MicroRNA-145通过ADAM28抑制人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化功能

目的:探讨微小RNA(miR-145)对人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:将A-498肾癌细胞株分别转染miR-145模拟物(M145)和模拟物阴性对照(MNC),分别作为M145组和MNC组,并设立空白对照(MC)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-145水平。Transwell实验检测3组细胞侵袭能力的变化。Western blot法检测3组细胞波型蛋白(vimentin)、E-cadherin和ADAM28表达水平。应用生物信息学方法预测miR-145的靶基因。采用Western blot法检测ADAM28过表达对miR-145抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶报告基因实验验证miR-145与ADAM28的关系。结果:与MC组相比,M145组miR-145的表达水平显著上调(P0.05)。M145组侵袭细胞数量显著低于MC组(P0.05)。M145组细胞vimentin蛋白表达量显著降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P0.05),ADAM28蛋白表达量显著降低(P0.05)。ADAM28过表达M145组肾癌细胞中vimentin蛋白表达量显著升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果显示ADAM28为miR-145的下游靶基因。结论:miR-145可能通过降低下游靶基因ADAM28水平影响EMT相关蛋白表达,从而抑制人肾癌细胞A-498的EMT过程。     

PTBP1通过EMT途径促进肝癌细胞的迁移与侵袭

目的:基于上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)途径研究多聚嘧啶区结合蛋白1(polypyrimidine tract-binding protein 1, PTBP1)促进肝癌细胞迁移与侵袭的分子机制。方法:通过qPCR与Western blot实验筛选不同细胞中差异表达的剪接蛋白,生物信息学分析肝癌与正常肝组织中PTBP1的表达差异。划痕及侵袭实验研究过表达或敲减PTBP1对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响,Western blot检测过表达或敲减PTBP1对EMT通路蛋白的影响。结果:高转移肝癌细胞系HCCLM3中PTBP1的表达显著升高(P0.05),且肝癌组织中PTBP1的表达水平明显高于正常组织(P0.05)。过表达PTBP1可显著提高HCCLM3细胞的迁移与侵袭能力(P0.05),并增加间充质标志物N-cadherin和vimentin等的表达(P0.05),促进肝癌细胞的EMT进程。结论:PTBP1可通过促进肝癌细胞的EMT途径而促进肝癌细胞的迁移与侵袭。     

MicroRNA-9通过NRP1抑制胃癌SGC-7901细胞上皮-间充质转化功能

目的:研究微小RNA-9(microRNA-9,miR-9)对胃癌SGC-7901细胞上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:SGC-7901胃癌细胞株分别转染miR-9 mimics和阴性对照序列(negative control mimic,NCM),作为miR-9组和NCM组,并设立未转染对照(control)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-9的含量,Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力,Western blot法检测3组细胞的N-cadherin、E-cadherin、α-catenin和神经纤毛蛋白1(NRP1)表达水平。采用Western blot法检测NRP1过表达对miR-9抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶实验检测miR-9与NRP1的关系。结果:miR-9组的miR-9表达水平明显上调,为control组的538倍(P0.05)。miR-9组的迁移细胞数量明显低于control组(P0.05)。miR-9组的侵袭细胞数量明显低于control组(P0.05)。miR-9组细胞的N-cadherin和NRP1蛋白表达量明显降低,E-cadherin及α-catenin蛋白表达量明显升高。而NRP1及miR-9均过表达组胃癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,E-cadherin及α-catenin蛋白表达量明显降低。双萤光素酶检验结果显示NRP1为miR-9的下游靶基因(P0.05)。结论:miR-9可能通过降低下游靶基因NRP1水平影响EMT相关蛋白表达,抑制胃癌SGC-7901细胞的EMT功能。     

MiR-215-5p经AKT/GSK-3β/Snail信号通路抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭

目的探究miR-215-5p对乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响以及机制。方法乳头状甲状腺癌TPC1细胞体外转染miR-215-5p mimic后利用MTT实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;预测并验证miR-215-5p的靶基因,并且在TPC1细胞过表达和低表达miR-215-5p的靶基因后,检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;利用Western blot检测转染后靶基因的表达水平,AKT和GSK-3β的磷酸化水平,以及Snail的表达水平。结果 miR-215-5p mimic能够显著抑制TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力(P0.05);通过双荧光素酶报告实验验证了miR-215-5p的靶基因为ARFGEF1;低表达ARFGEF1的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力被显著抑制(P0.05);miR-215-5p mimic可显著抑制过表达ARFGEF1引起的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的增加(P0.05);Western blot结果显示miR-215-5p mimic可引起ARFGEF1和Snail表达水平显著降低(P0.05),AKT和GSK-3β的磷酸化水平降低(P0.05),但是miR-215-5p inhibitor和过表达ARFGEF1均可恢复ARFGEF1和Snail表达水平以及AKT和GSK-3β的磷酸化水平。结论 MiR-215-5p通过AKT/GSK-3β/Snail信号通路以ARFGEF1为目标发出信号抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭。     

微小RNA-138-5p抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的机制研究

目的:探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的相关机制。方法:以肺癌细胞A549和H460作为研究对象,分别转染miR-NC(对照组)或miR-138-5p(实验组);生物信息学技术预测miR-138-5p的靶基因;RT-qPCR检测转染后细胞miR-138-5p、叉头框蛋白C1(FOXC1)mRNA和波形蛋白(vimentin)mRNA的相对表达量;Western blot法检测FOXC1、vimentin、E-cadherin、N-cadherin和β-catenin蛋白表达变化;MTS法和集落形成实验分别检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:miR-138-5p过表达显著降低FOXC1和vimentin的mRNA及蛋白的表达(P0.05),E-cadherin和β-catenin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,显著抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P0.05)。结论:miR-138-5p可以通过靶向干扰FOXC1和vimentin的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能是肺癌基因治疗的潜在靶点。     

miR-138靶向调控FAK抑制三阴型乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的机制

目的 探讨miR-138对三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)MDA-MB-231细胞侵袭、转移的影响及分子机制。方法 将MDA-MB-231细胞转染miR-138 mimics及其阴性对照,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力改变。生物信息学预测miR-138的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告实验和Western blot法分析miR-138与FAK的靶向调控关系。回复实验使用Transwell及Western blot实验验证miR-138通过FAK抑制MDA-MB-231细胞侵袭、转移。结果 Transwell实验结果表明：过表达miR-138后,MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05)。生物信息学预测FAK为miR-138的潜在靶基因,双荧光素酶报告实验结果表明：FAK 3′UTR区域存在miR-138的互补结合位点。Western blot结果发现过表达miR-138后FAK蛋白表达降低。回复实验Transwell及Western blot结果表明：上调FAK可以部分恢复miR-138过表...     

miR-509靶向Rac1调节人肝癌LM3细胞侵袭和迁移及裸鼠模型的存活

目的:探究微小RNA-509(miR-509)对人肝癌细胞生长、侵袭、迁移及荷瘤裸鼠存活的作用及其作用机制。方法:将miR-509模拟物(miR-509 mimic)和pcDNA Ras相关的C3肉毒毒素底物1(pcDNA Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, pcRac1)转染人肝癌LM3细胞,Western blot检测Rac1的表达;萤光素酶报告基因实验证明miR-509和Rac1的靶向关系;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;采用皮下注射LM3细胞的方法建立肝癌裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠存活率,Western blot检测肿瘤组织Rac1的表达。结果:miR-509 mimic能明显抑制LM3细胞Rac1的表达(P0.05),pcRac1能明显减弱miR-509 mimic对Rac1表达的抑制作用(P0.05);miR-509 mimic还能显著减弱Rac1野生质粒的萤光素酶活性(P0.05);同时,miR-509 mimic可减少侵袭细胞数,抑制肝癌细胞迁移(P0.05)。此外,miR-509过表达还能升高肝癌移植瘤模型小鼠存活率(P0.05),降低肿瘤组织Rac1的蛋白表达水平(P0.01)。结论:miR-509能通过靶向抑制Rac1的表达而抑制肝癌细胞侵袭和迁移,并促进肝癌模型小鼠存活。     

miR-195-5p表达上调抑制肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨miR-195-5p对肺癌细胞系A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测肺癌组织及肺癌细胞系中miR-195-5p的表达;通过脂质体介导将miR-195-5p模拟物作用于A549细胞,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭; Western blot检测细胞内上皮间质转化标志物及ZEB1的表达。结果相对于癌旁组织及人正常肺上皮细胞,miR-195-5p在肺癌组织及肺癌细胞系中低表达(P0. 001);过表达miR-195-5p可显著抑制A549细胞的迁移和侵袭(P0. 001),伴随E-cadherin蛋白表达的上调,N-cadherin和vimentin蛋白表达的下调(P0. 01);过表达miR-195-5p可抑制A549细胞ZEB1的表达(P0. 001)。结论 miR-195-5p可能通过下调ZEB1的表达,抑制肺癌细胞迁移和侵袭。     

基底样乳腺癌中microRNA-205靶向调控KLF12及对细胞侵袭能力的影响

目的探讨基底样乳腺癌(basal-like breast carcinoma,BLBC)特异性miRNAs和靶基因及生物学功能。方法提取细胞总RNA和蛋白,荧光素酶实验验证靶基因;采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化En Vision法分析miRNA和靶基因表达;CCK8和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。结果荧光素酶实验示miR-205靶向调控KLF12(P=0.001 6)。qRT-PCR检测结果示MAD-MB-468细胞中miR-205表达下调(P=0.007),KLF12表达升高(P=0.039);转染miR-205 mimics过表达miR-205,miR-205表达显著升高(P=0.000),KLF12表达减少(P=0.038)。Western blot检测结果示miR-205过表达,MDAMB-468细胞KLF12表达显著升高(P=0.007 9)。CCK8实验示miR-205未参与细胞增殖。Transwell实验示过表达miR-205显著抑制细胞侵袭能力(P=0.001)。结论 miR-205是BLBC特异性的miRNA,通过负性靶向调控原癌基因KLF12和抑制侵袭具有抑癌基因的功能。miR-205和KLF12为BLBC的诊断和治疗提供潜在的分子标志物和新思路。     

miR-137通过TWIST1调控乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭、迁移及凋亡

目的:探讨微小RNA-137(miR-137)对乳腺癌细胞侵袭、迁移及凋亡的影响和分子机制。方法:在乳腺癌MDA-MB-231细胞中转染miR-137模拟物(miR-137 mimics),RT-qPCR检测miR-137表达量,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测侵袭和迁移,Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)、cleaved caspase-3(C-caspase-3)和Bax的蛋白水平。生物信息学软件预测TWIST1可能是miR-137的靶基因后用萤光素酶报告基因鉴定。Western blot检测miR-137 mimics对TWIST1蛋白表达影响。在乳腺癌细胞中共转染TWIST1过表达载体和miR-137 mimics,测定细胞凋亡、侵袭、迁移及MMP-9、C-caspase-3、Bax蛋白水平的变化。结果:转染miR-137 mimics后的乳腺癌细胞中miR-137水平升高,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,C-caspase-3和Bax的蛋白水平增高,MMP-9蛋白表达减少(P0.05)。萤光素酶报告载体鉴定显示miR-137靶向调控TWIST1,并且miR-137 mimics能够抑制乳腺癌细胞中TWIST1表达。与共转染阴性对照载体和miR-137 mimics的细胞比较,TWIST1过表达载体和miR-137 mimics共转染后的乳腺癌细胞TWIST1和MMP-9蛋白表达水平升高,C-caspase-3和Bax蛋白水平减少,细胞凋亡率降低,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05)。结论:miR-137靶向TWIST1抑制乳腺癌细胞侵袭迁移并诱导细胞凋亡。     

微小RNA-497抑制甲状腺乳头状癌细胞活力、侵袭和迁移

目的:研究微小RNA-497(miR-497)抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞活力、侵袭和迁移的作用机制。方法:采用Target Scan 6. 0软件预测miR-497的靶基因,通过萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot进行靶基因验证,再通过RT-qPCR检测PTC组织中miR-497及其靶基因的表达,并通过基因转染研究miR-497及其靶基因对PTC细胞活力、侵袭和迁移的影响。结果:Target Scan 6. 0软件预测、萤光素酶报告基因检测法、RTq PCR和Western blot均证明AKT3是miR-497的直接靶基因。此外,PTC组织中的AKT3表达水平较正常组织高(P 0. 05),且与miR-497表达呈负相关(r=-0. 573 7,P 0. 01)。下调AKT3可以抑制PTC细胞的活力、迁移和侵袭,与miR-497过表达在PTC细胞中具有相似的作用。结论:miR-497通过直接靶向调节AKT3抑制甲状腺乳头状癌细胞的活力、侵袭和迁移。     

lncRNA-PCAT6通过调控miR-185/SIX1轴对肺癌A549细胞上皮间质转化及化疗敏感性的影响北大核心CSCD

目的:探讨长链非编码RNA-PCAT6(lncRNA-PCAT6)对肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)和化疗敏感性的影响,以及对微小RNA-185(miR-185)/SIX1轴的调控作用。方法:取A549细胞,分为空白组、lncRNA-PCAT6低表达腺病毒(PCAT6-Si)组、不含lncRNA-PCAT6-Si的空病毒载体(eGFP-Si-1)组、miR-185低表达腺病毒(miR-185-Si)组、不含miR-185-Si的空病毒载体(eGFP-Si-2)组、PCAT6-Si与miR-185-Si共转染(PCAT6-Si+miR-185-Si)组。RT-qPCR法检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达;Transwell法测定细胞侵袭、迁移能力;免疫荧光检测EMT标志物N-cadherin阳性表达;Western blot法测定SIX1、EMT标志蛋白E-cadherin、Vimentin及N-cadherin表达。取A549细胞系及其顺铂耐药细胞株A549/DDP,RT-qPCR及Western blot法检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达。取A549/DDP转染PCAT6-Si与miR-185-Si,并分为A549组、A549/DDP组、PCAT6-Si组、miR-185-Si组、PCAT6-Si+miR-185-Si、eGFP-Si-1组、eGFP-Si-2组;RT-qPCR检测lncRNA-PCAT6、miR-185表达;CCK-8法检测各组细胞半数抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI);Western blot法检测SIX1、耐药相关蛋白P-gp表达;裸鼠荷瘤试验验证PCAT6对A549/DDP细胞化疗敏感性的作用。双荧光素酶试验验证PCAT6与miR-185之间的靶向关系。结果:与A549细胞相比,A549/DDP细胞IC50及RI、lncRNA-PCAT6、SIX1及P-gp表达升高(P<0.05),miR-185表达降低(P<0.05)。敲低A549细胞中lncRNA-PCAT6表达后,miR-185表达升高,SIX1蛋白表达降低,细胞侵袭、迁移能力及EMT进程降低,IC50及RI降低、肿瘤体积减小,且各指标变化差异显著(P<0.05)。敲低miR-185可逆转lncRNA-PCAT6的上述作用。双荧光素酶报告试验证实lncRNAPCAT6与miR-185之间有靶向负调控作用。结论:肺癌A549细胞中lncRNA-PCAT6低表达可靶向上调miR-185,下调SIX1,抑制EMT进程,增强对DDP化疗的敏感性。     

沉默S100A12对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 评价沉默S100A12基因对甲状腺乳头状癌细胞K1的增殖、侵袭与迁移能力的影响.方法 用shRNA质粒转染K1细胞沉默S100A12基因,将细胞分为shRNA-NC组和shS100A12组,通过MTT实验评价细胞增殖生长趋势,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数量,Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,细胞划痕实验评价细胞的迁移能力,Western blot实验检测K1细胞E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达情况.结果 与shRNA-NC组比较,shS100A12组K1细胞生长趋势明显受到抑制(P＜0.01),细胞克隆形成数量明显下降(P＜0.01),通过通透膜的细胞数量明显减少(P＜0.05),细胞的迁移速率明显减慢(P＜0.01).与shRNA-NC组比较,shS100A12组细胞E-cadherin的表达增高、N-cadherin的表达下降.结论 沉默甲状腺乳头状癌K1细胞中S100A12可以降低细胞增殖、侵袭与迁移能力,S100A12可能通过诱导EMT增强甲状腺乳头状癌细胞的侵袭与迁移能力.     

miR-186介导YAP1调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-186介导的YAP1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot法检测miR-186、YAP1蛋白在正常乳腺细胞MDA-kb2及人乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达；利用Lipofectamine 2000试剂将miR-186 mimic转染至乳腺癌细胞，荧光显微镜下观察转染效率；采用CCK-8法检测乳腺癌细胞的增殖能力；细胞划痕实验检测细胞的迁移能力；Transwell细胞侵袭实验检测细胞的侵袭能力；Western blot法检测YAP1蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-186与YAP1的靶向关系。结果 与正常乳腺细胞相比，乳腺癌细胞中miR-186表达量显著减少(P<0.01),YAP1蛋白表达量显著增加(P<0.01)。与对照组相比，miR-186过表达可明显降低乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),同时降低了YAP1蛋白表达(P<0.01)。miR-186和野生型YAP1载体共转染细胞的荧光素酶活性显著降低(P<0.01)。结论 miR-186在乳腺癌细胞中表达下...     

miR-107 靶向NID2 通过Notch 信号通路调控肺癌细胞的增殖侵袭

目的:miR-107 靶向NID2 调控Notch 信号通路影响肺癌的侵袭和增殖。方法:免疫组化检测NID2 在肺癌组织和正常肺组织中的表达;PCR 检测miR-107 在肺癌组织中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107 对NID2 转录活性的影响;肿瘤细胞成球实验检测miR-107 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的迁移能力的影响;Western blot 检测过表达miR-107 后Notch 信号通路的蛋白表达水平。结果:和正常肺组织比较,NID2 在肺癌组织中表达较高;miR-107 在肺癌组织中表达明显降低;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-107 可以直接调控NID2 的转录活性;过表达miR-107 后,肺癌细胞A549 的增殖、侵袭和迁移能力明显降低;过表达miR-107 后,Notch1、hes-1、presenilin1 蛋白表达下调。结论:miR-107靶向NID2 的表达,通过Notch 通路调控肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-124a靶向TGFBR1基因对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124a对乳腺癌MDA-MB231细胞株增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测24例患者乳腺癌组织及邻近的癌旁正常组织中miR-124a的表达,用Western bolt法检测TGFBR1的表达。利用脂质体将pre-miR-124a或anti-miR-124a瞬时转染至乳腺癌MDA-MB231细胞,real-time PCR分析miR-124a与其调控的靶基因TGFBR1的表达调控关系。Western blot法检测转染后细胞中TGFBR1的表达水平,同时采用CCK-8和克隆形成实验检测转染后MDA-MB231细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124a在乳腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织(P0.01),TGFBR1在乳腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P0.01)。过表达和抑制表达miR-124a能反向调控其靶基因TGFBR1及蛋白的表达;CCK-8和克隆形成实验结果显示,过表达miR-124a能明显抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭(P0.01)。结论 miR-124a可以通过下调TGFBR1的表达抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭。     

miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-708-5p通过靶向URGCP抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、转移的研究

目的 探讨miR-708-5p对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与上调基因-4(upregulated gene-4/upregulator of cell proliferation,URG4/URGCP)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为Control组(未进行任何处理),NC组(转染随机序列RNA Oligo),miR-708-5p组(转染miR-708-5p mimics).MTT检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室实验检测侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,Western blot检测URGCP表达水平;实时荧光定量PCR检测miR-708-5p、URGCP基因mRNA表达水平;荧光素酶实验验证miR-708-5p与URGCP的靶向关系.结果 与HLF-1细胞株相比,肺癌细胞株A549细胞miR-708-5p表达水平降低,URGCP-mRNA表达升高(P<0.05),同时,URGCP蛋白水平升高.转染72h后,与Control、NC组比较,miR-708-5p组细胞URGCP基因mRNA明显降低,URGCP蛋白表达量明显降低(P均<0.01).miR-708-5p组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显低于Control、NC组(P<0.05).与WT-URGCP组相比,miR-708-5p+WT-URGCP组细胞荧光素酶活性明显降低(P<0.01).结论 miR-708-5p在非小细胞肺癌A549细胞中低表达,过表达miR-708-5p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,机制可能与负性调控URGCP有关.     

miR-30a抑制人骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力

目的探讨miR-30a对人骨肉瘤细胞143B侵袭、迁移和细胞活力的影响。方法过表达或抑制miR-30a分别处理人骨肉瘤细胞143B。划痕实验观察细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测143B细胞迁移和侵袭能力;MTT实验检测细胞活力;定量PCR实验确认过表达miR-30a腺病毒有效性并且检测RUNX2 mRNA表达;Western blot检测细胞中RUNX2总蛋白表达。结果过表达miR-30a抑制了骨肉瘤细胞143B迁移和侵袭(P0.05),在72 h时,miR-30a明显抑制细胞活力(P0.01);抑制miR-30a的内源性表达后,143B细胞的迁移和侵袭能力增加(P0.05),细胞活力也表现出上升水平(P0.01);同时过表达miR-30a可以抑制RUNX2的蛋白表达,抑制内源性miR-30a后RUNX2蛋白水平表达增加(P0.05)。荧光素酶活性检测,miR-30a可以靶向于RUNX2(P0.01)。结论 miR-30a抑制骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力,其作用可以能是通过抑制RUNX2的表达来实现。     

miR-34a 通过Snail 诱导肺癌EMT 及促进其转移的分子机制

目的:探讨miR-34a 在肺癌组织中的表达情况以及miR-34a 在肺癌细胞侵袭和迁移过程中的作用及其机制。方法:qPCR 检测肺癌和正常肺组织中miR-34a 的表达情况;使用miR-34a-mimic 和miR-34a-inhibitor 过表达和沉默miR-34a,qPCR 检测沉默和过表达效果;Western blot 检测沉默和过表达miR-34a 后Snail 蛋白的表达情况;荧光素酶报告基因检测miR-34a 与Snail 的相互作用;Transwell 侵袭实验检测miR-34a 的表达对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-34a 的表达对肺癌细胞迁移能力的影响;Western blot 检测E-Cadherin、Vimentin 和Twist 蛋白的表达情况。结果:与正常肺组织相比,肺癌组织中miR-34a 表达明显降低;且晚期、低分化和有淋巴结转移的肺癌组织miR-34a 表达明显较早期、高分化和无淋巴结转移的肺癌组织低;miR-34a-mimic miR-34a-inhibitor 可以有效抑制和过表达miR-34a 的表达;miR-34a 能与Snail 的3忆UTR 特异性结合;miR-34a 可以调控肺癌H1650 细胞的侵袭迁移能力;过表达miR-34a 上调E-Cadherin,同时下调Vimentin 和Twist 蛋白的表达,沉默miR-34a 则相反。结论:miR-34a 在肺癌中表达明显降低,且跟肺癌分期分级以及淋巴结转移与否密切相关,同时miR-34a 可以通过上皮间质转化调节肺癌细胞侵袭和迁移能力。