醋酸铅对PC12细胞核转录因子-кB转录活性的影响

目的 探讨醋酸铅及NF-кB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对核转录因子-kappa B(NF-κB)转录活性的影响. 方法 将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)暴露于不同浓度的醋酸铅0、12.5、25、50、100、200、400、800和1600 μmol/L,采用四唑盐比色实验(MTT)检测IC50值.用脂质体将pNF-кB-Luc报告基因质粒转染入PC12细胞,转染后的PC12细胞分别暴露于不同浓度的醋酸铅(100、200和400 μmol/L)及不同浓度醋酸铅加PDTC 100 μmol/L,24小时后采用萤光素酶检测试剂盒检测萤光素酶活性. 结果 用不同浓度的醋酸铅处理细胞24小时,其生长增殖受到不同程度的抑制,且呈现出剂量-反应关系,其IC50值为(533.966±100.830) μmol/L.用不同浓度的醋酸铅处理转染后的PC12细胞24小时,结果显示:PDTC对照组萤光素酶活性较空白对照组降低(P＜0.01);铅处理组萤光素酶活性较空白对照组高(P＜0.01),且具有剂量依赖性;铅+PDTC联合作用组与PDTC对照组相比,PC12细胞内萤光素酶活性增高(P＜0.01). 结论 醋酸铅可诱导PC12细胞的NF-кB转录活性升高.     

NF-κB在砷诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2表达中的作用

目的观察NF-κB核转录因子在砷诱导人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法在细胞培养液中加入不同浓度的NaAsO2,24 h后提取细胞总RNA和核蛋白,用RT-PCR和Westernblot方法分别分析COX-2 mRNA表达和NF-κB蛋白水平;选择COX-2高表达的NaAsO2处理组,再用NF-κB抑制剂(PDTC)处理,观察COX-2 mRNA表达水平的变化。结果 4、8μmol/L NaAsO2处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);4μmol/L NaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平也显著提高,高于对照组,而10μmol/LNaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平低于对照组(P<0.05);同时用4μmol/L NaAsO2和PDTC共同处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平降低,显著低于单纯用4μoml/L NaAsO2处理细胞的COX-2 mRNA表达水平(P<0.05)。结论低剂量的砷能够诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2 mRNA和NF-κB蛋白表达水平的增高,砷诱导的核转录因子NF-κB活化在砷诱导的COX-2...     

铅抑制NF-κB、Bcl-2蛋白表达诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的研究醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2细胞NFκB、Bcl-2表达的影响及与细胞凋亡的关系。方法体外培养HK-2细胞分为0、2.5、5、10、20μmol/L醋酸铅组,分别染毒72h,应用间接免疫荧光-流式细胞术检测HK-2细胞NF-κB、Bcl-2蛋白表达的改变,用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡。结果随着染铅剂量增加HK-2细胞NF-κB、Bcl-2蛋白表达逐步降低,NF-κB与Bcl-2降低显著相关(r=0.71,P<0.01);细胞凋亡率随着铅剂量增加而增加,在5、10、20μmol/L铅组与对照组比较差别有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率与NF-κB、Bcl-2蛋白表达呈明显负相关(r=-0.625,P<0.01;r=-0.709,P<0.01)。结论醋酸铅能下调HK-2细胞NF-κB、Bcl-2基因的表达,这可能是其诱导HK-2细胞凋亡的途径之一。     

乳胞素诱导前列腺癌细胞凋亡机制的初步研究

目的 探讨乳胞素在诱导前列腺癌细胞凋亡作用中与核转录因子(NF)-κ B活性的关系.方法 利用乳胞素作用两种前列腺癌细胞,设立培养液处理的空白对照组和乳胞素处理组,乳胞素处理组分别向两种细胞中加入浓度递增的乳胞素(0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L),作用时间分别为8、16和24h.MTT法检测细胞生存率,利用酶联免疫吸附试验定量分析NF-κ B DNA结合活性,Western blot法检测NF-κB P65核蛋白表达,酶分析法测定caspase-3活性.结果 DU145细胞基础状态下NF-κB DNA结合活性强于LNCaP细胞(t=4.728,P=0.001),应用乳胞素作用24 h后,与空白对照组比较,不同浓度乳胞素处理组均观察到NF-κB DNA结合活性减少.随着乳胞素浓度增加,LNCaP细胞NF-κB p65核蛋白表达水平下调,而DU145细胞NF-κB P65核蛋白表达水平没有变化.DU145细胞基础状态下caspase-3活性强于LNCaP细胞(t=4.519,P=0.001),乳胞素作用24h 后,DU145和LNCaP细胞caspase-3活性均随乳胞素浓度增加升高(2.0μmol/L乳胞素处理组与1.0μmol/L乳胞素处理组比较,DU145细胞P=0.000,LNCaP细胞P=0.000).结论 乳胞素对不同前列腺癌细胞有不同杀伤作用,并与抑制NF-κB活性促进前列腺癌细胞凋亡相关,对激素非依赖性前列腺癌细胞还可能存在其他抗肿瘤细胞生存途径.     

醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶-6、-9活性的影响

目的了解醋酸铅对PC12细胞半胱天冬酶(caspase)-6、-9活性的影响.方法 PC12细胞分别不同时间(12、24、36、48、60、72 h)暴露于不同浓度的醋酸铅(0、62.5、125.0、20.0、500.0 μmol/L),用比色法检测其caspase-6、-9的活性.结果 PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅24h可见caspase-6活性升高,48h达高峰(为对照组的5.75倍,P＜0.01),至72 h仍高于对照组(P＜0.01).PC12细胞暴露于250.0μmol/L醋酸铅12 h,caspase-9活性已升高,36 h达高峰(约为对照组的7.48倍,P＜0.01),至60h已降至与对照组无差别的水平.PC12细胞暴露于不同浓度的醋酸铅48h(caspase-6)和36 h(caspase-9),可见caspase-6、-9活性具有浓度依赖性的增加.结论醋酸铅可引起caspase-6、-9活性的升高.     

Effects of Selenium on DNA Binding Activity of Nuclear Factor-κB Induced by Arsenic in Mouse Skin JB6-CI41 Cells in vitro

目的 研究硒对砷诱导小鼠皮肤JB6-CI41细胞核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)的DNA结合活性和细胞凋亡的作用.方法 调整JB6-CI41细胞密度为1×105/孔,分别设立对照(生理盐水)组,不同浓度的亚砷酸(3.125、6.25、12.5 μmol/L)和亚硒酸钠(2.5 μmol/L)单独染毒组,亚硒酸钠(2.5μmol/L)+不同浓度的亚砷酸(3.125、6.25和12.5μmol/L)联合染毒组,NF-κB特异化学抑制剂二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate,DTYC,100 μmol/L,提前染毒2 h)+亚砷酸(6.25 μmol/L)联合染毒组.采用凝胶阻滞电泳法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 2.5 μmol/L亚硒酸钠对小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性和细胞凋亡无显著影响(P＞0.05).6.25和12.5 μmol/L的亚砷酸能够增强小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性(P＜0.01),具有明显剂量-效应关系(r=0.942 6,P＜0.01).3.125、6.25和12.5 μmol/L亚砷酸诱导小鼠皮肤JB6-CI41细胞凋亡(P＜0.01),呈现显著剂量-反应关系(r=0.991 8,P＜0.01).NF-κB的DNA结合活性与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.977 5,P＜0.01).2.5 μmol/L亚硒酸钠能抑制6.25和12.5 μmol/L亚砷酸作用下的小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性(P＜0.01),对3.125、6.25和12.5 μmol/L的亚砷酸引起的小鼠皮肤JB6-CI41细胞凋亡率也表现出显著抑制作用(P＜0.01).100 μmol/L的DTYC对6.25μmol/L亚砷酸引起的小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性和细胞凋亡率具有显著抑制作用(P＜0.01).结论 在本实验中,一定剂量(6.25～12.5 μmol/L)的砷能够使小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性显著增高并诱导细胞凋亡,2.5 μmol/L的硒能抑制砷引起的NF-κB的活化和细胞凋亡.     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

硒对砷诱导小鼠皮肤JB6-CI41细胞核因子κB的DNA结合活性体外实验研究

目的研究硒对砷诱导小鼠皮肤JB6-CI41细胞核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)的DNA结合活性和细胞凋亡的作用。方法调整JB6-CI41细胞密度为1×105/孔,分别设立对照(生理盐水)组,不同浓度的亚砷酸(3.125、6.25、12.5μmol/L)和亚硒酸钠(2.5μmol/L)单独染毒组,亚硒酸钠(2.5μmol/L)+不同浓度的亚砷酸(3.125、6.25和12.5μmol/L)联合染毒组,NF-κB特异化学抑制剂二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate,DTTC,100μmol/L,提前染毒2 h)+亚砷酸(6.25μmol/L)联合染毒组。采用凝胶阻滞电泳法(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NF-κB的DNA结合活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 2.5μmol/L亚硒酸钠对小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性和细胞凋亡无显著影响(P>0.05)。6.25和12.5μmol/L的亚砷酸能够增强小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性(P<0.01),具有明显剂量-效应关系(r=0.942 6,P<0.01)。3.125、6.25和12.5μmol/L亚砷酸诱导小鼠皮肤JB6-CI41细胞凋亡(P<0.01),呈现显著剂量-反应关系(r=0.991 8,P<0.01)。NF-κB的DNA结合活性与细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.977 5,P<0.01)。2.5μmol/L亚硒酸钠能抑制6.25和12.5μmol/L亚砷酸作用下的小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性(P<0.01),对3.125、6.25和12.5μmol/L的亚砷酸引起的小鼠皮肤JB6-CI41细胞凋亡率也表现出显著抑制作用(P<0.01)。100μmol/L的DTTC对6.25μmol/L亚砷酸引起的小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性和细胞凋亡率具有显著抑制作用(P<0.01)。结论在本实验中,一定剂量(6.25～12.5μmol/L)的砷能够使小鼠皮肤JB6-CI41细胞NF-κB的DNA结合活性显著增高并诱导细胞凋亡,2.5μmol/L的硒能抑制砷引起的NF-κB的活化和细胞凋亡。     

亚砷酸钠对人胚肺成纤维细胞核因子κB信号通路的影响及其作用机制

目的探讨核因子κB(NF-κB)信号通路在亚砷酸钠染毒致人胚肺成纤维细胞(HELF)损伤中的作用机制。方法将HELF细胞分别暴露于0(对照)、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠溶液染毒18、24、48 h,采用MTT法检测细胞存活率。将HELF细胞分别暴露于0(对照)、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠溶液染毒24 h,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-1β(IL-1β)炎性因子的浓度。将HELF细胞分为2组,一组分别暴露于0(对照)、2.5、5、10、20μmol/L的亚砷酸钠溶液,另一组同时加入10μmol/L的NF-κB抑制剂PDTC溶液,染毒24 h后,采用Western blot法检测细胞NF-κB相关蛋白p-IKKβ和p-P65的表达水平。结果与对照组比较,2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠染毒HELF细胞18、24、48 h后的细胞存活率均下降,除2.5 mol/L亚砷酸钠染毒48 h外,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,各染毒时间HELF细胞的存活率均呈下降趋势(均P0.01)。与对照组比较,1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠染毒组HELF细胞上清液中TNF-α的浓度均升高,5、10、20、40μmol/L亚砷酸钠染毒组HELF细胞上清液中IL-6的浓度均升高,各浓度亚砷酸钠染毒组HELF细胞上清液中IL-1β的浓度均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HELF细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度均呈上升趋势。与对照组和相同浓度PDTC干预组比较,各浓度亚砷酸钠染毒组HELF细胞p-IKKβ和p-P65蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠暴露可激活NF-κB通路,促使炎性因子增加,从而造成HELF细胞损伤。     

亚砷酸钠对正常人类皮肤角质形成细胞蛋白激酶B及其下游信号因子IκB和NF-κB蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人角质形成(HaCat)细胞蛋白激酶B(PKB/Akt)及其下游信号因子IκB和NF-κB蛋白表达的影响。方法 HaCat细胞分别暴露于终浓度为0(对照)～100μmol/L的亚砷酸钠溶液6 h。采用Alamar Blue还原法检测细胞活力,采用Western Blot法检测细胞磷酸化Ak(tp-Akt)、磷酸化IκB(p-IκB)及胞核和胞浆中核转录因子NF-κB的蛋白表达水平。结果各浓度亚砷酸钠染毒组HaCat细胞内p-Akt、p-IκB蛋白以及胞核中NF-κB蛋白表达水平均显著升高,细胞活力和胞浆中NF-κB蛋白表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HaCat细胞内p-Akt、p-IκB蛋白以及胞核中NF-κB蛋白表达水平呈逐渐上升的趋势,细胞活力和胞浆中NF-κB蛋白表达水平呈逐渐下降的趋势。结论亚砷酸钠可使HaCat细胞活力明显下降;诱导HaCat细胞Akt蛋白的磷酸化活化,进而诱导其下游信号因子IκB磷酸化及核转录因子NF-κB入核表达。     

Study on the roles of nuclear factor-kappaB, p53 and Bcl-2 gene in lead acetate induced apoptosis in PC12 cells

OBJECTIVE: To investigate the roles of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB), p53 and Bcl-2 gene in lead acetate induced apoptosis in PC12 cells. METHODS: Cell culture, Flow cytometry, RT-PCR and Western Blot were employed to analyze the expression of NF-kappaB, p53 and Bcl-2 gene, and clarify the effect of lead acetate on apoptosis in PC12 cells and related molecular mechanisms. RESULTS: The PC12 cells were exposed to lead acetate at varied concentrations (100 micromol/ L, 200 micromol/L and 400 micromol/L) for 24 hours, Flow cytometry detected that the apoptosis rate of groups treated with lead acetate are higher than that of blank control groups with a dose-effect relationship (P < 0.05). RT-PCR results show that the mRNA expression level of NF-kappaB p65, p53 increased accordingly. Western Blot results show that the protein expression of Bcl-2 gene decreased. CONCLUSION: lead acetate induces apoptosis in PC12 cells, which may be related to activation of NF-kappaB and p53 gene and depression of Bcl-2 gene.     

亚砷酸钠所致人胚肺成纤维细胞增殖兴奋效应与氧化应激的关系

目的探讨亚砷酸钠（Na2AsO2）所致人胚肺成纤维细胞（HELF）增殖兴奋效应与氧化应激的关系。方法0．0、0．1、0．5、1．0、5．0和10．0μmol／LNa2ASO2处理HELF细胞4h或24h后，检测Na2AsO2对HELF细胞增殖率、细胞中活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和还原性谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力的影响。结果0．1和0．5μmol／L Na2ASO2引起HELF细胞增殖率均明显升高，差异有统计学意义（P〈0．01），细胞增殖高峰表现在0．5μmol／L，而5．0和10．0μmol／L Na2ASO2引起HELF细胞增殖率均明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．01），其剂量-反应关系曲线呈倒U形；0．5—10．0μmol／L Na2ASO2引起ROS水平均明显升高，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），ROS水平与Na2ASO2处理剂量有明显的正相关关系（r=0．934，P〈0．01）；5．0和10．0μmol／L Na2ASO2引起MDA含量均明显升高和GSH-Px活力明显降低。与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；0．5μmol／L Na2ASO2引起SOD活力明显升高。而5．0和10．0μmol／L Na2ASO2引起SOD活力均明显降低，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01），其剂量-反应关系呈倒U形曲线。结论Na2ASO2可引起HELF细胞增殖明显兴奋效应，其剂量-反应关系呈倒U形曲线，其机制可能与不同浓度Na2ASO2引起HELF细胞小同程度的氧化应激有关。     

乙酸铅对脑脉络丛Z310细胞毒性作用

目的初步探讨乙酸铅诱导大鼠脑脉络丛Z310细胞的低剂量兴奋作用和高剂量抑制作用。方法以浓度为0、0.000 2、0.002、0.02、0.2、2、20、200、500μmol/L的乙酸铅分别染毒Z310细胞12和24h,用噻唑蓝(MTT)法和2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐(WST-8)法检测细胞生存情况,并观察各剂量组细胞形态变化。结果 0.02μmol/L乙酸铅染毒24 h,MTT法检测Z310细胞存活率为107.06%,0.2μmol/L染毒组24 h时细胞存活率升高为110.91%;>2μmol/L乙酸铅染毒时,细胞存活率随剂量增加而降低;染毒24 h时,200、500μmol/L乙酸铅组细胞存活率(MTT法)分别下降至79.37%和76.81%(P<0.01);染毒12、24 h时,200、500μmol/L乙酸铅组细胞存活率(WST-8法)分别下降至81.67%和72.36%及56.89%和44.05%(P<0.05)。结论低剂量乙酸铅可引起Z310细胞兴奋效应;高剂量乙酸铅引起Z310细胞抑制效应;WST-8法检测细胞存活率较MTT法更敏感。     

肝细胞生长因子对铅致人肾小球系膜细胞损伤的保护效应的机制

目的初步探讨肝细胞生长因子（HGF）防护铅处理致人肾小球系膜细胞（HMC）损伤的作用机制。方法将HMC分为对照组（C组）、Pb10μmol／L组和HGF＋Pb10μmol／L组,在6、12、24、48h分别通过噻唑蓝（MTY）法检测细胞存活率和用流式细胞仪检测凋亡率;实时荧光定量一PCR检测各组细胞中Caspase-3的表达水平。结果MTr检测结果显示。Pb10pμmol／L组HMC在6、12、24、48h细胞生长存活率均显著低于HGF＋Pb10μmol／L组（P〈0．01）;流式凋亡检测结果显示,HMC在10μmol／L醋酸铅染毒6、12、24和48h后,HGF＋Pb10μmol／L组在各个时间点细胞凋亡率显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。实时荧光定量-PCR检测结果显示,在HMC铅染毒48h后,HGF＋Pb10μmol／L组Caspase-3的表达量显著低于Pb10μmol／L组（P〈0．01）。结论铅促进HMC细胞的凋亡,而HGF通过降低Caspase．3的表达抑制HMC的凋亡,从而发挥对铅致HMC细胞损伤的保护作用。     

人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究

目的 研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况。
方法 分别用浓度为0 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6 h、12 h、24 h, 应用2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平, 高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性, 酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平, 并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析。
结果 乙酸铅染毒6 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比, 差异无统计学意义(P>0.05), 而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。乙酸铅染毒12 h和24 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。相关性分析显示, 细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r_{6 h}=-0.865、r_{12 h}=-0.890、r_{24 h}=-0.801, P < 0.01), 与8-OHdG含量呈正相关(r_{6 h}=0.840、r_{12 h}=0.829、r_{24 h}=0.866, P < 0.01)。
结论 乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成, 抑制细胞内抗氧化酶SOD活性, 造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤。
     

铅对体外培养大鼠海马神经细胞生长和Oct-2蛋白表达的影响

目的　探讨铅对海马神经细胞生长发育和对Ⅱ型POU域蛋白Oct 2表达的影响。方法　采用大鼠海马神经细胞体外培养建立细胞模型 ,醋酸铅的染毒浓度分别为 10 -1、10 0 、10 1、10 2 、10 3μmol/L ,对照组给予等量培养液。染毒后 2 4h用免疫组织化学法检测神经细胞和神经胶质细胞的标志物神经丝 (NF)和神经胶质原纤维酸性蛋白质 (GFAP)以及Oct 2蛋白的表达。结果 10 μmol/L及 以上浓度醋酸铅组海马神经细胞胞体减小、轴突突起长度和细胞间连接减少。GFAP免疫组化结果发现1μmol/L醋酸铅即可使GFAP阳性细胞数明显增加 ,与对照组相比差异具有统计学意义。此外 ,1μmol/L的醋酸铅可导致神经元和神经胶质细胞Oct 2表达阳性面积比与对照组相比差异具有统计学意义 ,10 μmol/L以上浓度醋酸铅作用下 ,Oct 2表达阳性面积比和吸光度均高于对照组 ,差异具有统计学意义。结论　醋酸铅在抑制神经元生长和分化的同时可刺激神经胶质细胞增生 ,铅对中枢神经系统的部分毒作用至少与其导致的Oct 2表达增加有关     

叔丁基对苯二酚对百草枯神经细胞毒性和氧化应激的拮抗作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理对百草枯(PQ)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性和氧化应激的拮抗作用.方法 将PC12细胞分为溶剂对照组及100、300 μmol PQ处理组.用终浓度为40 μmol/LtBHQ预处理PC12细胞4 h再分别用终浓度0、100、300 μmol/L PQ处理细胞24或48 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性,用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μ,mol/L PQ处理PC12细胞24 h细胞存活率分别较100、300 μmol/L PQ组增高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100μmol/LPQ处理PC12细胞48 h细胞存活率较100μmol/LPQ处理组细胞存活率增高,差异有统计学意义(P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/PQ处理PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别较100、300 μmol/L PQ下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/LPQ处理PC12细胞24 h后,MDA含量分别较100、300 μmol/L PQ组下降,MDA含量分别为相应对照组的0.61、0.57倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ预处理可削弱PQ致PC12细胞的细胞毒性、细胞凋亡以及氧化应激作用.

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of the tert-butylhydroquinone (tBHQ)pretreatment on neurotoxicity and oxidative stress induced by paraquat (PQ) in PC12 cells. Methods Cytoyoxicity of PC12 cells was measured by MTT assay, following the PC12 cells treatment with different concentrations of 100, 300 μmol/L PQ for 24 h and 48 h. PC12 cells were pretreated with or without 40 μmol/L tBHQ for 4 h, PC 12 cells were exposed to PQ at the doses of 0, 100, 300 μmol/L for 24 h and 48 h, respectively.The viability of PC 12 cells was measured by MTT assay, the apoptosis rates of PC 12 cells were detected by flow cytometry (FCM) and the malondialdehyde (MDA) levels of PC 12 cells were examine by thiobarbituric acid (TBA) method. Results When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the viability of PC 12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC 12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). When the exposure dose of PQ was 100μmol/L for 48 h, the viability of PC12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.01). When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the apoptosis rates and MDA levels of PC12 cells pretreated with tBHQ were significantly lower than those of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions tBHQ preteatment can reduce the cytotoxicity, apoptosis and oxidative stress induced by PQ in PC12 cells.     

重组人神经营养因子-4/5蛋白抗三氧化二砷神经毒作用

目的初步观察重组人神经营养因子-4／5（hNT－4／5）蛋白对三氧化二砷毒性的抑制作用。方法利用hNT－4／5蛋白具有抗神经毒性的特点,采用本实验室克隆表达及部分纯化的具有天然hNT－4／5蛋白生物学活性的重组hNT-4／5蛋白,以不同水平的重组hNT4／5蛋白（0－100μl）与不同浓度的As2O3（0－160μmol／L）同时加入各组鸡胚前脑神经细胞和PC12细胞培养液中共同孵育24－48小时,观察其对染毒鸡胚前脑神经细胞存活和PC12细胞突起生长的影响作用。结果在鸡胚前脑神经细胞和PC12细胞中与As2O3共同培养48小时后,对照组与实验组的细胞存活率差异有显著性,而且细胞存活率和突起数目随hNT－4／5浓度增高而提高和增加。结论初步观察到重组hNT4／5蛋白具有抑制As2O3的毒性作用,为从基因工程途径寻找抗环境毒物因子提供了依据。