地黄饮子对帕金森病肾虚证模型大鼠的干预作用及机制研究

目的通过检测大鼠形态学、HPA轴及抗氧化能力,探讨地黄饮子对帕金森病肾虚证模型大鼠的干预机制。方法将36只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、干预组。模型组、干预组大鼠给予15 mg·kg~(-1)·d~(-1)氢化可的松溶液连续灌胃6周,模拟中医肾虚证模型。从造模第15天开始模型组、干预组大鼠颈背部皮下注射1.0 mg/kg的鱼藤酮溶液,连续注射4周,每周间隔一天,制备病证结合模型,同时干预组给予0.86 mL·100 g~(-1)·d~(-1)的地黄饮子水煎液灌胃4周。用ELISA、HE染色等方法,观察各组大鼠HPA轴变化、MAO、Lipo含量及黑质区形态学变化。结果与正常组相比,模型组大鼠HPA轴功能亢进(P0.01),MAO、Lipo浓度升高(P0.01),黑质区多巴胺能神经元数目明显减少,胶质细胞增多,神经纤维结构疏松;与模型组相比,干预组大鼠HPA轴功能减退、MAO、Lipo含量降低(P0.01),黑质区多巴胺能神经元数目明显增多,胶质细胞减少。结论地黄饮子通过调控HPA轴功能,降低脑组织中MAO、Lipo含量,提高脑组织抗氧化能力,减缓DA神经递质降解速率,抑制黑质区多巴胺能神经元的损伤等对帕金森病肾虚证模型大鼠产生疗效作用。     

地黄饮子对Alzheimer’s disease和Parkinson’s disease大鼠T-SOD、LPO的影响

目的:观察地黄饮子对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease AD)和帕金森病(Parkinson’s disease PD)血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、脂质过氧化物(LPO)的影响,探讨中医"异病同治"理论在地黄饮子治疗AD和PD中的效应机制。方法:将大鼠随机分为AD(正常对照、模型、假手术、地黄饮子)组、PD(正常对照、模型、地黄饮子)组,采用病证结合的造模方式,共6周,以灌胃方式给药,每日一剂,共4周,最后测定各组大鼠血清中T-SOD、LPO。结果:地黄饮子治疗组可显著提高AD、PD大鼠血清中T-SOD含量(P<0.05),并显著降低AD、PD大鼠LPO含量(P<0.05),结论:通过降低脂质过氧化物,提高总超氧化物歧化酶可能是基于"异病同治"理论的地黄饮子汤治疗老年痴呆病和帕金森病病证结合模型大鼠的机理之一。     

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠HPA轴影响的实验研究

目的:通过对MCAO模型大鼠缺血不同时点及地黄饮子灌胃后HPA轴水平的检测,观察其变化特点及地黄饮子的干预效应。方法:采用放射免疫分析法测定MCAO模型大鼠缺血后6h、48h和灌胃地黄饮子7d后的血浆HPA轴水平。结果:①脑缺血6h时模型组HPA轴水平低于正常组,其功能呈抑制状态;②脑缺血48h时,模型组ACTH、COR的含量较正常组明显升高,CRH含量进一步降低;③地黄饮子能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量。结论:地黄饮子加减方能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量,通过改善HPA轴功能的紊乱在脑缺血急性期发挥保护作用。     

基于16S rDNA测序探讨地黄饮子对帕金森病肾虚证大鼠肠道菌群的影响＊

目的 探讨地黄饮子对D-半乳糖所致肾虚证及鱼藤酮诱导帕金森病（Parkinson''s disease，PD）大鼠的疗效及其对肠道菌群（Gut Microbiota，GM）的影响。方法 选取90只6-8周龄雄性健康SD大鼠，随机分为6组：正常组、模型组、左旋多巴组、地黄饮子高、中、低剂量组。造模采用腹腔注射D-半乳糖（150 mg·kg^-1）6周及背部皮下注射鱼藤酮（0.5 mg·kg^-1）4周，联合诱导PD肾虚证病证结合模型，观察地黄饮子高、中、低剂量对PD肾虚模型大鼠的疗效评价。通过地黄饮子治疗，对大鼠粪便标本中的细菌16S rDNAV3-V4区域扩增子测序，比较PD肾虚模型大鼠GM特点及地黄饮子干预后GM变化。结果 本研究共得到448个OTU。PD肾虚模型大鼠存在GM失衡的情况，主要与厚壁菌门、拟杆菌门和放线菌门及其下属部分菌群丰度水平的变化相关。物种注释结果方面，相较于模型组，地黄饮子中、高剂量组厚壁菌门显著性升高（P<0.01）、拟杆菌门降低（P<0.05），而放线菌门地黄饮子低剂量组显著性升高（P<0.01），高剂量组则显著性降低（P<0.01）。相较于模型组，地黄饮子中剂量组ACE指数、Chao1指数、Simpson指数、Shannon指数等Alpha多样性指数均增加（P<0.05），可见地黄饮子干预后物种丰富度和多样性有显著改变。通过Beta多样性分析可见，地黄饮子中、高剂量组分别与空白组大鼠的GM存在关联。而地黄饮子低、中剂量组大鼠GM的LDA评分下多样性较为突出，且有相应关联菌群相富集。结论 本研究运用16S rDNA测序技术预测地黄饮子治疗PD肾虚证的作用机制，初步揭示了地黄饮子通过保护PD大鼠肠道黏膜屏障，改善肠道屏障通透性，调节厚壁菌门、拟杆菌门和放线菌门及其下属部分菌群丰度水平的变化等作用，改善PD大鼠运动障碍，而发挥防治PD的作用。研究结果预测了地黄饮子治疗PD的作用机制可能与调节GM动态的相对平衡有关，可为从肠道微环境角度揭示补肾法改善PD作用机制的研究提供参考。     

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血浆HPA轴及脑组织HSP70表达的干预效应研究

目的探讨地黄饮子加减方对大脑中动脉线栓(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠血浆下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA轴)含量及其脑组织热休克蛋白70(heatshock protein 70,HSP70)表达的干预效应。方法 MCAO法制作SD大鼠脑缺血模型,造模成功后第二天开始给予地黄饮子加减方浓缩煎剂灌胃,对照组灌胃等量的生理盐水,连续7天,于最后一次灌胃后1小时取材,放射免疫法检测血浆HPA轴含量,免疫组化法检测脑组织HSP70表达。结果经地黄饮子治疗后:MCAO模型大鼠血浆皮质醇(COR)含量明显低于正常组、模型组,差异有统计学意义(P0.01),促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量均明显高于模型组,差异有统计学意义(P0.05);地黄饮子组较模型组脑组织的HSP70表达更为明显,差异有统计学意义(P0.01);模型组COR含量与脑组织HSP70表达存在显著的正相关关系,CRH、ACTH含量则与HSP70表达无明显相关性,地黄饮子组HPA轴各指标与脑组织HSP70表达无明显相关性。结论地黄饮子加减方可能通过纠正HPA轴的紊乱状态、提高大鼠脑组织HSP70表达等途径在脑缺血急性期发挥神经保护作用。     

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血清HPA轴及其脑组织细胞凋亡表达的干预效应研究

目的探讨地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血清HPA轴含量及其脑组织细胞凋亡表达的干预效应。方法MCAO法制作sD大鼠脑缺血模型,造模成功后第二天开始给予地黄饮子加减方浓缩煎剂灌胃,对照组灌胃等量的生理盐水,连续7天,于最后一次灌胃后1小时取材,放射免疫法检测血清HPA轴含量,TUNEL免疫组化法检测脑组织细胞凋亡表达。结果经地黄饮子治疗后：MCAO模型大鼠血清COR含量明显低于正常组、模型组,差异有显著统计学意义（P〈0．01）,ACTH、CRH含量均明显高于模型组,差异有显著统计学意义（P〈0．05）,缺血侧脑组织细胞凋亡表达较模型组明显减少,差异有显著统计学意义（P〈0．01）。结论地黄饮子加减方能够通过纠正HPA轴的紊乱状态、抑制脑组织细胞凋亡表达等作用机制在脑缺血急性期发挥减轻脑损伤、改善预后的作用。     

地黄饮子对AD模型大鼠定位航行学习记忆的影响

目的:观察中医古方地黄饮子改善老年性痴呆模型大鼠定位航行学习记忆功能的作用强度.方法:应用Morris水迷宫检测地黄饮子对D-半乳糖致亚急性衰老合并右侧海马CA1区注射凝聚态Aβ1-40所致AD模型大鼠定位航行学习记忆改善情况.结果表明:地黄饮子能够改善模型大鼠的定位航行学习记忆能力,缩短模型大鼠在水迷宫中定位航行实验逃避潜伏期,提示地黄饮子对AD模型大鼠的定位航行学习记忆能力有一定的改善作用.     

肾虚证动物模型研究进展

肾虚证动物模型一直是中医证候研究的重点,提供与人类疾病类似的肾虚证动物模型,有助于深入研究肾虚证本质及其治疗。近年来建立了不少肾虚证动物模型,然而不同的肾虚证模型特点也不尽相同。对临床常见肾虚证型,从肾阳虚、肾阴虚、肾精不足、肾气虚方面进行概述,并对其存在的不足进行思考,以期为肾虚证动物模型的构建及其证候生物学机制研究提供新思路。     

心肌缺血型冠心病肾虚血瘀病证结合模型研究

目的探讨手术方法建立心肌缺血型冠心病与肾虚血瘀病证结合模型的可行性。方法采取惊吓、置于寒冷环境并皮下注射氢化可的松的方法制备非疾病肾虚血瘀证候模型,结扎冠状动脉前降支并注射氢化可的松建立心肌缺血型冠心病肾虚血瘀病证结合模型。实验大鼠分为肾虚血瘀组、病证结合组和正常组,每组5只。观察大鼠造模前后体温、体质量、呼吸频率、心率、全血黏度、卡松黏度。依据中医临床肾虚血瘀证诊断标准,对2种模型中医证候进行比较。结果与正常组和本组造模前比较,肾虚血瘀组、病证结合组大鼠造模后均出现体温下降、呼吸频率增快(P0.05);与正常组比较,病证结合组、肾虚血瘀组体质量减轻或者增长缓慢、全血黏度及卡松黏度升高(P0.05,P0.01);造模两组间全血黏度、心电图比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 2种模型在中医证候方面无明显差异,符合中医临床肾虚血瘀证的诊断标准。     

肾虚血瘀证树鼩动物模型构建初探

目的:探索肾虚血瘀证树鼩动物模型的制做方法。方法:将树鼩随机分为对照组、模型1组(腹腔注射氢化可的松结合肾上腺素)和模型2组(腹腔注射氢化可的松结合角叉菜胶),5只/组,通过观察树鼩表征、脏器指数、血液流变学、下丘脑-垂体-靶腺轴(甲状腺轴、性腺轴)激素水平的变化情况评判肾虚血瘀证模型是否建立。结果:造模后动物均出现"耗竭"现象,肾、前列腺、脾、睾丸不同程度肿大,模型2组甲状腺萎缩;模型1组血清中雌二醇(E2)和睾酮(T)水平及模型2组中甲状腺激素(FT3、FT4)、E2水平显著下降;血液流变学结果显示模型2组血液黏度和红细胞压积增高,而模型1组无显著变化。结论:腹腔注射氢化可的松与肾上腺素的方法能够较好地模拟肾虚血瘀证树鼩动物模型。     

地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响

目的探讨地黄饮子对AD模型大鼠的学习记忆及炎性反应的影响。方法模型组以D-半乳糖腹腔注射合并Aβ注射海马制备AD动物模型,各治疗组分别在造模的同时灌胃地黄饮子和抗脑衰胶囊、哈伯因。运用MORRIS水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力及采用免疫组化方法观察各组大鼠海马神经元TNF-α,IL-1α蛋白的变化。结果治疗组能缩短潜伏期、增加过台次数,第四象限与其它象限游泳距离之间比较也有差异,说明地黄饮子能改善痴呆大鼠空间探索记忆能力,低剂量组已经显效,高剂量组效果更为明显。地黄饮子治疗组IL-1α,TNF-α含量显著下降,且具有剂量差别。结论地黄饮子对痴呆模型大鼠学习记忆空间探索能力有改善作用及能有效抑制海马神经元炎性反应,其作用机理可能与地黄饮子抑制海马神经元TNF-α,IL-1α蛋白,抑制小胶质细胞活性进而减轻海马神经元的炎症损伤有关。     

地黄饮子对老年性痴呆模型大鼠脑组织NO、NOS含量及行为学的影响

目的:探讨地黄饮子对老年性痴呆(AD)模型大鼠脑组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及行为学的改善作用.方法:用D-半乳糖(D-Gal)腹腔注射和鹅膏蕈氨酸(iboteni cacid,IBO)脑内Meynert基底核(nbM)注射相结合诱导大鼠模型.分别用程控穿梭箱、酶法检测各组实验大鼠学习记忆、脑组织NO、NOS的变化.结果:AD模型组大鼠学习记忆能力降低,脑组织NO、NOS含量显著升高;地黄饮子与西药对照组较AD模型组学习记忆能力显著提高,脑组织NO、NOS含量显著降低.结论:用D-Cal合IB0结合诱导可建立AD动物模型,地黄饮子可提高AD大鼠学习记忆能力、降低脑组织NO、NOS含量.     

复方地黄颗粒对帕金森病模型大鼠胃窦Cx43及部分胃肠激素表达的影响

目的 探讨阴虚动风证帕金森病(PD)病证一体动物模型小肠碳末推进率、胃窦连接蛋白(Cx43)的表达、血清中部分胃肠激素的变化及复方地黄颗粒的干预作用.方法 SD大鼠右侧黑质注射6-羟基多巴胺制备阴虚动风证PD大鼠模型,检测PD模型大鼠、复方地黄颗粒组大鼠小肠碳末推进率,免疫组化法检测胃窦部位Cx43的表达,酶联免疫吸附...     

补肾方药对老年大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质所属组织结构形态变化的影响

目的:观察左归丸、右归丸对老年大鼠HPA轴所属组织形态结构变化的影响。方法:以自然衰老大鼠为肾虚证动物模型,HE染色,光镜观察HPA轴所属组织结构的增龄性变化,以及补肾方药(左、右归丸)的改善作用。结果:老年大鼠垂体、下丘脑、肾上腺皮质组织形态结构呈现明显的老年性退化,左归丸、右归丸能不同程度改善这些组织结构。结论:左归丸、右归丸能从组织结构形态方面延缓下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴的老年性变化。     

加减地黄饮子对痴呆大鼠行为学及脑内细胞凋亡影响的研究

采用D -半乳糖拟衰老和在大鼠脑内海马区注射喹啉酸造成海马损伤两者相结合的办法 ,较好的模拟了AD(阿尔茨海默氏病 )的病理过程 ,并采用古方地黄饮子 ,结合老年性痴呆的病机进行加减变化 ,用于造模痴呆大鼠灌胃治疗。结果表明 :模型组行为学改变较其它各组有明显差异 ,有成簇凋亡细胞出现 ,为模型成功提供了佐证 ,细胞凋亡参与了AD的病理过程 ,加减地黄饮子可能会影响到细胞凋亡的发生。     

地黄饮子治疗帕金森病的机理与临床探讨

目的：对中医经典名方地黄饮子治疗帕金森病进行理论分析和临床观察。方法：分析历代医家对帕金森病的病因病机认识,结合临床观察,发现帕金森病的病机为本虚标实,本虚以肾虚为主,肾阴、肾阳亏虚,标实以风、痰为主。地黄饮子滋阴、补阳、化痰并用,恰合帕金森病的病机,故临床应用地黄饮子治疗帕金森病。结果：地黄饮子治疗帕金森病临床疗效较好。结论：帕金森病的病机以肾虚为本,风痰为标,地黄饮子治疗帕金森病临床疗效确切。     

病证结合动物模型研究的现状及思考

通过查阅文献资料,对病证结合动物模型的意义、制备方法及评价作一整体的综述,对现有的问题进行分析总结,病证结合动物模型制备的理论有2个:(1)基于"证"的概念理论的病证结合动物模型,制备方法分为2种:诱发疾病病证结合模型和自发遗传性疾病证侯模型;(2)基于西医疾病的模型叠加中医证候因素理论的病证结合动物模型,根据造模因素复合病证结合模型,制备方法也分为2种:"西医病+中医传统病因"模型和"西医病+病理生理"模型。要不断制备出更完美的模型,才有助于中西医学者更深入地研究贴近人类各种疾病的模型。     

病证结合动物模型的思考

目前常用的病证结合动物模型造模方法有:建立疾病模型,动态观察模型出现的证候;辨析自发性疾病动物模型证候;以方测证判定疾病模型证型;建立证候模型检测特定指标认为存在某种疾病;疾病模型与证候模型相叠加。故在动物模型复制原则的基础上,对上述造模方法进行分析,探析病证结合动物模型存在的问题,并提出一些解决问题的思路:造模时应考虑人与动物模型的差异,重视单因素与多因素造模对模型的影响,应统一同一证候造模方法并建立统一的评价体系。     

老年期痴呆典型证候的演变机制研究

目的通过构建老年期痴呆肾虚精亏证和痰浊阻窍证动物模型,观察大鼠睾酮(T)、白介素6(IL-6)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量的变化,探讨老年期痴呆典型证候演变规律。方法先分次永久结扎双侧颈总动脉,然后腹腔注射D-半乳糖建立老年期痴呆大鼠模型,在疾病造模的同时,分别采用过度房劳体虚和投喂高脂饲料的方法,建立病证结合肾虚精亏证和痰浊阻窍证的大鼠模型。造模结束后对各组大鼠进行行为学检测,并测定其血清内T、IL-6和GSH-Px的含量。结果与正常组比较,老年期痴呆组、肾虚精亏证组、痰浊阻窍证组大鼠的学习记忆能力以及空间搜索能力均下降(P0.05);与老年期痴呆组相比,肾虚精亏证组大鼠的T和GSH-Px含量明显降低(P0.05),痰浊阻窍证组大鼠的IL-6含量显著升高(P0.05)。结论老年期痴呆典型证候演变以肾虚为主线,贯穿于痴呆发病始终,表现出因虚致实、虚实夹杂的特点。     

加减地黄饮子对Aβ1-40所致AD大鼠学习记忆及抗氧化作用的影响

目的:观察加减地黄饮子对实验性痴呆大鼠的防治作用.方法:凝聚态Aβ1-40直接定向注射右侧海马CA1区造成AD大鼠模型,以大鼠跳台实验检测各组大鼠学习记忆行为,测定脑组织中SOD活性、MDA及脂褐素含量,光镜观察海马病理变化.结果:加减地黄饮子可以通过清除自由基,提高抗氧化能力,改善细胞的退化、变性程度,提高Aβ致痴呆鼠的学习记忆能力.结论:加减地黄饮子可以通过影响自由基水平对老年性痴呆大鼠有一定的防治作用.