二冬二母二草汤对慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压平滑肌细胞增殖的影响及作用机制研究

目的:研究二冬二母二草汤对慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Diseases,COPD)相关肺动脉高压大鼠模型的肺动脉平滑肌细胞(Pulmonary Arterial Smooth Muscle Cells,PASMCs)增殖的影响及作用机制。方法:体外培养PASMCs,分为对照组、模型组、二冬二母二草汤组(低、中、高浓度组)、Rho激酶抑制剂组。采用CCK-8方法测定PASMCs增殖水平,通过Western blot测定PASMCs中ROCK1、ROCK2表达水平。结果:与正常对照组相比,模型组的PASMCs增殖及ROCK1、ROCK2表达均明显升高(P<0.01);与模型组相比,低、中、高剂量组及Rho激酶抑制剂组的PASMCs增殖及ROCK1、ROCK2表达均明显降低(P<0.01或P<0.05),其中以高剂量组及Rho激酶抑制剂组降低显著。结论:二冬二母二草汤可明显抑制COPD相关肺动脉高压大鼠的PASMCs增殖,作用机制与调节Rho激酶信号通路有关。     

法舒地尔对VEGF诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖是肺动脉高压（PAH）中肺动脉重塑的一个重要因素.各种刺激均可促进PASMCs的移行和增殖,导致动脉壁增厚和PAH的形成[1].血管内皮生长因子（VEGF）可以促进PASMCs的增殖[2,3],在严重的PAH发病过程中,VEGF控制着毛细血管前动脉的重构[4].小G蛋白Rho及其效应物Rho激酶（ROCK）信号通路在各种细胞功能中,包括血管平滑肌细胞的收缩和增殖中都起着重要作用.     

川芎平喘合剂对COPD相关肺动脉高压大鼠NO、ET-1的影响

目的:评价川芎平喘合剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关肺动脉高压大鼠肺动脉压的作用及对一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)的影响。方法:将SD大鼠60只随机分为对照组、模型组、川芎平喘合剂组、法舒地尔组。采用烟熏联合脂多糖并给予低氧环境方法复制COPD相关肺动脉高压模型。采用多通道生物信号采集系统测定大鼠平均肺动脉压力,采用硝酸还原酶法测定NO,酶联免疫吸附法测定ET-1。结果:模型组平均肺动脉压(m PAP)高于对照组(P0.01),法舒地尔、川芎平喘合剂组m PAP均较模型组下降(P0.05);模型组、川芎平喘合剂组右心肥大指数(RVHI)高于对照组(P0.05),川芎平喘合剂组、法舒地尔组RVHI与模型组比较差异无统计学意义(P0.05);模型组较对照组NO水平降低,ET-1水平升高(P0.01);川芎平喘合剂组、法舒地尔组较模型组NO水平升高,ET-1水平降低(P0.05)。结论:川芎平喘合剂对COPD相关PAH具有治疗作用,作用机制与调节肺组织ET-1、NO表达有关。     

加味川芎平喘合剂治疗痰瘀阻肺型慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并肺动脉高压临床观察

目的 观察加味川芎平喘合剂治疗痰瘀阻肺型慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并肺动脉高压的临床疗效。方法 将80例痰瘀阻肺型AECOPD合并肺动脉高压患者按照随机数字表法分为2组。对照组40例予西医常规治疗;治疗组40例在对照组治疗基础上应用加味川芎平喘合剂。2组均治疗14 d。比较2组疗效;观察2组治疗前后中医证候评分变化;观察2组治疗前后肺动脉压及血清Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)水平变化。结果 治疗组总有效率95. 0%(38/40),对照组总有效率90. 0%(36/40),2组疗效比较差异无统计学意义(P 0. 05)。治疗后2组中医证候评分及总评分均较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗组降低更明显(P 0. 05)。治疗后2组肺动脉压、血清ROCK1水平均较本组治疗前降低(P 0. 05),且治疗组降低更明显(P 0. 05)。结论 加味川芎平喘合剂治疗痰瘀阻肺型AECOPD合并肺动脉高压,可改善患者中医证候,降低肺动脉压,其机制可能与降低血清ROCK1水平、改善血管内皮收缩及重构功能有关。     

活血化瘀祛痰法对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

目的:观察活血化瘀祛痰法对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压大鼠的影响，探讨其作用机制。方法:SD大鼠60只随机分为假手术组、模型组、中药复方组、法舒地尔组。采用MCT腹腔注射诱导肺动脉高压大鼠模型。观察大鼠一般状态，采用生物信号采集系统测定肺动脉压力，HE染色观察肺血管病理形态变化，Western blot法检测肺动脉组织ROCKⅠ、ROCKⅡ蛋白表达。结果:与假手术组比较，模型组右心肥大指数(RVHI)、肺动脉压力、肺血管增殖程度高于假手术组(P<0.05或P<0.01),中药复方组、法舒地尔组大鼠RVHI、肺动脉压力、肺血管壁厚度均低于模型组(P<0.05或P<0.01)。模型组ROCKⅠ、ROCKⅡ水平均较假手术组升高(P<0.05或P<0.01);中药复方组、法舒地尔组ROCKⅠ、ROCKⅡ水平低于模型组(P<0.05或P<0.01);中药复方组与法舒地尔组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论:活血化瘀祛痰法对MCT诱导的肺动脉高压具有一定疗效，可降低肺动脉压力、改善肺血管重构，其机制与调节Rho激酶信号通路有关。     

血府逐瘀汤含药血清对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的研究血府逐瘀汤含药血清对低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。方法低氧诱导大鼠PASMCs增殖,设置正常对照组、低氧模型组、血府逐瘀低剂量组、血府逐瘀高剂量组和NVP-BEZ235组,血府逐瘀低、高剂量组含药血清浓度分别为5%和20%。运用CCK-8法检测不同低氧时间和药物干预对于PASMCs增殖的影响,Western Blot检测细胞p-Akt、p-mTOR和PCNA表达。结果低氧培养36 h时PASMCs OD值最高,且高于常氧培养(P0.01);与正常对照组比较,低氧模型组OD值明显升高(P0.01),p-AKT、p-mTOR、PCNA表达增加(P0.05);与低氧模型组比较,血府逐瘀高剂量组和NVP-BEZ235组OD值不同程度降低(P0.01),各药物组p-AKT、p-mTOR、PCNA表达减少(P0.05);与血府逐瘀低剂量组比较,NVP-BEZ235组p-AKT、p-mTOR、PCNA表达减少(P0.05)。结论血府逐瘀汤含药血清可以抑制低氧诱导的大鼠PASMCs增殖,可能通过阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路活化并下调PCNA表达而发挥作用。     

金芪枳术汤对糖尿病胃轻瘫GK大鼠胃动力的影响

目的观察金芪枳术汤对糖尿病胃轻瘫(DGP)GK大鼠胃动力的影响,探讨其作用机制。方法 80只雄性GK大鼠随机选取12只作为正常组,其余68只给予高糖高脂饲料不规则喂养8周制备DGP模型,成模大鼠随机分为模型组、阳性药组和金芪枳术汤低、中、高剂量组,干预12周,测定胃内色素残留率,ELISA检测血浆多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACh)、5-羟色胺(5-HT)含量,HE染色观察胃窦组织病理变化,透射电镜观察胃窦组织黏膜层超微结构,Western blot检测胃窦组织Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组胃内色素残留率升高,DA、ACh、5-HT含量降低,Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低(P0.01);与模型组比较,阳性药组和金芪枳术汤高剂量组胃内色素残留率降低,DA、ACh、5-HT含量明显升高,Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),胃窦组织病理变化和黏膜层超微结构明显改善;与阳性药组比较,金芪枳术汤高剂量组胃内色素残留率、DA含量及Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达差异均无统计学意义(P0.05);与金芪枳术汤低剂量组比较,金芪枳术汤高剂量组胃内色素残留率明显降低,DA、ACh、5-HT含量明显升高,Rho A、ROCK1、ROCK2蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论金芪枳术汤能提高DGP大鼠胃动力,促进胃排空,改善和修复胃窦组织黏膜层损伤,这可能与其调节Rho A/ROCK信号通路蛋白表达有关。     

川芎平喘合剂对慢性肺源性心脏病失代偿期患者一氧化氮、内皮素及肺动脉高压的影响

目的探讨川芎平喘合剂对慢性肺源性心脏病(肺心病)患者一氧化氮、内皮素及肺动脉高压的影响。方法将符合诊断标准的76例患者随机分为治疗组40例和对照组36例。对照组选用敏感抗生素,常规止咳、祛痰、平喘,心功能不全者加用地高辛或利尿剂。治疗组除按对照组上述方法处理外,加用川芎平喘合剂,两组疗程均为15天。结果①川芎平喘合剂治疗组血清一氧化氮含量在第8天时较对照组及治疗前明显升高(P<0.01)而第15天时升高不明显;②治疗组较对照组血清内皮素含量在第8天及第15天均明显升高(P<0.05;P<0.01);③治疗组肺动脉压下降在第8天时与对照组比较无统计学意义(P>0.05),在第15天时与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论川芎平喘合剂能调节机体血清一氧化氮和内皮素的平衡,降低肺动脉高压,对治疗慢性肺源性心脏病具有重要的临床意义。     

川芎平喘合剂对慢性肺源性心脏病失代偿期患者一氧化氮、内皮素及肺动脉高压的影响

为了探讨川芎平喘合剂对慢性肺源性心脏病（肺心病）患者一氧化氮、内皮素及肺动脉高压的影响。将符合诊断标准的76例患者随机分为治疗组40例和对照组36例。对照组选用敏感抗生素，常规止咳、祛痰、平喘，心功能不全者加用地高辛或利尿剂。治疗组除按对照组上述方法处理外，加用川芎平喘合剂，2组疗程均为15d。结果，①川芎平喘合剂治疗组血清一氧化氮含量在第8天时较对照组及治疗前明显升高（P〈0．01），而第15天时升高不明显；②治疗组较对照组血清内皮素含量在第8天及第15天均明显升高（P〈0．05，P〈0．01）；③治疗组肺动脉压下降在第8天时与对照组比较无统计学意义（P〉0．05），在第15天时与对照组比较有显著差异（P〈0.05）。说明川芎平喘合剂能调节机体血清一氧化氮和内皮素的平衡，降低肺动脉高压，对治疗慢性肺源性心脏病具有重要的临床意义。     

槲皮素对原代培养的牛肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂槲皮素对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:用原代培养的小牛肺动脉平滑肌细胞,采用 MTT 比色法、流式细胞术、细胞计数、Giemsa染色对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响进行观察。结果:与对照组相比,槲皮素处理组可显著地抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,而且主要是细胞周期的 G_0/G_1到 S 期受抑制。结论:槲皮素可显著地抑制肺动脉平滑肌细胞的增殖,其机制可能是其对酪氨酸蛋白激酶的抑制作用。     

复方薤白胶囊对肺动脉高压大鼠模型MMP-2和TIMP-1的影响

目的探讨复方薤白胶囊对野百合碱所诱导的肺动脉高压大鼠模型基质金属蛋白酶MMP-2及其抑制剂TIMP-1的影响。方法 40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、复方薤白胶囊高剂量组、复方薤白胶囊低剂量组。采用腹腔注射野百碱（MCT）的方法制作肺动脉高压动物模型,于造模第2日开始给药,给药7周后测定其平均肺动脉压（mPAP）和平均右心室压（mRVP）,采用免疫组化法测定肺组织MMP-2和TIMP-1的表达。结果模型组mPAP和mRVP明显升高,较正常对照组有非常显著差异,复方薤白胶囊高剂量组和低剂量组mPAP和mRVP较正常组高但较模型组则显著下降;与正常对照组相比,其余各组MMP-2含量明显增加,与模型组相比,复方薤白胶囊高、低剂量组MMP-2含量则显著下降;正常组、模型组、复方薤白胶囊低剂量组之间TIMP-1含量无显著差异,而复方薤白胶囊高剂量组TIMP-1明显增加,与其余各组相比差异有显著性。结论复方薤白胶囊能有效降低MCT诱导肺动脉高压大鼠的肺动脉压,这可能与其减少MMP-2表达,增加TIMP-1含量,降低MMP-2/TIMP-1的比值有关。     

速效平喘合剂对脂多糖诱导的支气管上皮细胞炎症反应和TGF-β1/Smad3通路的影响

目的 探讨速效平喘合剂对脂多糖刺激支气管上皮细胞NCI-H292炎症反应和TGF-β1/Smad3通路的影响。方法 采用脂多糖刺激NCI-H292细胞建立炎症模型，将细胞随机分为空白组、模型组、阳性组以及速效平喘合剂低、中、高剂量组；采用MTT法检测细胞活力和增殖率，ELISA法检测细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平；免疫组化染色法检测细胞因子TGF-β1、Smad泛素调节因子(Smurf2)、Smad3的表达情况。结果 与空白组相比，模型组细胞活力下降，细胞因子IL-1β、IL-8、TGF-β1、TNF-α的分泌量和TGF-β1、Smad3的蛋白表达量均显著升高，Smurf2蛋白表达显著降低。与模型组比较，阳性组、速效平喘合剂低、中、高剂量组可显著逆转上述指标，其中后3组数据指标呈药物浓度依赖性的特点。结论 速效平喘合剂能显著促进气道上皮细胞活力和增殖，其可能通过调控TGF-β1/Smad3信号转导通路，抑制炎症反应水平，发挥其对脂多糖诱导NCI-H292细胞损伤的保护作用。     

益肺活血颗粒对缺氧培养大鼠肺动脉 平滑肌细胞NO,iNOS的影响

目的:观察益肺活血颗粒对缺氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)一氧化氮(NO)产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响。方法:采用组织块贴壁法培养大鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs随机分为常氧组,缺氧组,缺氧+益肺活血颗粒组(7.5,1.5,0.15 g.L-1)。利用硝酸还原酶法测定各组PASMCs NO的产生,RT-PCR测定iNOS mRNA的水平,免疫组化法测定胞内iNOS蛋白的表达量。结果:与单纯常氧组相比,缺氧组PASMCs iNOS转录和翻译增强,NO生成显著升高(P<0.05);且与单纯缺氧组相比,益肺活血颗粒组随着药物浓度的增加,可进一步提高PASMCs iNOS的活性和NO的生成(P<0.05)。结论:益肺活血颗粒可以促进缺氧条件下PASMCs NO产生及iNOS活性和表达,其可能是通过提高iNOS基因的转录和蛋白的表达来实现,从而抑制PASMCs的增殖及介导血管的舒张,在缺氧性肺动脉高压方面有着独特的疗效。     

桂枝茯苓丸对低O2高CO2大鼠肺动脉血管重构的影响及机理

目的:研究桂枝茯苓丸对肺动脉高压大鼠血管重构的影响及机理。方法:复制低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型后,右心导管法测肺动脉压;免疫组化法检测Ⅰ型胶原、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)的表达;原位杂交法检测c-junmRNA;c-fosmRNA的表达。结果:桂枝茯苓丸干预组的各项指标均显著低于模型组。结论:桂枝茯苓丸阻断ERK信号通路,可抑制肺动脉高压血管重构。     

氧化苦参碱与安倍生坦联用对野百合碱致肺动脉高压大鼠右心室重构的作用

目的探讨氧化苦参碱联合安倍生坦调控RhoA/ROCK蛋白表达对野百合碱致肺动脉高压大鼠右心室心肌肥厚的抑制作用。方法将60只雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氧化苦参碱组、安倍生坦组、氧化苦参碱联合安倍生坦组(25 mg/kg+10 mg/kg)、氧化苦参碱联合安倍生坦组(50 mg/kg+10 mg/kg)。模型组及各用药组单次皮下注射野百合碱(60 mg/kg),正常组给予等量的生理盐水,氧化苦参碱、安倍生坦及氧化苦参碱联合安倍生坦均在皮下注射野百合碱1 h后灌胃给药。4周后,分离大鼠右心室(RV)、左心室+室间隔(LV+S)并称质量,计算RV/(LV+S)的比值,HE染色观察心肌病理变化,Western blot检测右心室组织中RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠终末体质量降低,大鼠心脏肥厚指数增加;与模型组比较,氧化苦参碱联合安倍生坦连续给药4周后,RV/(LV+S)的比值降低,终末体质量增加,右心室病理变化有所改善,右心室组织中RhoA、ROCK1和ROCK2的蛋白表达降低。结论氧化苦参碱联合安倍生坦能够抑制野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠右心室重构,其机制可能与其抑制RohA/ROCK通路有关。     

牛磺酸对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:观察Tau对肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡作用的影响,并探讨其机制是否通过死亡受体途径。方法:取Wistar雄性大鼠肺动脉平滑肌细胞培养;分为正常组(control)、凋亡组(SD)、给药组(Taurine高、中、低剂量)。用吖啶橙(AO)法,在荧光显微镜下观察6孔板细胞核形态学变化;用Western-blot法分别测定Bax,Bcl-2,Procaspase-3,Fas的蛋白表达变化。结果:吖啶橙法3组结果可以看出,凋亡组和Tau给药组的细胞核皱缩,形成凋亡小体。Western-blot法测定显示Tau升高Bax和Fas蛋白表达,降低Procaspase-3和Bcl-2的表达。结论:Tau可能通过死亡受体途径诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡。     

延胡索乙素对大鼠低O_2高CO_2肺动脉高压及FAK、ERK和Caspase 3表达的影响

目的:研究延胡索乙素对慢性低O2高CO2性肺动脉高压的作用及粘着酶激酶FAK、ERK和凋亡蛋白酶Caspase 3表达的影响。方法:常压低O2高CO2舱制备低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型,延胡索乙素ip 40mg/kg。右心导管法测肺动脉压;光镜下测定肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)、肺细小动脉中膜厚度(PAMT);免疫组化法检测细胞外信号调节激酶(ERK2)、Ⅰ型胶原的表达量;原位杂交法检测FAKmRNA、Caspase3 mRNA的表达量。结果:延胡索乙素组mPAP显著低于低O2高CO2组;延胡索乙素组的WT/TA、PAMT也显著低于低O2高CO2组;延胡索乙素组肺细小动脉ERK2、I型胶原的相对含量、FAKm-RNA、Caspase3 mRNA的表达均显著低于低O2高CO2组。结论:延胡索乙素能明显抑制肺动脉高压的形成,延缓肺动脉血管的重构,抑制FAK表达、增强Caspase3的表达可能是其重要的机制之一。     

益气活血中药对常压缺氧性大鼠肺动脉压的影响

目的:探讨益气活血中药(下简称中药)对低氧性肺动脉压升高的干预作用。方法:将实验动物分为5组,即正常组、缺氧组、中药低剂量组(0.45 g/kg)、中药中剂量组(1.35 g/kg)和中药高剂量组 (2.70 g/kg)。通过常压间断缺氧21天建立大鼠肺动脉高压模型,采用右心导管法检测肺血流动力学指标,观察中药对肺血流动力学的影响。结果:中药低、中、高3个剂量组肺动脉压均降低,心功能及肺血液流变学得到改善,其中中、高剂量组效果较佳。结论:益气活血中药可防止低氧性肺动脉高压的形成。     

血府逐瘀汤对野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠的作用研究

目的研究血府逐瘀汤对野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠的作用。方法将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、西地那非组,每组10只。除对照组外,其余组均按50 mg/kg一次性皮下注射野百合碱制作肺动脉高压模型。从模型制备后当天开始,中药低、中、高剂量组分别给予血府逐瘀汤制成的颗粒剂6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg灌胃,西地那非组给予西地那非10 mg/kg灌胃,对照组及模型组给予等量蒸馏水灌胃,均1次/d,连续28 d。灌胃结束后,测量各组大鼠右心室收缩压、左心室收缩压和心率,检测血浆一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)水平,处死大鼠后测量大鼠心脏质量,计算右心室肥厚指数。结果模型组大鼠右心室收缩压显著高于对照组(P0.05),中药各剂量组和西地那非组大鼠右心室收缩压均显著低于模型组(P均0.05),各组间左心室收缩压、心率比较差异均无统计学意义(P均0.05)。模型组大鼠血浆NO水平显著低于对照组(P0.05),中药各剂量组和西地那非组大鼠血浆NO水平均显著高于模型组(P均0.05);模型组大鼠血浆ET-1水平及心脏质量、右心室肥厚指数均显著高于对照组(P均0.05),中药各剂量组和西地那非组大鼠血浆ET-1水平及心脏质量、右心室肥厚指数均显著低于模型组(P均0.05)。结论血府逐瘀汤能够缓解野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压。     

川芎嗪对肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

目的:观察川芎嗪对野百合碱(MCT)引起的肺动脉高压大鼠肺动脉压力及肺血管重构的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为3组各10只。MCT组和治疗组建立大鼠肺动脉高压模型。对照组、MCT组以生理盐水灌胃,每天2 mL,每天1次,连续20天;治疗组以川芎嗪80 mg/(kg·d),每天灌胃1次,连续20天。检测平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥大指数(RVHI)、肺血管增殖细胞核抗原(PCNA)和α-平滑肌肌动蛋(α-SMA)的表达。结果:对照组大鼠的mPAP低于MCT组(P0.01);治疗组、对照组大鼠的mPAP、RVHI较MCT组降低(P0.01);MCT组肺血管PCNA及α-SMA表达较治疗组、对照组增加。结论:川芎嗪可降低MCT引起的肺动脉高压大鼠肺动脉压力,减轻大鼠肺动脉重构。