Cripto-1基因沉默对人肝癌MHCC-97H细胞侵袭、迁移能力的影响

 目的: 探讨Cripto-1蛋白在人肝癌组织和肝癌细胞系中的表达,研究沉默Cripto-1基因后对肝癌细胞MHCC-97H侵袭和迁移能力的影响及可能的机制。方法: 采用Western blot检测11对肝癌组织及相应的癌旁组织和不同肝癌细胞株中Cripto-1蛋白的表达;收集80例肝癌石蜡标本,免疫组织化学方法检测Cripto-1蛋白的表达情况;Cripto-1 siRNA转染肝癌细胞MHCC-97H细胞后,real-time PCR和Western blot分别检测转染效率;Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分别检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达。结果: Western blot检测结果显示肝癌组织中Cripto-1蛋白的表达明显高于对应的癌旁组织,Cripto-1蛋白在各肝癌细胞系中均有表达,且表达量高于对照细胞,其中高侵袭性肝癌细胞MHCC-97H表达量最高;免疫组织化学结果显示Cripto-1蛋白在88.7%的肝癌组织中表达;Cripto-1 siRNA转染MHCC-97H细胞后能显著降低Cripto-1 mRNA和蛋白的表达水平,并且能降低其侵袭和迁移能力;Western blot结果表明,Cripto-1基因沉默后能抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论: Cripto-1在肝细胞癌中的高表达可能与肝癌的发生发展密切相关,下调Cripto-1的表达可以抑制肝癌细胞侵袭和迁移能力,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9的表达有关。     

MTA1基因调节神经胶质母细胞瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移

目的评价沉默MTA1基因对神经胶质瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移能力的影响。方法应用慢病毒转染技术沉默MTA1基因的表达,通过Western blot实验与荧光共聚焦实验检测MTA1蛋白与F-actin蛋白的表达;通过Transwell实验评估细胞侵袭与迁移能力;Western blot实验检测E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达。结果沉默MTA1基因可下调F-actin蛋白的表达水平,抑制U-87-MG细胞的侵袭与迁移能力,并且上调N-cadherin蛋白,下调E-cadherin蛋白的表达。结论沉默MTA1基因抑制胶质母细胞瘤细胞系U-87-MG的侵袭与迁移能力与影响F-actin的集聚与EMT相关蛋白N-cadherin与E-cadherin表达相关。     

miR-195-5p表达上调抑制肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨miR-195-5p对肺癌细胞系A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测肺癌组织及肺癌细胞系中miR-195-5p的表达;通过脂质体介导将miR-195-5p模拟物作用于A549细胞,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭; Western blot检测细胞内上皮间质转化标志物及ZEB1的表达。结果相对于癌旁组织及人正常肺上皮细胞,miR-195-5p在肺癌组织及肺癌细胞系中低表达(P0. 001);过表达miR-195-5p可显著抑制A549细胞的迁移和侵袭(P0. 001),伴随E-cadherin蛋白表达的上调,N-cadherin和vimentin蛋白表达的下调(P0. 01);过表达miR-195-5p可抑制A549细胞ZEB1的表达(P0. 001)。结论 miR-195-5p可能通过下调ZEB1的表达,抑制肺癌细胞迁移和侵袭。     

E-cadherin参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移的实验研究

目的:研究E-cadherin介导参与IL-24抑制肺癌细胞增殖和侵袭迁移的机制。方法:选用肺癌细胞A549作为体外研究对象,在细胞中转染pcDNA3.1-IL-24,Realtime PCR和Western blot方法测定过表达效果,MTT测定增殖变化,Transwell小室测定侵袭和迁移变化,Western blot检测E-cadherin、MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达变化。将E-cadherin shRNA和pcDNA3.1-IL-24共转染至肺癌细胞中,按照上述MTT、Transwell小室和Western blot方法测定细胞增殖、侵袭迁移和E-cadherin、MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达变化。结果:转染pcDNA3.1-IL-24后的肺癌细胞中IL-24表达水平升高,细胞增殖、侵袭和迁移能力下降,细胞中MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高。E-cadherin shRNA可以逆转pcDNA3.1-IL-24对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及MMP-2、MMP-9和Ki-67蛋白表达的抑制...     

CNTN-1促进人食管癌EC9706细胞侵袭和迁移

目的探讨接触蛋白-1(CNTN-1)在食管癌转移中的作用。方法 q PCR和Western blot检测食管癌细胞系EC9706中CNTN-1的表达;RNA干扰和CNTN-1过表达质粒转染调整EC9706细胞CNTN-1的表达,并将细胞分为空白对照组、scrambled siRNA组、CNTN-1 siRNA组、pcDNA3.1-vector组和pcDNA3.1-CNTN-1组;Brd U和Transwell实验分别检测EC9706细胞增殖、侵袭和迁移能力;qPCR和Western blot检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。结果 CNTN-1在食管癌细胞EC9706中mRNA和蛋白水平较与正常食管上皮细胞显著上调(P0.05);转染CNTN-1siRNA后,EC9706细胞CNTN-1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P0.05),同时细胞中侵袭转移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下降(P0.05);CNTN-1过表达质粒转染细胞后,EC9706细胞内CNTN-1表达水平上调(P0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高,同时MMP-2和MMP-9表达明显升高(P0.05)。结论 CNTN-1可能通过调节MMP-2和MMP-9表达促进食管癌细胞的侵袭转移。     

EPAS1 siRNA抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨沉默内皮PAS区域蛋白1(EPAS1)对抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 将HiMet-ccRCC细胞分为对照(Con)组、阴性对照(NC)组、沉默EPAS1表达组(EPAS1 siRNA组)。用RT-qPCR检测HiMet-ccRCC细胞EPAS1 mRNA水平;MTT法检测HiMet-ccRCC细胞增殖;Transwell小室法检测HiMet-ccRCC细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、PCNA表达。结果 与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞中EPAS1表达水平显著降低(P<0.05),HiMet-ccRCC细胞增殖抑制率明显升高、侵袭及迁移细胞数明显减少(P<0.05);与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),N-cadherin、MMP-9、PCNA蛋白表达下调(P<0.05)。结论 沉默EPAS1可抑制HiMe...     

ATP1A1基因沉默抑制人胶质瘤细胞U251侵袭

目的探讨沉默Na+/K+ATP酶A1亚基(ATP1A1)对人U251胶质瘤细胞系侵袭能力的影响及其机制。方法用shRNA-ATP1A1慢病毒感染人U251胶质瘤细胞,RT-q PCR及Western blot分别检测ATP1A1 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞体外的增殖;细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达。结果沉默ATP1A1细胞的ATP1A1 mRNA和蛋白表达均受到了明显抑制;细胞的增殖和迁移、侵袭能力也显著受抑(P0.05);MMP-2和MMP-9的表达也明显降低(P0.05)。结论靶向ATP1A1干扰能够明显抑制胶质瘤U251细胞的体外增殖、迁移及侵袭,其机制可能与MMP-2、MMP-9的下调相关,ATP1A1可能作为胶质瘤治疗的一个潜在靶点。     

HOXB7基因沉默对人胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响

目的:探讨靶向沉默HOXB7基因对人胃癌SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭作用的影响及潜在机制。方法:设计靶向HOXB7的siRNA,然后瞬时转染胃癌SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测siRNA靶向沉默的效果。MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,实时荧光定量PCR和Western blot法检测胃癌SGC-7901细胞PTEN和VEGF的表达水平以及p-AKT的蛋白水平。结果:胃癌组织中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表达均显著高于对照组织。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901细胞中HOXB7的表达,且沉默HOXB7表达后SGC-7901细胞活力明显下降,同时细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1的表达亦下调。靶向沉默HOXB7可明显抑制SGC-7901细胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌细胞的侵袭转移,同时下调VEGF的表达水平,抑制胃癌组织中的肿瘤血管生成。结论:HOXB7作为一个癌基因,可上调细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1和侵袭相关分子VEGF的表达,上调AKT的磷酸化水平,进而抑制PTEN的功能,促进胃癌细胞SGC-7901的生长、迁移和侵袭能力。     

BMP4沉默对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换及侵袭转移能力的影响

目的探讨沉默骨形成蛋白-4(BMP4)对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换(EMT)和侵袭迁移能力的影响。方法脂质体法转染MG-63细胞BMP4 shRNA表达质粒,将MG-63细胞分为MG-63对照组(正常培养对照)、空白对照组(转染空白质粒)和BMP4沉默组(转染BMP4 shRNA质粒)。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测细胞E-cadherin、vimentin、twist和snail的mRNA及蛋白水平。Transwell侵袭实验和伤口愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果沉默BMP4后MG-63细胞的间质细胞标志物vimentin、twist1和snail水平降低,上皮细胞标志物E-cadherin表达增高(P0.05)。BMP4沉默组细胞穿膜细胞数和迁移距离显著少于MG-63对照组和空白对照组(P0.05)。结论沉默BMP4基因可以使间质型MG-63骨肉瘤细胞向上皮细胞表型转变,从而有效地降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力。     

长链非编码RNA UCA1对胰腺癌细胞系侵袭转移的影响

目的探讨尿路上皮癌相关1(UCA1)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞侵袭转移的影响。方法用荧光定量PCR检测11例胰腺癌组织和配对的癌旁组织及5种胰腺癌细胞系中UCA1的表达,通过RNA干扰技术降低胰腺癌细胞系Bx PC-3的UCA1水平,用Transwell侵袭实验和划痕实验观察Bx PC-3细胞的侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP-2和MMP-9的蛋白水平。结果胰腺癌组织的UCA1水平高于相应的癌旁组织(P0.05),UCA1差异性表达于5种胰腺癌细胞系;干扰UCA1后,Bx PC-3细胞的MMP-2和MMP-9的蛋白水平均降低(P0.01),侵袭能力和迁移能力明显减弱(P0.01)。结论 UCA1在胰腺癌中高表达,下调UCA1通过降低MMP-2和MMP-9的表达减弱胰腺癌细胞系Bx PC-3的体外侵袭转移能力。     

水飞蓟素抑制肝癌细胞系MHCC97侵袭及迁移

目的探讨水飞蓟素(SM)对人肝癌细胞系MHCC97侵袭和转移能力的影响及可能涉及的分子机制。方法 MTT法检测细胞增殖; Transwell、划痕实验和细胞-基质黏附实验分别检测细胞侵袭、迁移及黏附能力; RT-PCR和Western blot检测MMP-9、VEGF、E-cadherin、integrinβ1和Akt mRNA及蛋白的表达。结果和对照组相比,水飞蓟素抑制细胞增殖(P0. 05),显著降低细胞侵袭、迁移和黏附能力(P0. 05)。水飞蓟素处理组MMP-9、VEGF、integrinβ1和Akt的mRNA及蛋白表达量降低(P0. 05),而E-cadherin的mRNA及蛋白表达量增高(P0. 05)。结论水飞蓟素可抑制MHCC97细胞增殖,并且降低细胞侵袭、迁移和黏附能力。     

Gli2基因沉默对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)基因对结肠癌细胞系SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法构建靶向Gli2基因的shRNA慢病毒载体,转染到SW480细胞中,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;实验设干扰组、阴性对照组和空白组。用MTT法、倍增时间与集落形成实验检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的迁移、侵袭能力;利用qRT-PCR和Western blot法检测细胞间Gli2、cyclin D和MMP-2基因和蛋白的表达。结果SW480细胞转染慢病毒72 h后可见明显的绿色荧光蛋白表达,干扰组较阴性对照组与空白组Gli2表达降低,细胞增殖减慢,集落形成能力减弱,倍增时间延长,迁移、侵袭能力减弱,cyclin D1和MMP-2表达下降(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够抑制SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力,机制可能与cyclin D1和MMP-2的下调有关。     

沉默TREM-2对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞迁移和侵袭的影响

 目的: 应用RNA干扰(RNAi)技术沉默类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)髓样细胞触发受体2(TREM-2)的表达,探讨TREM-2基因沉默对RA-FLS迁移和侵袭能力的影响及其相关机制。方法: 向RA-FLS转染特异性的TREM-2 siRNA,利用RT-PCR法和Western blot法检测沉默效果;CCK-8法检测各组细胞生长情况;Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭能力;ELISA法检测细胞MMP-2和MMP-9的分泌水平;Western blot法分析沉默TREM-2基因对细胞PI3K/AKT通路的影响。结果: TREM-2 siRNA能显著降低RA-FLS中TREM2 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。沉默TREM-2基因后,各时点各组细胞的活力未见明显差异;特异性干扰组RA-FLS的迁移细胞数目与空白组和control siRNA组相比明显增多(P<0.05);TREM-2 siRNA组侵袭细胞数目相比空白组和control siRNA组明显增多(P<0.05);TREM-2 siRNA干扰后RA-FLS分泌的MMP-2显著增加(P<0.05)而MMP-9未见明显变化;特异性转染后的RA-FLS相对于对照组PI3K/AKT的磷酸化水平显著增强(P<0.05)。结论: TREM-2可能通过调节PI3K/AKT通路的活化对RA-FLS的迁移和侵袭能力发挥着重要作用。     

曲古抑菌素A通过上调原钙黏蛋白9表达抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭

目的 探讨曲古抑菌素A（TSA）对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,及其可能的分子机制。 方法 体外常规培养SGC-7901细胞至对数生长期,给予不同浓度TSA（5、10、20、40、80、160 nmol/L）处理48 h,采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞活力,脂质体介导法将人原钙黏蛋白9（PCDH9）真核表达质粒转染SGC-7901细胞并筛选出稳定表达的细胞系,Transwell实验检测迁移率和侵袭率,RT-PCR法检测PCDH9 mRNA表达水平,免疫印迹法(Western blotting)检测PCDH9、Snail、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9的蛋白表达水平。 结果 TSA在80 nmol/L以上时对人胃癌SGC-7901细胞活力有显著的抑制作用（P<0.05）;而在较低浓度下（5～20 nmol/L）可剂量依赖性地抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）,下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平（P<0.05）,上调E-cadherin和PCDH9蛋白表达水平（P<0.05）,上调PCDH9 mRNA表达水平（P<0.05）;PCDH9高表达也可抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭（P<0.05）,上调E-cadherin蛋白表达并下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达（P<0.05）。 结论 TSA可在体外抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭,这可能与其促进PCDH9基因表达,继而下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

前列腺癌组织中BMP-4的表达及临床意义

目的探讨骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)在前列腺癌组织中的表达,分析其表达下调对前列腺癌细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组化En Vision法检测58例前列腺癌及40例前列腺良性增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中BMP-4蛋白的表达;利用Western blot法检测前列腺癌细胞(LNcap、PC-3、Du145)和BPH细胞中BMP-4蛋白的表达;将BMP-4 siRNA和对照siRNA分别转染LNcap,分为未处理组、对照siRNA组和BMP-4 siRNA组,采用Western blot法检测三组LNcap细胞中BMP-4、MMP-2和MMP-9的表达量;利用CCK8分别检测三组细胞的增殖能力;采用Tanswell小室实验检测三组细胞的侵袭能力。结果前列腺癌组织中BMP-4蛋白阳性率高于BPH组织(P 0. 05),BMP-4蛋白在前列腺癌细胞中的表达量高于BPH细胞。BMP-4 siRNA组细胞中BMP-4蛋白表达低于未处理组和对照siRNA组; BMP-4 siRNA组细胞增殖能力及细胞侵袭能力均低于未处理组和对照siRNA组。BMP-4 siRNA组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达量低于未处理组和对照siRNA组。结论 BMP-4高表达于前列腺癌组织中,与前列腺癌细胞增殖和侵袭相关,有望成为前列腺癌潜在的治疗靶点。     

黄芪多糖抑制多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、迁移和侵袭

目的探讨黄芪多糖(APS)对多发性骨髓瘤(MM)细胞系U266增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法培养U266细胞,用不同浓度(6、 8和10 mg/mL)的APS作用U266细胞24、48和72 h,或8 mg/mL的APS作用于转染肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达质粒(pcDNA3.1-TRAF6)的U266细胞48 h,CCK-8法检测U266细胞增殖;流式细胞仪检测U266细胞凋亡;Transwell检测U266细胞迁移和侵袭;Western blot检测cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和TRAF6蛋白表达。结果与对照组相比,APS组U266细胞抑制率、凋亡率、迁移和侵袭细胞数均显著升高(P0.05),cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和TRAF6蛋白表达水平显著降低(P0.05), p21、Bax、和E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05)。与APS+pcDNA3.1组比,APS+pcDNA3.1-TRAF6组U266细胞抑制率、凋亡率、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P0.05),cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和TRAF6蛋白表达水平显著升高(P0.05), p21、Bax、和E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 APS可能通过下调TRAF6蛋白表达抑制U266细胞的增殖、迁移和侵袭,促进U266细胞凋亡。     

沉默TRIM27基因对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:检测TRIM27蛋白在鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中的表达水平,观察沉默TRIM27对鼻咽癌5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:通过免疫组化技术检测鼻咽癌组织和鼻咽部正常组织中TRIM27的表达水平,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法分别检测5-8F细胞和NP69细胞中TRIM27的mRNA和蛋白表达水平;利用脂质体2000将TRIM27干扰序列转入5-8F细胞中;采用real-time PCR检测转染后细胞中TRIM27 mRNA表达水平的变化,Western blot法检测转染后细胞中TRIM27蛋白水平的变化;CCK-8法检测细胞活力的变化;细胞平板集落形成实验观察转染后细胞增殖能力的变化;Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果:免疫组化结果显示TRIM27在鼻咽癌组织中的表达率高于鼻咽部正常组织;TRIM27基因沉默后5-8F细胞增殖、侵袭和迁移能力均明显受到抑制(P0.05)。结论:TRIM27在鼻咽癌5-8F细胞中可能充当癌基因的角色。沉默TRIM27基因可以明显抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

Twist对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化的影响

RNA干扰技术抑制Twist在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达,观察其沉默对TNF-α作用后乳腺癌细胞侵袭及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响。以乳腺癌细胞MDA-MB-231为空白对照,shRNA-NC空载体为阴性对照,构建Twist沉默表达载体,转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,qRT-PCR和Western blotting检测转染细胞中Twist mRNA及蛋白质表达水平。建立Twist沉默表达的乳腺癌细胞模型后,用TNF-α分别处理对照组及转染后的乳腺癌细胞,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western blotting检测细胞EMT相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)和转移相关蛋白基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2, MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达。结果显示,下调Twist的乳腺癌细胞经TNF-α处理后,细胞侵袭和迁移能力降低,Vimentin表达减少,E-cadherin表达增加,细胞中MMP-2、MMP-9表达减少,与空白对照及TNF-α作用后的阴性对照相比,差异有统计学意义(P0.05)。因此,下调Twist可降低TNF-α诱导的乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力,抑制其EMT。     

β-catenin在食管癌侵袭转移过程中的作用

目的探讨β-catenin在食管癌侵袭转移过程中的作用。方法转染有效的β-catenin基因siRNA干扰片段于食管癌Eca-109细胞中,下调β-catenin表达:CCK-8增殖实验检测沉默该基因对食管癌细胞增殖能力的影响;Transwell小室实验检测对其侵袭、迁移能力的影响;Western blot法检测β-catenin表达下调后WISP2、TCF4及E-cadherin蛋白表达。结果 CCK-8增殖实验结果显示,干扰组(siRNA干扰片段有效转染的下调β-catenin组)细胞增殖能力明显低于空白对照组(未处理组)及阴性对照组(转染无意义片段组)(P0.05),而空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。Transwell小室实验结果显示,干扰组迁移、侵袭能力均低于空白对照组及阴性对照组(P0.05)。Western blot结果显示,WISP2、E-cadherin蛋白在干扰组中的表达量高于空白对照组及阴性对照组(P0.05);TCF4蛋白在干扰组中的表达量低于空白对照组及阴性对照组(P0.05)。结论在食管癌细胞中,下调β-catenin后,Wnt信号通路的相关因子也出现明显改变,推测沉默食管癌中Wnt信号通路β-catenin因子,E-cadherin表达增加,抑制上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT),阻碍食管癌细胞增殖,通过减少TCF4表达,促进下游靶基因WISP2表达,从而抑制肿瘤细胞侵袭、转移;β-catenin基因有望成为靶向治疗食管癌的候选基因。