雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞Bcl-2和Bax表达的影响

本实验建立了去卵巢和雌激素替代疗法动物模型,用免疫组织化学SABC法结合图象分析方法,观察大鼠心内神经节细胞中Bcl-2和Bax的变化,探讨雌激素对卵巢摘除大鼠心内神经节细胞中Bcl-2和Bax表达的影响。去卵巢(OVX)大鼠心内神经节细胞中Bcl-2的表达较正常对照组明显减弱(P<0.05),雌激素替代治疗组大鼠心内神经节中Bcl-2的表达与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05),而较卵巢摘除组显著增高(P<0.05);卵巢摘除后同时给予特异性雌激素受体阻断剂(TAM)和17β-雌二醇(OVX+TAM+ERT)组大鼠心内神经节中Bcl-2的表达较正常对照组显著减弱(P<0.05),但与OVX组无显著性差异(P>.05)。各组中Bax的表达无显著性差异(P>0.05)。实验结果提示雌激素能上调大鼠心内神经节细胞中Bcl-2的表达,但对Bax的表达无影响。     

脑室注射链脲佐菌素对大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察App17肽对脑室注射链脲佐菌素的大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响,探讨胰岛素信号转导通路障碍对神经元存活的作用.方法脑室注射链脲佐菌素(STZ)制作大鼠痴呆模型.3周后,皮下注射App17肽.4周后取脑组织做Bcl-2、Bax、CytoC免疫组织化学染色及Western blotting半定量分析.结果 模型组大鼠海马内Bax、CytoC阳性反应神经元细胞数目多,胞质深染,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01);模型组大鼠海马内Bcl-2阳性细胞数目少,胞质染色淡,细胞计数与正常组及治疗组有显著性差异(P＜0.01).Western blotting半定量分析可见、Bcl-2、Bax、CytoC出现清晰的条带,组间可见较明显的差异(P＜0.01).结论 脑室注射STZ的大鼠海马内促进凋亡的Bax、CytoC表达增加;抑制凋亡的Bcl-2表达降低.App17肽可影响上述蛋白的表达,使之接近正常.胰岛素信号转导通路对神经元存活有一定作用.     

雌激素对大鼠胸腺细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨苯甲酸雌二醇对大鼠胸腺Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响及其机制.方法:雌性大鼠行卵巢切除术,给予苯甲酸雌二醇后,观察胸腺指数的变化,Hochest33342荧光染色及透射电镜标本观察胸腺细胞凋亡情况,免疫组织化学检测胸腺组织中Bcl-2和Bax的表达情况,原位杂交技术检测Bcl-2、Bax m RNA的表达情况.结果:双侧卵巢切除组大鼠胸腺指数较假手术组增加,双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺指数较双侧卵巢切除组减小;假手术组和双侧卵巢切除组大鼠胸腺组织中以正常胸腺细胞为主,偶见凋亡细胞或凋亡小体,双侧卵巢切除+雌激素组可见较多凋亡细胞和凋亡小体;双侧卵巢切除+雌激素组大鼠胸腺组织中Bcl-2表达较双侧卵巢切除组和假手术组增高明显降低,而Bax表达呈现相反趋势;Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达与Bcl-2、Bax的表达呈一致性.结论:雌激素可以降低大鼠胸腺指数,抑制胸腺组织中Bcl-2的表达,促进Bax的表达,从而诱导大鼠胸腺细胞凋亡,促进雌性大鼠胸腺退化.     

雌激素对慢性脑缺血大鼠海马神经元的保护作用

目的:探讨雌激素对慢性脑缺血大鼠海马神经元的保护作用.方法:采用永久结扎去势大鼠双侧颈总动脉的方法建立慢性脑缺血模型,项背部皮下注射17β-雌二醇.硫堇染色观察海马神经元的形态变化,SP免疫组织化学法观察海马神经元胆碱乙酰基转移酶(ChAT)、细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2和细胞凋亡促进蛋白Bax的表达.结果:模型组大鼠海马神经元排列松散,大小不规则,部分细胞固缩深染,核固缩.雌激素治疗组海马神经元细胞形态、大小与正常接近,偶见个别神经细胞胞核固缩,胞质浓染.与模型组同时间点相比,雌激素治疗组各时间点海马神经元Bcl-2和ChAT蛋白的表达升高,Bax蛋白的表达降低,且均呈时间依赖性.结论:雌激素可通过抑制海马神经元凋亡、上调海马神经元ChAT的表达,发挥对慢性脑缺血大鼠海马神经元的保护作用.     

雌、孕激素对大鼠子宫内膜NO/iNOS系统及细胞凋亡的影响

目的:了解雌、孕激素对卵巢摘除大鼠子宫内膜NO/iNOS系统及细胞凋亡的影响。方法:SD雌性大鼠分为5组:假手术组(Sham)、卵巢摘除组(OVX)、卵巢摘除加肌注苯甲酸雌二醇组(OVX BE2)、卵巢摘除加肌注黄体酮组(OVX P)、卵巢摘除同时加肌注BE2和P组(OVX BE2 P)。实验组分别在激素作用5、10周后取材。酶法测定血清NO含量,SABC法检测子宫内膜iNOS、Bcl-2的活性表达及TUNEL法检测内膜细胞凋亡。结果:OVX BE2组NO/iNOS系统及内膜Bcl-2的活性明显升高;OVX P组、OVX BE2组、OVX BE2 P组凋亡指数均显著减少。结论:雌、孕激素影响子宫内膜NO/iNOS系统活性、Bcl-2的表达及细胞凋亡,可能是激素调控内膜的机制之一。     

颈动脉狭窄影响大鼠认知功能及海马神经元凋亡

目的:研究改善颈动脉狭窄对大鼠认知功能、海马神经元凋亡及bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:采用SD大鼠制作颈动脉狭窄模型,2周后将颈动脉狭窄解除,4周后各组采用Morris水迷宫检测记忆能力、HE染色观察神经元形态学变化、TUNEL法观察海马神经元凋亡、免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:对照组与假手术组比较,大鼠记忆能力明显下降(P<0.01),神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Bcl-2和Bax免疫阳性细胞数增多(P<0.01),改善狭窄组较对照组记忆能力明显改善(P<0.01),神经细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05),Bcl-2免疫阳性细胞数明显增多(P<0.05),Bax免疫阳性细胞数明显减少(P<0.05).结论:改善颈动脉狭窄可提高大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善认知功能障碍.     

神经调节素对实验性痴呆大鼠的干预作用和可能机制

目的探讨神经调节素1β(NRG1β)对实验性老年痴呆大鼠神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响。方法成年健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、治疗组各10只,经左侧脑室微量注射淀粉样蛋白β1-40(Aβ1-40)建立实验性痴呆模型,经右侧脑室注射NRG1β干预治疗,Y型电迷宫检测大鼠的认知功能,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax表达。结果造模成功后,模型组大鼠较对照组认知能力明显下降,TUNEL阳性细胞数明显增多,神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达增强(P0.05)。经NRG1β治疗后,治疗组大鼠较模型组认知能力显著改善,TUNEL阳性细胞显著减少,Bcl-2表达增强,Bax表达减弱(P0.05)。结论 NRG1β可能通过调节Bcl-2和Bax表达而抑制神经细胞凋亡,从而改善实验性痴呆大鼠学习记忆能力。     

APP17肽对D-半乳糖脑老化小鼠海马凋亡相关基因表达的影响

目的 研究APP17肽对D-半乳糖脑病小鼠海马神经元凋亡的影响。方法 用D-半乳糖制备脑老化模型，皮下注射APPl7肽治疗D-半乳糖脑老化小鼠，3个月后取脑组织做Bcl-2、Bax、cREB、AKt、AIF免疫组织化学染色。结果 D-半乳糖脑病小鼠海马内Bax、AIF阳性反应神经元胞浆与突起深染，而正常小鼠及APPl7肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性细胞数目少，染色淡；D-半乳糖小鼠海马内Bcl-2、CREB、AKt阳性细胞数日少，染色淡；而正常小鼠及APP17肽保护的D-半乳糖小鼠海马阳性反应神经元胞浆与突起深染。结论 促进凋亡的Bax、AIF在D-半乳糖小鼠海马表达增加；抑制凋亡的Bcl-2、CREB、AKt在D-半乳糖小鼠海马表达降低。APP17肽能影响D-半乳糖脑病小鼠脑内Bcl-2、Bax、CREB、AKt、AIF的表达，使之接近正常。     

糖调节受损大鼠学习记忆能力下降与海马神经细胞凋亡有关

目的探讨糖调节受损大鼠海马神经细胞凋亡与学习记忆能力的关系。方法用高脂高糖饲料饲养法建立糖调节受损大鼠模型;用Morris水迷宫法检测学习记忆能力;用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡数目;用免疫组化和原位杂交技术检测海马神经细胞Bcl-2/Bax和Bcl-2 mRNA/Bax mRNA的表达。结果与NGT组相比,IGR组学习记忆能力下降(P0.05),海马神经细胞凋亡数增高(P0.05),Bcl-2、Bcl-2 mRNA表达减少(P0.05),Bax与Bax mRNA表达增加(P0.05)。IGR组学习、记忆能力与Bcl-2阳性表达呈正相关(P0.05),与Bax阳性表达呈负相关(P0.05)。结论糖调节受损与大鼠学习记忆能力下降有相关性,海马神经细胞凋亡可能是其重要机制之一。     

补肾阴及补肾阳法对化疗诱导的卵巢早衰大鼠外周血TNF-α、IFN-γ水平及卵巢颗粒细胞凋亡的影响

目的:观察化疗诱导的卵巢早衰大鼠接受补肾阴法和补肾阳法干预后,其外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及卵巢颗粒细胞凋亡情况。方法:48只雌性SD大鼠随机分成对照(control)组、环磷酰胺(CTX)组、环磷酰胺+补肾阴(CTX+kidney yin)组、环磷酰胺+补肾阳(CTX+kidney yang)组。ELISA法检测各组大鼠外周血TNF-α、IFN-γ水平;末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测卵巢颗粒细胞凋亡;Western blot法检测卵巢Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:CTX组大鼠外周血TNF-α、IFN-γ表达水平上升,卵巢颗粒细胞凋亡明显,卵巢中Bax蛋白明显增多,而Bcl-2蛋白明显减少。经本实验中补肾方药治疗后,外周血TNF-α、IFN-γ水平下降,颗粒细胞凋亡程度减轻,Bax蛋白减少,Bcl-2蛋白增多,部分指标变化以CTX+kidney yin组较为明显。结论:补肾阴及补肾阳法可通过调控颗粒细胞凋亡相关的Bax、Bcl-2蛋白及外周血TNF-α、IFN-γ的水平,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,恢复卵巢功能、增强储备能力。     

Amyloid precursor protein 17-mer peptide ameliorates hippocampal neurodegeneration in ovariectomized rats

Amyloid precursor protein 17-mer peptide (APP 17-mer peptide) is an active fragment of amyloid precursor protein (APP) in the nervous system that mediates various neuronal activities and functions. Estrogen deprivation during menopause disproportionately increases the risk of many neurodegenerative diseases, including Alzheimer's disease (AD). Currently, therapeutic approaches to treat Alzheimer's disease are less than effective. We have previously shown that APP 17-mer peptide participates in neuronal function in aged-hippocampal neurons. In this study, we investigate the effects of estrogen and APP 17-mer peptide on hippocampal neurodegeneration in ovariectomized rats. The results showed that decreases in learning and memory function in ovariectomized rats were associated with degenerative changes in hippocampal neurons. Estrogen deprivation also enhances apoptotic cell death and decreases expression of the anti-apoptotic protein Bcl-2. Administration of APP 17-mer peptide ameliorates changes associated with estrogen deprivation without affecting estrogen levels. These results indicate that APP 17-mer peptide may prevent neurodegeneration caused by estrogen deficiency. Our findings also suggest that estrogen deficiency-induced neurodegeneration is regulated by activation of an intracellular “cross talk” signaling pathway, connecting neurotrophins with APP 17-mer peptide.     

CART肽抑制NMDA诱导海马神经元凋亡的机制

目的：探讨可卡因－苯丙胺调节转录肽（CART）对兴奋性氨基酸N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导海马神经元凋亡的作用和机制。方法：18 d SD大鼠胚胎（E18）海马神经元原代培养8 d,用MTT吸光度值、DNA ladder、Hoechst染色、Western blotting方法观察NMDA引起的神经元凋亡,以及CART肽对NMDA诱导的细胞凋亡的影响,分析CART肽的作用机制。结果：CART肽预处理组海马神经元存活率明显高于NMDA组（P<0.05）;DNA ladder和核形态Hoechst染色证明,CART肽明显抑制NMDA诱导的海马神经元凋亡（P<0.01）。CART肽预处理明显促进NMDA组海马神经元中Bcl-2表达（P<0.01）,增加Bcl-2/Bax比值,抑制caspase-9及caspase-3活化（P<0.01）;但CART肽对Bax的表达及caspase-8活化无显著影响。结论： CART肽抑制NMDA诱导的海马神经元凋亡,呈明显的神经保护作用,其神经保护机制主要是提高抗凋亡分子Bcl-2表达,抑制线粒体凋亡途径启动分子caspase-9和执行分子caspase-3的活化。     

大鼠血管性痴呆模型动物中海马神经元凋亡和蛋白表达的研究

目的:观察不同时点分别结扎左、右颈总动脉建立大鼠血管性痴呆模型中海马CA1区神经元凋亡和Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨其在血管性痴呆发病过程中的作用。方法:采取间隔3 d分2次结扎双侧颈总动脉建立血管性痴呆模型,术后4周用TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡,用免疫组织化学法检测其Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:模型组大鼠海马CA1区可见大量凋亡神经元;模型组Bcl-2及Bax蛋白表达明显增加,与假手术组比较差异均有显著意义(P<0.05)。结论:此血管性痴呆模型大鼠中海马CA1区神经元大量凋亡丢失,可能是导致血管性痴呆的病理基础。     

Effect of 3-aminobenzamide on Bcl-2, Bax and AIF localization in hippocampal neurons altered by ischemia-reperfusion injury. the immunocytochemical study

Poly(ADP-ribose) polymerase plays an important role in cell survival and death. Our previous histological and ultrastructural studies showed that PARP inhibitor 3-aminobenzamide (3-AB) protected neurons against death after ischemia. In this study we investigated the effect of 3-AB on the localization and expression of apoptosis inducing factor (AIF) and on two proteins from Bcl-2 family: Bcl-2 and Bax in hippocampal area CA1, on the 4th day after 3 min of forebrain ischemia in gerbils. Our results indicated that after ischemia AIF is preferentially translocated from the mitochondria to the cytoplasm and to the nucleus. Intravenous administration of 3-AB (30 mg/kg b.w.) prevents AIF translocation to the nucleus. AIF was mainly seen in the structurally unchanged mitochondria and Golgi complex. Moreover, after 3-AB administration overexpression of Bcl-2 protein was observed in mitochondrial membranes, rough endoplasmatic reticulum, Golgi complex, nuclear envelopes, and also in cytoplasm and in nucleus. These data suggest that inhibition of PARP activity may have a beneficial effect on hippocampal neurons through overexpression of Bcl-2 protein and suppression of AIF translocation to the nucleus.     

自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(sham)、CA/CPR模型组(model)、雷帕霉素(Rapa)组(CA/CPR+Rapa)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CA/CPR+3-MA)。采用呼气末夹闭气管窒息法复制大鼠CA/CPR动物模型,分别给予自噬激动剂Rapa 0.2 mg/kg及自噬抑制剂3-MA 10 mg/kg进行干预。采用神经功能缺陷评分(NDS)评价CA/CPR大鼠神经功能;用TUNEL染色法检测大鼠海马神经元的凋亡变化;用RT-PCR和Western blotting法检测大鼠海马内微管蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,CA/CPR模型组大鼠NDS评分明显降低;海马神经元TUNEL染色阳性细胞数明显增多,凋亡率显著升高;海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CA/CPR+Rapa大鼠NDS评分明显降低,而海马神经元凋亡率明显有所增加,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显上调,而Bcl-2表达则明显有所下降;CA/CPR+3-MA大鼠NDS评分明显升高,而海马神经元凋亡率下降,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显下调,而Bcl-2表达则有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论 CA/CPR后自噬水平升高促进海马神经元凋亡,自噬水平降低抑制海马神经凋亡,两者相互作用共同参与CA/CPR的病理过程。     

白藜芦醇对新生大鼠神经元缺血缺氧时SDF-1/CXCR4通路抗凋亡作用的调控机制

目的:探究白藜芦醇(RSV)对缺血缺氧诱导的新生大鼠脑神经元凋亡及基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)通路的作用和机制。方法:体外培养新生大鼠皮质神经元,给予氧糖剥夺(OGD)模拟新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)模型。首先将细胞随机分成4组:对照(control)组、HIE组、HIE+RSV低剂量(10μmol/L)组和HIE+RSV高剂量(50μmol/L)组。OGD处理2 h后加入相应剂量的RSV继续培养24 h,通过流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白及SDF-1和CXCR4的蛋白表达水平,real-time PCR检测SDF-1和CXCR4的mRNA表达水平。然后使用CXCR4抑制剂AMD3100与RSV共同处理OGO损伤的细胞24h,检测SDF-1/CXCR4通路阻断后RSV对细胞凋亡和凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果:RSV能够抑制OGD诱导的神经元凋亡,下调活化的caspase-3和细胞色素C的水平,上调Bcl-2/Bax比值(P0.05)。与对照组相比,OGD导致SDF-1和CXCR4表达增加;与模型组相比,RSV能够上调SDF-1和CXCR4的表达(P0.05);使用AMD3100阻断SDF-1/CXCR4通路减弱了RSV抑制OGD诱导的细胞凋亡的作用。结论:RSV可抑制缺血缺氧诱导的新生大鼠神经元凋亡,其机制可能是通过上调SDF-1/CXCR4通路发挥作用的。     

母体肢体缺血预处理对宫内窘迫胎鼠复氧后海马神经元凋亡的影响*

 目的： 观察母体的肢体缺血预处理(LIP)对宫内窘迫胎鼠复氧后海马神经元凋亡的影响。方法: 采用微动脉夹阻断母鼠通向子宫和卵巢的动静脉15 min后开放以制备胎鼠宫内窘迫模型。孕19 d SD大鼠12只,随机分为4组：空白对照（S）组、LIP组、胎儿窘迫（FD）组和LIP+FD组。各组母鼠再灌注2 d时剖宫取活胎鼠12只断头取脑。TUNEL法测定胎鼠海马CA1区神经元凋亡情况,计算细胞凋亡指数;免疫组化法和Western blotting法测定Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果: 与S组比较,FD组和LIP+FD组胎鼠海马CA1区神经元凋亡指数增加（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低;与S组比较,LIP组胎鼠海马CA1的 Bcl-2、Bax蛋白表达及Bcl-2/Bax蛋白表达的比值无明显改变（P＞0.05）;与FD组比较,LIP+FD组细胞凋亡指数降低（P＜0.05）,Bcl-2/Bax比值增加。结论: 母体肢体缺血预处理减轻了宫内窘迫胎鼠复氧后海马神经元的凋亡,其机制可能与Bcl-2蛋白表达的上调相关。