显示肝、肾上腺脂类油红O方法探讨

油红 O为脂溶性 ,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料 ,在脂肪内能高度溶解 ,从而染色 ,能保存组织中的脂肪滴。配制染料的溶剂是染色成败的关键 ,在此介绍一种油红 O染色的改进。油红 O原配方是由异丙醇 ,我们改用酒精配制效果同样满意。1取材 :小狗肝脏、肾上腺固定于 1 0 %中性甲醛溶液内 1～ 2 d。 2蒸馏水洗冰冻切片 1 0～ 2 0 μm入蒸馏水。 3用 70～ 80 %异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗。 4入油红 O染色 1 5～ 2 5 min。油红 O配方 :油红 O1 g,异丙醇 1 0 0 ml或 70 %酒精 1 0 0 ml,将油红 O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱…     

疏松结缔组织铺片法改良

疏松结缔组织分布广泛,其中含有三种纤维和六种细胞.为使一张铺片中两种纤维和三种细胞呈现不同颜色,我们对Weigeyt方法进行改良,同时选用伊红Y和番红花O显示胶原纤维和肥大细胞,又选用健康妊娠期小白鼠、并给炎症刺激.制出的铺片满意,方法稳定可靠.1 材料和方法1.1 动物和试剂(1)选用健康妊娠期小白鼠并给刀割伤一次.(2)试剂:1注射液0.5%台盼兰生理盐水.2 固定液1:9甲醛90%乙醇混合液.3染色液 碱性复红染液:碱性复红4g间苯二碱4g蒸馏水200ml.配后加浓硫酸4ml即可应用;1%伊红水溶液(染前滴几滴冰醋酸促染);1%番红花O水溶液(染前滴几滴苯胺油促染).     

改良镀银染色在大鼠脑缺血选择性神经元及轴突溃变中的应用

常规染色难以直接证实所有坏死或溃变的神经元 ,但镀银染色可显示溃变的神经元及轴突和轴突终末。本文介绍一种研究海马缺血性神经元死亡及其轴突溃变程度和时间过程的改良镀银染色方法。1　材料与方法1.1　动物模型　大鼠急性前脑缺血 2 0 min再灌流 2 d或 4d,1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉下 ,4%多聚四醛经左心室升主动脉灌注固定 ,取脑在同样的固定液中后固定 4～ 5 d,包括背侧海马的 2 0 μm冰冻切片 ,做改良的 Gallyas et al镀银方法染色 ,相邻切片作 HE常规染色。1.2　银染工作液的配制1.2 .1　预处理液　 9% Na OH和 1.2 % NH4NO3等…     

不同浓度胰岛素对人肾小管上皮细胞SREBP-1、FAS表达及脂质形成的影响

目的:探讨不同浓度胰岛素对人肾小管上皮细胞(HKC)固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)和脂肪酸合成酶(FAS)表达以及细胞内脂滴形成的影响。方法:分别给予0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L和200nmol/L胰岛素刺激HKC细胞6h。RT-PCR技术检测SREBP-1和FASmRNA表达,免疫细胞化学和Westernblotting检测SREBP-1蛋白的表达,油红O染色检测细胞内脂滴。结果:与0nmol/L胰岛素组相比,10nmol/L、100nmol/L和200nmol/L组HKC细胞SREBP-1和FASmRNA表达均升高,其中100nmol/L组升高最明显。免疫细胞化学技术显示SREBP-1蛋白定位于HKC细胞的胞浆,在10nmol/L、100nmol/L和200nmol/L组HKC细胞其表达明显增强。Westernblotting检测显示10nmol/L、100nmol/L和200nmol/L组HKC细胞SREBP-1蛋白的前体和成熟片段表达增强,其中100nmol/L组表达最强,差异显著。油红O染色显示胰岛素刺激6h后只有100nmol/L胰岛素组HKC细胞内可见明显红染脂滴颗粒。结论:高浓度胰岛素引起HKC细胞SREBP-1和FAS表达上调并最终导致细胞内脂滴沉积,这可能是代谢综合征引起肾脏脂质沉积的重要机制之一。     

介绍一种冷冻切片快速染色方法

制作优质的冷冻切片,以缩短染色时间、提高染色细胞的核浆清晰度最为重要。我们试将苏木精。伊红按比例配成混合液使整个染色过程在1min内完成,且不必经过盐酸乙醇分化,染色鲜艳而稳定,现介绍如下。1材料和方法1．1染液配制（1）冷冻固定液：85％乙醇85ml,4％甲醛10ml,冰醋酸5ml。（2）苏木精伊红混合染色液：沉淀酸化伊红Y乙醇应用液1份,哈雷苏木精液3份混合供染色用。1．2切片制作取手术新鲜组织置恒冷式切片机载物台上,－20℃冷冻后6μm切片,玻片附贴切片后即刻用冷冻固定液固定10S,水稍洗,滴加苏木精伊红混合染色液至液体覆…     

芥子碱对H_2O_2诱导BMSCs成脂分化的影响

目的:探讨中药有效单体芥子碱对过氧化氢(H_2O_2)诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成脂分化的影响。方法 :先通过全骨髓培养法和流式细胞术鉴定并筛选未分化的大鼠BMSCs;一方面利用H_2O_2诱导BMSCs成脂分化建立模型,一方面采用CCK-8实验检测芥子碱对BMSCs的毒性作用;模型建立成功与芥子碱药用浓度确定后进行油红O半定量实验检测细胞中脂滴含量,筛选出最佳的药物浓度;随后采用油红O染色拍片直接观察药物干预24 h后对BMSCs成脂分化的影响,并且采用qPCR和Western blot实验检测BMSCs中成脂分化相关蛋白——脂肪细胞蛋白2(aP2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和葡萄糖转运蛋白4(Glut4)的变化情况。结果:浓度为200μmol/L的H_2O_2作用1 h可诱导BMSCs成脂分化;CCK-8实验结果显示在芥子碱浓度40μmol/L的条件下对BMSCs的活力没有显著影响,同时结合油红O半定量实验结果筛选出芥子碱抑制其成脂分化的最佳浓度为15μmol/L;油红O染色实验观察到芥子碱组(15μmol/L)组脂滴较模型组数量明显减少,qPCR和Western blot实验结果亦显示正常对照组和芥子碱组aP2、PPARγ和Glut4表达均低于模型组(P0.01)。结论:芥子碱能够抑制H_2O_2诱导BMSCs向脂肪细胞分化,其机制可能与PPARγ/AMPK信号通路有关。     

动脉壁整体标本油红O染色

本室因科研工作的需要,给鹌鹑和家兔喂高脂饲料,造成大动脉管腔中动脉粥样硬化的班盐病变。为了显示整体标本中粥样硬化的班块的脂肪堆积及分布情况,经几年实践摸索出用油红○显示整体标本方法,其步骤如下;1.将动物放血杀死,取出大动脉(包括主动脉弓,胸主动脉,腹主动脉,髂总主动脉),用剪刀剪开,在滤纸上铺平。2.将整体标本固定于福尔马林钙液中:10％福尔马林100ml加氯化钙1克,固定2-3天。3.充分水洗4小时,剥去动脉壁的外膜。4.油红○染色:油红○0.5克,溶于异丙醇100ml制成储备液。染色前,取储备液6ml加蒸馏     

携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞及其成脂分化

背景：胰岛素是成脂诱导剂的重要组成成分。然而胰岛素存在半衰期,会随着体内代谢不断灭活及降解,植入体内的细胞或材料无法像体外那样以更换培养液来达到目的。实验拟通过转染胰岛素基因,使转染后的干细胞稳定分泌胰岛素,促进其成脂分化。 目的：探讨携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞后对其成脂分化能力的影响。 方法：取第3代人脐带间充质干细胞,以感染复数为20转染腺病毒载体。实验分为4组：对照组为第4代人脐带间充质干细胞;实验组1为腺病毒转染的第4代人脐带间充质干细胞;实验组2为第4代人脐带间充质干细胞+成脂诱导液;实验组3为腺病毒转染的第4代人脐带间充质干细胞+成脂诱导液。 结果与结论：转染48 h后实验组1和实验组3的人脐带间充质干细胞在荧光显微镜下显现弱荧光,72 h后荧光较强。经脂肪诱导培养液培养14 d后,实验组1,2,3油红O染色后显微镜下呈红色,对照组未见脂滴形成,实验组1可见一些细小脂滴形成;实验组3与实验组2相比,脂滴大且多,定量分析显示,实验组3油红O染色阳性的面积和吸光度大于实验组2(P < 0.05)。由此说明携带人胰岛素基因腺病毒载体转染人脐带间充质干细胞后可促进其成脂能力。     

DHA缓解肝X受体激活所致HepG2细胞的甘油三酯积聚

目的 探讨DHA对肝X受体激动剂T0901317诱导的HepG2细胞甘油三酯积聚的影响.方法 体外培养HepG2细胞,以50 μmol/L DHA、10 μmol/L T0901317分别处理细胞以及50 μmol/L DHA 和10 μmol/L T0901317共同处理细胞48 h.油红O染色观察细胞内脂质沉积;氯仿-甲醇抽提细胞总脂质,酶法定量检测细胞甘油三酯含量;实时定量PCR检测与脂肪酸代谢相关基因如SREBP-1c、FAS、SCD-1、PPARα和CD36的mRNA水平.结果 与对照组相比,10 μmol/L T0901317处理48 h后,HepG2细胞内的油红O染色脂滴增多,甘油三酯浓度升高了50 %;脂肪酸合成基因:SREBP-1c、FAS和SCD-1及脂肪酸吸收基因CD36的mRNA水平分别升高了9.9、5.2、2.2和1.5倍,而脂肪酸降解基因PPARα的mRNA无变化.DHA与T0901317共同处理的HepG2细胞内脂滴明显减少;甘油三酯含量比T0901317处理组降低了15 %;SREBP-1c 、FAS 、SCD-1和 CD36的mRNA水平比T0901317处理组分别降低了92 %、31 %、46 %和60 %,而PPARα的mRNA水平比T0901317处理组升高了30 %.结论 DHA通过降低脂肪酸合成和吸收基因的表达并升高脂肪酸降解基因的表达缓解肝X受体激活所致HepG2细胞内甘油三酯积聚.     

Ziehl-Neelsen改良染色法在痰涂片中的应用

针对结核杆菌菌体含有蜡质的特点和传统Ziehl Neelsen抗酸染色法存在的不足 ,笔者在以前工作的基础上对染色液的配方进行改良〔1,2〕,并结合微波辐射技术建立了一种快速、敏感、简便的痰涂片抗酸染色法。1　材料与方法1.1　材料　 5 3例结核杆菌痰培养阳性的痰液 ,每例涂片 2张 ,95 %乙醇固定 15～ 30min ,分别用Ziehl Neelsen改良染色法和传统的抗酸染色法染色 ,同时设阳性对照、阴性对照。1.2　染液配制　 (1)改良的Ziehl Neelsen染色液 :碱性复红无水乙醇饱和液 (相当 6 %浓度 ) 10ml,活性剂 5ml,蒸馏水85ml,先将碱性复红溶于无水乙醇…     

表面活性剂在Wade-Fite法中的应用

由于结核杆菌属抗酸菌,其菌体壁上含有脂质,一般不易着色。常规W ade-F ite法染色使用汽油、松节油混合液代替二甲苯脱蜡,以保存菌体脂质不受破坏。我们通过反复探索,发现通过在染液中加入表面活性剂能有效地提高结核杆菌的检出率,现报道如下。1材料与方法1.1材料收集广东省揭阳市人民医院病理科近2年来所收结核病例标本24例,每例切片2张,分为两组,分别用常规W ade-F ite法和加入表面活性剂的W ade-F ite进行染色。1.2染色剂的配制(1)A液:100 m l石炭酸复红溶液加5m l表面活性剂,混匀。(2)B液:20%硫酸水溶液。(3)C液:亚甲蓝水溶液。1.3…     

二甲双胍抑制脂多糖诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成

目的探讨二甲双胍(Met)对脂多糖(LPS)诱导的THP-1来源泡沫细胞的形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的影响。方法采用100 ng/m L佛波酯(PMA)处理THP-1细胞48 h后,诱导其分化成为巨噬细胞;再利用50μg/m L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和1μg/m L LPS促进THP-1细胞来源的巨噬细胞形成泡沫细胞,在此过程中用(0、100、200)μmol/L Met进行处理,采用油红O染色分析Met对泡沫细胞形成的影响;采用BODIPY493/503染色,荧光显微镜观察泡沫细胞内脂滴的形态和数量;抽提细胞内脂类,通过定量试剂盒测定细胞甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot分析脂滴表面蛋白中脂肪分化相关蛋白(ADRP)、47 k Da的尾连蛋白(TIP47)的表达水平。结果与ox-LDL和LPS组相比,采用100μmol/L、200μmol/L Met处理后能够降低泡沫细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,其中200μmol/L Met能够降低泡沫细胞中约25%的TG储积。Western blot结果显示,Met能够降低泡沫细胞中ADRP的表达水平,但对TIP47的表达水平无影响。结论 Met能够抑制LPS诱导的THP-1细胞源性泡沫细胞形成,并抑制脂质蓄积,同时下调细胞内ADRP的表达水平。     

氧化低密度脂蛋白诱导巨噬细胞泡沫化氧化损伤后血管紧张素转化酶2的表达变化及意义

目的观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化后血管紧张素转化酶2(ACE2)的表达变化与氧化应激损伤的关系,探讨ACE2的抗氧化作用。方法用不同浓度ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7泡沫化,油红O染色观察巨噬细胞内脂质堆积变化,并定量分析细胞内脂滴含量,通过检测细胞上清中丙二醛(MDA)含量鉴定细胞氧化损伤程度,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测ACE2及MAS m RNA表达,化学比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性与还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果不同浓度(20、40、60、80mg/L)ox-LDL处理巨噬细胞24 h,油红O染色可见巨噬细胞变大、变圆,胞质内脂滴含量呈剂量依赖性增加;用60mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞泡沫化模型组中MDA含量较对照组明显升高(P0.01);Real-time PCR结果显示,模型组ACE2和MAS m RNA表达水平较对照组显著减少(P0.05);与对照组比较,模型组中SOD活性与GSH含量显著降低(P0.05或P0.01)。结论巨噬细胞泡沫化氧化损伤进程与ACE2及其下游受体MAS表达下调密切相关,提示ACE2具有一定的抗氧化作用,其机制可能与SOD及GSH有关。     

油酸诱导SW872前脂肪细胞分化及分化过程中促酰化蛋白的分泌

目的探讨油酸对SW872前脂肪细胞的诱导分化作用及SW872细胞分化过程中促酰化蛋白的分泌。方法体外培养SW872细胞,0.6mmol/L油酸作为诱导分化剂刺激SW872前脂肪细胞,油红O染色观察细胞形态的变化及脂滴的聚集,化学比色法测定甘油三酯的总量,ELISA方法测定培养上清中促酰化蛋白的含量。结果SW872细胞分化之前呈成纤维细胞样,胞内无脂滴,甘油三酯的含量较低;加入0.6mmol/L油酸诱导分化刺激72h时,SW872细胞已经完全分化,胞浆中脂滴明显增多,油红O染色可见胞浆中丰富的脂肪染色,甘油三酯的含量是诱导分化前的14倍(P<0.01)。诱导分化之前,SW872细胞分泌ASP的量非常低,几乎不能检测出;诱导分化72h,ASP的含量增加到1.12ng/mg细胞总蛋白质。结论油酸能诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞;ASP的分泌与脂肪细胞的分化程度密切相关。     

壳聚糖修饰丝素蛋白与人脂肪间充质干细胞体外构建组织工程脂肪

背景:在保留丝素蛋白原有优点的基础上,采用带正电荷的水溶性壳聚糖对其表面进行修饰,可改善细胞在支架材料上的黏附性。目的:验证壳聚糖表面修饰丝素蛋白支架材料与人脂肪间充质干细胞的生物相容性及两者体外构建组织工程脂肪的可行性。方法:将第3代人脂肪间充质干细胞悬液以1×107 L-1浓度接种于壳聚糖表面修饰丝素蛋白支架材料上作为实验组,以单纯的细胞悬液为对照组,MTT法检测细胞在支架材料上的黏附和增殖能力。将第3代人脂肪间充质干细胞悬液以1×109 L-1浓度接种于壳聚糖表面修饰丝素蛋白支架材料上,分别进行成脂诱导培养与高糖培养基常规培养,14 d后行细胞-支架复合物油红O染色与RT-PCR检测。结果与结论:人脂肪间充质干细胞在壳聚糖表面修饰丝素蛋白支架材料上黏附、增殖良好。成脂诱导14 d后,油红O染色显示壳聚糖修饰丝素蛋白支架材料上有大量脂肪细胞生成,且过氧化物酶增殖物活化受体γ2基因表达阳性。结果表明壳聚糖表面修饰丝素蛋白支架材料具有良好的体外生物相容性,与人脂肪间充质干细胞共培养可被成功诱导为成熟脂肪细胞。     

人参茎叶皂苷、三七总皂苷和天麻素配伍防治肝细胞脂肪变性的作用

<正>目的:探讨人参茎叶皂苷、三七总皂苷和天麻素配伍防治L02肝细胞脂肪变性的作用。方法:L02细胞中加50%小牛血清100 mmol/L乙醇体外培养36 h,生化分析仪测血清TG水平;流式细胞术检测肝细胞内ROS和线粒体膜电位;高效液相色谱测定肝细胞ATP含量;RT-PCR方法及Westren blot检测肝细胞CYP2E1及PPARαmRNA及蛋白表达。结果:油红O染色     

神经组织的双重免疫组化染色法

在研究心传导系统神经组织的正常分布、增龄变化及其病变与猝死的关系的过程中,我们建立了一套能同时显示神经轴突和雪旺氏细胞的双重免疫组化染色方法.1 材料与方法1.1 主要试剂 一抗:鼠单克隆PGP9.5抗血清,英国Ultraclone公司;兔多克隆S100抗血清,丹麦Dakopatts公司.桥联试剂:羊抗鼠IgG/碱性磷酸酶与羊抗兔IgG/辣根过氧化酶,丹麦Dakopatts公司.底物:萘酚AS-MX磷酸与固蓝B:美国Sigma公司;二氨基联苯胺(DAB):美国Sigma公司.1.2 标本 人尸检心脏与传导系统组织10例,均为常规福尔马林固定、石蜡包埋的标本,切片厚度5μm,裱于Superfrost plus(英国BDH)玻片上.1.3 免疫组化染色方法(1)高压消毒蒸锅暴露抗原:切片经脱蜡、抑制内源性过氧化酶后,浸入1mmol/L的EDTA缓冲液(PH8.0),置入高压消毒蒸锅处理(120℃,105kPa)10min,冷却后移入0.01mmol/L的PBS(pH7.1,下同)平衡10min,进行下面的免疫组化染色.(2)双重免疫组化染色步骤:①滴加一抗混合物:PGF9.5(1:4000) S100(1:12000),4℃,16～18h.     

改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

胰岛素对THP-1细胞脂蛋白脂酶 mRNA表达及细胞泡沫化的影响

目的 观察胰岛素在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致人髓系白血病单核细胞株THP-1细胞泡沫化过程中的作用,并探讨其机理.方法 用不同浓度胰岛素及ox-LDL与THP-1细胞一起共同孵育,观察THP-1细胞脂蛋白脂酶(LPL) mRNA RT-PCR产物、非特异性脂酶染色THP-1细胞所得脂酶阳性细胞数、细胞大小变化、油红O染色所得含脂滴细胞数、细胞内胆固醇含量.结果 100 mU/L以上浓度胰岛素各组THP-1细胞LPL mRNA表达与ox-LDL对照组比较上调2倍;细胞周长、脂滴阳性细胞百分率及细胞内胆固醇含量均明显高于ox-LDL对照组(P＜0.05).结论 高浓度胰岛素在ox-LDL存在条件下有促进THP-1细胞向泡沫细胞转化的作用,其机理可能与细胞LPL mRNA表达上调有关.     

骨髓间充质干细胞复合羟基磷灰石/磷酸三钙植骨材料的体外研究

目的研究兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)在羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)植骨材料上的黏附增殖情况。方法抽取兔股骨骨髓,进行贴壁培养BMSCs。在成骨诱导液中诱导BMSCs,于7d用钙钴法检测碱性磷酸酶活性,10d进行茜素红矿化结节染色;在成脂诱导液中诱导BMSCs,于21d进行油红O染色。将BMSCs接种到HA/TCP植骨材料上,加入成骨诱导液,采用倒置显微镜、荧光显微镜及扫描电镜检测,并采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定HA/TCP植骨材料上BMSCs的增殖情况。结果BMSCs在成骨诱导液中7d碱性磷酸酶呈强阳性,10d矿化结节染色呈橘红色;在成脂诱导液中,21d油红O染色呈阳性。BMSCs在HA/TCP植骨材料上孔隙周围及孔隙内生长良好并大量增殖。MTT分析结果显示,HA/TCP对BMSCs的体外增殖无抑制作用。结论BMSCs与HA/TCP植骨材料有良好的生物相容性。