补肾填精方对去卵巢骨质疏松模型大鼠胶原代谢的影响

目的通过对比观察补肾填精方左归丸和左归丸去补阳药对去卵巢骨质疏松模型大鼠胶原代谢的影响,探讨左归丸阳中求阴法防治骨质疏松症的作用机制。方法取雌性SD大鼠32只,采用双侧卵巢摘除术建立骨质疏松模型,随机分为假手术组(Sham)、模型对照组(OVX)、左归丸组(ZGP)、左归丸去补阳药组(ZGPQ),每组8只。灌胃给药12周后收集各组大鼠血清和股骨组织,采用ELISA法检测血清中PICP和ICTP水平,采用Masson染色法检测股骨组织胶原纤维形态,采用免疫组织化学染色法检测股骨组织ColⅠ蛋白表达水平。结果与Sham比较,OVX血清PICP和ICTP水平显著升高(P0.01)、股骨组织ColⅠ蛋白表达显著降低;与OVX比较,补肾填精方下调血清PICP和ICTP水平(P0.05,P0.01)、上调股骨组织ColⅠ蛋白表达。结论补肾填精方左归丸对去卵巢引起的骨质疏松症具有一定的防治作用,其作用机制可能与其干预胶原代谢有关,全方效果较为明显。     

补肾填精方对快速老化模型小鼠活化的T细胞转录核因子蛋白表达的影响

目的观察补肾填精方左归丸对快速老化模型小鼠骨组织破骨细胞功能的影响,探讨其作用机制是否与干预活化的T细胞转录核因子蛋白表达有关。方法取SAMR1同源对照组小鼠8只为对照组(SAMR1),取SAMP6衰老模型小鼠16只,随机分为模型组(SAMP6)、左归丸组(ZGP),每组8只。灌胃给药12周后收集各组小鼠股骨组织,采用HE染色法观察股骨组织形态,采用TRAP染色法观察股骨组织破骨细胞数,采用Western-blot法检测股骨组织NFAT2蛋白表达水平。结果与SAMR1比较,SAMP6股骨组织形态明显改变、破骨细胞数增多、NFAT2蛋白表达显著升高;与SAMP6比较,补肾填精方能够部分改善模型小鼠的股骨组织形态、减少破骨细胞数、下调NFAT2蛋白表达。结论补肾填精方左归丸对快速老化模型小鼠骨质疏松具有一定的防治作用,其作用机制可能与其通过干预NFAT2蛋白表达调节破骨细胞功能有关。     

左归丸对去卵巢致骨质疏松症模型大鼠破骨细胞活性及miR-133b-3p/RhoA表达的影响

目的研究左归丸对去卵巢致骨质疏松症大鼠破骨细胞中miR-133b-3p、RAS同源基因家族成员A(RhoA)表达的影响, 探讨其作用机制。方法将SD雌性大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、左归丸组, 每组6只。模型组、左归丸组采用卵巢切除术构建大鼠骨质疏松症模型。左归丸组灌胃左归丸水煎液10 g/kg, 连续灌胃12周。采用比色法测定大鼠血清钙、磷水平, ELISA法检测ALP水平;骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度。培养各组破骨细胞, 采用Western blot法检测RANKL、RUNX2蛋白表达。对各组大鼠骨组织进行miRNA测序及差异表达分析。采用miR-133b-3p类似物及其对照处理破骨细胞, 采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)方法检测破骨细胞增殖活力, 采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞活性, 双荧光素酶报告基因实验检测miR-133b-3p与RhoA的靶向关系, 采用miR-133b-3p类似物及RhoA共表达的"挽救"实验研究左归丸影响破骨细胞活性的分子调控机制。结果与模型组比较, 左归丸组骨密度增加(P<0.05或P<0.01), 血清钙、...     

补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清IL-10、TNF-α水平的影响

目的:观察补骨脂-淫羊藿药对对去卵巢骨质疏松型大鼠血清中IL-10、TNF-α水平的影响,探讨补骨脂-淫羊藿药对防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法:3月龄SD雌性大鼠40只,分为假手术组、模型组、壮骨止痛胶囊组、阳性对照组、补骨脂-淫羊藿药对组,采用去卵巢3个月制备绝经后骨质疏松大鼠模型,连续灌胃13周后检测比较各组大鼠血清IL-10、TNF-α水平。结果:与模型组比较,补骨脂-淫羊藿药对组能提高骨质疏松模型大鼠血清IL-10水平,但差异无统计学意义(P0.05);补骨脂-淫羊藿药对组能显著降低模型大鼠血清TNF-α水平,差异有统计学意义(P0.01)。结论:补骨脂-淫羊藿药对可以抑制骨吸收,调节成骨细胞与破骨细胞的功能活动,使成骨细胞活动加剧,破骨细胞活动减弱,从而使骨吸收/骨形成代谢保持动态平衡。     

左归丸对去卵巢大鼠骨组织降钙素受体蛋白表达的影响

目的:探究左归丸对去卵巢大鼠骨组织中降钙素受体蛋白(CTR)表达的影响。方法:制备去卵巢大鼠模型,实验分为假手术组、去卵巢组、左归丸组。采用ELISA法检测血清中ALP和TRAP含量,免疫组织化学染色法检测股骨组织ALP蛋白表达,Western Blot法检测股骨组织CTR蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,去卵巢组血清中ALP和TRAP含量明显升高(P0.01),股骨组织ALP和CTR蛋白表达明显下降;与去卵巢组比较,左归丸组血清中ALP和TRAP明显降低(P0.05),股骨组织ALP和CTR蛋白表达明显升高。结论:左归丸能明显降低血清中ALP和TRAP的含量,显著升高ALP和CTR蛋白表达的水平,从而有效防治绝经后骨质疏松症。     

基于ER/ERK信号通路研究左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞功能的影响

目的:对比观察左归丸和左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞功能的影响,从而部分阐明"阳中求阴"配伍防治骨质疏松的作用机制。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸、左归丸去补阳药含药血清,选用雌激素受体拮抗剂ICI182780共孵,阻断ER受体后检测左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。采用MTT法检测24 h、48 h、72 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞增殖的影响,采用改良钙钴染色法和茜素红染色法分别观察48 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对成骨细胞ALP活性和矿化结节的影响,采用Western-blot法检测48 h左归丸、左归丸去补阳药含药血清对ERα、ERK、p-ERK和Osterix蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,左归丸组(9.68 g/kg)促进成骨细胞增殖,提高成骨细胞ALP活性和矿化结节数量,上调ERα、p-ERK和Osterix蛋白表达。ICI 182780阻断ER受体后,左归丸含药血清促成骨细胞增殖、分化和矿化的特性明显下降,ERα和p-ERK蛋白表达降低,相关转录因子Osterix的表达也被部分抑制。与空白对照组比较,左归丸去补阳药组(7.47 g/kg)未呈现促MC3T3-E1细胞增殖作用,可促进成骨细胞ALP活性和矿化结节形成数量增多,左归丸组明显优于左归丸去补阳药组,对ERα、p-ERK和Osterix蛋白表达影响不明显。结论:左归丸含药血清可以促进成骨细胞增殖、分化和矿化,机制可能与其上调成骨细胞ER受体激活ERK信号通路调控转录因子osterix有关;全方效果较好,部分揭示左归丸"阳中求阴"配伍防治骨质疏松的作用机制可能与其影响成骨细胞增殖和部分影响成骨细胞分化和矿化功能密切相关。     

红曲对去卵巢大鼠骨质疏松模型血清ALP,TRAP及骨组织TNF-α,RANK表达的影响

目的:明确红曲对去卵巢大鼠骨质疏松模型血清ALP,TRAP及骨组织TNF-α,RANK表达的影响。方法:取12周龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为结合雌激素组、红曲组、模型组、假手术组,每组10只。前三组行完整双侧卵巢摘除术,假手术组仅打开腹腔,不切除卵巢。灌胃12周后,处死各组动物,采用多光谱成像系统检测骨密度,用ELISA法测定各组大鼠血清中ALP及TRAP,用Image Pro Plus对免疫组化染色图像结果进行定量分析。结果:红曲组TNF-α免疫组化表达水平低于模型组(P0.05),红曲组RANK免疫组化表达水平低于模型组(P0.05)。结论:红曲可以提高血清ALP表达水平,降低血清TRAP表达水平,能够通过降低TNF-α水平及RANK水平来提高去卵巢大鼠骨密度,其机理与雌激素类似,可能与成骨细胞及破骨细胞活跃程度有关。     

左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肝脏抗氧化能力的影响

目的:探讨左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠肝脏抗氧化能力的影响。方法:手术摘除2月龄SD大鼠双侧卵巢,术后验证造模成功。以左归丸、右归丸、两方共同药、滋阴药、补阳药和阳性对照药补佳乐、蒸馏水给大鼠灌胃。12周后处死,取大鼠肝脏,用冷冻研磨仪将肝脏研磨成10%肝组织匀浆,分别用分光光度法、TBA法测定肝组织匀浆脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)的含量,分别用羟胺法、酶促法、可见光法测肝组织匀浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)的活性。结果:与模型组比较,左、右归丸及其拆方均能明显降低去卵巢大鼠肝脏LPO、MDA的含量(P0.05或P0.01),明显提高肝脏TSOD、GSH-PX、CAT的活性(P0.01),并且滋阴补肾填精的左归丸组的效果优于右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组(P0.05或P0.01)。结论:左、右归丸及其拆方均可提高去卵巢大鼠肝脏抗氧化能力,其中滋阴补肾填精的左归丸效果最好。     

左归丸与右归丸及其拆方对去卵巢大鼠脂质代谢的影响

目的探讨左归丸与右归丸及其拆方对去卵巢大鼠脂质代谢的影响。方法将90只2月龄雌性SD大鼠随机分为正常组(Control),假手术组(SHAM),模型组(OVX),补佳乐组(BJL),左归丸组(ZGW),右归丸组(YGW),共同药组(GTY),滋阴药组(ZYY),补阳药组(BYY),每组10只。除正常组、假手术组外,其他组手术摘除SD大鼠双侧卵巢制备去卵巢大鼠模型,给药治疗12周。取大鼠血清和肝脏,用酶联免疫吸附测定法检测血清雌激素(E2)的含量,全自动生化分析仪进行血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量的测定,用油红O染色方法观察肝脏脂肪堆积。结果与模型组相比,归丸与右归丸及其拆方均可显著升高血清E2水平(P0.01或P0.05),右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组升高E2水平不及左归丸组(P0.05),归丸与右归丸均可显著降低TC、TG(P0.01或P0.05),左、右归丸及其拆方均可显著降低LDL-C,升高HDL-C(P0.01或P0.05),降低肝脏的脂肪含量。结论左、右归丸及其拆方均可明显改善去卵巢大鼠E2水平降低,其中滋阴补肾填精的左归丸治疗效果较好;左、右归丸对去卵巢大鼠脂质代谢紊乱有一定的改善作用,且二者效果无显著性差异。     

更年春方预防实验性原发性骨质疏松作用机理初探

为探讨更年春方(GNC)预防实验性原发性骨质疏松的作用机理,采用10～12月龄SD雌性大鼠去卵巢建立骨质疏松模型,用GNC灌药4个月,RT-PCR法检测胫骨骨骺ERα、ERβ、OPG、RANKL、osf2／cbfal与TRAP mRNA的表达。结果：大鼠去卵巢后,血清E2水平及胫骨骨骺ERα、ERβ、OPG及osf2／cbfal mRNA的表达均明显下降,RANKL与TRAP mRNA的表达明显增高。GNC治疗后,血清E2水平无明显变化,胫骨骨骺ERβ、OPG及osf2／cbfal mRNA的表达均明显增高,RANKL与TRAP mRNA的表达明显下降。提示GNC可能通过上调胫骨骨骺ERβ mRNA的表达,有促进成骨细胞、抑制破骨细胞的作用,从而对实验性原发性骨质疏松有预防功效。