兔脑组织三种染色方法的比较

目的通过Nissl染色、苏木素伊红(HE)染色和Nissl-HE联合染色方法观察兔脑组织结构。方法分别对同一新鲜兔脑组织进行Nissl染色、HE染色和Nissl-HE联合染色。结果 Nissl染色易于观察神经元细胞的尼氏体形态;HE染色方便观察神经组织形态结构的轮廓;Nissl-HE联合染色后神经元细胞细胞核蓝染、细胞质粉染,尼氏体呈虎斑状蓝染,均清晰可见,易于观察、分辨。结论应用Nissl-H-E联合染色能够清晰地分辨出神经元细胞的细胞核、细胞质和尼氏体等形态结构。     

三种评估大鼠受孕方法的比较

目的 比较阴栓检查法、阴道涂片法和孕中期腹部触诊法判断SD大鼠受孕的准确性,为高效构建SD孕鼠模型提供参考。方法 于2018年1月~3月选取50只未生育过的雌性SPF级SD大鼠,9只SPF级雄性SD大鼠,随机交配后分别用阴栓检查法、阴道涂片法和孕中期腹部触诊法检查大鼠受孕情况,以解剖发现子宫内存在仔鼠为受孕成功的标准,比较三种方法检出大鼠受孕的成功率。结果 腹部触诊法判断大鼠受孕的成功率为100.00%,阴道涂片法为90.00%,阴栓检查法为40.00%,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 孕中期腹部触诊法对确定大鼠受孕成功的准确率最高,但是需结合确定大鼠交配成功准确率较高的阴道涂片法共同判断。     

Ad-shRNA-NgR转染EAE大鼠脑组织安全性评估

目的观察NgR特异性RNA干扰的重组腺病毒(Ad-shRNA-NgR)转染实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑组织后,EAE大鼠的存活情况,为EAE干预实验提供依据。方法 80只大鼠建立EAE大鼠模型后,将其随机分成高、中、低、对照组,每组20只。实验组分别用滴度为1×1011pfu/m L、1×1010pfu/m L、1×109pfu/mL的Ad-shRNA-NgR注入EAE大鼠侧脑室。观察注射后第3天、第7天EAE大鼠的存活情况。结果 Ad-shRNA-NgR转染EAE脑组织后,高滴度组在第3天和第7天时EAE大鼠的存活率显著低于中、低滴度组,差异具有统计学意义(P0.05)。中、低滴度组和对照组EAE大鼠的存活率无显著性差异(P0.05)。结论 Ad-shRNA-NgR转染EAE大鼠实验时,滴度从1×1010pfu/mL到1×109pfu/mL范围是安全的。     

三种大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法的比较***

背景：骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法很多,但目前尚未有统一标准。 目的：通过对比确定合适的大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品制备方法。 方法：充分裂解体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞,所得蛋白样品分为3组：未进一步处理组、丙酮沉淀法处理组、2-D clear-up kit处理组,Bradford法测定蛋白质浓度后分别进行双向电泳,对比分析3组所得电泳图谱。 结果与结论：2-D Clean-up kit处理组所得双向电泳图谱在背景,图像清晰度,分辨率,重复性上比丙酮沉淀法处理组和未进一步处理组要好,说明经2-D Clean-up kit处理的样品制备方法更适合用于大鼠骨髓间充质干细胞双向电泳样品的制备。      

三种分离大鼠主动脉内皮细胞方法的比较研究

目的:建立一种有效的、重复性好的大鼠主动脉内皮细胞(RAEC)分离方法。方法:采用外翻胶原酶消化法、瞬间热处理植环法和植块法分离RAEC,并进行培养、纯化和传代,观察细胞生长和形态,用免疫组织化学法检验Von Villebrand Factor/Ⅷ因子相关抗原进行内皮细胞鉴定。结果:采用植块法分离RAEC,5~7天后可见细胞贴壁生长,14天呈单层铺路石样分布,Ⅷ因子相关抗原阳性细胞(胞浆呈棕黄色)比率为52.3±10.6%,其他两种方法分离后未见上皮细胞贴壁生长。结论:比较外翻胶原酶消化法、瞬间热处理植环法,植块法分离RAEC能培养获得较多内皮细胞,且方法较简便,细胞污染和损伤较少,重复性好。     

三种方法制备组织工程气管支架的比较

背景：气管支架制备是组织工程学方法修复长段气管缺损的关键步骤。 目的：通过比较分析3种制备异体脱细胞气管支架的方法,为组织工程气管支架制备寻找更适宜的途径。 方法：手术获得兔新鲜气管,分为对照组、玻璃化液冷冻法组、酶洗法组、改良玻璃化液冷冻法组。处理后对各组标本行苏木精-伊红染色,电镜扫描观察,并测量气管最大拉伸力、破裂力和组织拉伸率等生物力学性能。 结果与结论：组织学观察显示对照组、玻璃化液冷冻法组可见部分完整黏膜上皮细胞,酶洗法组、改良玻璃化液冷冻法组未见黏膜上皮细胞。电镜观察示对照组、玻璃化液冷冻法组、改良玻璃化液冷冻法组有丰富的细胞外基质和胶原纤维,而酶洗法组无细胞外基质,只有胶原纤维。组间两两比较,气管支架的最大拉伸力、最大破裂力和组织拉伸率比较,差异均无显著性意义。说明应用改良玻璃化液冷冻法制备气管支架能够有效地去除抗原性、保留细胞外基质,并维持生物力学性能,是一种较为理想的组织工程气管支架制备方法。     

三种测序DNA模板制备方法的比较○

背景：DNA模板质量对DNA序列测定起着至关重要的作用。 目的：为基因组DNA或甲基化DNA测序寻找一种经济,简便的方法。 方法：分别采用96管集合板及96孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR产物,通过以上3种方法制备DNA测序模板进行测序。 结果与结论：实验所采用的3种方法对于基因组DNA测序效果无差异(P > 0.05)。对于甲基化DNA测序效果,96管集合板法优于其他2种方法(P < 0.05)。说明3种方法均适用于基因组DNA的测序,而96管集合板法更适用于甲基化DNA的测序。      

两种染色方法对脑垂体三种嗜色细胞显示效果的比较

脑垂体由腺垂体和神经垂体两部分组成,其中腺垂体内有3种类型细胞：嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和嫌色细胞。在常规的苏木精-伊红染色切片中,脑垂体3种嗜色细胞显示的效果一直不甚理想,学生在显微镜下进行观察辨认比较困难,为了更清晰地显示脑垂体3种嗜色细胞,我们采用不同的染色方法对脑垂体进行染色,经过多次实验显示,采用Mallory氏法染色,获得了较满意的染色效果,现介绍如下：     

三种不同方法制备去细胞神经支架的比较

背景：去细胞异体神经移植物具有完全仿真的三维结构,为细胞附着提供了较理想的三维空间,是目前所有人工合成材料所无法比拟的。 目的：对比分析液氮冷冻法、化学法及改良法3种方法对大鼠坐骨神经去细胞化的优劣。 方法：切取SD大鼠10 mm坐骨神经,分别以液氮冻融法、TritonX-100处理化学去细胞法、改良法处理的化学去细胞法分别制作去细胞神经支架,行苏木精-伊红染色,并在扫描电镜下观察支架超微结构。 结果与结论：液氮冻融法去细胞支架内有较多许旺细胞残留,有较多轴突及髓鞘,基膜完整,基膜管欠通畅;TritonX-100处理化学法去细胞神经支架内无明显许旺细胞,管内未见明显轴突及髓鞘残留,基膜完整,基膜管通畅;改良法处理的化学去细胞神经支架内许旺细胞及轴突、髓鞘成分几乎完全消失,去细胞效果更好,基膜完整,基膜管更通畅。表明TritonX-100处理化学去细胞法、改良法处理的化学去细胞法脱细胞效果较好,其中以改良法处理的化学去细胞法最好。     

硫化银染重金属离子的组织学方法在脑组织的应

改良的 Timm 硫化银方法能使大脑组织的重金属染色呈特异性分布.海马结构和纹状体染色最深,垂体和杏仁核染色次之。海马结构内的染色呈典型的带状模式,并和某些特定的神经终末成份分布相一致。本文讨论了硫化银染色方法用于研究在损伤、病变或某些操作后海马结构内特定神经成份可塑性变化的可能性.     

大鼠脑组织中CNTF基因克隆及其探针制备

目的　克隆大鼠CNTF基因并制备地高辛标记的CNTF探针。方法　采用RT PCR法 ,从大鼠脑组织mRNA中扩增CNTF基因ORF区片段 ,克隆入T载体 ,并经序列测定。以地高辛素标记CNTF基因片段为探针 ,对成年大鼠脊髓组织切片进行原位杂交。结果　RT PCR法扩增出一特异产物与预期长度 6 16bp相符 ,序列测定与CNTF基因 10 0 %同源。原位杂交显示阳性信号出现在成年大鼠脊髓白质的前索及侧索的周边部分 ,为杵棒形和三角形带有纤细突起的胶质细胞。结论　采用RT PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织中的CNTF基因克隆 ,地高辛标记的CNTF探针原位杂交显示正常大鼠脊髓白质的部分胶质细胞中表达CNTFmRNA。     

一种脑组织移植的方法

<正> 自1980年Thompson报道猫、狗的脑组织移植研究至今已有一百年了。在这一百年中,脑组织移植的研究大致可分三个方面,即成年动物之间脑组织移植;以新生动物为供体的脑组织移植;和以胚胎为供体的脑组织移植。最近十几年内,在胚胎脑组织移植方面取得了一些令人振奋的进步。这些进展激励着人们去探索治疗神经系某些疾患的新途径。目前常用的脑组织移植法有两种,即小腔移植法和注射移植法。本文拟结合我们研究室工作中的一些体会,介绍胚胎脑组织的注射移植法。     

三种脑缺血大鼠模型的血液流变学比较

目的对三种脑缺血大鼠模型的血液流变学(全血黏度、血浆黏度、红细胞比容、红细胞变形指数)进行比较,筛选出血液流变学变化明显的符合临床特征的脑缺血模型。方法选择线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠模型、双侧颈总动脉(DCCA)结扎大鼠模型、单侧颈总动脉(SCCA)结扎大鼠模型三种脑缺血模型,进行脑缺血后1、3、5、7 d不同时间点血液流变学的比较。结果MCAO组、DCCA组、SCCA组与正常组大鼠的血液流变学比较均存在统计学差异(P<0.05);不同时间点血液流变学结果显示:MCAO组内全血黏度值指标第3 d为最高值(19.29±2.996)mPa.s/5s-1,且第3 d血浆黏度值(1.81±0.348)mPa.s、红细胞比容(47.5±5.28)%为模型组间最高值;MCAO组大鼠红细胞变形指数(0.47±0.017)较正常组及SCCA组、DCCA组大鼠均有明显降低,但仅MCAO组大鼠在1、5 d红细胞变形指数较正常组比较有差异(P<0.05)。但三组模型大鼠血液流变学统计学比较无明显差异(P>0.05)。结论在三种脑缺血模型中,大脑中动脉阻塞模型为最接近临床发病特征的、血液流变学变化明显的脑缺血模型。     

大鼠脑组织中p75基因克隆及其探针制备

为了克隆大鼠p75基因并制备地高辛标记的p75 cDNA探针(dig-p75 cDNA),本研究采用RT-PCR法,从大鼠脑组织mRNA中扩增p75基因mRNA部分片段,克隆入T载体,并经序列测定。以dig-p75 cDNA为探针,采用原位杂交方法观察成年SD大鼠海马组织中p75 mRNA的表达。结果:RT-PCR法扩增出一种特异产物与预期长度386 bp相符,T载体克隆测序与p75基因100％同源。原位杂交结果显示,阳性信号出现在成年大鼠海马组织中。结论:采用RT-PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织p75基因克隆,dig-p75 cDNA探针原位杂交显示正常SD大鼠海马组织中表达p75 mRNA。     

三种方法培养慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞的比较

背景：原代培养方法被广泛应用于正常和哮喘大鼠气道平滑肌细胞的培养,但少见用于慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞培养的报道。 目的：建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型,比较组织块法、酶消化法和改良组织块消化法原代培养模型大鼠气道平滑肌细胞生长情况的差异。 方法：将16只清洁级雄性健康SD大鼠随机分成2组,对照组正常饲养,慢性阻塞性肺疾病组用熏烟法建立大鼠慢性阻塞性肺疾病模型,显微镜下观察大鼠肺组织病理学特点。分别应用上述3种方法原代培养慢性阻塞性肺疾病大鼠气道平滑肌细胞,相差显微镜下观察细胞形态,用α-平滑肌肌动蛋白免疫组织化学染色鉴定细胞类型。 结果与结论：经病理学证实成功构建慢性阻塞性肺疾病大鼠模型。在倒置相差显微镜下见培养的细胞表现为典型的 “谷-峰状”生长。经免疫细胞化学染色后,可见胞质呈棕色阳性反应,所培养的细胞有94%以上为气道平滑肌细胞。3种方法在耗时和细胞质量方面均无明显差别,但组织块法更经济、稳定可靠和简单。     

三种骨组织脱钙方法的比较

骨组织制片是一重要环节,也是技术的一个难点。如果骨组织脱钙方法不当,会直接妨碍制片切片以及染色结果。作者对目前科研常用三种不同的脱钙方法进行了比较,从中筛选出一种较好的脱钙方法。认为10%甲酸-中性缓冲福尔马林脱钙液处理骨组织标本是一种较为理想的脱钙方法,具有很好的应用价值和推广作用。