6-OHDA induces cycle reentry and apoptosis of PC12 cells through activation of ERK1/2 signaling pathway

This study investigated the effect and mechanism of cell cycle reentry induced by 6-hydrodopamine （6-OHDA） in PC12 cells. By using neural differentiated PC12 cells treated with 6-OHDA, the apoptosis model of dopaminergic neurons was established. Cell viability was measured by MTT. Cell apoptosis and the distribution of cell cycle were assessed by flow cytometry. Western blot was used to detect the activation of extracellular regulator kinasel/2 （ERK1/2） pathway and the phosphorylation of retinoblastoma protein （RB）. Our results showed that after PC12 cells were treated wtih 6-OHDA, the viability of PC12 cells was declined in a concentration-dependent manner. Flow cytornetry revealed that 6-OHDA could increase the apoptosis ratio of PC12 cells in a time-dependent manner. The percentage of ceils in G0/G1 phase of cell cycle was decreased and that in S phase and G2/M phase increased. Simultaneously, ERK1/2 pathway was activated and phosphorylated RB increased. It was concluded that 6-OHDA could induce cell cycle reentry of dopaminergic neurons through the activation of ERK1/2 pathway and RB phosphorylation. The aberrant cell cycle reentry contributes to the apoptosis of dopaminergic neurons.     

多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究

目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。     

人参皂苷Rh2通过调控GSK-3β/Wnt双信号通路影响骨肉瘤细胞增殖和凋亡

目的：探讨人参皂苷Rh2（Rh2）对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并进一步研究Rh2在骨肉瘤中抗肿瘤作用的机制。方法：分别以不同浓度的Rh2 处理骨肉瘤细胞,用MTT法检测骨肉瘤细胞活性的变化;用基质凝胶（Matrigel）侵袭和孔膜法（Transwell）迁移实验检测骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力的变化;用Annexin V-FITC/PI调亡检测试剂盒及流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的调亡变化;用Western blot法检测细胞侵袭、凋亡相关蛋白的表达情况。结果：骨肉瘤细胞经过不同浓度的Rh2处理后,MTT实验结果表明Rh2在一定浓度范围内可以显著抑制骨肉瘤细胞的生长（P ＜0.05）。Matrigel侵袭和Transwell迁移实验结果表明Rh2可以有效抑制骨肉瘤细胞的侵袭与迁移（P ＜0.05）。Annexinv-FITC/PI凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测结果表明,Rh2可以促进骨肉瘤细胞的凋亡反应（P ＜0.05）。Western blot实验结果则显示Rh2 可以上调Bax、E-cadherin蛋白的表达,并抑制Bcl-2、PARP、MMP2、MMP9 蛋白的表达。Rh2 还可以通过激活GSK-3β并抑制β-catenin、Cyclin D1和C-myc相关蛋白来达到调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭反应的作用。结论：Rh2可以抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,这种作用可能是通过激活GSK-3β并抑制Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

冬凌草甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡及对G2/M细胞周期的阻滞作用

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌PANC-1细胞生长抑制以及促进凋亡的机制.方法 采用MTT还原法检测冬凌草甲素对PANC-1细胞生长的抑制作用;碘化丙啶(PI)染色和Hoechst 33342染色法观察细胞形态学的变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期分布;膜联蛋白V(Annexin V)/pI双标流式细胞术测定凋亡细胞比...     

阿尔茨海默病中Tau蛋白与相关分子作用的探究

阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease, AD）是一种致死性神经退行性脑病,细胞外间隙β淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成的老年斑以及细胞内过度磷酸化Tau蛋白聚集形成的神经原纤维缠结（NFTs）是其主要特征性病变。Tau蛋白的异常与阿尔茨海默病的神经变性和记忆认知减退密切相关。而Tau蛋白与相关分子的相互作用进一步促进了阿尔茨海默病的发生发展。本文综述了Tau蛋白与Aβ、14-3-3ζ、p62在阿尔茨海默病中的相互联系和作用。     

红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号途径保护H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的 探讨红景天苷保护H2O2诱导PC12细胞凋亡的分子机制.方法 PC12细胞置于含10％马血清、5％胎牛血清的高糖DMEM完全培养基中常规培养.不同浓度的红景天苷预处理细胞2h,然后H2O2作用细胞特定的时间,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP,caspase 3的表达及胞内信号分子p38,ERK和JNK的磷酸化水平;DAPI染色检测细胞核的形态改变;ROS检测试剂盒检测胞内ROS的水平;膜质分离实验检测NOX2的两个重要亚基gp91phox和p47phox在胞膜和胞质中的含量;免疫共沉淀实验检测gp91phox和p47phox的结合.结果 红景天苷浓度依赖性的抑制H2O2诱PC12细胞凋亡;减弱H2O2诱导p38,JNK和ERK的磷酸化;减少H2O2诱发的ROS释放;抑制gp91phox和p47phox的结合,进而抑制NOX2的活性.结论 红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号通路保护H2O2诱导PC12细胞凋亡.     

右美托咪定通过PI3K/Akt信号通路减轻梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡

目的:探究右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinosit-ide-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路减少梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)大鼠肝细胞凋亡的各种作用.方法:选取40只...     

Tau蛋白异常导致阿尔茨海默病等神经退行性Tau蛋白病的机制与研究进展

Tau蛋白是神经细胞特有的微管相关蛋白,其基本功能是促进微管蛋白组装成微管,维持正常神经轴突运输及微管稳定性。既往基于尸检发现脑部神经纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFTs）与神经细胞形态异常及凋亡之间呈良好的平行关系,因而NFTs被认为是引起神经退行性Tau蛋白病的重要原因,并认为与Tau蛋白的过磷酸化有关;但新近发现单纯Tau蛋白磷酸化并不足以形成NFTs,还必须有其他诸如糖基化、脯氨酸异构化、泛素化等翻译后修饰机制的协同,其他如Tau蛋白基因突变、自噬的抑制等也与NFTs形成有关。尤其是最近采用转基因活体动物和多光子影像技术的研究显示,NFTs可能只是疾病晚期的临床表现,而可溶性的Tau蛋白才是启动下游病理反应的关键因素。更为引人注目的是,抑制Tau蛋白还可以阻止Aβ引起的神经细胞凋亡、减轻记忆损害,换言之即Aβ的毒性是Tau蛋白依赖性的。随着近期对Tau蛋白异常介导神经退行性Tau蛋白病及其机制的新认识以及以Aβ为靶点的药物研发宣告失败,人们愈来愈重视以Tau为靶点的药物开发。     

氯化锂通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察氯化锂（LiCl）作用于神经干细胞（NSCs）后对细胞周期等生物学性状的影响以及经LiCl处理过的神经干细胞在分化过程中Wnt信号通路的主要信号分子β-catenin、GSK-3β的表达改变,评估LiCl激活Wnt信号通路后对NSCs增殖和分化的影响。方法应用分离培养的NSCs体系,流式细胞仪检测不同浓度的LiCl（1、5、10、100mmol/L）处理48h后NSCs细胞周期等生物学性状改变,Western Blot检测LiCl处理后的NSCs中β-catenin、GSK-3β的表达以及动态变化。结果 LiCl处理后的NSCs体系细胞团块分散,呈悬浮状态生长,并能抑制血清诱导下的干细胞分化,分化细胞贴壁时间明显延长。流式细胞仪检测表现为S期、G2/M期细胞数百分比的增加和G0/G1期细胞数百分比的相对减少,其效应呈现一定的剂量依赖关系（P〈0.01）。Western Blot检测显示NSCs中的β-catenin分子在LiCl处理后表达明显增强,GSK-3β分子的表达明显下调,表现出正相关的量效关系（P〈0.01）。结论 LiCl通过激活Wnt信号通路能促进培养NSCs的增殖,抑制干细胞分化,其作用可能与胞内效应分子β-catenin的表达增多有关。     

氯通道阻断剂DIDS对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨氯通道阻断剂DIDS抗PC12细胞凋亡的作用机制。方法:取处于对数生长期的PC12细胞,随机分为对照组、模型组(用400 nmol/L H2O2诱导细胞凋亡)和DIDS组(H2O2+DIDS),培养12 h后,用MTT法测定各组细胞的存活率,Western blot法观察凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:400 nmol/L H2O2可以明显诱导PC12细胞损伤,细胞存活率为(35.07±1.23)%;DIDS组细胞存活率明显高于模型组,且具有一定浓度依赖性(F=640.420,P<0.001)。与对照组比较,模型组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,DIDS组Caspase-3表达降低,Bcl-2蛋白表达增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:DIDS可能通过抑制Caspase-3依赖性凋亡信号通路发挥抗凋亡作用。     

异丙酚对睾丸扭转/复位后生精细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨异丙酚对睾丸扭转/复位后睾丸细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法30只青春期Wistar大鼠随机等分为3组.组1为对照组(左侧睾丸扭转720°即刻复位);组2、3为睾丸扭转/复位模型组(左侧睾丸扭转720°、2h后复住).组3睾丸复位前5min静脉注射异丙酚20mg/kg,继之输入5%异丙酚50mg/(kg·h)1 h;组1、2以生理盐水代之.术后24 h取左侧睾丸标本分别以原位缺口末端标记法(TUNEL)及免疫组织化学法检测凋亡细胞和Bcl-2、Bax基因蛋白表达.结果与组1比较,组2睾丸生精细胞凋亡指数升高和Bax表达增强(P＜0.01),而睾丸细胞Bcl-2表达下降(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值降低,睾丸病理损害明显.与组2比较,组3睾丸上述改变明显减轻(P＜0.01).结论异丙酚通过调节Bcl-2及Bax蛋白表达抑制睾丸扭转/复住所诱导的生精细胞凋亡增加.     

蒺藜总皂苷对AD大鼠GSK-3β的影响

目的探讨蒺藜总皂苷对AD大鼠GSK-3β的影响。方法采用AlCl3灌胃制作AD大鼠模型,Morris水迷宫检测大鼠空间记忆能力,免疫印迹检测GSK-3β蛋白水平。结果蒺藜总皂苷明显缩短大鼠寻找平台的时间,降低GSK-3β蛋白水平。结论蒺藜总皂苷能有效改善因AlCl3所致的大鼠空间记忆障碍,其机制可能与抑制GSK-3β蛋白过度激活有关。     

原儿茶酸对β淀粉样蛋白_(1-42)诱导PC12细胞毒性的保护作用及机制

【目的】探讨原儿茶酸(PCA)在阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的保护作用及机制。【方法】采用免疫荧光法鉴定β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))纤维聚体,将Aβ_(1-42)作用于PC12细胞,并于不同时间点(0、3、6、9、12、24 h)观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率以确定造模条件,并用MTT法检测原儿茶酸对PC12细胞的毒性条件。采用预保护的给药方式,检测不同浓度的原儿茶酸对PC12细胞的干预作用。采用Western-blot法检测自噬相关标记蛋白Beclin1的表达水平,以探究原儿茶酸的保护作用机制。【结果】显微镜下观察到12、24 h时,Aβ_(1-42)白色团块聚集基本稳定,无明显差异,MTT检测细胞损伤率均达40%,由此确定12 h和24 h均可做为AD的造模条件。原儿茶酸在200~800μmol/L浓度作用24 h的条件下,细胞活力显著上升(P0.01)。Western-blot结果显示:原儿茶酸可显著增加Beclin1的表达水平。【结论】原儿茶酸有助于改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞毒性,其机制可能与增加自噬水平有关。     

Cbl-b and PI3K/Akt pathway are differently involved in oxygen-glucose deprivation preconditioning in PC12 cells

Background Transient sublethal ischemia is known as ischemic preconditioning, which enables cells and tissues to survive subsequent prolonged lethal ischemic injury. Ischemic preconditioning exerts neuroprotection through phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/Akt pathway. Cbl-b belongs to the Casitas B-lineage lymphoma （Cbl） family, and it can regulate the cell signal transduction.The roles of ubiquitin ligase Cbl-b and PI3K/Akt pathway and the relationship between them in oxygen-glucose deprivation preconditioninq （OGDPC） in PC12 cells were investiaated in the ore.~e.nt study     

中药颤复宁血清对6-羟基多巴诱导的PC12 细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨中药颤复宁血清对6-羟基多巴（6-OHDA）诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）凋亡的抑制作用。方法：用血清药理学方法制备中药血清．加到经6-OHDA处理的PCI2细胞培养液中,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞存活率．并用免疫组织化学染色方法和图像分析检测酪氨酸羟化酶（TH）含量及半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）阳性凋亡细胞数。结果：颤复宁中药血清能有效地提高PC12细胞的存活率．对6-OHDA诱孚的凋亡有明显抑制作用。与6-OHDA损伤组比较,颤复宁血清组TH阳性细胞平均吸光度增高（P〈0．01）,Caspase-3阳性细胞数明显降低（P〈0．01）。结论：中药颤复宁血清对PC12细胞具有直接的神经营养作用．能提高细胞存活率,且对6-OHDA诱导的细胞凋亡具有抑制作用。     

Effects of histamine on growth and apoptosis of human melanoma cells A375

Histamine,as a biogenic amine,exists in bod-ies diffusely.Like other neural transmitters,his-tamine can play various physiological roles whencombining with special receptors on plasma mem-brane of target cells.Previous studies suggestedinconsistent results that histamine promoted or in-hibited growth of primary or metastatic melanomacells.The mechanism has not been elucidated ful-ly.The present research is aimed at investigatingwhether histamine has effects on growth and apop-tosis of human me…     

基于PI3K/AKT信号通路探讨黄芪甲苷对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

【】 目的 研究黄芪甲苷对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法 使用不同浓度黄芪甲苷干预经H2O2诱导的PC12细胞,ROS试剂盒检测PC12细胞内ROS含量,凋亡试剂盒检测PC12细胞凋亡率,Western blot检测PC12细胞BCL-2,Caspase-3,Bax等凋亡指标及PI3K/AKT信号通路关键蛋白表达。结果 0.8μmol/L黄芪甲苷可进一步提高PC12细胞存活率;中高黄芪甲苷剂量组PC12细胞内ROS及凋亡率显著下降;中高黄芪甲苷剂量组通过活化PI3K/AKT信号通路减低PC12细胞BCL-2,Caspase-3,Bax等凋亡指标蛋白水平。结论 中高剂量黄芪甲苷可基于PI3K/AKT信号通路改善经H2O2诱导的PC12细胞氧化应激及凋亡水平。     

Minocycline protects the apoptosis of PC12 cells induced by 1-methyl-4-phenylpyridinium

Objective： To explore the protective effect of minocycline on the apoptosis of cellular parkinsonism models induced by MPP^＋ . Methods： Using PC12 cells as the apoptotic model of dopaminergic neurons, MC and MPP^＋ were added into the culture medium of PC12 cells, and using MTr to assay the cell viability and metabolic state; The cells apoptosis was assayed by electrophoresis method and using flow cytometry FACS to assay the apoptosis ratio. Results： Added the MPP^＋ to get the concentration of 10μmol/L, the cellular parkinsonism model of apoptosis had been prepared. The pre-treatment of MC （ 100/μmol/L） could significantly increase the PC12 cell viability. The apoptosis ratio of MC＋MPP^＋ group was significantly lower than that of MPP^＋ group, but was still significantly higher than that of control group. Conclusion： MC may protect the cell apoptosis induced by MPP^＋ to some extent.     

6-OHDA Induces Cycle Reentry and Apoetosis of PC12 Cells through Activation of ERK1/2 Signaling Pathway

This study investigated the effect and mechanism of cell cycle reentry induced by 6-hydrodopamine (6-OHDA) in PCI2 cells.By using neural differentiated PCI2 cells treated with 6-OHDA,the apoptosis model of dopaminergic neurons was established.Cell viability was measured by MTT.Cell apoptosis and the distribution of cell cycle were assessed by flow cytometry.Western blot was used to detect the activation of extracellular regulator kinasel/2 (ERK1/2) pathway and the phosphorylation of retinoblastoma protein (RB).Our results showed that after PC12 cells were treated wtih 6-OHDA,the viability of PC12 cells was declined in a concentration-dependent manner.Flow cytometry revealed that 6-OHDA could increase the apoptosis ratio of PC12 cells in a time-dependent manner.The percentage of cells in G0/G1 phase of cell cycle was decreased and that in S phase and G2/M phase increased.Simultaneously,ERK1/2 pathway was activated and phos- phorylated RB increased.It was concluded that 6-OHDA could induce cell cycle reentry of dopa-minergic neurons through the activation of ERK1/2 pathway and RB phosphorylation.The aberrant cell cycle reentry contributes to the apoptosis of dopaminergic neurons.     

酰化4-羟基查耳酮对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的抗氧化保护作用及初步机制

目的:研究查尔酮化合物B1、B2对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其对Nrf2/ARE信号通路的影响。方法:建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的模型,用MTT法检测化合物B1和B2的抗氧化活性及细胞毒性;用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测其对转录相关因子Nrf2调控基因谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)、血红素氧合酶-1(HO-1)m RNA表达的影响;用Hoechst染色检测其对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。结果:分别加了B1、B2的细胞孵育1 h后,B1、B2对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤无保护作用,而孵育24 h后,B1、B2均具有较好的保护作用,两者在浓度为10μmol/L时对细胞无毒性;B1对Nrf2下游GCLC、HO-1基因的表达无明显影响,而B2可明显激活GCLC、HO-1基因的表达,且明显抑制H2O2诱导的PC12细胞的凋亡。结论:B1、B2均对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有较好的抗氧化保护作用,B2的作用机制可能是通过激活Nrf2/ARE抗氧化信号通路来实现,B1可能是通过其他机制起到抗氧化作用。