人宫颈癌脱落细胞端粒酶活性检测的意义

目的 研究宫颈上皮内瘤样病变(CIN )和宫颈癌脱落细胞端粒酶激活的意义。方法 采用端粒酶PCR-ELISA法检测13例CIN和17例宫颈癌脱落细胞端粒酶活性,并与相应的组织标本中端粒酶活性相比较,11例正常宫颈脱落细胞作为对照。结果8例(61.54％)CIN、14例(82.35％)宫颈癌脱落细胞表达端粒酶活性,正常宫颈无端粒酶活性,CIN、宫颈癌及正常宫颈脱落细胞端粒酶活性平均值分别为0.328±0.192、1.329±0.259和0.039±0.084,三组间端粒酶表达率和量存在显著差异。CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级之间端粒酶活性无明显差异。CIN及宫颈癌组织中端粒酶活性和相应脱落细胞一致。结论 端粒酶的激活是宫颈癌的早期改变,在宫颈癌发生发展过程中起重要作用;宫颈脱落细胞和组织中端粒酶活性可能成为宫颈癌早期诊断、预后判断和肿瘤浸润的标记物。     

宫颈病变中hTERC的表达

目的:探讨人类染色体端粒酶RNA(hTERC)在宫颈病变中的表达.方法:荧光原位杂交(FISH)法检测8例宫颈癌,28例CINⅢ,10例CINⅡ,6例CIN Ⅰ及25例慢性宫颈炎组织中hTERC的表达情况.结果:hTERC在慢性宫颈炎组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中的阳性表达率分别为12.0%、16.7%、20.0%、71.4%和100.0%,与病变程度呈正相关(r=0.631,P<0.01),各组间差异有统计学意义(P<0.05).结论:hTERC的阳性表达率与宫颈病变程度密切相关,提示其在宫颈癌的发生发展中起着重要作用.     

hTERC基因表达在宫颈癌筛查中的意义

目的:探讨宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(hTERC)的表达及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的临床意义。方法:收集宫颈病变患者的宫颈脱落细胞标本129例,依据组织病理学结果分为3组:宫颈上皮内瘤变低度病变组(CINⅠ)、高度病变组(CINⅡ/Ⅲ)、宫颈癌组(SCC);同时选择健康妇女的宫颈脱落细胞标本20例作为对照组建立实验室阈值;应用荧光原位杂交技术(FISH)检测两组标本hTERC基因的扩增情况,最终以病理学诊断为金标准,比较FISH检测结果。结果:研究各组中CINⅠ,CINⅡ/Ⅲ,SCC的hTERC基因阳性表达率分别为7.31%,56.25%,75.00%,hTERC基因扩增比例随病变进展而增加;研究组与对照组hTERC基因阳性表达率差异有统计学意义(P0.05);研究各组两两比较,hTERC基因阳性表达率低度病变组与高度病变组、宫颈癌组差异有统计学意义(P0.05),而高度病变组与宫颈癌组的差异无统计学意义(P0.05)。结论:FISH方法检测hTERC基因可用于筛查宫颈高度病变及宫颈癌,其阳性扩增信号多倍体型可能是宫颈病变进展的预测性指标。     

子宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16 E6 mRNA表达与survivin蛋白表达的相关性

目的探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16E6mRNA表达与survivin蛋白表达的相关性。方法采用半定量PCR技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法,检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌共148例患者宫颈组织中HPV16E6mRNA及survivin蛋白的表达。结果148例患者中,HPV16阳性共37例,其中慢性宫颈炎5例、CINⅠ6例、CINⅡ～Ⅲ11例及宫颈癌15例。慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ及宫颈癌组织中,HPV16E6mRNA的表达水平分别为0.3±0.4、0.6±0.4、1.8±0.6及2.4±0.6;survivin蛋白阳性表达率分别为7%、31%、63%及84%。CINⅡ～Ⅲ及宫颈癌组织中,HPV16E6mRNA的表达水平及survivin蛋白阳性表达率均显著高于慢性宫颈炎及CINⅠ组织,两者比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。宫颈癌组织中,HPV16E6mRNA的表达水平与survivin蛋白阳性表达率呈显著正相关关系(γs=0.62,P<0.05)。结论HPV16E6mRNA的表达水平与宫颈病变的进展有关,survivin蛋白阳性表达率升高可能与宫颈癌的发生、发展密切相关。     

两种筛查宫颈肿瘤方法的比较:ELISA检测宫颈脱落细胞p16~(INK4a)蛋白与FQ-PCR检测8种共用型HPV DNA

目的:探讨用ELISA方法检测p16INK4a蛋白在宫颈脱落细胞的表达,筛查宫颈癌。方法:选取宫颈组织活检标本1523例,活检前用棉拭子从标本中获取宫颈脱落细胞。用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测宫颈活检组织中8种亚型HR-HPV DNA,用ELISA方法检测宫颈脱落细胞中p16INK4a蛋白的表达。结果:HR-HPV DNA阳性率在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及宫颈癌中,分别为91.9%,92.8%,94.4%,91.7%,其阳性率与宫颈病变严重程度无显著相关(P=0.893);非肿瘤性病变人群HR-HPV DNA阳性率16.3%;FQ-PCR方法的特异性83.7%。ELISA方法检测宫颈脱落细胞中p16INK4a表达用于筛查宫颈癌及CIN的总体敏感性和特异性分别为87.4%和92.4%,且宫颈病变级别越高,p16INK4a表达越强(r=0.773,P0.001)。结论:FQ-PCR检测HR-HPV DNA用于筛查宫颈癌及CIN,敏感度高但特异性较低;ELISA检测p16INK4a蛋白表达具有较高的灵敏度和特异性,有望成为宫颈癌新的筛查方法在临床推广使用。     

人染色体端粒酶基因的扩增率与宫颈癌前病变和宫颈癌的研究

目的:探讨人染色体端粒酶基因(hTERC)扩增率与宫颈癌前病变及宫颈癌的关系.方法:应用荧光原位杂交技术(FISH)检测宫颈上皮内瘤变(CIN)组108例(CIN Ⅰ 39例、CINⅡ37例、CINⅢ32例),宫颈癌组24例和正常对照组33例,共165例宫颈脱落细胞中hTERC基因的表达情况.结果:CINⅡ、CINⅢ和...     

宫颈脱落细胞中高危型人乳头瘤病毒和k-ras、c-myc基因表达及其与宫颈上皮内瘤变病变程度相关性分析

目的探讨宫颈脱落细胞中高危型人乳头瘤病毒和k-ras、c-myc基因表达及其与宫颈上皮内瘤变病变程度的相关性。方法选择2012年12月至2013年1月在舟山市妇幼保健院因液基细胞学检测(TCT)结果异常或HPV-DNA检测异常行阴道镜宫颈活检术的252例患者作为研究对象,术前取其宫颈脱落细胞,其中宫颈上皮内瘤变(CIN)患者164例、慢性宫颈炎患者48例及正常体检者40例。实时荧光定量核酸扩增检测系统(q PCR)检测高危型HPV-DNA,逆转录定量PCR(q RT-PCR)检测k-ras、c-myc m RNA表达,并分析其与CIN病变程度间的相关关系。结果 (1)高危型HPV-DNA和k-ras、c-myc m RNA在CINⅠ~Ⅲ级表达均较慢性宫颈炎及正常体检者高,在CINⅢ级表达较CINⅠ、Ⅱ级高,差异有统计学意义(P0.05)。(2)CIN患者高危型HPV-DNA与k-ras m RNA呈明显相关(r=0.2507,P=0.0012),但与c-myc m RNA表达无明显相关(P0.05)。(3)Logistic回归分析显示高危型HPV-DNA和k-ras、c-myc m RNA表达增高是致CIN发生的危险因素(P0.05)。结论 CIN发生与高危型HPV感染和癌基因k-ras、c-myc m RNA表达增高有关,特别是CINⅢ级。检测高危型HPV-DNA和k-ras、cmyc m RNA对早期发现CIN和宫颈癌具有重要的临床意义     

CD1a和E-cadherin在宫颈上皮内瘤变中的表达

目的:探讨CD1a和E-cadherin与宫颈癌发生发展的关系及作为早期癌变生物学指标的可能性。方法:采用免疫组化SP法检测CD1a和E-cadherin在同期56例宫颈上皮内瘤变、56例宫颈鳞癌和15例正常宫颈组织中的分布及表达。结果:(1)CD1a+朗格汉斯细胞在正常宫颈、CIN和宫颈癌各组中数量逐渐减少,两两比较有显著差异(P0.01);CIN中该细胞数量随病变严重程度减少,CINⅠ和CINⅡ、CINⅠ和CINⅢ组之间两两比较有显著差异(P0.05),而CINⅡ与CINⅢ组间无显著差异(P0.05);(2)E-cadher-in在正常宫颈、CIN和宫颈癌各组中的阳性表达率及强度逐渐下降,两两比较有显著差异(P0.05);在CIN中阳性表达率及表达强度随病变严重程度呈下降趋势,CINⅠ和CINⅡ、CINⅠ和CINⅢ之间两两比较有显著差异(P0.05),而CINⅡ和CINⅢ之间无显著差异(P0.05);(3)宫颈组织中CD1a+朗格汉斯细胞的细胞数与E-cadherin的阳性表达率及强度呈正相关(r=0.912,P0.05)。结论:CD1a+朗格汉斯细胞与E-cadherin可能在宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用。     

人端粒酶逆转录酶在子宫颈癌组织中的表达变化及其意义

目的研究端粒酶在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达,探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)作为宫颈癌早期诊断标志物的可能性。方法采用RTPCR方法测定端粒酶mRNA在3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、38例宫颈癌、16例宫颈上皮内瘤变(CIN)和20例正常宫颈组织中的表达水平;端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法测定端粒酶活性;免疫组化链酶菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法检测3株宫颈癌细胞、2株正常的人二倍体细胞、21例正常宫颈组织、2例CIN和55例宫颈癌切片中hTERT蛋白的表达水平。结果hTERTmRNA在3株宫颈癌细胞中均表达,而在2株正常的人二倍体细胞中无表达,宫颈癌组织中的阳性表达率为81.6%,高于CIN的37.5%和正常宫颈组织的5.0%,差异有统计学意义(P<0.05);hTERTmRNA的阳性表达率与端粒酶活性有相关性(P<0.01);hTERT蛋白在3株宫颈癌细胞中有表达,2株正常的人二倍体细胞中无表达,正常宫颈组织中阳性表达率为4.8%、CIN为28.0%,均低于宫颈癌组织的65.5%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织和细胞中hTERTmRNA和蛋白阳性表达率均高于正常宫颈组织,其有可能作为宫颈癌早期诊断的标志物。     

年轻妇女宫颈上皮内瘤变Ⅰ~Ⅱ级组织中p16~(InK4a)和Ki67的表达及意义

目的:探讨年轻妇女宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ~Ⅱ级组织中细胞周期抑制因子p16InK4a蛋白及细胞增殖活性相关抗体Ki67的表达及与病变级别的相关性。方法:选取2010年在北京大学第一医院妇产科门诊就诊、年龄小于35岁,经阴道镜活检病理诊断为CINⅠ及CINⅡ级的病例56例,对其阴道活检组织及宫颈环形电切除术(LEEP)后组织之石蜡切片,进行p16InK4a及Ki67免疫组织化学染色检测其表达。结果:①阴道镜宫颈活检组织的CINⅠ及CINⅡ中p16InK4a阳性表达率分别为30.0%、80.6%,Ki67阳性表达率分别为20.0%,77.8%,CINⅡ级病变组织中p16InK4a及Ki67阳性表达率高于CINⅠ级,差异有统计学意义(P0.001)。②阴道镜宫颈活检组织标本及LEEP组织标本不同级别CIN病变组织中,p16InK4a及Ki67的阳性表达率存在差异(均P0.001);p16InK4a及Ki67的阳性表达率与病变级别呈正相关(r=0.644,r=0.645)。结论:p16InK4a及Ki67在年轻妇女CINⅠ~Ⅱ级组织中均有表达,且p16InK4a及Ki67阳性表达与CIN级别相关,可在CIN病理分级中提供参考。     

PCNA在宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞核增值抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）在宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测92例宫颈鳞癌、40例CIN和92例宫颈正常组织的PCNA蛋白表达情况。结果宫颈鳞癌组织PCNA阳性表达率为82.61%（76/92）;CINⅠ、CINⅡ和CINⅢPCNA阳性表达率分别为33.33%（5/15）、71.43%（10/14）和81.82%（9/11）,正常宫颈组织无PCNA表达。宫颈鳞癌、CINⅡ和CINⅢ组织PCNA阳性表达率明显高于CINⅠ（P〈0.01）;但宫颈鳞癌PCNA表达与CINⅡ、CINⅢ比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。PCNA阳性表达与宫颈癌分期（r=0.634,P〈0.01）、组织学分级（r=0.654,P〈0.05）有关;而与年龄无关（r=0,P〉0.05）。结论 PCNA的阳性表达可能与宫颈癌的发生、发展及细胞增殖活性增加有关。     

子宫颈癌及其癌前病变组织端粒酶活性的研究

目的研究宫颈癌及其癌前病变组织中端粒酶激活的意义.方法应用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)及电泳-银染法,对36例宫颈浸润癌及16例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织进行端粒酶活性测定,以吸光度(A)值判断端粒酶活性.同时测定11例正常宫颈、6例慢性宫颈炎症及8例癌旁组织端粒酶活性作为对照.结果CIN、宫颈癌及对照组端粒酶活性A值分别为0.398±0.293、1.580±0.819和0.050±0.012,3组比较,差异有极显著性(P＜0.01).端粒酶活性高低与肿瘤分化程度呈负相关,与淋巴结转移呈正相关;与组织学类型、分期、体积大小无关.结论端粒酶的激活发生在宫颈癌病变的早期,可能成为宫颈癌及癌前病变早期诊断和鉴别诊断的指标.     

子宫颈上皮癌前病变及子宫颈癌的细胞核

目的探讨宫颈上皮癌变过程中的细胞生物学特征及其变化规律,为临床诊治提供依据.方法收集125份宫颈组织行病理检查,按病变程度不同分为,正常宫颈上皮11份、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)22份、宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CINⅡ)17份、宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ)13份和宫颈鳞癌55份(其中高、中、低分化宫颈鳞癌分别为13、19、23份),以及宫颈腺癌7份.组织切片分别行福根(Feulgen)染色,并以计算机检测其DNA平均倍体值(DMP)、DNA指数(DI)、核面积,打印DNA倍体直方图.结果(1)随病变程度增高,DMP、DI和核面积测定值均依次逐渐增高,正常宫颈上皮与CINⅠ、CINⅡ3者间比较,除正常宫颈上皮与CINⅡ的DI和核面积、CINⅠ与CINⅡ的核面积比较,差异有显著性(P＜0.05)外,其余差异均无显著性(P＞0.05);而宫颈癌与CINⅠ、CINⅡ比较,差异均有极显著性(P＜0.01);高、中、低分化宫颈鳞癌3者间比较,差异也均无显著性.(2)官颈不同病变的DNA倍体直方图各有特点,超5倍体(5C)细胞在CINⅢ病变组织中开始增多,5C、7C和9C细胞在鳞癌病变组织中显著增加.结论宫颈上皮癌变是一个渐进的、由量变到质变的过程.CINⅢ是非癌到癌的变化阶段.     

Ki-67、PCNA及HPV在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变的表达及意义

目的:研究Ki-67,增殖细胞核抗原(PCNA)在早期宫颈癌(IA~IIA期高分化)、宫颈上皮内瘤变(CINI、CINII、CINIII)及慢性宫颈炎中的表达,及其与HPV感染的关系,探究3者联合应用的诊断价值。方法:应用免疫组织化学S-P法检测宫颈病变中Ki-67、PCNA抗原的表达,PCR反应检测HPV感染,结合临床病理特点分析。结果:慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞癌中Ki-67阳性表达率分别为33.33%、89.19%、100%。PCNA阳性表达率分别为66.67%、97.30%、100%。HPV阳性率分别是13.33%、54.05%、1000%。CINI和CINII/III中Ki-67阳性表达率分别为85.00%、94.12%;PCNA阳性表达率分别为95.00%、100.00%。HPV阳性率分别是30%、82.35%。CIN和宫颈癌中的Ki7、PCNA及HPV的阳性表达与宫颈炎相比,差异均有显著性(P<0.05)。Ki-67及PCNA过表达率在CINII/III组与CINI组间差异显著(P<0.05)。HPV阳性率在CINII/III与CINI之间差异显著(P<0.01)。Ki-67及PCNA表达与HPV感染有相关性(P<0.05)。结论:Ki-67、PCNA抗原过表达与CINII/III和早期宫颈癌显著相关。Ki-67、PCNA表达与HPV感染率相关,联合检测宫颈组织中Ki-67、PCNA的过表达及HPV感染,有助于判断细胞的增殖活性,可作为诊断早期宫颈癌和CINII/III的标记物。     

Telomerase activity in Papanicolaou smear-negative exfoliated cervical cells and its association with lesions and oncogenic human papillomaviruses

OBJECTIVE: The goal of this study was to evaluate telomerase activity in exfoliated cervical cells and its association with cytology, pathology, and human papillomavirus (HPV). METHODS: Telomerase activity and HPV DNA sequences were examined in the exfoliated cervical cells from a general population of 245 women aged more than 30 years undergoing routine cervical screening by Papanicolaou smear. The women who were found to have telomerase activity or abnormal cytology in their exfoliated cervical cells were examined for cervical lesions by colposcopy and biopsy. RESULTS: Cytology for our population (mean, 56 years) revealed only one abnormal smear (1/245, 0.4%), in which a cervical intraepithelial neoplasia grade I (CIN I) lesion was found. The exfoliated cervical cells used to prepare the smear were negative for telomerase and contained low-risk HPV DNA. Telomerase activity was found in 16 exfoliated cell samples (16/245, 6.5%); high-risk HPV DNA was found in 9 of these samples (9/16, 56%) and 9 of the biopsy specimens that could be evaluated from patients testing positive for telomerase revealed CIN I lesions (9/11, 82%). CONCLUSIONS: Telomerase activity is often associated with high-risk HPV infection and it is suggested that telomerase assay can help to detect occult cervical lesions.     

Telomerase Activation in Cervical Neoplasia

Objective: To examine the critical point at which telomerase activation occurs in the course of cervical carcinogenesis.Methods: Telomeric repeat assay protocol was used to measure telomerase activity in cell samples obtained from 155 Japanese women with various cervical conditions: normal cytology (n = 62), cervical intraepithelial neoplasia (CIN) (n = 63), and invasive squamous cell carcinoma (n = 30).Results: Telomerase activity was detected in five (8%) women with normal cytology, in 26 (41%) patients with CIN (26% of patients with CIN I, 35% with CIN II, and 68% with CIN III), and in 29 (97%) patients with invasive carcinoma. Telomerase activation was significantly more frequent in CIN than in normal cervices (P < .001), and the positive rate in CIN III was significantly higher than that in CIN I (P < .01) and CIN II (P < .05). Furthermore, telomerase activation was significantly more frequent in invasive carcinoma than in CIN III (P < .01).Conclusion: Our findings suggest that telomerase activation is a relatively early event in cervical carcinogenesis and correlates well with grade of cervical lesion.     

Conservative management of the abnormal smear during pregnancy. A long-term follow-up

One hundred and thirty-two pregnant women who had a smear suggestive of cervical intra-epithelial neoplasia (CIN) II or more during the 10th to 12th gestational week, were followed with repeated smears and colposcopy every month and, when indicated, a colposcopically guided biopsy. Post-partum follow-up included cytology, colposcopy, portio biopsies and endocervical curettage. Seventy-nine women with normal findings post partum were checked once a year in a long-term study. A close correlation (71% of CINIII) was found between cytological and histological diagnoses in cases of persistent (three or more) abnormal smears. However, in women with regression of the cytological diagnosis, high frequencies of histologically verified CIN were found. Thus, 37.5% (18/48) of normal or CINI smears were histologically still CINIII. Histologically verified CIN during pregnancy, on the other hand, showed a post partum progression of two degrees or more of CIN in only two cases. Cytology seemed to be inappropriate post partum, with 23.3% smears which were normal or suggestive of CINI, when histology showed CINIII. In a long-term follow-up, 24% of women with a normal post partum follow-up for at least one year had a subsequent recurrence of CIN. It is concluded that follow-up of abnormal smears during pregnancy with repeated smears is not a reliable method. Post-partum follow-up should include at least colposcopy and a biopsy when indicated by the colposcopical examination. Women with a normal post partum follow-up constitute a high risk group for future recurrence of CIN and should be carefully followed for at least 5 years.     

分析人雄激素受体基因判断子宫颈癌及子宫颈上皮内瘤变组织的克隆状态

目的　通过分析人雄激素受体 (humanandrogenreceptor,HUMARA)基因 ,检测宫颈癌及宫颈上皮内瘤变 (CIN)组织的X染色体失活方式 ,从而判断其克隆状态。方法　对 2 6例宫颈浸润性癌 (宫颈癌组 )、31例CIN(CIN组 )及 33例正常宫颈 (正常宫颈组 )组织标本 ,提取其DNA ,经甲基化敏感性限制性核酸内切酶HhaⅠ消化后 ,对HUMARA基因片段行PCR扩增并电泳 ,通过观察电泳条带判断其克隆状态。结果　HUMARA基因的杂合率为 89%。宫颈癌组、CIN组及正常宫颈组组织的单克隆率分别为 92 %、38%和 10 % ,宫颈癌组分别与CIN组及正常宫颈组比较 ,差异均有极显著性 (P <0 0 0 1) ,CIN组与正常宫颈组比较 ,差异有显著性 (P =0 0 12 )。宫颈癌组中 ,临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期组织的单克隆率分别为 6 / 7、90 % (9/ 10 )及 7/ 7,两两比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 )。CIN组中 ,CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ组织的单克隆率分别为 2 0 % (2 / 10 )、38% (3/ 8)及 6 3% (5 / 8) ,呈逐级增高趋势 ,但各级CIN间比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　宫颈癌是癌细胞克隆性增殖的结果。对单克隆状态的CIN应给予积极干预或严密随访。HUMARA基因分析可能成为研究宫颈癌发生机制的一种分子生物学检测手段。