黄连解毒汤干预胃火炽盛证引起的口腔疾病患者尿液代谢组学研究

[目的]运用代谢组学方法,研究胃火炽盛证引起的口腔疾病患者的尿液代谢物变化及黄连解毒汤对其干预作用,探索胃火炽盛证引起的口腔疾病患者尿液中的潜在标志物。[方法]按照诊断标准、纳入标准、排除标准等纳入胃火炽盛证引起的口腔疾病患者58例作为口腔疾病患者组,所有患者服用黄连解毒汤5d后为黄连解毒汤干预组,另外纳入健康对照组10例。利用超高效液相色谱-静电场轨道阱质谱联用(ultra performance liquidchromatography coupled with orbitrap tandem mass spectrometry, UHPLC-Orbitrap MS)法对口腔疾病患者黄连解毒汤干预前和干预后,以及健康对照组的尿液进行分析,采用主成分分析(principal component analysis, PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminantanalysis, OPLS-DA)处理数据,区分代谢轮廓并寻找可能的生物标记物。[结果]健康对照组和口腔疾病患者组初步鉴定38个差异代谢物,口腔疾病患者组黄连解毒汤干预前和干预后初步鉴定出36个差异代谢物。3组中鉴定出α-N-苯乙酰基-L-谷氨酰胺等10种化合物可能与黄连解毒汤干预胃火炽盛证引起的口腔疾病的作用机制和代谢途径有关,分别为癸酰肉碱、α-N-苯乙酰基-L-谷氨酰胺、反-2,顺-4-癸二烯酰肉毒碱、异亮羟基脯氨酸、3-氨基己酸、10,20-二羟基二十碳酸、菊蒿醇B、Sterebin A、亮菌素和L-谷氨酰胺。推测黄连解毒汤治疗胃火炽盛证口腔疾病主要涉及的代谢通路为三聚氰胺、天冬氨酸和谷氨酸代谢,D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢等。[结论]本研究首次从代谢组学角度研究了健康对照组和胃火炽盛证口腔疾病患者组,以及胃火炽盛证口腔疾病患者黄连解毒汤干预前和干预后尿液中代谢模式差异,证实黄连解毒汤可以显著修复胃火炽盛证引起的口腔疾病患者尿液中的内源性小分子代谢紊乱。     

赣南地区非综合征性唇腭裂患者血浆代谢组学研究

目的通过检测赣南地区非综合性唇腭裂（NSCL/P）患者与正常人血浆内源性代谢产物的变化,探讨基于核磁共振（NMR）的代谢组学方法在临床实践中的可行性。方法分别收集17例NSCL/P患者和16例正常人对照组的血浆样品,测定NSCL/P患者血浆的一维1H-NMR图谱,采用主成分分析法（PCA）分析NMR数据,以鉴别NSCL/P组和正常对照组血浆中内源血浆代谢产物的变化,获得NSCL/P患者的特征代谢物。结果 NSCL/P组和正常对照组间的血浆代谢产物存在明显差别。与正常对照组相比,NSCL/P患者血浆中的缬氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸的含量升高;NSCL/P患者血浆中的丙氨酸、胆碱、磷酰胆碱等代谢物的含量降低。结论采用基于NMR的代谢组学技术能较好地反映赣南地区NSCL/P患者血浆的代谢变化,通过1H-NMR代谢图谱获得NSCL/P的特征代谢物,可以初步探讨NSCL/P的代谢机制,表明了该技术在临床应用中具有很大的潜能。     

基于系统生物学的非小细胞肺癌气阴两虚证多组学联合分析研究

[目的]探讨气阴两虚型非小细胞肺癌肠道菌群、代谢组学和蛋白组学的基本特征。[方法]选择气阴两虚型非小细胞肺癌患者13例作为患者组,选择健康志愿者15名作为健康对照组,收集两组粪便标本,用16S rDNA技术检测肠道微生态。采集两组血清标本,通过液相色谱-质谱联用技术比较两组代谢组学和蛋白质组学差异。最后通过WGCNA软件对多组学结果进行联合分析。[结果]两组间存在6种显著差异菌,20种差异蛋白(上调5个,下调15个),11种差异代谢物(负离子模式下2个,正离子模式下9个),差异菌群、差异蛋白与差异代谢物间存在相关性,联合分析发现差异物质与癌症通路相关。[结论]气阴两虚型非小细胞肺癌具有特异的肠道菌群、蛋白质和代谢物,与肿瘤的发生发展密切相关。     

2型糖尿病患者血清与粪便的代谢组学研究

  目的  研究2型糖尿患者与健康者血清和粪便的代谢组学差异，分析差异代谢物与2型糖尿病之间的相关性。  方法  选择2018年1月至2019年3月在昆明医科大学第二附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者53例，以及同期常规体检健康对照人群30例，采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术对两组研究对象的血清代谢物及30例糖尿病患者与对照组的粪便代谢物进行非靶向和靶向的代谢组学研究。应用Spearman相关性分析方法对血清和粪便中的差异代谢物与2型糖尿病相关指标的相关性进行分析。  结果  在2型糖尿病组与健康对照组血清样本中鉴定出15个差异代谢物，在粪便样本中鉴定出的差异代谢物则有6个。其中，糖尿患者血清中的谷氨酰胺、壬二酸、癸二酸及3-羟基癸二酸等二羧酸类羟基化衍生物明显低于健康对照组，差异有统计学意义（P < 0.01），而琥珀酰乙酰乙酸、缬氨酸、亮氨酸、葡萄糖、乳酸的含量则高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.01），并且琥珀酰乙酰乙酸、乳酸与糖化血红蛋白、餐后2 h血糖及空腹血糖浓度具有较强的正相关性，而壬二酸、癸二酸及二羧酸类羟基化衍生物与血糖浓度则具有较强的负相关；在粪便代谢物中，去氧胆酸和鹅去氧胆酸等胆汁酸与受检者的血糖浓度也有着一定的正相关性，并且单变量分析结果显示，与健康对照组相比糖尿病患者血清中的去氧胆酸和鹅去氧胆酸均显著性升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  2型糖尿患者的血清代谢组学与健康者具有明显的差异，这些差异代谢物与糖尿病的发生和发展具有较强的关联性。在粪便代谢组学中，糖尿患者的胆汁酸水平与血糖的浓度变化也密切相关。     

基于核磁共振波谱的鼻咽癌患者血清代谢组研究

目的 应用核磁共振氢谱(nuclearmagnetic resonancc1H,1H NMR)和偏最小二乘法.判别分析(partial least square-discriminant analysis,PLS-DA)研究鼻咽癌(NPC)患者血清中代谢物的代谢组变化.方法 健康人血清10例和鼻咽癌患者血清2l例,采用...     

血浆血管内皮生长因子含量测定对胃癌的诊断价值

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌诊断中的价值。方法用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术对92例胃癌、36例胃良性病变(10例胃溃疡和26例胃炎)和92例正常人血浆VEGF含量进行测定,分析不同临床病理特性与VEGF含量的相关性,并用受试者工作特征(ROC)曲线分析VEGF对胃癌诊断的临床价值。结果血浆VEGF含量在胃癌和胃良性病变组呈非正态分布,与正常对照组相比,胃癌和胃良性病变组都显著增高,但胃良性病变组增高幅度不及胃癌组;血浆VEGF含量与性别、年龄、肿瘤位置(胃窦、胃体、幽门)、组织类型、分化程度及肿瘤分级无相关性,与TNM分期、有无淋巴结和远处转移显著相关;以217.79 pg/mL为临界值,血浆VEGF诊断胃癌的灵敏度为40.2%,特异性为93.7%,诊断准确率为69.9%。结论血浆VEGF含量与胃癌的临床病理特性相关,检测血浆VEGF含量对胃癌诊断有一定价值。     

基于~1H-NMR的模式识别方法在慢性心力衰竭患者血清代谢组学中的应用

目的探讨基于1H-NMR的模式识别方法应用于慢性心力衰竭(CHF)血清代谢组学研究的可行性。方法应用1H-NMR技术对9例CHF患者和6例健康人血清进行检测,对所得数据分别采用主成分分析法(PCA)和正交信号校正偏最小二乘法(OPLS)进行模式识别分析,确定CHF患者与健康人血清差异代谢物,比较两种模式识别方法判别能力。结果 CHF患者与健康人血清1H-NMR图谱有明显差异。其中PCA模式识别法未能将CHF组和健康对照组区分开,而用OPLS模式识别方法两组可明显区分。结论 1H-NMR技术是研究CHF代谢组学的有效技术手段,CHF患者血清代谢组与健康人存在明显差异。OPLS模式识别法明显优于PCA法,能够去除非实验因素的影响,提高分类效果。     

早期胃癌患者与正常健康人血清IL-2表达

目的 探讨胃癌患者及健康者血清IL-2水平变化.方法 选取初次住院的早期胃癌患者共26例纳入本项研究.采集并分离所有受试者血清标本,ELISA方法检测血清IL-2水平.结果 早期胃癌患者血清IL-2水平较正常健康人显著降低,差异具有统计学意义.结论 血清IL-2水平可反映胃癌患者细胞免疫功能变化,这可能是肿瘤细胞发生免...     

慢性肾衰竭患者尿乙酰氨基葡萄糖苷酶活性检测的临床意义

目的: 探讨慢性肾衰竭患者尿乙酰氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)活性变化及其在慢性肾衰竭进展过程中的意义。方法: 用光电比色法测定87例慢性肾衰竭患者尿NAG的活性,并根据其肾脏病变是否稳定以及是否合并高血压将患者分为肾脏病变稳定组、肾脏病变活动组、高血压组和非高血压组,分别比较尿NAG的活性。同期选择30名健康人作为对照组。结果: 慢性肾衰竭尿NAG活性显著高于对照组(P<0.01),肾脏病变活动组尿NAG活性显著高于肾脏病变稳定组(P<0.01),高血压组尿NAG活性显著高于非高血压组(P<0.01)。结论: 慢性肾衰竭病程中,肾脏病变活动和高血压可能是加重肾小管-间质损伤的重要因素。     

阵发性心房颤动患者血清代谢组学初步研究

目的 采用代谢组学方法分析阵发性心房颤动患者血清中低分子代谢物的变化。方法 采用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）检测15例阵发性心房颤动患者（病理组）和同期20例健康者（对照组）血清中代谢物,采用正交偏最小二乘法（OPLSA）的方法比较两组代谢谱的变化。结果 对照组和病例组的代谢谱分离趋势明显,利用Wiley和NIST质谱库及本课题组建立的标准品谱库鉴定了29个具有统计学意义的差异代谢物。并对29个差异代谢物进行了ROC曲线绘制,计算ROC曲线下的面积,得出甘油曲线下的面积为0.937,丝氨酸曲线下的面积为0.853,天冬氨酸曲线下的面积为0.933,苏氨酸曲线下的面积为0.823,色氨酸曲线下的面积为1。结论 心房颤动患者血清中低分子代谢产物与正常人存在差异,心房颤动患者血清中甘油、丝氨酸、天冬氨酸、苏氨酸以及色氨酸可能成为心房颤动诊断标志物。     

食管癌患者血清TIMP-2水平以及临床意义

目的 检测基质金属蛋白酶抑制因子-2在食管癌患者血清中的蛋白水平及其临床意义.方法 通过对100例血浆样本,包括50例食管癌患者、50例健康人,采用酶联免疫吸附试验进行检测,测定基质金属蛋白酶抑制因子-2蛋白的血清浓度,检验其诊断食管癌的敏感性和特异性.结果 酶联免疫吸附试验检测结果显示,食管癌患者血清中基质金属蛋白酶抑制因子-2蛋白浓度显著低于正常对照人群（P＜0.01）.当cutoff值定为107.5 ng/mL时,基质金属蛋白酶抑制因子-2检测食管癌的敏感性为70％,特异性为94％.结论 检测血清中基质金属蛋白酶抑制因子-2的蛋白水平有助于食管癌的诊断.     

血清Ⅰ型胶原羧端肽和尿Ⅰ型胶原羧端肽/肌酐检测在肺癌骨转移监测中的价值

为探讨血清β-Ⅰ型胶原羧端肽（β-CTX）、血骨钙素（M-MID）和尿Ⅰ型胶原羧端肽/肌酐（CTX/CR）在监测肺痛骨转移中的意义,收集2007年5月至2008年5月期间住院的肺癌骨转移患者24例（转移组）,无骨转移肺癌患者26例（无转移组）及正常对照27例（正常对照组）,全部检测血清β-CTX、血M-MID及尿CTX/CR比值.结果 发现肺癌骨转移组的血β-CTX和尿CTX/CR明显高于无骨转移及正常对照组,检测这两项指标可以为临床判断肺癌骨转移提供参考。     

胃癌患者血清中TNF-a IL-8的检测及临床意义

目的:探讨血清TNF-a、IL-8水平与胃癌的关系。方法:选择胃癌住院患者64例,均经纤维内窥镜与病理检查确诊,用ELISA法测定胃癌患者术前、术后与健康者血清中TNF-a、IL-8含量,采用方差分析进行组间两两比较。结果:胃癌患者血清TNF-a、IL-8含量明显高于正常对照组(P<0.05),临床Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者血清TNF-a和IL-8含量明显高于Ⅰ期、Ⅱ期(P<0.05),肿瘤根治术后血清TNF-a、IL-8含量较术前明显降低(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05)。结论:检测血清TNF-a、IL-8含量,对了解胃癌患者体内免疫状态,临床诊断和预后判断有重要意义。     

检测尿足细胞在活动性肾小球疾病中的意义

目的:探讨检测尿足细胞的方法可否作为无创评估肾小球损伤的指标.方法:采用抗人足细胞标记蛋白-Podocalyxin(PCX)抗体进行间接免疫荧光染色.60份尿标本采自我院肾内科住院患者,于肾活检前留取晨尿检测尿沉渣中足细胞,30份尿标本采自健康志愿者作为对照.60例患者均经皮肾活检,肾组织行光镜、免疫荧光和电镜检查作出病理诊断.根据肾小球病变活动性炎症损伤与慢性损伤分为两组,并与尿足细胞阳性和阴性发生率进行对比分析.结果:⑴间接免疫荧光尿沉渣染色抗足细胞PCX抗体仅与足细胞特异结合,可用于检测尿足细胞.⑵尿足细胞见于成人多种类型肾小球疾病,而健康成人尿足细胞阴性.⑶肾小球活动炎症性损伤者尿足细胞阳性率72%,慢性损伤者尿足细胞阳性率22.7%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).⑷尿足细胞阳性组肾小球病理平均活动指数积分154±60,尿足细胞阴性组肾小球病理平均活动指数积分82±46,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:小鼠抗人足细胞PCX单克隆抗体尿沉渣染色,是一种特异性检测尿足细胞的方法,这项无创检查可作为预测肾小球疾病活动的指标.     

Quantification of plasma DNA as a screening tool for lung cancer

Background Recent studies suggest that circulating DNA may be a potential tumor marker for lung cancer, but most of these studies are conducted between healthy controls and lung cancer patients, with few or no benign lung disease patients included. The objective of this study was to evaluate the performance of plasma DNA quantification in discriminating lung cancer from the healthy and benign lung disease.Methods Plasma DNA was extracted with a QIAamp DNA Blood Midi kit and quantified by a PicoGreen dsDNA quantitation kit in 44 healthy individuals, 36 benign lung disease patients and 67 lung cancer patients. Discrimination power was evaluated by the receiver operating characteristic curve. Results Plasma DNA values were significantly increased in lung cancer patients, especially in those with metastases, and in benign lung disease patients compared with that in the healthy individuals (P＜0.001, respectively). The values in lung cancer patients were significantly increased compared with that in the benign lung disease patients (P＜0.001). The area under the curve was 0.96 ［95% confidence interval (CI) 0.92-0.99］ for the healthy versus lung cancer, 0.73 (95% CI 0.64-0.83) for lung cancer versus benign lung disease, and 0.86 (95% CI 0.80-0.91) for lung cancer versus the healthy and benign lung disease.Conclusions Plasma DNA quantification has a strong power to discriminate lung cancer from the healthy and from the healthy and benign lung disease, less power to discriminate lung cancer from benign lung disease. Plasma DNA quantification may be useful as a screening tool for lung cancer.     

miR-195在乳腺癌患者血浆中的表达及其临床意义

目的：探讨mtR-195在乳腺浸润性导管癌患者术前、术后2周血浆中的表达及其与乳腺癌临床病理特征的相关性。方法：以miR-16为内参,采用茎环RT-qPCR方法检测48例术前、术后2周乳腺浸润性导管癌患者及35例健康对照者血浆中miR-195的表达,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理指标的关系。结果：乳腺浸润性导管癌患者血浆中miR-195的表达较健康对照者明显升高（P〈0．05）,术后2周表达明显降低至健康对照者水平。ROC曲线显示,血浆miR-195评价乳腺浸润性导管癌的敏感性和特异性可达94．4％和68．8％。与临床特征相关性分析统计未见血浆miR-195表达与乳腺浸润性导管癌肿块大小、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体-2（Her-2）状态及淋巴结转移状态等临床病理特征有明显相关（P〉0．05）。结论：血浆中miR-195的异常表达可作为乳腺癌诊断的新的肿瘤标志物。     

阿尔茨海默病患者尿液生物标志物的检测

目的探寻阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）患者尿液中潜在的生物标志物,为AD的早期诊断提供依据。方法通过超高效液相色谱-质谱联用和代谢组学的方法,考查AD患者和正常老年人尿液中代谢产物的扰动。对于超高效液相色谱-质谱联用所产生的色谱图,进行主成分分析显示出疾病组和正常组之间的代谢物的变化。结果 AD患者的鞘氨醇类、色氨酸相对于正常组变化明显,发现7个潜在的与AD相关的生物标志物。结论 AD患者的代谢物谱发生了明显改变,可以为AD的诊断提供依据。     

RT-PCR检测外周血中CK19mRNA方法的优化

目的:探讨应用RT-PCR技术检测CK19 mRNA的优化方法.方法:采用RT PCR方法分别检测经病理确诊的胃癌组织及有明确肿瘤病灶的胃癌患者和健康对照者外周血中CK19 mRNA的表达.结果:通过设计多对引物进行对比及设立未经逆转录的RNA为模板的对照可观察到CK19假基因及基因组DNA的干扰现象.在合理设计错配引物的基础上选择合适的退火温度可消除干扰.结论:在运用RT-PCR法检测外周血中CK19 mRNA表达时常存在基因组及假基因等因素的干扰,通过本方法可有效地克服这种干扰作用.     

食管癌与贲门癌患者术后残余食管与胸腔胃功能研究

目的了解食管癌与贲门癌患者术后残余食管和胸腔胃的病理生理变化,为提高患者术后生活质量提供客观依据。方法应用放射性核素胃排空、食管测压、24h食管pH监测、电子胃镜、摄像上消化道造影和DeMeester烧心症状评分对92例食管癌与79例贲门癌术后患者进行客观检查,并与正常人进行对比分析。结果食管与贲门癌术后患者的胸胃排空较正常人明显延迟（t=7．105,P〈0．01）,且随时间推移有所改善,但术后1年仍未达到正常人水平（t=2．900,P=0．016）。食管癌切除术后患者,食管上括约肌关闭压和残余食管静息压均高于正常人（分别为t=2．275,P=0．03;t=2．160,P=0．039）。24h食管pH监测发现89．7％的术后患者存在胃食管反流,半卧位的反流程度低于平卧位（t=3．074,P=0．005）。结论食管癌与贲门癌术后,胸胃排空明显延缓,且随时间推移逐渐改善,但很难达到正常人水平。食管与贲门癌术后广泛存在胃食管反流,采取半卧位可减轻反流。     

脾虚水湿不化证大鼠尿液代谢组学研究

目的?以基于液质联用的代谢组学方法对脾虚水湿不化证模型及正常对照组大鼠的尿液进行研究,寻找模型大鼠尿液中差异代谢物,探讨脾虚水湿不化证的分子机制。方法?采用高脂低蛋白饲料加力竭游泳法复制脾虚水湿不化大鼠模型,收集模型组和正常对照组尿液,运用高效液相色谱-四极杆-时间飞行串联质谱仪技术检测2组尿液样本中的小分子代谢产物,对所得到的代谢指纹图谱进行主成分分析和偏最小二乘法-判别分析,找出具有差异的特征代谢物。结果?与正常对照组相比,模型组大鼠尿液差异代谢物为:α-酮戊二酸、瓜氨酸、乳酸、柠檬酸、5-羟色胺、谷氨酰胺等6种。结论?脾虚水湿不化模型大鼠机体糖、蛋白质代谢均出现紊乱,能量供应不足,胃肠功能下降,抗氧化能力下降,其机制可能与这些小分子代谢产物的变化有关。