同期放化疗诱导人结直肠癌细胞发生上皮-间质转化

目的:探讨放化疗抵抗的结直肠癌细胞发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的意义.方法:采用5-FU化疗同期进行放疗对人结直肠癌野生型细胞(HCTll6)进行干预,诱导放化疗共同抵抗的细胞株(HCT1 16CRR)并采用克隆形成实验进行放化疗抵抗性的鉴定.高倍显微镜下观察细胞形态学变化.采用Real-time PCR和Western印迹,检测上皮表型标志物E-cadherin,间质表型标志物N-cadherin、波形蛋白(vimentin)、核转录因子(Snail)mRNA及其蛋白的表达.结果:放化疗抵抗的结直肠癌细胞发生与EMT相符的形态学改变,细胞呈纺锤体状,极性消失,并出现伪足;Real-time PCR和Western印迹结果显示E-cadherin mRNA及蛋白表达下调;N-cadherin,vimentin,Snail mRNA及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:放化疗抵抗后的人结直肠癌细胞发生EMT,其与结直肠癌的治疗抵抗相关.     

上皮-间质转化在蒿甲醚逆转结直肠癌细胞放化疗抵抗中的作用

目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在蒿甲醚(artemether,ARE)对同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116(HCT1 16CRR)的逆转作用中的作用.方法:实验分为四组:1)对照组;2)单纯放化疗组;3)ARE联合放化疗组;4)ARE组.采用Real-time PCR和Westernblot,检测各组EMT相关指标E-cadherin,N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot结果显示E-cadherin mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＜ARE联合放化疗组＜对照组＜ARE组;N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＞ARE联合放化疗组＞对照组＞ARE组.结论:EMT在ARE逆转同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116CRR细胞系的放化疗抵抗作用中有重要的作用,即上调E-cadherin mRNA及其蛋白的表达,下调N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达.     

结直肠癌中NAT10与上皮-间质转化的关系

目的 探讨结直肠癌中N-乙酰基转移酶10(N-acetyltransferase 10, NAT10)与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的关系及临床意义。方法 采用免疫组化MaxVision 3HRP法分别检测NAT10及EMT相关蛋白E-cadherin、β-catenin、vimentin在95例结直肠癌癌组织及30例癌旁组织中的表达,分析NAT10与EMT相关蛋白表达的相关性,及NAT10与结直肠癌临床病理特征的关系。结果 结直肠癌组织中NAT10的阳性率[70.5%(67/95)]高于癌旁组织[10%(3/30)]。结直肠癌组织中E-cadherin的阳性率[56.8%(54/95)]低于癌旁组织[96.7%(29/30)](P<0.001),β-catenin的阳性率[74.7%(71/95)]高于癌旁组织[0(0/30)](P<0.001),viminten的阳性率[35.8%(34/95)]高于癌旁组织[0(0/30)](P<0.001)。结直肠癌组织中NAT10与E-cadherin表达呈负...     

过表达Oct4B1 诱导结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化

目的:探讨Oct4B1 基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418 抗性的Oct4B1 基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480 细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),转染成功后用G418 筛选建立稳定转染的细胞株,对两种稳定转染细胞进行如下检测: RT-qPCR 检测Oct4B1 的mRNA 水平;于划痕实验和Transwell 小室实验检测迁移和侵袭能力;盂Western blot 检测EMT 相关标记物E-cadherin、N-cadherin 及Vimentin 蛋白表达; RT-qPCR 和Western blot 检测EMT 转录因子Twist 的mRNA 及蛋白表达。结果:稳定转染细胞株建立后,实验组与对照组比较:Oct4B1 基因表达水平明显升高(P<0.01);细胞迁移明显增强(P<0.01);细胞侵袭能力明显提高(P<0.01);上皮标记物E-cadherin 蛋白表达量明显下降(P<0.01);而间质标记物N-cadherin 及Vimentin蛋白表达量明显上调(P<0.01);Twist 的mRNA 及蛋白表达量均明显升高(P<0.01)。结论:过表达Oct4B1 基因可诱导人结直肠癌SW480 细胞发生EMT,增强细胞迁移及侵袭能力,其分子机制可能与提高Twist 表达有关。     

SCUBE2过表达通过Wnt/β-catenin抑制结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的:研究信号肽-CUB-EGF结构域蛋白2(SCUBE2)对结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的分子机制。方法:首先,用real-time PCR与Western blot法检测人结直肠癌HCT116细胞和正常人结直肠上皮FHC细胞SCUBE2的表达;HCT116细胞转染GV144-SCUBE2质粒过表达SCUBE2后,MTT、Transwell和流式细胞术分别检测其对细胞活力、迁移和凋亡的影响。转染GV144-SCUBE2质粒6 h后加入10μg/L重组转化生长因子(TGF)-β1蛋白继续培养48 h,real-time PCR或者Western blot法检测EMT标志物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail]、β-catenin、c-Myc和细胞周期蛋白(cyclin)D1的表达。随后,在HCT116细胞中使用Wnt/β-catenin通路激活剂氯化锂(Li Cl)或抑制剂XAV93920并加入TGF-β1且过表达SCUBE2,检测Wnt/β-catenin通路激活或阻断后对HCT116细胞EMT的影响。结果:HCT116细胞中SCUBE2的表达明显低于FHC细胞;过表达SCUBE2能够抑制HCT116细胞的活力与迁移,但是对其凋亡影响不大;SCUBE2增加了E-cadherin的表达,降低了TGF-β1诱导的vimentin、Snail、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达,XAV93920增强了SCUBE2对EMT的影响,而Li Cl阻碍SCUBE2对EMT的影响。结论:过表达SCUBE2能够抑制结直肠癌细胞的生长与迁移,抑制其EMT的发生,这一过程可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用的。     

microRNA-31通过靶向调控Dock1抑制乳腺癌的上皮-间质转化

目的:探讨microRNA-31(miR-31)靶向调控Dock1对乳腺癌上皮-间质转化的影响。方法:通过qRT-PCR、Western blot检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-31、Dock1的表达情况;将含有miR-31的过表达质粒或Dock1的敲除质粒转入乳腺癌细胞MDA-MB-231中并检测转染效率;用Western blot检测转染后各组细胞中Dock1的表达变化; Transwell侵袭实验检测转染及共转染后各组细胞的侵袭能力的变化; Western blot检测转染及共转染后各组细胞中EMT标志物的表达情况。结果:MCF-7细胞中miR-31的表达明显高于MDA-MB-231细胞,但两组都低于其在MCF-10A中的表达。转染对照及过表达质粒后,MDA-MB-231细胞中miR-31的表达较正常组与对照组明显上调,Dock1表达明显下调。Transwell侵袭实验结果显示,MDA-MB-231/miR-31组相比于MDA-MB-231/NC组穿过基底膜的细胞数明显减少,而与MDA-MB-231/miR-31+con组相比无明显差距; MDA-MB-231/miR-31+Dock1组与MDA-MB-231/miR-31+con组相比穿过基底膜的细胞数明显增多。Western blot结果显示,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞相比于MDA-MB-231/NC细胞中E-cadherin表达水平显著上调,在MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中E-cadherin的表达水平与对照组相比无统计学意义;与MDA-MB-231/NC细胞相比,MDA-MB-231/miR-31和MDA-MB-231/miR-31+con细胞中Vimentin表达水平明显下调,MDA-MB-231/miR-31+Dock1细胞中Vimentin的表达水平几乎无变化。结论:miR-31可以靶向调控Dock1来抑制乳腺癌的上皮-间质转化,进而抑制乳腺癌的侵袭与转移。     

KDMs参与恶性肿瘤细胞上皮间质转化

转移是导致肿瘤患者预后差的根本原因。上皮间质转化（ epithehal?mesenchymal transition, EMT）是调控胚胎发生和组织发育过程中细胞形态和功能改变的复杂程序。 EMT在肿瘤转移过程中也起重要作用。已知表观遗传修饰在调控基因表达中起重要作用,其中包括组蛋白甲基化。组蛋白去甲基化酶（ his?tone demethylase）可通过特异性的作用于赖氨酸单甲基化、双甲基化和三甲基化调控基因表达。越来越多的研究表明组蛋白赖氨酸去甲基化酶（ histone lysine demethylases, KDMs）在调控MET相关基因表达中其重要作用。文章就KDMs在人类恶性肿瘤细胞的EMT过程中的研究进展作一综述。     

幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A蛋白调控胃癌细胞上皮-间质转化的研究进展

目的探讨幽门螺杆菌(H. pylori)细胞毒素相关基因A(CagA)蛋白调控胃癌细胞上皮-间质转化( EMT)的作用机制。方法以“幽门螺杆菌”、“细胞毒素相关基因A蛋白”、“胃癌细胞”、“上皮-间质转化”为关键词,在中国知网、万方数据库、Pubmed、 Web of Science 检索1990年1月—2015年1月国内外关于CagA及EMT的文献,进行归纳总结。结果 CagA蛋白通过Ⅳ型分泌系统(T4SS)进入宿主细胞后,除了既往认为的可能参与胃黏膜上皮早期癌变的发生,还可与多种信号分子结合,通过调控基因转录水平(如上调Twist、Snail等与EMT相关的信号通路分子)、上调相关miRNA(如miRNA-584、miRNA-1290等)来降解或阻遏目标mRNA等不同途径来调控细胞的生长和运动相关的信号通路,导致胃癌细胞EMT的发生。结论 CagA可通过不同的途径调控胃黏膜上皮细胞发生EMT。对这些途径及其机制的全面且进一步的研究将有助于对胃癌浸润和转移的机理的了解。     

趋化因子SDF-1 对淋巴细胞白血病细胞的作用

基质细胞衍生因子-1(stromakcell-derivedfactor-1,SDF-1)是一种由骨髓基质细胞释放的趋化因子,是趋化因子CXC亚家族的成员之一.近年研究表明SDF-1不仅与正常机体造血功能的维持及造血干/祖细胞的回髓定位和植入有密切的关系,同时与各种白血病细胞的移动和功能之间也存在复杂的相互作用.本文重点就SDF-1与淋巴细胞白血病细胞之间的相互作用及其意义对国外的研究现状作一综述.     

SPIN1通过调控上皮-间质转化促进胃癌细胞的迁移、浸润

目的 明确SPIN1在胃癌细胞系中的表达情况及其对胃癌细胞迁移、浸润的作用,初步探究其可能的分子机制.方法 qRT-PCR检测SPIN1在5种胃癌细胞系中的表达情况;Transwell小室实验观察过表达及沉默SPIN1后细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blot法检测过表达及沉默SPIN1后上皮-间质转化(ep...     

上皮-间质转化的信号转导机制

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)出现在各种生理和病理情况下,在胚胎发生与器官发育、肿瘤形成和转移以及纤维化过程中均有表现。TGF-β是EMT的一个重要诱导因素,其通过Smad和非Smad依赖通路对EMT的发生进行调节,对肿瘤的形成、转移和扩散起到了重要的作用。本文综述了近年来EMT信号转导机制的研究进展。     

上皮-间质转化与乳腺癌干细胞

乳腺癌干细胞是导致乳腺癌复发、转移和耐药的根源之一。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅赋予乳腺癌细胞迁移和侵袭特征,还可使癌细胞获得自我更新能力而具有干细胞的特性,从而促进乳腺癌干细胞的产生。EMT可以作为乳腺癌干细胞研究的一个新的切入点。本文就近年来该方面的研究进展做简要综述。     

CNPY2增强非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化作用

目的探讨CNPY2激活AKT/GSK3β途径增强非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞侵袭和迁移作用的机制。方法采用qRT-PCR和Western blot法检测AKT/GSK3β途径在CNPY2诱导下上皮、间质标志物以及上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关转录因子的表达变化。通过Transwell侵袭实验和细胞划痕修复实验观察过表达CNPY2对NSCLC细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 CNPY2和E-cadherin在mRNA水平的表达呈负相关。细胞划痕修复实验和Transwell侵袭实验表明CNPY2促进NSCLC细胞的侵袭和迁移能力。进一步分析发现CNPY2可以激活AKT/GSK3β途径,导致GSK3β失活,增加Snail的水平,进而降低E-cadherin的表达,促进细胞发生EMT。结论 CNPY2促进NSCLC细胞的EMT过程,在NSCLC侵袭和迁移中发挥重要作用,CNPY2可作为治疗NSCLC的新型靶点。     

肝细胞生长因子促进HeLa细胞上皮间质转化

目的探讨肝细胞生长因子对宫颈癌He La细胞上皮间质转化的影响。方法以不同浓度的HGF(0、5、10、20和40 ng/m L)处理细胞24 h或20 ng/m L肝细胞生长因子(HGF)处理细胞不同时间(0、6、12、24和48 h),MTT检测细胞活力;用HGF(20 ng/m L)处理细胞24 h,倒置显微镜观察He La细胞形态,划痕实验检测细胞的迁移及Transwell实验检测细胞的侵袭能力。Western blot检测上皮细胞的标志蛋白E-Cadherin及转录因子snail和间质细胞的表面标志蛋白vimentin的表达,HGF/c-Met信号通路分子的表达情况。结果 HGF促进He La细胞增殖,其中以20 ng/m L或20 ng/m L处理24 h生存率达到最高峰;此外,HGF可以促进He La细胞迁移、侵袭及上皮间质转化,并促进c-Met磷酸化,并且激活p-ERK、p-AKT以及促进snail的蛋白表达(P0.05或P0.01)。结论 HGF可以促进He La细胞上皮间质转化,其机制可能是通过HGF/c-Met/MAPK或HGF/c-Met/AKT通路上调snail表达,进而调控E-cadherin或vimentin表达有关。     

姜黄素调控Wnt信号通路抑制胃癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨姜黄素对人胃癌细胞株BGC-823上皮间质转化(EMT)的影响机制。方法将细胞分为姜黄素干预组、TGF-β组、BGC-823细胞对照组、GES-1细胞对照组。采用姜黄素(10μmol/L)干预人胃癌细胞株BGC-823,通过MTT试验检测胃癌细胞增殖能力;通过Transwell小室试验检测胃癌细胞侵袭功能改变;通过Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 TGF-β诱导能够促进人胃癌细胞株BGC-823增殖(P 0.05),胃癌细胞表现出更高的侵袭能力(P 0.01),而姜黄素干预后胃癌细胞的增殖及侵袭能力均明显受抑制。Western blot检测表明,TGF-β诱导干预后,BGC-823细胞E-cadherin、Vimentin蛋白水平升高,与此同时GSK3β、β-catenin及c-Myc的表达明显上调(P 0.01);姜黄素干预能有效抑制胃癌细胞EMT作用,Wnt信号通路蛋白水平显著下调(P 0.05)。结论姜黄素可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT作用,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,实现抗肿瘤作用。     

转化生长因子β1与食管鳞状细胞癌上皮间质转化的关系

目的 探讨食管鳞状细胞癌中转化生长因子β1(TGFβ1)与上皮间质转化的关系以及阻断TGFβ1通路对食管鳞状细胞癌上皮间质转化的影响.方法 将化学合成的TGFβ1反义寡核苷酸(TGFβ1-ASODN)转染食管鳞状细胞癌细胞株EC9706,采用RT-PCR、免疫细胞化学及流式细胞术检测阻断前后对TGFβ1活性的影响以及对上皮性标志物E-cadherin及间质性标志物波形蛋白表达的影响;观察TGFβ1-ASODN转染前后细胞形态学的变化;采用细胞划痕试验检测TGFβ1-ASODN转染前后细胞迁移能力的变化.结果 转染TGFβ1-ASODN可有效的抑制EC9706细胞中TGFβ1的活性,其mRNA(0.25±0.07)及蛋白(35.07%±1.42%)的表达均明显低于转染前mRNA(0.43±0.09)及蛋白(43.57%±1.77%)的水平(χ2=13.847及χ2=84.120,均P<0.05);并提高E-cadherin的表达,抑制波形蛋白的表达.转染后E-cadherin mRNA(0.38±0.09)及蛋白(17.13%±1.45%)的表达明显高于转染前mRNA(0.22±0.06)及蛋白(12.53%±1.31%)的水平(χ2=0.160及χ2=40.008,均P<0.05);波形蛋白mRNA(0.73±0.07)及蛋白(14.15%±1.46%)的表达低于转染前mRNA(0.89±0.09)及蛋白(17.97%±1.42%)水平(χ2=0.160及χ2=21.103,均P<0.05).TGFβ1-ASODN转染可明显抑制细胞的运动能力,转染后细胞迁移距离(0.45±0.05)比转染前(0.81±0.11)明显缩小(χ2=16.854,P<0.05).结论 TGFβ1可能参与了食管鳞状细胞癌的上皮间质转化,TGFβ1-ASODN可导致食管鳞状细胞癌细胞上皮性标志物E-cadherin表达上调、间质性标志物波形蛋白表达下调、形态发生改变以及细胞移动能力降低,阻断TGFβ1信号可抑制食管鳞状细胞癌细胞的上皮间质转化.     

PTEN与食管鳞状细胞癌上皮-间质转化的关系

目的探讨食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中PTEN表达与上皮-间质转化的关系。方法采用免疫组织化学技术检测95例食管鳞癌组织和癌旁正常黏膜组织中的PTEN、E-cadherin和vimentin蛋白的表达。结果食管鳞癌组织中PTEN、E-cadherin和vimentin阳性表达率分别为49.5%、40.0%、58.9%,与癌旁正常组织(89.5%、76.8%、29.4%)相比具有明显差异(P0.05)。食管鳞癌组织中PTEN蛋白与E-cadherin蛋白表达呈正相关(r=0.362,P=0.001),而与vimentin蛋白表达呈负相关(r=-0.208,P=0.018)。结论 PTEN的缺失表达伴随E-cadherin的表达下调和vimentin的表达上调。PTEN可能与食管鳞癌的上皮间质转化有关,并与食管鳞癌的发生及浸润转移相关。     

HAS-2沉默抑制大肠癌细胞上皮间质转化

目的本研究主要探讨HAS-2沉默前后对大肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法分别用Realtime PCR及Western blot方法检测HAS-2 siRNA转染前后E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail mRNA、蛋白表达水平变化,用免疫荧光法观察HAS-2 siRNA转染前后E-Cadherin、Vimentin表达的变化。结果 E-Cadherin蛋白和mRNA在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组比阴性对照组明显上调(0.05),而Vimentin蛋白和mRNA,Snail mRNA and Slug蛋白在大肠癌细胞的表达水平在HAS-2 siRNA转染组表达水平比阴性对照组明显下调(0.05)。结论 HAS-2沉默对大肠癌细胞EMT有抑制作用。     

PTTG1通过上皮-间质转化促进非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的 研究PTTG1在非小细胞肺癌侵袭转移中的作用.方法 应用免疫组织化学染色法检测80例NSCLC组织中PTTG1、E-cadherin和Vimentin的表达,并分析其相关性.细胞分组:1)A549/con,转染空载的A549,2)A549/PTTG1,转染目的基因的A549,3)Scr/H1299,转染空载的H1299,4)SiPTTG1/H1299,敲除PTTG1的H1299;用Western blot检测细胞中PTTG1、E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况.结果 NSCLC组织中PTG1蛋白的阳性表达率为85％与E-cadherin的表达呈负相关(P＜0.05)而与Vimentin的表达呈正相关(P＜0.05).Western blot结果显示在SiPTTG1/H1299细胞中PTTG1蛋白表达水平明显降低,Vimentin蛋白表达水平降低而E-cadherin蛋白表达水平升高.同时在A549/PTTG1细胞中Vimentin蛋白表达水平升高而E-cadherin蛋白表达水平降低.结论 PTG1能促进NSCLC EMT的发生,从而促进NSCLC的侵袭和转移.