E1A基因对人宫颈癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的探讨E1A基因对人宫颈细胞化疗药物的增敏作用及其相关机制。方法E1A基因经PEI—Fe3O4纳米粒介导转染人宫颈癌细胞系，用不同浓度的顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞。通过MTT法测绘细胞存活曲线，观察EIA基因对顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇等化疗药物敏感性的影响；用同一浓度的顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞，观察EIA基因在不同时间对癌细胞存活率的影响。结果转染EIA基因的人宫颈癌细胞（Hela-E1A）对顺铂和紫杉醇的敏感性显著增加，与Hela和Hela—vect细胞系比较．Hela—E1A细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性分别提高了10倍和15倍；对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显。结论E1A基因能显著提高人宫颈癌细胞对顺铂和紫杉醇等化疗药物的敏感性。其作用机制可能是E1A基因抑制了该细胞的HER-2／neu基因的表达，使该细胞周期再分布，出现S期抑制和G2/M期阻滞。     

RNPC1基因对人乳腺癌细胞SUM1315化疗药物敏感性的影响

目的：探讨RNPC1对人乳腺癌细胞SUM1315化疗药物敏感性的影响及相关机制。方法：慢病毒转染技术将转染至SUN1315细胞中,设敲除（shRNPC1）组和过表达RNPC1组、敲除对照（SCR）组和过表达对照（NC）组。采用实时荧光定量PCR和Western blot 方法检测各组SUM1315细胞中RNPC1的mRNA和蛋白水平。用不同浓度的紫杉醇、多西他赛和5?氟尿嘧啶化疗药物处理各组SUM1315细胞,通过CCK?8法测绘细胞存活曲线并计算半数抑制浓度（IC50）,紫杉醇、多西他赛和5?氟尿嘧啶处理各组SUM1315细胞72 h,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：敲除RNPC1组RNPC1 mRNA和蛋白相对表达量均低于SCR组,过表达RNPC1组RNPC1 mRNA及蛋白相对表达量均高于NC组（P < 0.05）。紫杉醇、多西他赛和5?氟尿嘧啶处理各组SUM1315细胞72 h后,shRNPC1组IC50明显低于SCR组（P < 0.05）,过表达RNPC1组IC50明显高于NC组（P < 0.05）。用紫杉醇、多西他赛和5?氟尿嘧啶处理各组SUM1315细胞72 h后,shRNPC1组凋亡率明显高于SCR组;过表达RNPC1组凋亡率显著低于NC组（P < 0.05）。结论：RNPC1基因能显著降低人乳腺癌细胞SUM1315对紫杉醇、多西他赛和5?氟尿嘧啶化疗药物的敏感性,有望成为乳腺癌治疗的新策略。     

E1A基因对人宫颈癌细胞放射增敏的实验研究

目的探讨E1A基因对人宫颈癌细胞的放射增敏作用及其初步的作用机制。方法将人宫颈癌细胞(Hela)、转染空载体纳米粒的人宫颈癌细胞(Hela-vector)及转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A)分别给以0、2、4、6和8Gy的6MV-X线照射,用集落形成法计算细胞存活分数及放射增敏比(SER),检测E1A基因对人宫颈癌细胞对放射线敏感性的影响;采用RT-PCR检测E1A基因的表达以及E1A基因对Her-2基因表达的影响,采用流式细胞术检测E1A基因对细胞周期的影响。结果集落形成实验结果显示:经不同剂量照射后Hela-E1A组平均细胞存活分数明显低于Hela和Hela-vector组,而后两组相近。Hela-E1A组D0值为1.23,Hela和Hela-vector组D0值分别为2.51和2.59,放射增敏比(SER)=(2.04);RT-PCR结果显示:E1A基因在Hela细胞中能稳定表达,E1A基因的转染明显降低了Her-2基因在Hela细胞中的表达水平;流式细胞术结果显示:转染E1A基因后,细胞周期出现S期抑制,G2期阻滞。结论E1A基因能够明显提高人宫颈癌细胞对放射线的敏感性,其作用机制可能与E1A基因抑制了该细胞Her-2基因的表达,使细胞周期再分布有关。     

腺病毒E1A基因对人宫颈癌细胞体外增殖抑制的实验研究

目的：探讨聚已烯亚胺-四氧化三铁（PEI-Fe3O4）纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞体外增殖的抑制作用及其作用机制,为宫颈癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。方法：E1A基因经PEI-Fe3O4纳米粒载体介导转染人宫颈癌细胞（Hela细胞），用细胞计数法测绘生长曲线、计算倍增时间及软琼脂集落形成数目，观察E1A基因对该细胞系体外生长的影响。采用RT-PCR 和 Western印迹检测E1A基因在宫颈癌细胞中的表达及对HER-2/neu基因表达的影响。结果：转染E1A基因的人宫颈癌细胞系生长缓慢，倍增时间延长，是转染空载体组的1.53倍, 是Hela细胞组的1.58倍 ；未经转染的Hela细胞系、转染空载体纳米粒的Hela细胞系（Hela-vect）及转染E1A基因的Hela细胞系(Hela-E1A），细胞集落形成率分别为30.48%,28.32%和6.62%,转染E1A基因组（Hela-vect）明显低于Hela和Hela-vect组（均P＜0.05）。与Hela及Hela-vect组的集落形成率相比，Hela-E1A组集落形成抑制率分别为78.28%和76.62%。RT-PCR和Western印迹结果显示，E1A基因能在Hela细胞中稳定表达，且显著降低了HER-2/neu在宫颈癌细胞中的mRNA和蛋白表达水平。结论：PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因能够明显抑制人宫颈癌细胞的生长，其作用机制可能与E1A抑制HER-2/neu基因的表达有关。     

E1A基因对裸鼠移植瘤细胞凋亡及Survivin、Caspase-3基因表达的影响

目的探讨E1A基因对裸鼠移植瘤肿瘤细胞凋亡的影响及其相关作用机制。方法采用免疫组织化学染色检测E1A基因对裸鼠移植瘤肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因表达的影响。结果免疫组织化学染色显示：EIA基因组肿瘤细胞凋亡数量较多，Caspase-3基因呈高表达，Survivin基因表达较弱；而Heh和Hela—vect组肿瘤细胞凋亡数量较少，Survivin基因呈高表达，Caspase-3基因表达较弱。结论EIA基因能够明显促进裸鼠移植瘤肿瘤细胞的凋亡，该作用可能与EIA基因激活Caspase-3基因和抑制Survivin基因的表达有关。     

MTT法检测乳腺癌原代细胞中SP细胞对化疗药物的敏感性

目的:探讨MTT法在筛选乳腺癌较敏感的药物及浓度和指导乳腺癌临床治疗中的作用.方法:乳腺癌原代细胞和乳腺癌细胞株MCF-7培养传代,利用Hoechest DNA染色流式细胞仪分选SP细胞和非SP细胞.选SP细胞、MP细胞、PP细胞分别加入不同浓度的四种常规化疗药物观测SP细胞对药物敏感性.结果:不同药物对SP、MP和PP三种细胞的半抑制浓度IC50都呈现如下趋势:SP>>PP>MP.结论:SP细胞对不同药物都具有最低的敏感性,会将药物之间的差异放大,更适合用其检测药物毒性,药物毒性随着药物浓度的增加而增高,在具有相同效应的药物中,应选择低浓度,但因药物的作用机理不尽相同,患者身体基础状况及耐受程度不同,还应结合临床试验确定药物浓度.     

RNPC1基因对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响

目的：研究RNPC1对乳腺癌细胞MCF-7阿霉素药物敏感性的影响。方法：在MCF-7细胞中使用慢病毒转染法,设敲除（shRNPC1）组和过表达RNPC1组、敲除对照（SCR）组和过表达对照（NC）组。用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组MCF-7细胞中RNPC1的mRNA和蛋白水平。以不同浓度的阿霉素处理各组MCF-7细胞,CCK-8法检测各组细胞生长抑制率。阿霉素处理各组MCF-7细胞后, 用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中调亡相关蛋白的表达。结果：shRNPC1组RNPC1 mRNA和蛋白相对表达量均低于SCR组,过表达RNPC1组RNPC1 mRNA及蛋白相对表达量均高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞后,shRNPC1组IC50明显于低于SCR组（P<0.05）,过表达组IC50明显高于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,发现shRNPC1组凋亡率明显高于SCR组;过表达RNPC1组凋亡率显著低于NC组（P<0.05）。阿霉素处理各组MCF-7细胞24 h后,shRNPC1组抑凋亡蛋白BCL-XL、BCL-2的表达低于SCR组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达高于SCR组;过表达RNPC1组抑凋亡蛋白BCL-CL、BCL-2的表达高于NC组,促凋亡蛋白BIM和BID的表达低于NC组。结论：RNPC1能降低乳腺癌细胞MCF-7对阿霉素的敏感性,其机制与抗细胞凋亡有关。     

LyGD1基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响

目的研究转染LyGDI基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的方法,将构建于pEGFP载体上的LyGDI及空载体pEGFP-C1转入A549细胞,用G418筛选出稳定表达株,RT-PCR法了解LyGDI基因在转染细胞中的表达情况;用平板克隆形成实验研究细胞生长情况;体外划痕试验观察对细胞侵袭及转移能力的影响;甲基偶氮唑蓝法、克隆形成实验分别研究细胞对放、化疗的敏感性。结果转染细胞中有相应融合基因表达;与转染前比较,基因转染后,阳性细胞尤其是表达LyGDI的A549细胞克隆形成能力显著降低（P〈0.01）,对常用化疗药物顺铂和放射线敏感度显著提高（P〈0.05或〈0.01）。结论建立了稳定转染细胞株;LyGDI转入抑制了A549细胞的生长能力,且增加了细胞对放、化疗的敏感性。     

Aiolos基因过表达对白血病细胞生物学特性及化疗敏感性的影响

目的 研究Aiolos基因过表达对白血病细胞周期、凋亡及化疗敏感性的影响并探讨其机制。方法 将Jurkat细胞分为Aiolos过表达组、转染GFP组和未转染组,构建Aiolos基因慢病毒载体,感染Jurkat细胞并检测3组细胞的细胞周期、凋亡、相关基因表达及对依托泊苷敏感性。结果 Aiolos转染Jurkat细胞4d后,Aiolos过表达组和转染GFP组的GFP表达量达80%以上,且Aiolos过表达组的Aiolos蛋白表达较转染GFP组和未转染组明显上升(P<0.05)。Aiolos过表达组细胞凋亡比例较转染GFP组和未转染组明显增加(P<0.05),细胞周期由G0/G1进入S期比例明显减少(P<0.05)。周期相关基因Cyclin D3和Skp2表达下调(P<0.05),细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21和P27表达上调(P<0.05);凋亡相关基因Bax表达无明显变化,Bcl-2表达下调(P<0.05),Bax/Bcl-2比例增加(P<0.05)。Aiolos过表达组细胞在依托泊苷浓度40μg/mL作用36、48h后,细胞存活百分率较转染GFP组和未转染组均明显降低(P<0.05)。结论 在Jurkat细胞系中介导Aiolos基因过表达能够促进细胞凋亡、抑制细胞周期并提高细胞对化疗药物的敏感性。     

抑癌基因p53对非小细胞肺癌化疗药物敏感性的影响

p53基因与肺癌密切相关，可作为诊断肺癌及判断预后的参考指标。研究显示p53基因变异的肺癌预后较差，而且对化疗的敏感性也较低。p53基因异常会降低铂类、吉西他滨、依托泊苷、长春碱类以及环磷酰胺和异环磷酰胺等抗肿瘤药物的敏感性，野生型p53(Wt-p53)基因的重建和修复可能作为基因治疗成为与这些类药物联合治疗肺癌的有效治疗手段；对紫杉碱类药物的敏感性没有负面影响。对p53等基因药物学的研究，并有助于肺癌个体化治疗的实施，提高肺癌治疗的有效率。     

PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响

目的 探讨PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因对人宫颈癌细胞周期的影响，为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供实验依据。方法取对数生长的人宫颈癌细胞(Hela)、对照空载体细胞(Hela-vect)、转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A)，使用流式细胞仪(Coulter-proftlo Ⅱ型)测定DNA含量，计算机分析细胞周期。结果Hela-E1A组与Hela及Hela-vect组比较，S期细胞比例明显下降，G2/M期细胞比例明显增多，G1期无明显变化。结论PEI-Fe3O4纳米粒E1A基因能改变人宫颈癌细胞周期的分布，使该细胞周期出现S期抑制和G2/M期阻滞，为进一步研究E1A基因对宫颈癌放、化疗增敏提供了实验依据。     

E1A基因对裸鼠移植瘤化疗增敏的实验研究

目的 探讨E1A基因对人宫颈癌细胞裸鼠移植瘤化疗的增敏作用及其相关作用机制.方法 通过E1A基因对裸鼠移植瘤化疗增敏实验,观察E1A基因对裸鼠移植瘤化疗敏感性的影响;采用RT-PCR鉴定E1A在肿瘤细胞中的表达及E1A转染后对HER-2/neu基因表达的影响.结果 E1A基因化疗增敏实验结果显示:E1A基因组裸鼠肿瘤体积缩小最明显,肿瘤重量明显小于对照组及空载体组(均P＜0.05);而后两组差异无显著性(P＞0.05).RT-PCR结果显示:E1A基因在宫颈癌细胞中能稳定表达并且显著降低HER-2/neu在宫颈癌细胞中的表达水平.结论 E1A基因能够显著增加紫杉醇对裸鼠移植瘤的药物敏感性.该作用机制可能与E1A基因降低HER-2/neu蛋白的表达有关.     

包裹E1A基因的纳米粒子制备及转染人肺腺癌细胞A549实验研究

目的制备包裹E1A基因（腺病毒早期表达基因）的纳米粒子,并观察其介导E1A基因转染人肺腺癌细胞A549的可行性和效率。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载E1A基因,制备纳米级粒子混合物,检测其包埋率、体外释放情况及粒径大小。用制备的包裹DNA纳米粒子转染人肺腺癌细胞A549,并以阳离子脂质体为对照,用PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A基因DNA整合和mRNA表达。结果制备的纳米粒子粒径为150～280nm,包埋率为0.78%,体外释放约为22d;在转染相等质量的DNA情况下,纳米组所得克隆数较脂质体组多（P〈0.05）;PCR、RT-PCR结果表明纳米粒子和脂质体转染细胞均有E1A基因整合和mRNA表达。结论成功制备了纳米粒子,纳米粒子可携带外源基因进行基因转染。     

乳腺癌组织中S-100蛋白阳性树突状细胞的研究

采用Ｓ １００蛋白免疫组化染色对６０例乳腺癌及其周围组织中的树突状细胞进行了原位观察和数量分析。结果表明：乳腺癌组织中散在分布Ｓ １００蛋白阳性的树突状细胞，而癌周及癌旁的淋巴细胞及浆细胞密集区可见树突状细胞成簇存在。树突状细胞与乳腺癌的组织类型，腋窝淋巴结转移状况及癌周淋巴细胞及浆细胞的浸润程度有关。提示树突状细胞参与的宿主抗肿瘤免疫反应随肿瘤的不同时期而不同。     

乳癌中突变P53和nm23-H1基因的表达及临床意义

目的探讨乳癌中突变P53和nm23-H1基因的表达与临床因素及淋巴结转移、远处转移和复发之间的关系;方法应用免疫组化LSAB法研究乳癌的P53、nm23-H1基因表达;结果nm23-H1低表达与淋巴结及远处转移相关(P<0．01,P<0．01),nm23-H1基因在低分化乳癌中表达显降低,与中、高分化乳癌相比均有统计意义,突变P53基因表达与淋巴结转移和远处转移相关(P<0．02,P<0．05),与肿瘤大小相关,与组织学分级相关(P<0．01,列联系数P=0．32),两的表达与其它病理因素无关,两联合表达中,P53低表达和nm23-H1过表达组淋巴结转移率较低,与其它组相比均有统计意义,突变P53过表达和nm23-H1低表达在总病例中远处转移率最高,与其它组相比均有统计意义;结论认为二种基因表达对淋巴结和远处转移均起重要作用．检测它们在乳癌中的表达,对指导临床治疗、随访、评价乳癌患的预后有重要的参考意义。     

p27kip1基因转染增强放射抗拒人食管癌细胞的放射敏感性

目的研究腺病毒介导的p27kip1基因转染对人放射抗拒食管癌细胞放射敏感性的影响。方法以重组腺病毒介导的p27kip1基因转染人放射抗拒食管癌细胞EC9706R,免疫细胞化学法检测p27kip1表达;流式细胞仪检测转染前后肿瘤细胞周期,克隆形成实验检测p27kip1基因转染前后两种EC9706R细胞的放射敏感性。结果腺病毒转染后放射抗拒食管癌EC9706R细胞p27kip1表达明显升高,细胞周期结果显示G0/G1期阻滞;转染p27kip1前后放射敏感性参数检测结果比较:转染前EC9706R细胞SF2=67.4%,Dq=1.66 Gy,转染后SF2=49.7%,Dq=1.03 Gy,放射增敏比SERSF2、SERDq分别为1.36,1.61,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 p27kip1基因转染能增强人放射抗拒食管癌细胞的放射敏感性。