乌头各组织部位生物碱类成分动态差异性研究

目的:比较不同采收期乌头不同组织中乌头总碱和双酯型生物碱(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱)的含量,为毒性及药效学研究提供依据.方法:用酸性染料比色法测定乌头不同组织中总生物碱的含量;反相高效液相色谱法测定新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量,流动相为乙腈-40 mmol· L-1乙酸铵水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长240 nm,柱温30℃.结果:6月4日之前采收的乌头的不同组织部位总生物碱含量明显小于6月18日和7月3日,乌头最佳采收期可确定为6月底至7月初.乌头地上部分乌头类总生物碱的含量小于地下部分,不同采收期乌头各组织部位中乌头类总生物碱和双酯型生物碱含量顺序大体为:须根＞子根＞母根＞叶片≈茎秆.结论:该研究初步了解了乌头各组织部位生物碱类成分的动态变化规律,确认了乌头的最佳采收期及各组织部位生物碱类成分的含量差异.     

不同炮制方法对附子中乌头总碱和双酯型生物碱含量的影响

目的:探讨不同炮制方法对附子中有效成分含量的影响。方法:分别采用炒法、蒸法、胆水浸泡及混合溶液浸泡对附子进行炮制。采用UV和RP-HPLC方法分别测定附子四种加工品中总生物碱和新乌头碱、乌头碱、次乌头碱等双酯型生物碱的含量。结果表明:附子不同炮制品中生物碱的含量呈现明显的差异,蒸制品和炒制品含量可以达到中国药典规定酯型生物碱以乌头碱计,不得过0.15%的规定。结论:不同炮制方法对附子生物碱含量有显著影响。     

麻黄-附子药对主要有效成分在不同汤方中的含量变化

目的:研究麻黄-附子药对主要有效成分在麻黄附子细辛汤及麻黄附子甘草汤中的含量差异,为方剂配伍的科学性提供试验依据.方法:采用HPLC测定汤剂中麻黄-附子药对麻黄的有效成分去甲基伪麻黄碱、去甲基麻黄碱、麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱及附子的有效成分苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量.结果:药对及2种汤剂中5种麻黄生物碱的含量无显著性差异,附子中的苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱有显著性差异.结论:麻黄-附子药对主要药效成分在不同方剂中含量的差异与其临床应用相关,但具体原因尚不明确.     

附子在炮制中主要生物碱含量变化的研究

目的比较两种不同炮制方法对附子中生物碱含量的影响,并对陕西省周至人处理附子的科学性进行证明。方法采用酸碱滴定法测定总生物碱量,并采用一阶导数光谱法测定附子中3种主要生物碱的含量。结果煎煮可以减小附子中生物碱的含量,但变化很小;但与甘草合煎后生物碱总量及乌头碱、次乌头碱及新乌头碱等3种主要生物碱含量均显著降低,其中主要毒性物质乌头碱的含量减小了约64%。结论该研究对周至人大量食用附子而不中毒的现象进行了理论解释,并为附子的临床应用提供科学依据。     

HPLC-Q-TOF-MS分析附子的化学成分及煎煮过程中的变化规律

目的:对附子生物碱进行分析鉴定并探究其主要成分在煎煮过程中的动态变化规律。方法:采用HPLC-Q-TOFMS分析鉴定附子生物碱成分,基于溶出率分析附子主要成分在煎煮过程中的动态变化。结果:分析鉴定了附子中的36个生物碱成分,并测定了其中25个主要成分在煎煮过程中的溶出变化。双酯型生物碱(新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、脱氧乌头碱等)迅速降低,约2 h几乎检不出;单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、10-羟基苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰去氧乌头原碱、脱水苯甲酰次乌头原碱等)先逐渐升高,6~8 h达到峰值,后逐渐降低;酯型原碱(新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱)一直持续升高;其他原碱先逐渐升高,6~8 h达到峰值,后趋于稳定。结论:对附子生物碱成分进行了较全面的分析,揭示了附子煎煮过程中各类生物碱含量的动态变化规律,为附子质量控制和临床应用提供参考。     

D101型大孔树脂纯化附子生物碱

目的:研究附子生物碱经D101型大孔树脂富集后化学成分的变化.方法:以附子中总生物碱、酯型生物碱、乌头碱、次乌头碱及新乌头碱的转移率为指标,采用UV,HPLC,TLC分别对富集前后附子提取物中的生物碱进行含量测定及其成分鉴别.结果:采用D101型大孔树脂富集附子生物碱,总生物碱转移率83.70％,纯度67.34％;乌头碱转移率77.78％,次乌头碱转移率94.12％,新乌头碱转移率52.63％;TLC比较发现显示6个相似的生物斑点,说明富集前后生物碱化学成分无明显差异.结论:D101型大孔树脂能有效提高附子中总生物碱的纯度,且各生物碱转移率较高,可用于大生产推广.     

附子生物碱分布规律研究

目的:探讨附子中生物碱的分布规律,为确定合理的加工炮制方法、有效控制附子饮片质量提供参考.方法:将附子横向与纵向分割为不同部分,分别以HPLC法测定乌头碱、新乌头碱和次乌头碱等成分含量.结果:在横向上,新乌头碱、次乌头碱及总生物碱均以韧皮部含量最高、表皮与皮层含量最低,而乌头碱却以髓部含量最高、韧皮部含量最低;在纵向上,各种生物碱含量变化的大体趋势均表现为先降低后升高再降低.结论:附子中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的分布具有一定的规律性,掌握此规律性,可为附子的加工炮制与质量控制提供参考.     

干热高温对比湿热高压对附子中6种酯型生物碱含量影响

目的:分析干热高温对比湿热高压对附子中6种酯型生物碱含量影响。方法:控制时间与温度,使用湿热高压蒸制与干热高温烘制法炮制附子,使用HPLC检测炮制品内六种生物碱的含量状况。结果:炮制附子使六种生物碱含量产生明显改变,单脂生物碱含量明显升高,双脂生物碱含量消失或者明显下降;乌头碱、次乌头碱及新乌头碱进样量依次在(0.03~3.21,r=0.98)、(0.03~3.10,r=0.98)、(0.03~2.96,r=0.98)间,苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱进样量依次在(0.03~3.29,r=0.98)、(0.03~3.22,r=0.98)、(0.03~2.98,r=0.98)间,线性关系良好;乌头碱、次乌头碱及新乌头碱回收率RSD依次是0.89%、0.57%、0.98%,苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱回收率RSD依次是0.99%、1.36%、0.97%。结论:附子炮制采用湿热高压蒸制与干热高压烘制法其方法简便,准确可控,降低毒性同时减少有效成分流失,为炮制附子提供了新的借鉴。     

液质联用技术追踪生物碱类成分在川乌茎叶生长周期的动态变化规律

目的研究川乌茎、叶中生物碱类成分在不同生长期的含量变化。方法采用Phenomenex C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),质谱采用ESP多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式扫描;建立HPLC-MS/MS方法同时测定川乌茎叶中乌头碱、新乌头碱、印乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、尼奥林、附子灵、宋果灵、塔拉乌头胺、去甲乌药碱、去甲猪毛菜碱14种生物碱的含量。结合主成分分析(PCA)追踪川乌茎叶在生长过程中不同生物碱的含量变化规律。结果 14种生物碱在各自浓度范围内线性关系良好(r~20.990 0),定量限为2.27～18.27 ng/mL,平均回收率在94.73%～104.50%。结果表明,川乌茎叶中均含有相当量的生物碱,且茎中生物碱总量高于叶,茎在5、6、7、8月的生物碱总量分别为0.087 1%、0.182 8%、0.141 0%、0.199 4%,呈现波浪形上升趋势,8月份到达峰值;叶在5、6、7、8月生物碱总量分别为0.074 7%、0.075 9%、0.0814%、0.0589%,呈现出先上升后下降的变化趋势,叶中生物碱的总量7月最高。结论 PCA发现茎、叶中生物碱含量在不同时期表现出不同的变化趋势。茎中生物碱在采收期达到峰值,生物碱含量可观,具有成为新药用资源的潜力与开发价值。     

HPLC法测定附子膨化品与生品双酯型生物碱含量

目的利用膨化炮制技术对附子进行加工,测定双酯型生物碱的含量.方法采用HPLC测定附子中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量,计算附子中双酯型生物碱含量.结果附子经过膨化后,双酯型生物碱含量为0.01524%.与生品相比.显著降低.结论膨化法可显著降低附子双酯型生物碱的含量.     

合江金钗石斛不同品系农艺性状比较与品质分析

目的:对合江金钗石斛3个品系(JC-1,JC-2,JC-3)主要农艺性状与品质进行比较,为合江金钗石斛生产提供指导,为金钗石斛新品种选育提供参考依据。方法:用直尺、游标卡尺和分析天平等测定了合江金钗石斛的主要农艺性状与产量性状;采用苯酚-硫酸比色法和酸性染料比色法分别测定茎中多糖与总生物碱含量。结果:2年生的JC-1在茎节数、节间长、茎鲜重与茎干重方面表现最佳。从茎长来看,无论是1年生,2年生还是3年生,均表现为JC-1JC-2JC-3。茎粗则随着年限的增长而增粗,JC-2粗于JC-1和JC-3,且JC-2从2年生到3年生这个阶段增长迅速。折干率均表现为2年生大于1年生与3年生,JC-1的折干率远大于JC-2与JC-3。JC-3株型最小,折干率最低。在有效成分含量方面,多糖质量分数为JC-1(4.64%)JC-2(3.02%)JC-3(2.20%);总生物碱质量分数为JC-3(0.59%)JC-2(0.48%)JC-1(0.45%),但折算为茎鲜品中多糖与总生物碱含量均为JC-1最高。结论:综合生产及品质等角度,笔者认为合江金钗石斛品系JC-1最适合推广种植。     

湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的分布及变化

目的:研究湖北利川黄连不同生长龄期主要生物碱的累积变化过程,为标准化种植提供科学依据.方法:采用紫外分光光度法和HPLC测定黄连有效成分.结果:随着生长龄期的增长,黄连叶片数、根茎干重都在不断的增加;黄连不同部位中总生物碱含量的由大到小的顺序依次是根茎＞须根＞叶片;在黄连2～3龄阶段为黄连生长最旺盛的时期,酪氨酸、总生物碱、小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量增长速度最快;在5龄阶段,这4种生物碱含量的大小顺序依次是小檗碱、黄连碱、表小檗碱、巴马汀,且这4种生物碱含量之和占总生物碱含量的比例在不断增加.结论:为黄连的种植管理提供了参考.     

镰形棘豆总生物碱对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的:研究镰形棘豆总生物碱的体内抗肿瘤作用并探讨其作用机制。方法:采用S180荷瘤小鼠模型,将生理盐水和总生物碱灌胃给药,阳性药环磷酰胺腹腔注射,给药后检测小鼠的体质量、抑瘤率、胸腺指数以及脾指数,并通过HE染色,光镜下观察肿瘤细胞的形态变化。结果:镰形棘豆总生物碱高、中、低剂量组对S180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为74.8%、79.3%、69.4%,总生物碱各剂量组对S180荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数均高于环磷酰胺组和生理盐水组,但无显著性差异。实验过程中,小鼠体质量没有降低,未显示任何毒性反应。HE染色发现,给药组肿瘤间质可见炎细胞浸润。结论:镰形棘豆总生物碱具有明显的抗肿瘤作用,其机制可能是通过增强小鼠的免疫调节功能来实现的。     

苦参提取工艺优选

目的:优选苦参提取工艺参数。方法:以苦参总生物碱和干膏率为考察指标,单因素试验考察提取溶媒、溶媒pH;采用正交试验法,选取溶媒用量、提取时间、提取次数为考察因素,以苦参总碱总量和固含物总量的总权重为考察指标,优选苦参提取工艺。结果:优选的提取工艺为加0.2%盐酸溶液提取3次,每次加6倍量溶媒,每次提取2 h。结论:该优选工艺稳定可行,可用于苦参的工业化提取。     

Production of cytotoxic canthin-6-one alkaloids by Ailanthus altissima plant cell cultures

Ailanthus altissima (Mill.) Swingle was established as callus- and cell-suspension cultures. Canthin-6-one and 1-methoxycanthin-6-one were isolated by a combination of preparative tlc and preparative hplc. The two alkaloids were identified by their uv, ms, and 1H-nmr spectra. The combined yield of the two alkaloids was 1.38% of dry weight from callus and 1.27% of dry weight from cell suspensions. The cytotoxicities of canthin-6-one, 1-methoxycanthin-6-one, 5-methoxycanthin-6-one, and canthin-6-one-3-N-oxide to guinea pig ear keratinocytes have been compared, and the IC50 values range from 1.11 to 5.76 micrograms/ml. There is no significant difference in activity among these four cytotoxic alkaloids.     

马钱子总生物碱复合磷脂脂质体的抗肿瘤作用研究

目的: 通过比较马钱子总生物碱溶液和3种不同磷脂组成的马钱子总生物碱脂质体对H22荷瘤小鼠的抑瘤率,评价马钱子总生物碱复合磷脂脂质体的抗肿瘤作用。方法: 采用硫酸铵梯度法和隐形脂质体技术制备了3种不同磷脂组成的马钱子总生物碱脂质体。ICR小鼠接种H22肝癌瘤株造成移植性肝癌H22小鼠模型,测定马钱子总生物碱溶液、马钱子总生物碱大豆磷脂(SPC)脂质体、氢化大豆磷脂(HSPC)脂质体和复合磷脂脂质体各ip 1 mg ·kg^-1,连续10 d,观察对H22肝癌小鼠的抑瘤效果,比较给药后各组H22荷瘤小鼠的体重、免疫器官(脾和胸腺)指数和生命延长率。结果: 1 mg ·kg^-1剂量下的马钱子总生物碱溶液、SPC脂质体、HSPC脂质体和复合磷脂脂质体的抑瘤率分别为29.05%,29.29%,45.11%,37.23%;3种马钱子总生物碱脂质体未发现对免疫器官有明显的抑制作用;与对照组相比体重也无明显变化。结论: 复合磷脂脂质体是抗肿瘤中药有效部位马钱子总生物碱具有开发前景的新型载体。     

两面针的超声-酶法辅助半仿生提取工艺优选

目的:优选两面针的超声-酶法辅助半仿生提取工艺条件。方法:以氯化两面针碱、总生物碱得率和干膏收率为评价指标,通过正交试验考察超声功率、提取时间及溶剂用量对两面针半仿生超声提取工艺的影响,利用动态过程优选提取时间。运用HPLC测定氯化两面针碱含量,流动相乙腈-水-磷酸-三乙胺(30∶70∶0.15∶0.15),检测波长271 nm;采用UV测定总生物碱含量,检测波长328 nm。结果:最佳提取工艺为复合酶预处理后于250 W超声提取,第1次加5倍量pH2.0磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液提取18 min,第2次加5倍量pH 7.5缓冲液提取15 min,第3次加5倍量pH 8.3缓冲液提取12 min;氯化两面针碱得率0.135%(RSD 1.86%),总生物碱得率1.20%(RSD 1.75%),干膏收率14.65%(RSD1.23%)。结论:本法的氯化两面针碱和总生物碱得率与乙醇回流法接近或稍低,而干膏收率显著提高,可为两面针的大生产提供参考。     

Comparison of semi-bionic extraction and water extraction in extraction of chemical constituents from processed cortex Phellodendri]

OBJECTIVE: To Study the granulation of processed Cortex Phellodendri. METHOD: Take berberine, total alkaloids and dry extract as indexes to compare the semi-bionic extraction (SBE) with water extraction (WE). RESULT: In 5 kinds of phellodendron bark solution, berberine, total alkaloids and dry extract obtained by SBE are much better than those obtained by WE. CONCLUSION: In the preparation of oral granules from processed Cortex Phellodendri, SBE is superior to WE, when the pH value is adjusted by HCl solution to 1.0 in the first decoction, adjusted by saturated Ca(OH)2 solution to 7.0 in the second decoction and to 10.0 in the third decoction respectively.     

Effects of the rol C gene on hairy root: induction development and tropane alkaloid production by Atropa belladonna

Two series of Atropa belladonna hairy root lines were obtained, the first one transformed via Agrobacterium tumefaciens harboring rol C and npt II genes, and the other transformed with rol ABC and npt II genes. Thirteen hairy root lines were obtained and selected on hormone-free medium. The transformation was confirmed by PCR analysis, and these root lines were first examinated for their growth rate. Then hyoscyamine and scopolamine production was measured after 3 and 4 weeks of culture to evaluate the possible role of rol C gene in tropane alkaloid formation. The rol C gene alone played a significant role in the hairy root growth rate (17-fold increase). However this effect was much lower than that induced by the rol ABC genes together (75-fold increase). In contrast, the rol C gene alone was as efficient as the rol ABC genes together (mean value of total alkaloids: 0.36% dry weight, i.e., 12-fold times more than in untransformed roots) to stimulate the biosynthesis of tropane alkaloids in A. belladonna hairy root cultures.     

千里光、千柏鼻炎片和总生物碱大鼠胚胎毒性研究

目的:探讨千里光及其复方千柏鼻炎片的胚胎毒性及其特点,为妊娠期安全用药提供参考.方法:选取受孕SD雌性大鼠220只,随机分为对照组;环磷酰胺组(10 mg·kg~(-1))、千里光水提物低、中、高剂量组(含生药7.5,15.0,30.0 g·kg~(-1);千柏鼻炎片复方提取物低、中、高剂量组(含生药7.5,15.0,30.0 g·kg~(-1);千里光总生物碱提取物低、中、高剂量组(含生药7.5,15.0,30.0 g·kg~(-1)等11组,于大鼠胚胎器官形成期(妊娠期第6～15天)给药,于妊娠期间定期称量母鼠体重和摄食量,称量子宫质量和胎仔体重,记录早期吸收胎、晚期吸收胎、F吸收胎、死胎、活胎、黄体以及着床腺数目和胎仔性别.对每只胎仔进行外观检查,测量胎仔的身长和尾长,并进行内脏检查和骨骼检查.结果:复方高剂量组的母鼠体重增长减缓,摄食量降低;各种受试物给药组均未见吸收胎明显增高,但水提物和总碱高剂量组的死胎百分数(分别为2.7%,3.36%)较对照组(0.0%)显著升高;总碱高剂量组的胎仔体重和身长明显降低.水提物、复方和总碱各剂鼍组均可见一定程度的骨骼发育异常,主要表现为囟门增大,顶骨、顶间骨、枕骨发育不全或枕骨缺失、颈椎弓发育不全,少数动物出现第14对肋骨等,剂量关系不明显.总碱组骨骼畸形发生的窝百分率高达80%,复方的死胎发生率和骨骼急性发生率相对较低.结论:千里光单味药及其复方均具有一定程度的胚胎毒性,主要表现为骨骼发育异常.尽管复方的胚胎毒性与单味药比较相对较低,但复方仍然能够造成部分动物胎儿骨骼畸形,因此建议千里光以及含千里光的复方在妊娠期禁用.