靶向ER-α36的vshRNA真核表达慢病毒载体的构建、鉴定及其对胃癌细胞增殖的影响

目的:针对雌激素受体(ER)-α36基因的特异性靶序列,构建并鉴定靶向ER-α36基因RNAi慢病毒载体,研究ER-α36沉默后对胃癌细胞增殖的影响。方法:筛选确定的ER-α36基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与慢病毒载体(GV307)连接,测序鉴定。转染293T细胞,包装产生慢病毒,感染胃癌SGC7901细胞株。荧光显微镜下观察SGC7901感染后荧光表达情况,real-time PCR和Western blotting方法检测ER-α36的表达变化。用1×10-10mol/L的17β-雌二醇处理沉默ER-α36的SGC7901细胞,用细胞计数法观察细胞增殖能力的变化及检测相关下游信号通路分子Src、ERK1/2、cyclin D1表达的变化。结果:阳性克隆PCR及测序证明成功构建慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi,倒置显微镜下观察LV-ER-α36-RNAi慢病毒载体感染率达80%以上。Real-time PCR和Western blotting方法证实四环素(Te T)诱导下LV-ER-α36-RNAi明显抑制SGC7901细胞内ER-α36 mRNA和蛋白质的表达。与对照组相比,沉默ER-α36的SGC7901细胞增殖能力减弱,Src、ERK1/2、cyclin D1蛋白表达明显降低,Src蛋白活化能力减弱(P0.05)。结论:我们构建的Te T诱导靶向ER-α36的vshRNA慢病毒载体LVER-α36-RNAi,可明显沉默ER-α36的表达,为研究ER-α36蛋白的作用机理提供实验依据,ER-α36与胃癌细胞等肿瘤细胞的增殖有关。     

IL-6经MEK/ERK途径促进ERα-Ser118磷酸化影响卵巢癌细胞他莫昔芬耐药

目的研究IL-6信号通路对ERα的Ser118位点磷酸化影响、对ERα转录活性的影响及IL-6诱导卵巢癌TAM耐药的机制。方法脂质体转染法获得内源性过表达IL-6的人卵巢癌A2780细胞株和内源性抑制IL-6表达的人卵巢癌CAOV3细胞株,Western blot法检测内源性和外源性IL-6对ERK和ERα的Ser118位点磷酸化影响,MTT法检测IL-6的MEK/ERK信号通路对A2780细胞TAM耐药性的影响,荧光素酶活性检测IL-6的MEK/ERK信号通路对ERα转录活性的影响。结果过表达IL-6能上调A2780细胞中ERα-Ser118的磷酸化水平,而抑制IL-6表达下调CAOV3细胞中ERα-Ser118的磷酸化水平;外源性IL-6上调A2780细胞中ERK的磷酸化水平,而MEK1/2特异性抑制剂PD98059则可以逆转IL-6介导的ERK及ERα-Ser118的磷酸化;PD98059可明显降低IL-6导致的A2890细胞对TAM的耐药性;IL-6明显促进ERα转录活性,而PD98059可逆转这一作用。结论 IL-6经MEK/ERK通路磷酸化ERα的Ser118位点促进ERα转录活性而激活ER途径,诱导OVCA细胞对TAM的耐药性。     

下调ERα36提高他莫昔芬对卵巢癌细胞作用的敏感性

目的探讨新型膜性雌激素受体ERα36在他莫昔芬(tamoxifen, TAM)治疗卵巢癌中的作用。方法转染特异性的siRNA,下调卵巢癌细胞SKOV3、HO8910中ERα36的表达;TAM处理肿瘤细胞后,采用CCK-8、流式细胞术及Western blot等方法检测卵巢癌细胞的增殖、凋亡及相关信号通路关键蛋白的表达。结果 siRNA特异性下调ERα36蛋白的表达;CCK-8检测显示,1μmol/L TAM作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度;不同浓度的TAM作用ERα36下调的肿瘤细胞后,与siRNA对照组相比,肿瘤细胞抑制率明显上升(P0.01);下调ERα36表达后,p-Akt蛋白表达显著下降(P0.01),凋亡相关Caspase-3、Bax蛋白表达量显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达显著降低(P0.01)。结论利用特异性siRNA下调ERα36的表达后,可以增强TAM对卵巢癌细胞作用的敏感性。     

不同来源外泌体与肿瘤发病相关性的研究与进展

文题释义： 干细胞在肿瘤治疗中的作用：干细胞是起源于中胚层的一种多能干细胞,具有在体外易于培养、多向分化性、免疫调节性、低免疫原性及归巢等特性,在组织工程修复中起着重要作用,由于干细胞具有归巢的特性,被认为是肿瘤治疗的首选生物载体,在肿瘤细胞融合中发挥着重要作用。 外泌体：外泌体的生成是细胞在活化过程中或受到外界刺激时,引发的一系列复杂的细胞内分泌变化,向细胞外释放的脂质双层结构囊泡,介导细胞间的广泛交流,参与细胞与组织的生理、病理过程。 背景：外泌体是一种纳米级具有膜结构的囊泡样小体,可以来源于多种不同的细胞,如干细胞、肿瘤细胞、肿瘤干细胞等,外泌体中含有大量生物活性分子,可介导细胞与细胞之间的交流。 目的：综述不同来源外泌体与肿瘤发生的相关研究动态及未来可能研究的方向。 方法：以“外泌体、肿瘤、骨髓间充质干细胞、肿瘤干细胞、HH信号通路”等为中文关键词,以“exosomes,tumors,bone marrow mesenchymal stem cells,caner stem cells,HH signaling pathway”等为英文关键词,检索2015年1月至2019年6月收录在PubMed数据库、中国知网及中国万方数据库的文献,最终纳入文献80篇,其中英文文献27篇,中文文献53篇。 结果与结论：①血清来源外泌体在非小细胞癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌及乳腺癌等肿瘤的诊断中具有一定的研究潜力,其有可能成为肿瘤检测的一种潜在替代诊断标志物;②肿瘤来源外泌体可通过促进肿瘤细胞的生长、增殖、迁移及侵袭,调节免疫及肿瘤相关基因和蛋白的表达发挥调控肿瘤作用;③干细胞来源外泌体可促进肿瘤细胞侵袭和转移,其对肿瘤的调控可能是通过激活HH信号通路介导的;④此外,肿瘤干细胞来源外泌体可通过促进肿瘤相关耐药基因的表达从而增强肿瘤细胞对化疗的耐药,通过研究肿瘤干细胞来源外泌体与耐药基因之间的相关机制,有可能发现肿瘤治疗的潜在靶点。 ORCID:0000-0003-3619-1497(崔国宁) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

雌激素受体与细胞信号传导通路

过去一直认为 ER只是一种配体依赖性转录激活因子。近年来许多实验证明 ,在无配体的情况下 ,ER也可与其他细胞信号传导通路发生作用 ,有学者建议称 ER的这种激活为 ER的配体非依赖性激活 ,包括 ER的磷酸化、ER与生长因子、与共调节因子、与孕激素受体以及癌基因 /抑癌基因蛋白等通路的相互作用。这些作用不仅参与调节靶细胞的增生、分化和维持正常生理功能 ,而且与人类雌激素相关肿瘤的发病以及该类肿瘤对雌激素拮抗剂等药物的耐药有关     

Wnt/β-catenin 信号通路在肿瘤干细胞中作用研究进展

 Wnt 信号通路是调控细胞生长、运动和分化的关键途径，在胚胎和器官发育以及维持干细胞的自我更新方面起重要作用。近年来的研究表明^[1]，Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的不恰当激活，参与了肿瘤的发生及其侵袭转移的过程，而且还与肿瘤干细胞（tumor stem cells，TSC）的关系密切，该通路可能通过作用于TSC而引起肿瘤产生耐受及复发，作用机制与其作用于干细胞的机制类似，从而为肿瘤的治疗提供了新的突破口。本文就 Wnt 通路中最为常见的 Wnt/β-catenin 信号通路在干细胞、肿瘤和 TSC 中作用的研究现状做一简要概述。......     

Notch通路介导的microRNAs对肝癌干细胞的调节作用

肝癌干细胞(hepatic cancer stem cells,HSCs)是存在于肝细胞癌中的一类具有干细胞特性的细胞,与肝癌的形成、 生长、 转移、 药物耐受和复发有密切关系.microRNAs(miRNAs)是一种长约19~22 nt的短链非编码RNA,在细胞众多的生化活动中起着重要的调节作用,通过作用于细胞中关键信号通路的重要节点分子调控肿瘤的发生发展.而Notch信号通路是调控肿瘤干细胞自我更新、 增殖和分化过程的最重要的信号通路之一.miRNAs在Notch信号通路中的作用如何?miRNAs通过靶向作用于Notch信号通路进而发挥调控肝癌干细胞的自我更新、 分化及致癌性作用的机制是什么?这均是本文重点阐述的问题.     

基因芯片分析成骨生长肽对OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞的作用

背景：合成成骨生长肽在体外可刺激骨髓间充质干细胞增殖和向成骨细胞分化,体内可增加骨密度改善骨质疏松,但具体作用机制尚未明确。 目的：应用小鼠全基因组芯片筛查合成成骨生长肽作用下OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞的差异表达基因,探索成骨生长肽作用下可能影响到的基因与信号传导通路。 方法：应用上海伯豪生物技术有限公司提供的小鼠全基因组Oligo芯片,筛选成骨生长肽干预组与空白对照组OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞差异表达基因,实时定量PCR分析验证部分与增殖分化相关的差异表达基因,并结合聚类分析及通路分析来探索成骨生长肽的作用机制。 结果与结论：芯片结果显示,成骨生长肽作用后使346条基因表达下调,121条基因表达上调。PCR验证结果与芯片结果相符。经BioCarta通路分析,涉及6条通路蛋白;经KEGG通路分析,涉及12条通路。成骨生长肽对OPG-/-小鼠骨髓间充质干细胞的作用涉及多条信号传导通路,其中MAPK信号传导通路可能对其促增殖起着至关重要作用。     

不同信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

背景：牙周膜干细胞作为牙源性间充质干细胞的一种,具有成骨分化潜能,可应用于牙周组织再生修复,而牙周膜干细胞的成骨分化涉及多种信号通路的调控。目的：综述目前已研究因子介导的与牙周膜干细胞成骨分化相关的信号通路及其对成骨分化的影响。方法：在PubMed和中国知网数据库,设置检索时间为2010-2022年,总结了2010年以来与牙周膜干细胞成骨分化相关的8个信号通路的研究进展,最终纳入60篇文献进行分析讨论。结果与结论：(1)牙周膜干细胞作为牙源性间充质干细胞,具有良好的增殖、自我更新及多向分化潜能的特点;作为牙周组织再生修复的种子细胞,牙周膜干细胞应用于牙周炎的治疗具有广阔的前景。(2)目前已有大量研究证实各类因子与牙周膜干细胞成骨分化之间的潜在关系是通过介导各信号通路产生,虽然各信号通路在促进牙周膜干细胞成骨分化方面均有一定作用,但研究最多的是MAPK信号通路和Wnt信号通路。(3)MAPK信号通路包括4条途径,广泛存在于细胞中,对于调节细胞的增殖及分化发挥着重要作用;经典的Wnt/β-连环蛋白通路是控制骨稳态的最重要信号通路之一,已有大量研究证实其与牙周膜干细胞成骨分化存在相关性。(4...     

雌激素受体亚型与妇科肿瘤的研究进展

雌激素受体广泛分布于妇女生殖系统,是一类由配体激活的核转录因子,介导大部分的雌激素作用.本文综述雌激素受体亚型(ER-α和ER-β)的结构和功能、雌激素受体配体调节基因转录的机制、分布及生理作用等.主要介绍了在妇科肿瘤中二者表达及比例变化与组织细胞的功能和病理变化的关系.     

Genistein和乳腺癌干细胞PTKs信号转导通路的研究进展

饮食中的genistein在降低亚洲人乳腺癌的发病率上有很重要的作用。最新研究表明genistein抑制乳腺癌细胞生长是通过调节细胞的增殖、分化和凋亡等相关信号转导通路来完成的。乳腺癌干细胞可能是乳腺癌发生耐药、复发及转移的根源。近年来发现乳腺癌干细胞相关信号转导通路复杂且涉及面广泛,其中蛋白酪氨酸激酶（proteintyrosine kinases,PTKs）信号转导通路在癌干细胞中的异常过表达,是引起癌基因转化、肿瘤生长的重要因素之一。因此,Genistein和乳腺癌干细胞相关的PTKs信号转导通路之间的关系也越来越受到关注,对寻找更为有效的乳腺癌靶向治疗具有重要意义。     

调控骨肉瘤及干细胞的相关信号通路

文题释义： 骨肉瘤：是多发于儿童和青少年的原发恶性骨肿瘤,恶性程度高,容易发生转移,预后不良。骨肉瘤的复发、转移及多药耐药,是制约骨肉瘤治疗效果的主要问题。 信号通路：是指能将细胞外的分子信号经细胞膜传入细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路,在骨肉瘤的发生、增殖和侵袭中发挥重要作用。 背景：骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的原发性骨源性恶性肿瘤,过去30年骨肉瘤患者的预后几乎没有大的进步,迫切需要开发新的策略和创新疗法,以进一步提高骨肉瘤患者的生存率。 目的：阐述骨肉瘤进展和转移的分子机制和信号传导网络的最新进展,为治疗骨肉瘤提供一定的理论基础。 方法：以“骨肉瘤,信号通路,预后,转移,耐药,Notch,Wnt/β-catenin,Hedgehog,PI3K/Akt/mTOR,BMPs”为中文检索词,以“osteosarcoma,signaling pathway,prognosis,metastasis,drug resistance,Notch,Wnt/β-catenin,Hedgehog,PI3K/Akt/mTOR,BMPs”为英文检索词,应用计算机在CNKI、PubMed 数据库检索1999年2月至2019年2月相关文献共586篇。通过阅读文献标题和摘要进行筛选,按排除标准剔除不相关的文献,最后共纳入40篇文献进行综述。 结果与结论：信号通路在骨肉瘤的形成和增殖调控方面非常重要,研究发现Notch、Wnt/β-catenin、Hedgehog、PI3K/Akt/mTOR和BMP等信号通路在骨肉瘤及骨肉瘤干细胞中均有表达,对骨肉瘤的发生发展产生重要影响。 ORCID: 0000-0003-4489-9647(陶海) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

新型雌激素受体ER-α36的生物学效应及其相关疾病的研究现状

<正>ER-α36是近年来发现的新型雌激素受体亚型,与传统的雌激素受体ER-α66在结构上具有一定的差异,其在生物学效应上具有重要的作用。本文对新型雌激素受体ER-α36的结构、生物学效应、相关疾病和药物作用进行综述,希望为今后的ER-α36研究提供参考价值。     

大黄酸哌嗪雌酚酮抑制人成骨样MG-63细胞分泌IL-6分子机制的研究

目的探讨大黄酸哌嗪雌酚酮(rhein-piperizinyl-estrone,命名为LC)调节人成骨样MG-63细胞分泌IL-6的分子机制。方法在原工作基础上,选择兼有2种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,采用ELISA、RT-PCR及荧光素酶报告基因检测、小RNA干扰及免疫印迹等技术,探讨LC对人成骨细胞产生的骨吸收调节因子IL-6表达的作用及作用机制。结果 LC可抑制MG-63细胞IL-6表达和IL-6基因启动子的转录活性,该作用可被纯ER阻断剂ICI182,780完全阻断,应用小RNA干扰技术进一步证实LC对成骨细胞IL-6产生的抑制作用是由ERα和ERβ共同介导的。PD98059(MEK1/2抑制剂)和Wortmannin(PI3K抑制剂)可分别阻断LC诱导的成骨细胞ERK和Akt的活化作用。结论 LC抑制成骨细胞产生IL-6是经ER途径、由ERα和ERβ共同介导的,LC还可通过活化Ras/MEK/ERK和PI3K/Akt信号通路对成骨细胞发挥作用。     

CXCL12-CXCR4/CXCR7轴信号传导通路与肿瘤细胞生物学特性的关系

越来越多的研究表明CXCR4与CXCR7在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用,CXCR4与CXCR7作为G蛋白藕联受体介导的信号传导通路及其在胞内激化级联信号通路与肿瘤发生发展的分子机制有密切关系。本文将对它们各自介导的信号通路及其在胞内的级联信号通路与肿瘤细胞的生长、增殖、黏附和迁移等生物学特性的关系进行综述。     

结肠癌干细胞表面标志的研究和信号传导

背景：近年来研究表明,结肠癌干细胞参与肿瘤的复发和转移,为恶性肿瘤靶向治疗带来新的希望。 目的：探讨结肠癌干细胞特异表面标志的分离和鉴定方法,以及与结肠癌干细胞研究紧密相关的信号通路。 方法：以“结肠癌干细胞,肿瘤干细胞,细胞表面标志,信号传导”为中文关键词,以“colon cancer stem cell,cancer stem cell,cell surface sign,signal transduction”为英文关键词,采用计算机检索Medline和CNKI数据库2000-01/2011-06有关结肠癌干细胞表面标志和信号传导的相关文章,排除重复研究或Meta分析类文章,筛选纳入40篇文献进行评价。 结果与结论：CD133⁺与CD44⁺可作结肠癌干细胞的表面标志。与结肠癌干细胞紧密相关的信号通路有Wnt和Notch等,Wnt信号通路在干细胞内环境稳定中起重要作用,Notch信号通路是干细胞信号网络的重要通路。通过研究结肠癌干细胞的表面标志,可以及早地检测出肿瘤的存在;掌握结肠癌干细胞的生物学特性和信号转导路径,可减少肿瘤的复发,为结肠癌的诊断和治疗降低难度。     

The relationship between CXCL12-CXCR4/CXCR7 axis signal transduction and the biological features of tumor

越来越多的研究表明CXCR4与CXCR7在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用,CXCR4与CXCR7作为G蛋白藕联受体介导的信号传导通路及其在胞内激化级联信号通路与肿瘤发生发展的分子机制有密切关系.本文将对它们各自介导的信号通路及其在胞内的级联信号通路与肿瘤细胞的生长、增殖、黏附和迁移等生物学特性的关系进行综述.     

雌激素受体ERα与PI3K/Akt细胞信号通路

雌激素直接与核内雌激素受体ERα或ERβ结合,活化靶基因的转录,这是经典的雌激素受体信号转导途径。近年来大量实验证实,雌激素受体ERα能够通过雌激素依赖或不依赖的方式激活,并与细胞质内的磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)细胞信号传导通路相互作用,发挥重要的生物学效应,如参与人类雌激素相关肿瘤的发病、调节靶细胞的增殖和分化。此外,实验研究还提示,ERα和PI3K/Akt信号通路在哺乳动物植入前胚的发育过程中也起着重要调节作用。     

一氧化氮对肿瘤细胞化疗增敏机制研究进展

一氧化氮化疗增敏是当前研究的热点,其机制包括调节NO/sGC/cGMP轴为中心的经典信号通路;调节NF-κB/Snail/YY1/RKIP/PTEN促肿瘤生长/抗凋亡环路;调节HIF-1α、干扰素(IFN-γ)免疫细胞因子水平;调节P53表达水平;介导释放细胞色素C;与其它分子反应产物结合等多种途径产生化疗增敏效应。阐明一氧化氮对肿瘤细胞化疗增敏机制,寻找关键靶点,进行多途径、多环节的联合干预,有望突破目前肿瘤化疗耐药的瓶颈。     

Toll样受体2、4对病毒囊膜蛋白的识别

TLR2、4是TLRs家族中重要的成员,通过识别囊膜病毒的PAMPs/DAMPs,活化依赖和非依赖于MyD88的信号通路,诱导促炎性细胞因子和趋化因子等的释放,介导先天性抗病毒免疫反应。本文就TLR2、4的基本概况、结构特征、抗病毒信号通路以及对不同囊膜病毒的天然免疫反应等相关研究进展进行简要综述。