来自本院妇科门诊及部分机关单位职工体检的1 026例妇女泌尿、生殖道分泌物棉拭子进行HPV检测.结果 1 026例妇女中HPV感染例数159例,感染率为15.5%,31~40岁年龄段HPV感染率最高,占7.21%,各年龄段HPV感染检出率差异无统计学意义(P>0.05).结论 来宾地区妇女高危型HPV感染率为15.5%,31~40岁年龄段HPV感染率最高.     

RNA病毒扩增检测的质控品和标准品研究进展

RNA病毒如丙型肝炎病毒(HCV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)等的核酸检测对于感染的早期诊断和抗病毒治疗疗效的动态观察具有重要价值。自1983年发明聚合酶链反应(PCR)技术以来，出现了基因扩增的概念。目前多采用核酸扩增技术(NAT)检测病毒RNA，最常用的是逆转录(RT)-PCR方法。核酸扩增检测想得到可靠的结果，必须使用质控品进行严格的质量控制，而对病毒进行定量测定，通常还须有病毒RNA标准品。目前RNA病毒扩增检测的质控品和标准品分为两大类，一是裸露的RNA片段，二是内含特定RNA的病毒样颗粒或称之为带盔甲的RNA(armored RNA)。     

妇女高危型人乳头瘤病毒核酸定量检测结果分析

目的探讨阳江地区妇女高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染情况和年龄分布。方法选取2012年5月至2013年4月在该院妇科就诊的1744例妇女宫颈棉拭子标本,采用实时荧光定量PCR技术检测高危型HPVDNA。将筛查人群分成10个年龄组,分别计算各年龄组高危型HPV阳性率。结果1744例妇女中,共检测出高危型HPV阳性者200例,总阳性率为11．5％（200／1744）,高危型HPV阳性者在大于40~45岁和大于35-40岁2个年龄组的分布率较高,分别是25．O％（50／200）和22．5％（45／200）。结论对妇女进行HPV检查,可为宫颈癌的早期诊断、预防及治疗效果提供实验室诊断依据。     

沙眼衣原体室间质量控制质控品的制备及其应用

目的 制备可模拟真实临床样本的沙眼衣原体室间质量评价（EQA）质控品,以客观评价上海地区临床实验室沙眼衣原体检测能力。方法 选用HELA-299细胞株培养沙眼衣原体血清型E,制备成沙眼衣原体EQA质控品,通过均匀性和稳定性验证后,用于上海市临床检验中心EQA计划。结果 制备的沙眼衣原体EQA质控品均匀性和稳定性均通过验证。对上海市54家临床实验室进行EQA,有51家回报结果,所有回报结果的实验室EQA成绩均为100分。结论 成功制备了可模拟临床样本的沙眼衣原体EQA质控品。上海地区临床实验室沙眼衣原体检测质量良好。     

人乳头瘤病毒16、18基因变异的生物学与临床意义

人乳头瘤病毒16、18（HPV16、18）是最重要的高危型的HPV病毒，是与宫颈癌、阴茎癌等有密切联系的病毒，随着分子生物学技术的发展，发现越来越多的HPV突变与肿瘤的类型、肿瘤的演谱有密切的关系。随着对HPV病毒的认识不断加深，HPV的检测及其疫苗的制备已经部分实现，因此有必要对HPV的突变进行系统的进一步研究。     

16型人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒(human papillomavirus HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的DNA病毒,目前已发现100多型。已有的研究表明,90％宫颈癌与HPV感染相关,其中50％的宫颈癌与HPV16感染有关,在成人中HPV16感染率达20％。因此,宫颈癌疫苗的研究主要集中在HPV16型。宫颈癌在全球妇女癌症死因中占第二位,在某些发展中国家甚至居首位。我国每年死于     

Z-score分数和泊松分布在血站血液核酸筛查室内质控的应用

目的制作1种采用Z分数(Z-score)和泊松(Poisson)分布方法对数值自定义的核酸定性室内质控图以反映血站血液(核酸)筛查实验室在控、假阳性、假阴性质控点。方法采集2018年12月份本站核酸实验室检测数据作出Excel表,自定义室内质控品检测阴性和阳性结果,以时间为横坐标,自定义值为纵坐标,绘制自定义室内质控核酸室内质控图;以时间为横坐标,以±3为告警限,±4为失控限,采用Z分数法建立核酸实验室内部质控品(IQ)、外部质控品(EQ)及标本内对照(IC)的核酸检测系统产生的扩增循环数(Ct值)Z-score质控图;采用Poisson分布概率法计算每日核酸检测阳性概率,在Excel表中以时间为横坐标,以概率为纵坐标,以P=0.05为失控限,绘制Poisson分布阳性概率质控图。验证将这3种统计方法质控图在血液筛查实验室的实用性、可行性。结果自定义核酸定性室内质控图简单明了可适用于不产生数值的室内质控;Z-score质控图能够同时呈现3个联检项目和内标的Z值,能够避免数据非正态分布引起的假失控;Poisson分布阳性概率图能够反应出实验室污染或检测过程有效性。结论 Z-score和Poisson统计方法建立的室内质控图满足了血站血液筛查实验室NAT定性检测室内质控的要求,具有预警失控和试验有效性的功能,能有效提升献血者血液核酸检测质量控制和实验室管理能力。     

输血相容性检测室内质控品的临床应用评价

目的评价解放军总医院输血科自主研发的输血相容性检测室内质控品临床应用效果。方法回顾性分析2009年10月～2011年10月全国31家输血相容性检测实验室应用该室内质控品对ABO及RhD血型鉴定试验、不规则抗体筛查试验和交叉配血试验开展室内质量控制工作情况,分析该室内质控品检测结果的重复性和稳定性;根据各实验室应用的试验方法、试剂、耗材及试验结果,分析室内质控品在各种检测条件下的实际应用效果。结果 31家输血相容性检测实验室共完成室内质控试验14 271次,包括ABO及RhD血型鉴定试验4 552次、不规则抗体筛查试验4 539次及交叉配血试验5 180次,失控7次。ABO及RhD血型鉴定试验A、B、D抗原检测结果变异系数(CV)为0;ABO血型鉴定反定型试验、不规则抗体筛查试验及交叉配血试验抗原、抗体反应阴性结果的CV为0,抗原、抗体反应阳性结果均为CV<10.0%;质控品不同保存时间试验结果比较差异甚小(P>0.05)。结论研发的自制室内质控品在重复性、稳定性方面可以满足输血相容性检测室内质量控制的基本要求。     

自制他克莫司室内质控品的制备及临床应用研究

目的完善他克莫司（FK506）室内质控品水平,弥补商用质控品监测盲区。方法观察1年内FK506检测结果,评估自制低值质控品用于临床的可行性;运用临床患者标本自制低值室内质控品（ZCON—L）和自制中值室内质控品（ZCON．M）,检测其日内、日间相对标准差（RSD％）,并与低值商用质控品（Leve11）、中值商用质控品（Leve12）比较,并绘制室内质控图;将ZCON—M和Leve12做统计学分析,评估自制质控品与商用质控品是否有差异;将ZCON—L、ZCON—M分别放于4、25和37℃环境内连续检测7d,观察不同温度环境对其影响;经无菌分装后的自制质控品置于-30℃保存,每周取1支复融后随日常工作检测,检测完毕后置4℃保存,经10个月连续检测,观察其稳定性。结果1年内9975人次的FK506检测中,约有28．4％处于商用质控品监测盲区;ZCON—L、ZCON—M的日内RSD分别为4．5％、5．3％,13问RSD分别为7．06％、5．37％,符合ARCHITECTi1000全自动免疫分析仪的性能指标及《中国药典》生物标本分析方法RSD〈15％的要求;ZCON—L、ZCON—M与Leve11、Leve12的相关性较好（r2=0．8352、0．8185）,并且在质控图中走势-致;ZCON—M与Leve12经t检验,二者之间差异无统计学意义（P〉0．05）;4、25和37℃环境温度在7d内对自制质控品影响较小;经连续10个月观察,ZCON—L、ZCON—M总RSD分别为7．56％、4．97％。结论自制FK506室内质控品稳定性好,与商用质控品无差异,与商用质控品联合应用于临床,可弥补商用质控的监测盲区,完善室内质量控制水平。     

江苏省苯丙氨酸室内质量控制数据实验室间比对结果与分析

目的对江苏省苯丙氨酸室内质量控制(质控)数据进行实验室间比对与分析。方法比对分析2015年度(2015年3月至2016年2月)使用相同质控品的14家江苏省新生儿疾病筛查分中心实验室检测血苯丙氨酸(Phe)的室内质控数据,计算各实验室和全省的苯丙氨酸均值(x珋)、标准差(s)、标准差指数(SDI)、变异系数(CV)、变异系数指数(CVI)、总误差(TE)、允许总误差(TEa)、临界系统误差(△SEc)等指标并做出评价。结果累计测定Phe低值质控11 477个,全省SDI、CVI、CV、TE、△SEc的合格率分别为100%、57.14%、42.86%、78.57%、14.29%;测定Phe高值质控11 502个,全省SDI、CVI、CV、TE、△SEc的合格率分别为100%、35.71%、92.86%、100%、21.43%。结论大部分实验室的质控比对结果均满足质量规范要求,但CV和CVI的统计结果表明部分实验室苯丙氨酸不精密度较大。     

不同群体无偿献血者核酸检测的结果分析及应用

目的通过对献血者血液标本核酸检测(NAT)的结果分析,评价不同献血者的血液安全性及核酸检测的必要性,同时针对献血者性别、年龄和职业差异的特点,完善无偿献血宣传和人群筛选策略,保证血液安全。方法对郑州地区2012年9月至2014年8月259 329例无偿献血者NAT结果进行分析,并对阳性献血者依据不同性别、年龄及职业进行回顾性统计。结果在259 329例经酶联免疫吸附试验(ELISA)阴性的献血者中检出144例核酸阳性标本,核酸阳性率为0.056%。不同性别、年龄和职业的差异均有统计学意义(P0.05)。其中,男性献血者核酸阳性率(0.075%)比女性献血者(0.023%)明显偏高(P0.01);核酸阳性率以36~45岁最高(0.088%),18~25岁最低(0.022%);不同职业人群中以农民的核酸阳性率(0.095%)较高,公务员(0)、医务工作者(0)、学生的核酸阳性率(0.018%)较低。结论实施NAT能更好地保证血液的安全性;学生、公务员及女性血液NAT阳性率较低,应为血站重点招募人群。     

基于日常检测结果的核酸扩增检测假阳性统计室内质量控制方法

目的建立一种利用核酸扩增检验实验室日常检测数据进行定性测定假阳性监测的实验室室内质量控制方法。方法以实验室日常不少于20次检测的阳性率比值为基础,计算阳性率比值的均值(x)和标准差(s),绘制质控图,以1+2S为“告警”规则,1+3S和3+2S为失控规则。结果对实验室212次HBVDNA聚合酶链反应(PCR)实测数据分析,x和s分别为0.527和0.078,与前20次测定的x(0.532)和s(0.09)相近。212次测定中,出现5次超出x±2s,按照所定的质控规则有两次失控。符合统计上的正态分布。结论为核酸扩增常规检测提供了一种具有可操作性的假阳性统计室内质控方法。     

不同核酸提取方法和新型冠状病毒核酸检测试剂室间质评结果分析

目的 分析2种不同核酸提取方法和2种新型冠状病毒核酸检测试剂检测室间质评样本的结果,进行性能比较.方法收集2020年江苏省临床检验中心和国家卫生健康委临床检验中心发放的新型冠状病毒核酸检测室间质量评价样本共15份,用2种常用核酸提取方法(磁珠法、核酸释放剂法)、2个厂家实时荧光定量PCR核酸扩增检测试剂检测,进行质评物...     

人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒用于宫颈癌及癌前病变筛查的临床价值

目的分析人乳头状瘤病毒(HPV)杂交捕获-化学发光法核酸检测试剂盒(DH3)用于宫颈癌及癌前病变筛查的临床价值。方法收集480例妇科门诊妇女宫颈脱落细胞样本,分别采用DH3、TCT和HPV-PCR检测,对TCT≥ASC-US者行阴道镜下病理检测,以病理学结果为金标准,分析DH3诊断价值。结果病理学结果显示,正常者370例(77.08%),良性病变者(≤CINⅠ)59例(12.29%),高危者(≥CINⅡ)51例(10.63%);TCT、HPV-PCR和DH3诊断阳性率分别为26.04%、32.08%和27.08%;DH3与TCT检测一致率为94.79%(P0.01),与HPV-PCR检测一致率为93.13%(P0.01);DH3灵敏度98.18%,特异度87.57%,阳性预测值70.13%,阴性预测值99.39%,准确率为90%,检出高危型(≥CINⅡ)的ROC曲线面积Z=0.887(95%CI为0.785~0.918,P0.01)。结论 DH3试剂盒与TCT、HPV-PCR在检出HPV宫颈癌及癌前病变具有高度一致性,灵敏度、特异度和准确率高,操作便捷,临床筛查意义显著。     

汕头市城镇妇女人乳头状瘤病毒核酸分型流行病学调查

目的 了解汕头市城镇健康妇女人乳头状瘤病毒(HPV)感染情况和核酸分型流行病学调查.方法 采用导流杂交(FH)低密度基因芯片技术,对3 399例健康妇女宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测,并对高危型HPV感染阳性人群进行液基薄层细胞学(TCT)检查.结果 3399例妇女HPV阳性315例,总阳性检出率为9.27%(315/3 399),其中高危型HPV感染率为8.15%(277/3 399)、低危型HPV感染率为2.62%(89/3 399),本地区健康妇女HPV亚型感染最常见依次分别为HPV52、HPV58、HPV16,该人群未检出HPV43.在315例HPV阳性中,以单一HPV亚型感染为主,占86.3%(272/315),并以高危型HPV为主,排在前3位依次为HPV52(21.6%,68/315),HPV16(11.1%,35/315),HPV58(11.1%,35/315).各年龄段HPV感染率随着年龄的增长呈逐渐上升趋势;感染高危型HPV人群宫颈上皮内瘤变发生率为5.4%.结论 健康妇女中有相当比例的女性感染HPV,并以单一高危型为主,HPV亚型感染具有独特的地方特征;结合TCT检查,可早期发现宫颈病变及癌变发生、降低宫颈癌的发生率.